Name: reverse transcription-loop-mediated isothermal amplification (rt-lamp) assay for zika virus and housekeeping genes in urine, serum, and mosquito samples
Uploaded: 2018-09-14T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Reverse Transcription-Loop-mediated Isothermal Amplification RT-LAMP Assay for Zika Virus and Housekeeping Genes in Urine, Serum, and Mosquito Samples at JoVE

Diese Arbeit wurde von Maureen und Ronald Hirsch Familie philanthropischen Beitrag und Neurowissenschaften Feldinstitut, St. Maria von Michigan unterstützt. Die Geldgeber hatten keine Rolle beim Studiendesign, Datenerhebung und Analyse, Entscheidung, zu veröffentlichen oder der Manuskripterstellung. Wir danken auch Dr. Bernadette Zwaans und Elijah Ward für ihre kritische Durchsicht des Manuskripts.

Alle hier beschriebene Methoden sind durch institutionelle Review Board (IRB) der Beaumont Gesundheit genehmigt worden. Alle Versuche wurden im Einklang mit geltenden Richtlinien und Vorschriften durchgeführt.
Achtung: Alle potentiell infektiöse Materialien sollten nach Biosafety Level 2 Standards einschließlich der Verwendung von persönlicher Schutzausrüstung gehandhabt werden. Alle Prozeduren erzeugen Aerosol sollte in ein Kabinett Biosafety durchgeführt werden. Darüber hinaus sollten...

<ol>
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Die ZIKV RT-Lampe-Assay in diesem Papierarbeiten mit Menschen- und Moskito Proben6beschrieben. Der Nachweisgrenze wurde ca. 1 Genom entspricht6, was ausreichen sollte, da die typische Viruslast eines symptomatischen ZIKV infizierten Patienten 103 bis 106 PFU/mL7. Darüber hinaus kann diese Methode ZIKV in Proben ohne erste isolierende RNA und ohne Verstärkung der Virus in der Zellkultur erkennen. Dies verringert deu...

Im Jahr 2015 sammelte Zika-Virus (ZIKV) Prominente weltweite Aufmerksamkeit als eine Infektionskrankheit von Sorge denn Infektion während der Schwangerschaft mit fehl-, Totgeburt, schwere neurologische Geburtsschäden einschließlich Mikrozephalie sowie andere angeborene verbunden war Geburtsschäden1. In seltenen Fällen wurde ZIKV mit Guillain-Barré-Syndrom. ZIKV ist in erster Linie von Aedes -Mücken übertragen; Es kann jedoch auch durch sexuellen Kontakt1verteilt werden. Angesichts der Tatsache, dass die Infektion mit ZIKV bei den meisten Menschen asymptomatisch ist oder präsentiert mit milden grippeähnlichen Symptomen, die sich überschneiden mit den Symptomen einer Infektion von anderen Arborviruses1, gab es eine Notwendigkeit für bessere Methoden zur schnellen und kostengünstigen Nachweis von ZIKV sowohl Menschen als auch lokale Moskito-Populationen auf den Bildschirm.
Quantitative reverse Transkription PCR (qRT-PCR) ist ein zuverlässiger Test zur ZIKV Erkennung; Diese Technik erfordert jedoch teure Spezialausrüstung, geschultes Personal und RNA-Isolierung aus der Stichprobe von Interesse. Reversen Transkription Schleife-vermittelten Isothermen Verstärkung (RT-Lampe) ist eine einstufige Nukleinsäure-Amplifikation Methode basiert auf PCR-Technologie, die nur eine Inkubationstemperatur durch den Einsatz einer thermophilen DNA-Polymerase mit Strang erfordert Verschiebung-Eigenschaften. Dies umgeht die Notwendigkeit für ein Thermocycler und verringert die Länge der Zeit benötigt, um den Test abzuschließen. Weitere Vorteile des RT-Lampe sind seine hohe Spezifität und Sensitivität, Robustheit bei einer Reihe von pH-Werten und Temperaturen und Resistenz gegen viele PCR-Inhibitoren2. Es hat einen relativ niedrigen Kosten und Reagenzien sind bei Raumtemperatur stabil. Angesichts dieser Merkmale, kann RT-Lampe in einem Labor oder im Feld eingesetzt werden. Als solche sind Lampe Reaktionen entwickelt worden, um eine Reihe von Krankheitserregern und anderen Arten von Infektion3,4,5zu erkennen. Das Ziel des RT-Lampe-Protokolls, die in diesem Dokument beschriebenen ist, ZIKV ohne RNA Isolierung im menschlichen Serum und Urin Proben sowie einen einzigen infizierten Mücke innerhalb von 30 min durch RT-Lampe zu erkennen. Diese Methode kann verwendet werden, um qRT-PCR zu ersetzen, wie es ist eine sensible, schnelle Diagnose-Tool, die schnell und in den Einstellungen außerhalb des Labors arbeitet.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:901px;" width="902">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:249px;">Bst 2.0 WarmStart DNA polymerase</td>
			<td style="width:223px;">New England Biolabs</td>
			<td style="width:223px;">M0537S</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Isothermal Amplification Buffer&#160;</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td style="width:223px;">B0537S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">WarmStart RTx Reverse Transcriptase</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td style="width:223px;">M0380S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Antarctic Thermolabile UDG</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td style="width:223px;">M0372S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MgSO4</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td style="width:223px;">B1003S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">100mM dATP Solution</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td style="width:223px;">N0440S</td>
			<td>Deoxynucleotide Set N0446S</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">100mM dCTP Solution</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td style="width:223px;">N0441S</td>
			<td>Deoxynucleotide Set N0446S</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">100mM dTTP Solution</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td style="width:223px;">N0443S</td>
			<td>Deoxynucleotide Set N0446S</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">100mM dGTP Solution</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td style="width:223px;">N0442S</td>
			<td>Deoxynucleotide Set N0446S</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">100mM dUTP Solution</td>
			<td style="width:223px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:223px;">R0133</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">SYBR Green I Nucleic Acid Gel Stain</td>
			<td style="width:223px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:223px;">S7563</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Nancy-520</td>
			<td style="width:223px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:223px;">01494</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Low DNA Mass Ladder</td>
			<td style="width:223px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:223px;">10-068-013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:249px;">Zika Postive Control</td>
			<td style="width:223px;">Robert Koch Institute, Germany</td>
			<td style="width:223px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:249px;">Agarose</td>
			<td style="width:223px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:223px;">BP1600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:249px;">BlueJuice Gel Loading Buffer</td>
			<td style="width:223px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:223px;">10816015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:249px;">Primers</td>
			<td style="width:223px;">Integrated DNA Technologies</td>
			<td style="width:223px;">Custom Oligo</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:249px;">Nuclease-Free Water</td>
			<td style="width:223px;">Ambion</td>
			<td style="width:223px;">AM9938</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:249px;">Urine Preservative</td>
			<td style="width:223px;">Norgen Biotek</td>
			<td style="width:223px;">18126</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:249px;">ZIKV PCR Standard</td>
			<td>Robert Koch Institute</td>
			<td style="width:223px;">N/A</td>
			<td>Vero E6 cell supernatants</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">DENV2 New Guinea C Control</td>
			<td style="width:223px;">Connecticut Agricultural Experiment Station</td>
			<td style="width:223px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

reverse transcription-loop-mediated isothermal amplification (rt-lamp) assay for zika virus and housekeeping genes in urine, serum, and mosquito samples

Infektion mit Zika-Virus (ZIKV) kann bei Erwachsenen asymptomatisch sein, jedoch Infektion während der Schwangerschaft kann zu fehl- und schwere neurologische Geburtsschäden führen. Das Ziel dieses Protokolls ist es, ZIKV in Menschen- und Moskito Proben schnell zu erkennen. Der derzeitige Goldstandard für ZIKV Erkennung ist quantitative reverse Transkription PCR (qRT-PCR); reversen Transkription Schleife-vermittelten Isothermen Verstärkung (RT-Lampe) kann für eine effiziente und kostengünstige Prüfung ohne die Notwendigkeit für teure Ausrüstung. In dieser Studie dient RT-Lampe ZIKV-Erkennung in verschiedenen biologischen Proben innerhalb von 30 min ohne erste Isolierung der RNS aus der Probe. Diese Technik wird gezeigt, mit ZIKV infizierten Patienten Urin und Serum und infizierten Mücke Proben. 18 s ribosomalen Ribonukleinsäure und Aktin werden als Steuerelemente in Menschen- und Moskito Proben verwendet.

RT-Lampe Reaktionen können mit drei verschiedenen Methoden analysiert werden. Zunächst mit dem Zusatz eines fluoreszierenden Nukleinsäure-Farbstoffs werden positive Reaktionen gelb/grün in der Farbe negative Reaktionen erscheinen wo Orange in der Farbe mit dem bloßen Auge. Zweitens führt die Zugabe von fluoreszierenden Nukleinsäure-Farbstoff, RT-LAMP-Reaktion ein Fluoreszenzsignal wenn die Proben mit UV-Licht angeregt werden. Negative Reaktionen haben keinen nachweisbaren Fluoresze...

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Reverse Transcription-Loop-mediated Isothermal Amplification RT-LAMP Assay for Zika Virus and Housekeeping Genes in Urine, Serum, and Mosquito Samples

Reverse Transkription-Loop-vermittelten Isothermen Verstärkung (RT-Lampe) Assay für Zika-Virus und Housekeeping-Gene in Urin, Serum und Moskito-Proben

Dieses Protokoll bietet eine effiziente und kostengünstige Methode zum Zika Virus erkennen oder steuern Ziele im menschlichen Urin und Serum-Proben oder Mücken durch reverse Transkription Schleife-vermittelten Isothermen Amplifikation (RT-Lampe). Diese Methode erfordert keine RNA isoliert und kann innerhalb von 30 Minuten erfolgen.

Infection with Zika virus (ZIKV) can be asymptomatic in adults, however, infection during pregnancy can lead to miscarriage and severe neurological birth ...

Diese Methode kann schnell feststellen, ob Proben das Zika-Virus enthalten. Dies ist nützlich für Schwangere, Paare, die versuchen, schwanger zu werden, oder Überwachung der lokalen Mückenpopulationen, die für eine Zika-Infektion gefährdet sind. Der Hauptvorteil dieser Technik ist, dass sie schnell, einfach ist, keine teure Ausrüstung benötigt und ohne einen RNA-Isolationsschritt durchgeführt werden kann.Die Auswirkungen dieser Technik reichen bis zur Diagnose einer Zika-Infektion, da eine Infektion während der Schwangerschaft mit Fehlgeburten, Totgeburten und anderen schweren angeborenen, neurologischen Geburtsfehlern verbunden ist. Obwohl diese Methode Einblicke in Zika geben kann, kann sie auch auf andere Infektionskrankheiten wie Dengue, Chikungunya oder West-Nil-Virus angewendet werden, indem virusspezifische Primer verwendet werden. Um zu beginnen, rekonstituieren Sie jeden RT-LAMP Primer in molekularem Wasser auf eine Endkonzentration von 100 Mikromolaren.Kurz wirbeln Sie die Primer-Lösung, um sicherzustellen, dass die Lösung homogen ist. Zentrifuge für etwa fünf Sekunden bei maximaler Geschwindigkeit, um die Primer-Lösung zu sammeln. Bereiten Sie dann einen 10x RT-LAMP Primer Mix vor, wie in Tabelle 2 des Tech-Protokolls beschrieben.Wirbel kurz, um Homogenität zu gewährleisten. Und Zentrifugieren Sie kurz mit maximaler Geschwindigkeit, um Verluste zu vermeiden. Bewahren Sie die Primer bei minus 20 Grad Celsius zwischen den Anwendungen auf, um Frost-Tau-Zyklen zu vermeiden.Für menschliche Urinproben verwenden Sie entweder frischen Urin, gefrorenen Urin oder Urin in Konservierungsmittel. Vor Gebrauch alle gefrorenen Proben auf Eis auftauen. Menschliche Serumproben sollten entweder frisch oder gefroren sein, während ZIKV-infizierte Zelllinien entweder konditionierte Medien oder Zelllysate enthalten sollten.Schließlich, für Aedes aegypti Mücken, verwenden Ganze Kadaver, entweder frisch oder gefroren. Alle gefrorenen Mückenkadaver auf Eis auftauen. Legen Sie eine einzelne Mücke in 100 Mikroliter PBS.Mit einer P10 Pipettenspitze die Mücke zehnmal zerkleinern und zu einem groben Mückenlysat homogenisieren. Zentrieren Sie kurz das rohe Lysat, um Schmutz zu pellet und verwenden Sie den Überstand für die nachgeschaltete RT-LAMP-Analyse. Bereiten Sie zunächst eine RT-LAMP-Master-Mix-Reaktion auf Eis für jeden zu verwendenden Primersatz vor, wie in Tabelle drei im Protokoll der Technologie beschrieben.Wirbel jede Probe, um sicherzustellen, dass es gut gemischt ist. Drehen Sie sie dann kurz nach unten, um Volumenverlust zu verhindern. Für jede Reaktion mischen Pipette 23,0 Mikroliter des RT-LAMP-Master-Mix in ein 200-Mikroliter-PCR-Rohr.Fügen Sie dann zwei Mikroliter Probe hinzu, um das Gesamtvolumen auf 25,0 Mikroliter zu bringen. Verwenden Sie molekulares Wasser für die Negative Kontrolle, und stellen Sie sicher, dass eine positive Kontrolle enthalten. Optional, enthalten Eine Spezifitätskontrollreaktion eines verwandten Arbovirus wie Dengue-Virus, wie im Tech-Protokoll beschrieben.Mit einem Wärmeblock, einem Wasserbad oder einem Thermocycler die Proben 30 Minuten lang bei 61 Grad Celsius erhitzen. Danach erhöhen Sie die Hitze auf 80 Grad Celsius für 10 Minuten, um die Polymerase zu deaktivieren. Führen Sie die RT-LAMP-Analyse in einem separaten geschlossenen Raum durch.Verdünnen Sie den fluoreszierenden Nukleinsäurefarbstoff eins bis zehn im TAE-Puffer. Fügen Sie zwei Micorliter der fluoreszierenden Nukleinsäure-Farbstofflösung zu 12 Micorliter der RT-LAMP-Reaktion hinzu. Bewerten Sie die RT-LAMP-Reaktionen visuell, indem Sie nach einem Farbwechsel suchen.Verwenden Sie optional eine Kamera, um RT-LAMP-Reaktionen auf weißem Hintergrund zu fotografieren. Als nächstes stellen Sie die Proben unter ein 302 Nanometer UV-Licht, um das Vorhandensein von RT-LAMP-Produkten durch Fluoreszenz zu bestätigen. Verwenden Sie eine Kamera, um ein Bild des Ergebnisses zu machen.Um mit der Durchführung der Elektrophorese zu beginnen, gießen Sie 2%Agarose-Gel in 1x TAE-Puffer mit einem Nukleinsäurefleck zur Visualisierung. Fügen Sie fünf Mikroliter einer DNA-Leiter in der ersten Spur hinzu, um die Molekulargewichte zu vergleichen. Mischen Sie für jede RT-LAMP-Reaktion 13 Mikroliter RT-LAMP-Reaktionsmischung mit zwei Mikrolitern DNA-Ladefarbstoff.Laden Sie diese 15-Mikroliter-Mischung. Führen Sie das Gel bei 90 Volt für 90 Minuten oder bis die Bänder getrennt sind. Ein Bild mit 302 Nanometer UV-Licht.Nach Fertigstellung die RT-LAMP-Reaktionen in doppelt versiegelten Säcken entsorgen. In dieser Studie werden drei verschiedene Methoden verwendet, um RT-LAMP-Reaktionen zu analysieren. Bei verwendung von fluoreszierendem Nukleinsäurefarbstoff werden positive Reaktionen gelb-grün in der Farbe, während negative Reaktionen orange erscheinen.Dieser Farbstoff führt auch zu einem fluoreszierenden Signal, wenn Proben durch UV-Licht angeregt werden. Schließlich können RT-LAMP-Reaktionen auf einem Agarose-Gel auslaufen. Positive RT-LAMP-Reaktionen haben ein Banding-Muster, während negative Reaktionen keine DNA-Bänder haben.Diese Methoden werden verwendet, um die Spezifität der ZIKV RT-LAMP-Reaktion zu demonstrieren. Nur die MOLEKULARe ZikV-Steuerung hat eine positive RT-LAMP-Reaktion. Während ZIKV sowohl im Urin als auch im Serum eines Patienten mit bekannter ZIKV-Infektion nachgewiesen wird, wird es beim asymptomatischen Kontrollpatienten ohne ZIKV-Infektion nicht gesehen.Die Proben werden dann auf menschliche 18S rRNA getestet. Nur die von Patienten entnommenen Proben sind für 18S rRNA positiv. Mückenproben können in ähnlicher Weise auf ZIKV oder die RT-LAMP Qualitätskontrolle AEDAE getestet werden.Nur die positive molekulare Kontrolle für ZIKV und die mit ZIKV infizierte Mücke wird für ZIKV als positiv angesehen. Allerdings sind alle Mücken positiv für AEDAE von RT-LAMP. Einmal gemeistert, kann diese Technik in weniger als 30 Minuten durchgeführt werden, wenn sie richtig ausgeführt wird.Es ist wichtig, sich daran zu erinnern, dass RT-LAMP Reaktionen anfällig für falsche positive Reaktionen sind. Zu den Präventionsschritten gehören die Verwendung einer thermolabilen Uracil-DNA-Glykoselase in Reaktionen, die Verwendung eines lateralen Workflows, die Durchführung von Analysen in einem separaten Raum und die Verkürzung der Zeit nach der Amplifikation sind offen. Nach diesem Verfahren können andere Methoden wie QPCR ausgeführt werden, um zusätzliche Fragen zu beantworten, z. B. wie viele Kopien das Virus oder andere Ziele in der Stichprobe vorhanden sind.Nachdem Sie sich dieses Video angesehen haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie Sie RT-LAMP verwenden können, um das Zika-Virus zu erkennen und Kontrollen im menschlichen Urin und Serum sowie mückenzusteuern. Vergessen Sie nicht, dass die Arbeit mit Zika-Virus und Nukleinsäure-Färbung extrem gefährlich sein kann, und Vorsichtsmaßnahmen wie das Tragen von Handschuhen sollten immer während der Durchführung dieses Verfahrens getroffen werden. Angesichts des Zusammenhangs der Zika-Virusinfektion mit angeborenen Anomalien sollten schwangere Frauen oder Partner dieser Frauen ihre Laborexposition gegenüber dem Zika-Virus deutlich minimieren.

Research

JoVE Journal

Genetics

Reverse Transcription-Loop-mediated Isothermal Amplification (RT-LAMP) Assay for Zika Virus and Housekeeping Genes in Urine, Serum, and Mosquito Samples

The Use of Induced Somatic Sector Analysis (ISSA) for Studying Genes and Promoters Involved in Wood Formation and Secondary Stem Development

The Use of Induced Somatic Sector Analysis ISSA for Studying Genes and Promoters Involved in Wood Formation and Secondary Stem Development

Die Verwendung von Induced Somatic Sektoranalyse (IVSS) in Holzbildung und Nebenschaft Entwicklung beteiligten Gene und Promotoren Studieren

Secondary stem growth in trees and associated wood formation are significant both from biological and commercial perspectives. However, relatively little ...

Forschung

Genetik

Peptide-derived Method to Transport Genes and Proteins Across Cellular and Organellar Barriers in Plants

Peptid abgeleitete Methode zu schleusen Gene und Proteine ​​über zelluläre und Organell-Barrieren in Pflanzen

The capacity to introduce exogenous proteins and express (or down-regulate) specific genes in plants provides a powerful tool for fundamental research as ...

Determination of the Optimal Chromosomal Location(s) for a DNA Element in Escherichia coli Using a Novel Transposon-mediated Approach

Determination of the Optimal Chromosomal Locations for a DNA Element in Escherichia coli Using a Novel Transposon-mediated Approach

Bestimmung der optimalen chromosomalen Speicherorte für eine DNA-Element in Escherichia coli mit einem neuartigen Transposon-vermittelte Ansatz

The optimal chromosomal position(s) of a given DNA element was/were determined by transposon-mediated random insertion followed by fitness selection. In ...

Chromatin Immunoprecipitation (ChIP) Protocol for Low-abundance Embryonic Samples

Chromatin Immunoprecipitation ChIP Protocol for Low-abundance Embryonic Samples

Chromatin Immunopräzipitation (ChIP) Protokoll für Low-Fülle embryonalen Proben

Chromatin immunoprecipitation (ChIP) is a widely-used technique for mapping the localization of post-translationally modified histones, histone variants, ...

High Resolution Fluorescent In Situ Hybridization in Drosophila Embryos and Tissues Using Tyramide Signal Amplification

High Resolution Fluorescent In Situ Hybridization in Drosophila Embryos and Tissues Using Tyramide Signal Amplification

Hochauflösender Fluoreszenz In Situ Hybridisierung in Drosophila Embryos und Gewebe mit Tyramide Signalverstärkung

In our efforts to determine the patterns of expression and subcellular localization of Drosophila RNAs on a genome-wide basis, and in a variety of ...

Transient Expression of Foreign Genes in Insect Cells (sf9) for Protein Functional Assay

Transient Expression of Foreign Genes in Insect Cells sf9 for Protein Functional Assay

Transiente Expression von Fremdgenen in Insekt Zellen (sf9) für funktionelle Protein Assay

The transient gene expression system is one of the most important technologies for performing protein functional analysis in the baculovirus in vitro cell ...

Adapting 3' Rapid Amplification of CDNA Ends to Map Transcripts in Cancer

Anpassung der 3' endet rasche Verstärkung der CDNA Transkripte in Krebs zuordnen

Maturation of eukaryotic mRNAs involves 3&#39; end formation, which involves the addition of a poly(A) tail. In order to map the 3&#39; end of a gene, the ...

Amplification of Near Full-length HIV-1 Proviruses for Next-Generation Sequencing

Verstärkung des in der Nähe von Full-Length HIV-1 Proviruses für Next Generation Sequencing

The Full-Length Individual Proviral Sequencing (FLIPS) assay is an efficient and high-throughput method designed to amplify and sequence single, near ...

Evaluation of a Universal Nested Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction for the Detection of Lyssaviruses

Bewertung einer universellen, veralteten Transcription Polymerase Chain Reaction zur Erkennung von Lyssaviren

To detect rabies virus and other member species of the genus Lyssavirus within the family Rhabdoviridae, the pan-lyssavirus nested reverse transcription ...

An In Vitro Protocol for Evaluating MicroRNA Levels, Functions, and Associated Target Genes in Tumor Cells

Ein In-Vitro-Protokoll zur Bewertung von MicroRNA-Spiegeln, -Funktionen und assoziierten Zielgenen in Tumorzellen

MicroRNAs (miRNAs) are small regulatory RNAs which are recognized to modulate numerous intracellular signaling pathways in several diseases including ...