Name: generation of cationic nanoliposomes for the efficient delivery of in vitro transcribed messenger rna
Uploaded: 2019-02-01T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Generation of Cationic Nanoliposomes for the Efficient Delivery of In Vitro Transcribed Messenger RNA at JoVE.com

1-جيل نانوليبوسوميس الأيوني (الشكل 1)
<ol><li>تذوب الدهون DC-الكوليسترول في الدم (3β-[N-(N′,N′-dimethylaminoethane)-كاربامويل] الكوليسترول هيدروكلوريد) ومنشطات (ديوليويل فوسفاتيديليثانولاميني)، تسليم كمسحوق، في كلوروفورم لتحقيق تركيز نهائي 25 ملغ/مل. ملاحظة: تخزين الدهون المذابة في-20 درج?...

ويصف البروتوكول قدم توليد نلبس مع تغليف عالية الفعالية مرناً معدلة صناعيا، وكذلك تعداء موثوقة من الخلايا في المختبر. وعلاوة على ذلك، نلبس كفالة الإفراج عن مرناً، الذي بدوره يترجم إلى بروتين وظيفية داخل الخلايا. بالإضافة إلى ذلك، ترانسفيكشنز استخدام نلبس يمكن أن يؤديها في الخلية الع?...

استخدام مرناً معدلة للتطبيقات العلاجية أظهرت إمكانات كبيرة في العامين الماضيين. في أمراض القلب والأوعية الدموية، والالتهابات، ومونوجينيتيك، وكذلك في تطوير اللقاحات، مرناً هو وكيل علاجية واعدة1.
العلاج استبدال البروتين مع مرناً يوفر العديد من المزايا على مدى العلاج الجيني الكلاسيكية، التي تستند إلى تعداء الحمض النووي في الخلايا الهدف2. يبدأ الدالة مرناً في مباشرة سيتوسول. على الرغم من أن بلازميد الحمض النووي (بدنا)، بنية مزدوجة-الذين تقطعت بهم السبل، والتعميم الحمض النووي الذي يحتوي على منطقة مروج وتسلسل جينات ترميز البروتين العلاجي3، أيضا من أعمال في سيتوسول، يمكن فقط إدراجها في الخلايا التي تسير من خلال الانقسام في وقت تعداء. وهذا يقلل عدد transfected الخلايا في الأنسجة1،4. على وجه التحديد، هو تعداء للأنسجة مع النشاط الانقسام ضعيفة، مثل خلايا القلب، صعوبة5. على النقيض من بدنا، تحدث تعداء وترجمة مرناً في الخلايا الانقسامية وغير الانقسامية في1،الأنسجة6. قد يأتي اندماج الحمض النووي الفيروسي في جينوم المضيف مع تأثيرات مطفرة أو ردود فعل المناعة7،8، ولكن بعد تعداء الخلايا التي تحتوي على ترميز البروتين مرناً، نوفو دي تخليق البروتين المطلوب يبدأ مستقلة9،10. وعلاوة على ذلك، يمكن تعديل تخليق البروتين تحديداً إلى الحاجة للمريض عن طريق الجرعات الفردية، دون التدخل في الجينوم والمخاطرة بتأثيرات مطفرة11. يمكن خفض إمكانات تنشيط المناعة مرناً ولدت صناعيا هائلا باستخدام أردين الزائفة و 5 '-ميثيلسيتيديني بدلاً من أردين وسيتيديني12. أردين الزائفة كما تبين مرناً معدلة زيادة استقرار البيولوجي وأعلى بكثير قدرات متعدية الجنسيات13.
لتكون قادرة على الاستفادة من خصائص الواعدة للعلاج على أساس مرناً في التطبيقات السريرية، من الضروري إنشاء أداة مناسبة لنقل مرناً في الخلية. يجب أن تحمل خصائص غير سامة في المختبر و في فيفوهذه المركبات وحماية مرناً ضد تدهور نوكلاس وتوفر امتصاص الخلوية كافية لتوافر المطول والترجمة مرناً14.
من بين جميع أنواع الناقل المحتملة في فيفو تسليم المخدرات، مثل الأنابيب النانوية الكربونية، ونقاط الكم، والدهنية، هذا الأخير قد تم درس أكثر من15،16. الدهنية حويصلات تتألف من بلير الدهن10. وهم أمفيفيليك مع مسعور ومقطع ماء، ومن خلال هذا الترتيب الذاتي لهذه الجزيئات، طبقة مزدوجة كروية شكلت17. داخل الدهنية، العوامل العلاجية أو المخدرات يمكن تغليف و، وبالتالي، محمية من تدهور الانزيمية18. الدهنية التي تحتوي على N-[1-(2,3-dioleyloxy)propyl]-N,N,N-trimethylammonium كلوريد (دوتما)19، [1، 2-مكررا (أوليويلوكسي)-3-البروبان (تريميثيلامونيو)] (دوتاب)20، و21من ديوكتاديسيلاميدوجليسيلسبيرميني (الكلاب)، أو الكولسترول DC-22، تتميز جيدا وكثيراً ما تستخدم تعداء الخلوية مع الحمض النووي الريبي أو.
وتتألف الدهنية الموجبة دهن مشحونة بشكل إيجابي ودون توجيه تهمة إليه فسفوليبيد23. تعداء عبر الدهنية الموجبة واحد من الأساليب الأكثر شيوعاً لنقل الأحماض النووية في الخلايا24،25. تشكل جزيئات الدهن الموجبة المجمعات مع مجموعات الفوسفات مشحونة سلبا في العمود الفقري ل جزيئات الحمض النووي26. هذه ليبوبليكسيس ما يسمى نعلق على سطح غشاء الخلية وإدخال الخلية عن طريق الالتقام أو الالتقام-مثل-آليات27.
في عام 1989، مالون وآخرون. ووصف بنجاح الموجبة الدهون بوساطة مرناً تعداء28. ومع ذلك، باستخدام خليط من دوتما و 1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine (المخدر)، وجد الفريق أن دوتما تتجلى الآثار السامة للخلايا28. بالإضافة إلى ذلك، أظهرت زهرة et al. أن دوتاب (1، 2-ديوليويلوكسي-3-تريميثيلامونيوم-البروبان كلوريد) يمكن أن تستخدم ككاشف تعداء مرناً29. ومع ذلك، تعداء كفاءة للخلايا، ينبغي استخدام دوتاب في تركيبة مع الكواشف الأخرى، مثل فيبرونيكتين29 أو30من المخدر. وحتى الآن، كان دوتما الدهون الموجبة الأولى في السوق المستخدمة ل توصيل الجينات31. الدهون الأخرى تستخدم كناقلات العلاجية أو يجري اختبارها في مراحل مختلفة من التجارب السريرية، (مثلاً، اندوتاج-الأول، الذي يحتوي على دوتاب كناقل دهن)، ويجري التحقيق حاليا في مرحلة الثانية لمحاكمة سريرية32.
يصف هذا العمل وضع بروتوكول لتوليد نلبس المحتوية على DC-الكوليسترول ومخدر. من السهل القيام بهذا الأسلوب ويسمح لتوليد نلبس ذات أحجام مختلفة. الهدف العام لتوليد البرمجة اللغوية العصبية باستخدام الأسلوب الجاف-فيلم إنشاء الدهنية ل complexation مرناً، مما يتيح تعداء خلية فعالة ومتوافق حيويا في المختبر14،33.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT)</td>
			<td>AppliChem, Darmstadt, Germany</td>
			<td>A2231</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>(3&#946;-[N-(N&#8242;,N&#8242;-dimethylaminoethane)-carbamoyl]cholesterol hydrochloride (DC-Cholesterol)</td>
			<td>Avanti, Alabama, USA</td>
			<td>700001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4&#160;&#8242;,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Darmstadt, Germany</td>
			<td>D1306</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACScan system</td>
			<td>BD Biosciences, Heidelberg, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Fix (10x)</td>
			<td>BD Biosciences, Heidelberg, Germany</td>
			<td>340181</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloroform</td>
			<td>Merck, Darmstadt, Germany</td>
			<td>102445</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxid (DMSO)</td>
			<td>Serva Electrophoresis GmbH, Heidelberg, Germany</td>
			<td>20385.02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dioleoyl phosphatidylethanolamine (DOPE)</td>
			<td>Avanti, Alabama, USA</td>
			<td>850725</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence microscope</td>
			<td>Zeiss Axio, Oberkochen, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipofectamine 2000</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Darmstadt, Germany</td>
			<td>11668019</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini extruder</td>
			<td>Avanti, Alabama, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nuclease-free water</td>
			<td>Qiagen, Hilden, Germany</td>
			<td>129114</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opti-Mem</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Darmstadt, Germany</td>
			<td>11058021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS buffer (w/o Ca2+/Mg2+)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Darmstadt, Germany</td>
			<td>70011044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quant-iT Ribo Green RNA reagent kit</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Darmstadt, Germany</td>
			<td>Q33140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI (w/o phenol red)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Darmstadt, Germany</td>
			<td>11835030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silica gel</td>
			<td>Carl Roth, Karlsruhe, Germany</td>
			<td>P077</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin/EDTA (0.05%)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Darmstadt, Germany</td>
			<td>25300054</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HotStar HiFidelity Polymerase Kit</td>
			<td>Qiagen, Hilden, Germany</td>
			<td>202602</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>QIAquick PCR Purification Kit</td>
			<td>Qiagen, Hilden, Germany</td>
			<td>28104</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td> 
			Pseudouridine-5&#39;-Triphosphate (&#936;-UTP)</td>
			<td>TriLink Biotechnologies, San Diego, USA</td>
			<td>N-1019</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5-Methylcytidine-5&#39;-Triphosphate (Methyl-CTP)</td>
			<td>TriLink Biotechnologies, San Diego, USA</td>
			<td>N-1014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cyanine 3-CTP</td>
			<td>PerkinElmer, Baesweiler, Germany</td>
			<td>NEL580001EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNeasy Mini Kit</td>
			<td>Qiagen, Hilden, Germany</td>
			<td>74104</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEGAscript T7 Transcription Kit</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Darmstadt, Germany</td>
			<td>AM1333</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3&#180;-O-Me-m7G(5&#39;)ppp(5&#39;)G RNA Cap Structure Analog</td>
			<td>New England Biolabs, Ipswich, USA</td>
			<td>S1411L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antarctic Phosphatase</td>
			<td>New England Biolabs, Ipswich, USA</td>
			<td>M0289S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Darmstadt, Germany</td>
			<td>16500-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GelRed</td>
			<td>Biotium, Fremont, USA</td>
			<td>41003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>peqGOLD DNA ladder mix</td>
			<td>VWR, Pennsylvania, USA</td>
			<td>25-2040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Invitrogen 0.5-10kb RNA ladder</td>
			<td>Fisher Scientific, G&#246;teborg, 
			Sweden</td>
			<td>11528766</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

generation of cationic nanoliposomes for the efficient delivery of in vitro transcribed messenger rna

وضع الحمض النووي الريبي الرسول (مرناً)-على أساس المداواة لعلاج الأمراض المختلفة أصبح أكثر وأكثر أهمية بسبب الإيجابية خصائص في المختبر نسخها مرناً (IVT). مع المساعدة من IVT مرناً، يمكن أن يتسبب حيثياته تخليق البروتين المطلوب دون تغيير الحالة الفسيولوجية للخلية الهدف. وعلاوة على ذلك، يمكن التحكم تخليق البروتين الحيوي بدقة نظراً لتأثير عابر من IVT مرناً.
تعداء كفاءة للخلايا، نانوليبوسوميس (نلبس) قد تمثل وسيلة إيصال آمنة وفعالة مرناً العلاجية. تصف هذه الدراسة وضع بروتوكول لتوليد آمنة وفعالة الموجبة نلبس تتألف من DC-الكوليسترول و 1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine (منشطات) كوسيلة إيصال مرناً IVT. نلبس بعد من معرفة حجم، توزيعاً متجانساً، وقدرة كومبليكسيشن عالية، ويمكن أن تنتج باستخدام الأسلوب الجاف-فيلم. وعلاوة على ذلك، نقدم نظم اختبار مختلفة لتحليل ما كومبليكسيشن وزيادة بلغت تعداء الاصطناعية باستخدام البروتينات الفلورية الخضراء (اجفب) مرناً، فضلا عن تأثيرها على بقاء الخلية. إجمالاً، ينص البروتوكول على عرض نهج فعالة وآمنة complexation مرناً، التي قد تقدم وتحسين الإدارة مرناً العلاجية.

استخدام البروتوكول كما هو موضح، أعدت نلبس تتألف من الدهون DC-الكوليسترول ومخدر باستخدام الأسلوب الجاف-فيلم (الشكل 1). أثناء الإعداد، يظهر الحل نانوليبوسومي مراحل مختلفة في تعكر (الشكل 2).
يمكن ثم تحليل فعالي?...

Watch this Scientific Journal Video about Generation of Cationic Nanoliposomes for the Efficient Delivery of In Vitro Transcribed Messenger RNA at JoVE.com

Generation of Cationic Nanoliposomes for the Efficient Delivery of In Vitro Transcribed Messenger RNA

جيل نانوليبوسوميس الموجبة لتسليم كفاءة في المختبر نسخها رسول الجيش الملكي النيبالي

هنا يمكننا وصف بروتوكول لتوليد نانوليبوسوميس الأيوني، الذي يستند إلى الأسلوب الجاف-الفيلم ويمكن استخدامها الآمنة وتقديم كفاءة في المختبر نسخها رسول الجيش الملكي النيبالي.

The development of messenger RNA (mRNA)-based therapeutics for the treatment of various diseases becomes more and more important because of the positive ...

هذا البروتوكول يسمح لإنتاج نانوليبوسومات آمنة وفعالة والتي يمكن استخدامها كمركبات transfection لRNA رسول العلاجية. هذه نانوليبوسومات تسهيل امتصاص مرنا في الخلايا مما يؤدي إلى زيادة مستويات التعبير البروتين دون التأثير على صلاحية الخلية. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هو توليد سريع وسهل من نانوليبوزوس مستقرة مع حجم محدد وتوزيع متجانس.وعلاوة على ذلك، فإنها تحمي مرنا مغلفة من التدهور وتؤدي إلى الترجمة لفترات طويلة. سوف يكون إثبات الإجراء أن أنطونيا لينك، طالبة دكتوراه من مختبرنا. لبدء هذا الإجراء، وإعداد حلول الأسهم للدهون، DC-الكوليسترول و DOPE عن طريق حل كل في الكلوروفورم إلى تركيز النهائي من 25 ملليغرام لكل ملليلتر.مزيج 40 ميكرولترات من الكولسترول DC الذائبة مع 80 ميكرولترات من DOPE الذائبة في قارورة زجاجية. اتبخر الكلوروفورم تحت تدفق غاز الأرجون لمدة 15 دقيقة. بعد ذلك، املأ جهاز الحساسية بجل السيليكا.ضع قارورة الزجاج المفتوحة داخل وتطبيق فراغ بين عشية وضحاها لضمان تبخر الكلوروفورم المتبقية. سوف تشكل الفيلم الدهون الناتجة داخل قارورة الزجاج. في اليوم التالي، إضافة ملليلتر واحد من المياه الحرة النوى لإعادة الترطيب في فيلم الدهون.ودوامة التعليق لمدة 15 دقيقة. وضع تعليق في حمام سونيكيشن لمدة ساعة واحدة. بعد ذلك، تجميع الطارد مصغرة وفقا لتعليمات الشركات المصنعة.املأ حقنة مع التعليق السائل ووضعها جانب واحد من الطارد. ضع حقنة فارغة على الجانب الآخر. اضغط على تعليق الدهون من خلال الغشاء من حقنة واحدة إلى أخرى، ما يقرب من 20-25 مرة لبثق التعليق.ثم، تخزين نانوليبوسومات في قارورة زجاجية في أربع درجات مئوية حتى جاهزة للاستخدام. أولاً، ذوبان الحمض النووي الاصطناعي على الجليد. دوامة مرنا المجمدة ثم الطرد المركزي قبل وقت قصير من فتح الأنبوب.ثم، مزيج ميكروغرام واحد من مرنا الاصطناعية مع كميات مختلفة من تعليق نانوليبوسوم. جهاز طرد مركزي لفترة وجيزة واحتضان في درجة حرارة الغرفة لمدة 20 دقيقة لتشكيل نانوليببليكس. ثم، إضافة ملليلتر من المتوسطة الخلية العادية إلى nanolipoplex ومزيج عن طريق الأنابيب صعودا وهبوطا.قم بإعداد الخلايا قبل يوم واحد من عملية إعادة الرض. لذلك، لوحة 150، 000 A549 الخلايا في كل بئر من 12 لوحة جيدا يوم واحد قبل transfection. احتضان الخلايا في 37 درجة مئوية مع 5٪ ثاني أكسيد الكربون والخلايا المتوسطة العادية لمدة 24 ساعة.ثم في اليوم التالي، غسل كل بئر من الخلايا المعدة مرة واحدة مع ملليلتر واحد من برنامج تلفزيوني. إضافة ملليلتر واحد من خليط نانوليببليكس مستعد إلى واحدة من الآبار التي تحتوي على خلايا A549. احتضان في ظروف منتظمة لمدة 24 ساعة لتحليل كفاءة transfection، أو لمدة 24-72 ساعة لتحليل صلاحية الخلية بعد transfection.إزالة عظمى وغسل كل جيدا مع ملليلتر واحد من برنامج تلفزيوني لإزالة نانوليبوسومات المتبقية. لإعداد الخلايا للخلايا، أولا إضافة 500 ميكرولترات من التربسين EDTA إلى كل بئر واحتضان في 37 درجة مئوية لمدة ثلاث دقائق لtrypsinize الخلايا. بعد ذلك، إضافة 500 ميكرولتراترس من المتوسط العادية التي تحتوي على FBS لوقف العملية وactivate التربسين.الطرد المركزي الخلايا في 400 مرة G لمدة خمس دقائق. وإزالة بعناية فائقة دون إزعاج بيليه الخلية. غسل الخلايا مع ملليلتر واحد من برنامج تلفزيوني.ثم إعادة تعليق الخلايا في 300 ميكرولترات من حل تثبيت الخلايا ونقلها إلى أنابيب تدفق الخلايا. استخدم مقياس تدفق الخلايا لتحليل الخلايا عند 488 نانومتر. لتحضير الخلايا للمجهر الفلوري، أضف ملليلتر من الميثانول المبرد إلى كل بئر لإصلاح الخلايا.إضافة 500 ميكرولترات من 300 نانوموللار حل من DAPI حل في برنامج تلفزيوني لكل بئر. احتضان في الظلام لمدة خمس دقائق. بعد ذلك، قم بإزالة محلول DAPI وغسل الخلايا مرة أخرى مع الميثانول 100٪ التي تم تخزينها سابقا في ناقص 20 درجة مئوية.استخدام المجهر الفلوريس لتحليل الخلايا باستخدام الإثارة والانبعاثات الطول الموجي هو مبين هنا. في هذه الدراسة، يتم إنشاء نانوليبوزومات مع فعالية التغليف عالية لممر رنا المعدلة صناعيا. باستخدام RNA كمية عدة، يمكن تحليل فعالية التغليف من نانوليبوسومات بعد تغليف ميكروغرام واحد من eGFP ترميز مرنا عن طريق تحليل كمية مجانية من مرنا التي لا يتم تغليفها.بعد تغليف EGFP مرنا في كميات مختلفة من نانوليبوسومات، يمكن أن تكون محتضنة nanolipoplexes شكلت مع الخلايا في المختبر والنسبة المئوية للخلايا eGFP التعبير عن يمكن تحليلها باستخدام تدفق 24 ساعة بعد transfection. كما رأينا هنا، حتى واحد فقط ميكرولتر من حل نانوليبوسومات كافية لتحقيق نقل عالية من الخلايا invitro. عندما تكون الخلايا مع العدوى nanoliposomes التي تحتوي على Cy3 المسمى eGFP mRNA، يمكن تصور وجود الحمض النووي eGFP في السيتوبلازم، وكذلك بروتين eGFP المنتج بالفعل.منذ نقل الخلايا باستخدام نانوليبوبليكس يمكن أن يكون لها آثار سلبية على الخلايا، تم اختبار صلاحية الخلايا بعد 24 ساعة و 72 ساعة بعد نقل. ولم يكن من الممكن اكتشاف أي آثار على قابلية الخلية للبقاء عندما عولجت الخلايا بـ 2.5 أو خمسة ميكرولترات من نانوليبيكس. عند محاولة هذا الإجراء، من المهم أن نتذكر أن العمل في بيئة خالية من الإيثانول في كل وقت لأن هذا يمكن أن يضر استقرار نانوليبوزو.أثناء إعداد وخلط الكوليسترول DC مع DOPE، يجب استخدام ماصة زجاجية لتجنب تلوث الدهون الذائبة مع مكونات قابلة للذوبان من نصائح الماصات البلاستيكية. بعد هذا البروتوكول، يمكن التلاعب بـ nanoliposomes المتولدة بسهولة أثناء أو بعد التحضير. على سبيل المثال، من شأن دمج جزيئات PEG أو الأجسام المضادة المحددة أن يؤدي إلى زيادة الاستقرار أو بدء استهداف الأنسجة النشطة.و nanoliposomes ولدت الوفاء بالجوانب اللازمة للسلامة وتسهيل امتصاص مرنا إلى الخلايا المستهدفة. يمكن أن تقدم نانوليبوسوس المعقدة مع NRNA علاجية محددة مساهمة أساسية في تطوير علاجات رواية القائمة على مرنا في مجال هندسة الأنسجة أو العلاج البديل على سبيل المثال.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Generation of Cationic Nanoliposomes for the Efficient Delivery of In Vitro Transcribed Messenger RNA

Microscale Vortex-assisted Electroporator for Sequential Molecular Delivery

الميكروسكيل Electroporator لتوصيل متسلسل الجزيئية بمساعدة دوامة

Electroporation has received increasing attention in the past years, because it is a very powerful technique for physically introducing non-permeant ...

Generation of a Three-dimensional Full Thickness Skin Equivalent and Automated Wounding

جيل من سمك ثلاثي الأبعاد الجلد كامل أي ما يعادل واصابة الآلي

In vitro models are a cost effective and ethical alternative to study cutaneous wound healing processes. Moreover, by using human cells, these models ...

Eye Irritation Test (EIT) for Hazard Identification of Eye Irritating Chemicals using Reconstructed Human Cornea-like Epithelial (RhCE) Tissue Model

Eye Irritation Test EIT for Hazard Identification of Eye Irritating Chemicals using Reconstructed Human Cornea-like Epithelial RhCE Tissue Model

العين تهيج اختبار (EIT) لتحديد مخاطر العين مهيج للمواد الكيميائية باستخدام يعيد الإنسان القرنية مثل الظهارية (RHCE) الأنسجة نموذج

To comply with the Seventh Amendment to the EU Cosmetics Directive and EU REACH legislation, validated non-animal alternative methods for reliable and ...

Adapting the Electrospinning Process to Provide Three Unique Environments for a Tri-layered In Vitro Model of the Airway Wall

Adapting the Electrospinning Process to Provide Three Unique Environments for a Tri-layered In Vitro Model of the Airway Wall

تكييف عملية Electrospinning لتوفير ثلاث بيئات فريدة من نوعها لثلاثي الطبقات<em&gt; في المختبر</em&gt; نموذج جدار مجرى الهواء

Electrospinning is a highly adaptable method producing porous 3D fibrous scaffolds that can be exploited in in vitro cell culture. Alterations to ...

Delivery of Therapeutic siRNA to the CNS Using Cationic and Anionic Liposomes

تسليم العلاجية سيرنا إلى الجهاز العصبي المركزي عن طريق الموجبة وأنيوني الليبوزومات

Prion diseases result from the misfolding of the normal, cellular prion protein (PrPC) to an abnormal protease resistant isomer called PrPRes.  The ...

Polyelectrolyte Complex for Heparin Binding Domain Osteogenic Growth Factor Delivery

مجمع متضاعف الكتروليتي للهيبارين ربط تسليم عظمية عامل نمو المجال

During reconstructive bone surgeries, supraphysiological amounts of growth factors are empirically loaded onto scaffolds to promote successful bone ...

An In Vitro Organ Culture Model of the Murine Intervertebral Disc

An In Vitro Organ Culture Model of the Murine Intervertebral Disc

ل<em&gt; في المختبر</em&gt; نموذج الثقافة الجهاز من الفئران فقرات القرص

Intervertebral disc (IVD) degeneration is a significant contributor to low back pain. The IVD is a fibrocartilaginous joint that serves to transmit and ...

Efficient Generation and Editing of Feeder-free IPSCs from Human Pancreatic Cells Using the CRISPR-Cas9 System

كفاءة توليد وتحرير إيبسكس تغذية خالية من خلايا البنكرياس البشرية باستخدام نظام كريسبر-Cas9

Embryonic and induced pluripotent stem cells can self-renew and differentiate into multiple cell types of the body. The pluripotent cells are thus coveted ...

Preparation and Characterization of Nanoliposomes for the Entrapment of Bioactive Hydrophilic Globular Proteins

إعداد وتوصيف Nanoliposomes لفخ البروتينات الكروية المائية النشطة بيولوجيا

Liposome nanocapsules have been applied for many purposes in the pharmaceutical, cosmetic, and food industries. Attributes of liposomes include their ...

Bioparticle Microarrays for Chemotactic and Molecular Analysis of Human Neutrophil Swarming in vitro

الجسيمات الحيوية Microarrays للتحليل الكيميائي والجزيئي للالعدلة البشرية يحتشدون في المختبر

Neutrophil swarming is a cooperative process by which neutrophils seal off a site of infection and promote tissue reorganization. Swarming has classically ...