Name: generation of cationic nanoliposomes for the efficient delivery of in vitro transcribed messenger rna
Uploaded: 2019-02-01T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Generation of Cationic Nanoliposomes for the Efficient Delivery of In Vitro Transcribed Messenger RNA at JoVE.com

1. generatie van kationische Nanoliposomes (Figuur 1)
<ol><li>Los de lipiden DC-cholesterol (3β-[N--(N′,N′-dimethylaminoethane)-carbamoylfosfaat] cholesterol hydrochloride) en DOPE (dioleoyl phosphatidylethanolamine), geleverd als een poeder, in chloroform om een eindconcentratie van 25 mg/mL. Opmerking: Bewaar de opgeloste lipiden bij-20 ° C.</li>
	<li>Werken met 25 mg/mL stockoplossing van beide lipiden. Mix 40 µL van het opgeloste DC-cholesterol en 80 µL van het opgeloste DOP...

Het gepresenteerde protocol beschrijft de generatie van NLps met hoge inkapseling werkzaamheid voor synthetisch gemodificeerde mRNA, evenals de betrouwbare transfectie van cellen in vitro. Bovendien is de NLps garanderen de vrijlating van mRNA, die op zijn beurt, is vertaald in een functioneel proteïne in de cellen. Bovendien, de transfections met behulp van NLps kan worden uitgevoerd in normale cel medium, wat resulteert in hoge cel viabilities tijdens transfectie en duren tot drie dagen na de transfectie....

Het gebruik van gemodificeerde mRNA voor therapeutische toepassingen blijkt groot potentieel in de laatste paar jaar. In monogenetic, cardiovasculaire en inflammatoire ziekten, evenals bij de ontwikkeling van vaccins, is mRNA een veelbelovende therapeutische agent1.
Eiwit substitutietherapie met mRNA biedt diverse voordelen ten opzichte van de klassieke gentherapie, die is gebaseerd op de transfectie van het DNA in de doel cellen2. De functie van mRNA initieert rechtstreeks in het cytosol. Hoewel het plasmide DNA (pDNA), een constructie van het double-stranded, circulaire kan DNA met een promotor-regio en een sequentie van genen codering van de therapeutische eiwitten3, ook daden in cytosol, het alleen worden opgenomen in cellen die zijn gaan door mitose op het moment van transfectie. Dit vermindert het aantal transfected cellen in het weefsel1,4. De transfectie van weefsels met zwakke mitose activiteit, zoals hartcellen, is met name moeilijk5. In tegenstelling tot pDNA optreden de transfectie en vertaling van mRNA in de cellen van de mitotische en niet-mitotische in het weefsel1,6. De virale integratie van DNA in het genoom van de gastheer kan komen met mutagene effecten of immuunreacties7,8, maar na de transfectie van cellen met een eiwit-encoding mRNA, de DOVO -synthese van de gewenste eiwit begint autonoom9,10. Bovendien kan de eiwitsynthese juist naar de behoefte van de patiënt door middel van individuele doses, zonder mengend in het genoom en het gevaar van mutagene effecten11worden aangepast. Het potentieel immuun-activeren van synthetisch gegenereerde mRNA kan drastisch worden verlaagd met behulp van pseudo-uridine en 5'-methylcytidine in plaats van uridine en cytosinetrifosfaat12. Pseudo-uridine gemodificeerde mRNA is ook aangetoond dat een verhoogde biologische stabiliteit en een aanzienlijk hogere translationeel capaciteit13.
Om te kunnen profiteren van de veelbelovende eigenschappen van mRNA gebaseerde therapie in klinische toepassingen, is het essentieel om een geschikt voertuig voor het vervoer van mRNA in de cel. Dit voertuig moet dragen niet-toxische eigenschappen in vitro en in vivo, de mRNA tegen nuclease-afbraak te beschermen, en bieden voldoende cellulaire opname voor een langdurige beschikbaarheid en vertaling van de mRNA14.
Onder allerlei mogelijke vervoerder voor in vivo drug levering, zoals koolstof nanotubes en quantumdots liposomen, de laatste zijn geweest de meest15,16studeerde. Liposomen zijn blaasjes bestaande uit een lipide dubbelgelaagde10. Ze zijn amfifiele met een hydrofobe en een hydrofiele sectie, en door de zelfstandige regeling van deze moleculen, is een bolvormige dubbellaagse gevormde17. Binnen de liposomen, kunnen therapeutische agenten of drugs worden ingekapseld en, dus, beschermd tegen enzymatische afbraak18. Liposomen met N-[1-(2,3-dioleyloxy)propyl]-N,N,N-trimethylammonium chloride (DOTMA)19, [1,2-bis (oleoyloxy) -3-(trimethylammonio) propaan] (DOTAP)20en21van het dioctadecylamidoglycylspermine (honden), of DC-cholesterol22, zijn goed gekenmerkt en vaak gebruikt voor cellulaire transfectie met DNA of RNA.
Kationogene liposomen bestaat uit een positief geladen lipide en een ongeladen fosfolipide23. Transfectie via kationische liposomen is één van de meest voorkomende methoden voor het vervoer van nucleic zuren in cellen24,25. De deeltjes van kationische lipide vormen complexen met de negatief-geladen fosfaat groepen in de ruggengraat van nucleïnezuur moleculen26. Deze zogenaamde lipoplexes hechten aan het oppervlak van de celmembraan en voer de cel via endocytosis of endocytose-achtige-mechanismen27.
In 1989, Malone, et al.. succesvol beschreven kationische lipide-gemedieerde mRNA transfectie28. Echter, met behulp van een mengsel van DOTMA en 1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine (DOPE), de groep vond dat DOTMA geopenbaard cytotoxische effecten28. Zohra et al. toonde bovendien aan dat DOTAP (1,2-dioleoyloxy-3-trimethylammoniumformiaat-propaan chloride) kan worden gebruikt als een reagens van mRNA transfectie29. Echter, voor de efficiënte transfectie van cellen, DOTAP moeten worden gebruikt in combinatie met andere reagentia, zoals fibronectine29 of DOPE30. Tot nu toe, was DOTMA de eerste kationische lipide in de markt voor de levering van gene31. Andere lipiden als therapeutische dragers worden gebruikt of worden getest in verschillende stadia van klinische proeven, (bijvoorbeeld EndoTAG-I, met DOTAP als de drager van een lipide), wordt momenteel onderzocht in een klinische trial fase-II32.
Dit werk beschrijft een protocol voor het genereren van NLps met DC-cholesterol en DOPE. Deze methode is gemakkelijk uit te voeren en maakt de generatie van NLps van verschillende grootte. Het algemene doel van NLp generatie met de droge-film-methode is het creëren van liposomen voor mRNA kleurverandering, waardoor op efficiënte en biocompatibel cel transfectie in vitro14,33.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT)</td>
			<td>AppliChem, Darmstadt, Germany</td>
			<td>A2231</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>(3&#946;-[N-(N&#8242;,N&#8242;-dimethylaminoethane)-carbamoyl]cholesterol hydrochloride (DC-Cholesterol)</td>
			<td>Avanti, Alabama, USA</td>
			<td>700001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4&#160;&#8242;,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Darmstadt, Germany</td>
			<td>D1306</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACScan system</td>
			<td>BD Biosciences, Heidelberg, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Fix (10x)</td>
			<td>BD Biosciences, Heidelberg, Germany</td>
			<td>340181</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloroform</td>
			<td>Merck, Darmstadt, Germany</td>
			<td>102445</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxid (DMSO)</td>
			<td>Serva Electrophoresis GmbH, Heidelberg, Germany</td>
			<td>20385.02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dioleoyl phosphatidylethanolamine (DOPE)</td>
			<td>Avanti, Alabama, USA</td>
			<td>850725</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence microscope</td>
			<td>Zeiss Axio, Oberkochen, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipofectamine 2000</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Darmstadt, Germany</td>
			<td>11668019</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini extruder</td>
			<td>Avanti, Alabama, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nuclease-free water</td>
			<td>Qiagen, Hilden, Germany</td>
			<td>129114</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opti-Mem</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Darmstadt, Germany</td>
			<td>11058021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS buffer (w/o Ca2+/Mg2+)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Darmstadt, Germany</td>
			<td>70011044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quant-iT Ribo Green RNA reagent kit</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Darmstadt, Germany</td>
			<td>Q33140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI (w/o phenol red)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Darmstadt, Germany</td>
			<td>11835030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silica gel</td>
			<td>Carl Roth, Karlsruhe, Germany</td>
			<td>P077</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin/EDTA (0.05%)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Darmstadt, Germany</td>
			<td>25300054</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HotStar HiFidelity Polymerase Kit</td>
			<td>Qiagen, Hilden, Germany</td>
			<td>202602</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>QIAquick PCR Purification Kit</td>
			<td>Qiagen, Hilden, Germany</td>
			<td>28104</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td> 
			Pseudouridine-5&#39;-Triphosphate (&#936;-UTP)</td>
			<td>TriLink Biotechnologies, San Diego, USA</td>
			<td>N-1019</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5-Methylcytidine-5&#39;-Triphosphate (Methyl-CTP)</td>
			<td>TriLink Biotechnologies, San Diego, USA</td>
			<td>N-1014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cyanine 3-CTP</td>
			<td>PerkinElmer, Baesweiler, Germany</td>
			<td>NEL580001EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNeasy Mini Kit</td>
			<td>Qiagen, Hilden, Germany</td>
			<td>74104</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEGAscript T7 Transcription Kit</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Darmstadt, Germany</td>
			<td>AM1333</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3&#180;-O-Me-m7G(5&#39;)ppp(5&#39;)G RNA Cap Structure Analog</td>
			<td>New England Biolabs, Ipswich, USA</td>
			<td>S1411L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antarctic Phosphatase</td>
			<td>New England Biolabs, Ipswich, USA</td>
			<td>M0289S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Darmstadt, Germany</td>
			<td>16500-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GelRed</td>
			<td>Biotium, Fremont, USA</td>
			<td>41003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>peqGOLD DNA ladder mix</td>
			<td>VWR, Pennsylvania, USA</td>
			<td>25-2040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Invitrogen 0.5-10kb RNA ladder</td>
			<td>Fisher Scientific, G&#246;teborg, 
			Sweden</td>
			<td>11528766</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

generation of cationic nanoliposomes for the efficient delivery of in vitro transcribed messenger rna

De ontwikkeling van boodschapper-RNA (mRNA)-op basis van therapieën voor de behandeling van verschillende ziekten meer en meer belangrijk vanwege de positieve wordt eigenschappen van in vitro getranscribeerd (IVT) mRNA. Met de hulp van IVT mRNA, kan de DOVO synthese van een gewenste eiwit worden opgewekt zonder het wijzigen van de fysiologische status van de doelcel. Bovendien, eiwit biosynthese kan precies worden gecontroleerd als gevolg van de voorbijgaande effect van IVT mRNA.
Voor de efficiënte transfectie van cellen, kunnen nanoliposomes (NLps) vormen een veilige en efficiënte leveringsvoertuig voor therapeutische mRNA. Deze studie beschrijft een protocol voor het genereren van veilige en efficiënte kationische NLps bestaande uit DC-cholesterol en 1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine (DOPE) als een levering vector voor IVT mRNA. NLps hebben een gedefinieerde grootte, een homogene verdeling, en een hoge kleurverandering capaciteit, en kan worden geproduceerd met behulp van de methode droge-film. Bovendien presenteren we verschillende testsystemen voor het analyseren van hun kleurverandering en transfectie efficacies met behulp van synthetische verbeterd groen fluorescent proteïne (eGFP) mRNA, alsmede hun effect op de levensvatbaarheid van de cellen. Over het algemeen voorziet gepresenteerd het protocol een effectieve en veilige benadering mRNA kleurverandering, die kan bevorderen en verbeteren van het beheer van therapeutische mRNA.

Met behulp van het protocol zoals beschreven, NLps bestaande uit de lipiden DC-cholesterol en DOPE opgesteld met behulp van de methode van de droge-film (Figuur 1). Tijdens de voorbereiding toont de nanoliposome oplossing verschillende stadia in de troebelheid (Figuur 2).
De werkzaamheid van de inkapseling van de NLps kan dan na de inkapseling van 1 microgram van mRNA e...

Watch this Scientific Journal Video about Generation of Cationic Nanoliposomes for the Efficient Delivery of In Vitro Transcribed Messenger RNA at JoVE.com

Generation of Cationic Nanoliposomes for the Efficient Delivery of In Vitro Transcribed Messenger RNA

Generatie van kationische Nanoliposomes voor de efficiënte levering van In Vitro getranscribeerd Messenger RNA

Hier beschrijven we een protocol voor het genereren van kationische nanoliposomes, die is gebaseerd op de methode van de droge-film en kan worden gebruikt voor de veilige en efficiënte levering van in vitro getranscribeerd boodschapper-RNA.

The development of messenger RNA (mRNA)-based therapeutics for the treatment of various diseases becomes more and more important because of the positive ...

Dit protocol maakt de productie van veilige en efficiënte nanoliposomen mogelijk die kunnen worden gebruikt als transfectievoertuigen voor therapeutisch boodschapperRNA. Deze nanoliposomen vergemakkelijken mRNA opname in cellen wat resulteert in verhoogde eiwitexpressie niveaus zonder dat de levensvatbaarheid van de cel. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is het snel en eenvoudig genereren van stabiele nanoliposomen met gedefinieerde grootte en homogene distributie.Bovendien beschermen ze het ingekapselde mRNA tegen afbraak en leiden ze tot langdurige vertaling. Het aantonen van de procedure zal Antonia Link zijn, een promovendus uit ons laboratorium. Om deze procedure te beginnen, bereid voorraad oplossingen voor de lipiden, DC-cholesterol en DOPE door het oplossen van elk in chloroform tot een uiteindelijke concentratie van 25 milligram per milliliter.Meng 40 microliter van het opgeloste DC-cholesterol met 80 microliter van het opgeloste DOPE in een glazen kolf. Verdampen de chloroform onder een argon gasstroom gedurende 15 minuten. Vul vervolgens een desiccator met silicagel.Plaats de open glazen kolf binnen en breng 's nachts een vacuüm aan om ervoor te zorgen dat de resterende chloroform verdampt. De resulterende lipide film zal vormen in de glazen kolf. De volgende dag, voeg een milliliter van nuclease gratis water om de lipide film te hydrateren.En de suspensie gedurende 15 minuten. Plaats de suspensie een uur in een sonicatiebad. Monteer hierna de mini-extruder volgens de instructies van de fabrikant.Vul een spuit met de vloeibare suspensie en plaats deze aan de ene kant van de extruder. Plaats een lege spuit aan de andere kant. Druk de lipidesveer door het membraan van de ene spuit naar de andere, ongeveer 20-25 keer om de suspensie te extruderen.Bewaar vervolgens de nanoliposomen in een glazen kolf op vier graden Celsius tot ze klaar zijn voor gebruik. Ontdooi eerst het synthetische mRNA op ijs. Vortex de bevroren mRNA en vervolgens centrifugeren het kort voor het openen van de buis.Meng vervolgens een microgram van het synthetische mRNA met verschillende hoeveelheden nanoliposoom suspensie. Centrifuge kort en incubeer bij kamertemperatuur gedurende 20 minuten voor nanolipoplex vorming. Voeg vervolgens milliliter van regulier celmedium toe aan de nanolipoplex's en meng door op en neer te pipetten.Bereid de cellen een dag voor transfectie. Daarom, plaat 150, 000 A549 cellen in elke put van een 12 put plaat een dag voorafgaand aan de transfectie. Incubeer de cellen op 37 graden Celsius met 5% kooldioxide en regelmatig celmedium gedurende 24 uur.Dan de volgende dag, was elke goed van voorbereide cellen een keer met een milliliter PBS. Voeg een milliliter van een bereidnacpoplexmengsel toe aan een van de putten die de A549-cellen bevatten. Incubeer onder regelmatige omstandigheden gedurende 24 uur om de transfectie-efficiëntie te analyseren, of gedurende 24-72 uur om de levensvatbaarheid van de cel na transfectie te analyseren.Verwijder de supernatant en was elke put met een milliliter PBS om de resterende nanoliposomen te verwijderen. Om de cellen voor te bereiden op cytometrie, voeg eerst 500 microliter trypsin EDTA toe aan elke put en broed je drie minuten lang in bij 37 graden Celsius om de cellen te trypsiniseren. Voeg vervolgens 500 microliters van regulier FBS-bevattend medium toe om het proces te stoppen en de trypsine te inactiveren.Centrifugeren de cellen op 400 keer G gedurende vijf minuten. En verwijder voorzichtig de supernatant zonder de celpellet te verstoren. Was de cellen met een milliliter PBS.Stel de cellen vervolgens opnieuw op in 300 microliter celfixatieoplossing en breng ze over in stroomcytriebuizen. Gebruik een stroomcytometer om de cellen op 488 nanometer te analyseren. Om de cellen voor te bereiden op fluorescentie microscopie, voeg een milliliter gekoelde methanol aan elke put om de cellen vast te stellen.Voeg 500 microliter van een 300 nanomolar oplossing van DAPI opgelost in PBS aan elke put. Vijf minuten in het donker uitbroeden. Verwijder hierna de DAPI-oplossing en was de cellen opnieuw met 100% methanol die eerder bij min 20 graden Celsius werd opgeslagen.Gebruik een fluorescentiemicroscoop om de cellen te analyseren met behulp van de excitatie en emissiegolflengten die hier worden getoond. In deze studie worden nanoliposomen gegenereerd met een hoge inkapselingseffectie voor synthetisch gemodificeerd mRNA. Met behulp van de RNA kwantificering kit, de inkapseling werkzaamheid van de nanoliposomen kan worden geanalyseerd na de inkapseling van een microgram van eGFP codering mRNA door het analyseren van de vrije hoeveelheid mRNA die niet is ingekapseld.Na de inkapseling van EGFP mRNA in verschillende hoeveelheden nanoliposomen, kunnen de gevormde nanolipoplexen worden geïncubeerd met cellen in vitro en het percentage eGFP-uitdrukkende cellen kan worden geanalyseerd met behulp van stroomcytometrie 24 uur na transfectie. Zoals hier te zien, zelfs slechts een microliter van de nanoliposomen oplossing is voldoende om een hoge transfectie van de cellen invitro te bereiken. Wanneer de cellen worden doorfecteerd met nanoliposomen die Cy3-gelabeld eGFP mRNA bevatten, kan de aanwezigheid van het eGFP mRNA in het cytoplasma en het reeds geproduceerde eGFP-eiwit worden gevisualiseerd.Aangezien de transfectie van cellen met behulp van nanolipoplexen nadelige effecten op cellen kan hebben, werd de levensvatbaarheid van de cellen getest na 24 uur en 72 uur na de transfectie. Er kunnen geen effecten op de levensvatbaarheid van de cel worden gedetecteerd wanneer de cellen werden behandeld met 2,5 of vijf microliter nanolipoplexen. Bij het proberen van deze procedure, is het belangrijk om te onthouden om te werken in een ethanol-vrije omgeving de hele tijd, omdat dit kan schadelijk zijn nanoliposoom stabiliteit.Tijdens het voorbereiden en mengen van de DC-cholesterol met DOPE, moet u gebruik maken van een glazen pipet om besmetting van de opgeloste lipiden met oplosbare componenten van plastic pipet tips te voorkomen. Volgens dit protocol kunnen de gegenereerde nanoliposomen gemakkelijk worden gemanipuleerd tijdens of na de voorbereiding. Bijvoorbeeld, integratie van PEG moleculen of specifieke antilichamen zou leiden tot meer stabiliteit of initiëren actieve weefsel targeting.De gegenereerde nanoliposomen voldoen aan de nodige veiligheidsaspecten en vergemakkelijken de opname van mRNA voor de doelcellen. Nanoliposomen, complex met een specifiek therapeutisch nRNA, kunnen een essentiële bijdrage leveren aan de ontwikkeling van nieuwe mRNA-gebaseerde therapieën op het gebied van bijvoorbeeld weefseltechniek of vervangingstherapie.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Generation of Cationic Nanoliposomes for the Efficient Delivery of In Vitro Transcribed Messenger RNA

Microscale Vortex-assisted Electroporator for Sequential Molecular Delivery

Microschaal-Vortex bijgestaan ​​Electroporatie voor Sequential Molecular Delivery

Electroporation has received increasing attention in the past years, because it is a very powerful technique for physically introducing non-permeant ...

Generation of a Three-dimensional Full Thickness Skin Equivalent and Automated Wounding

Genereren van een drie-dimensionale volledige dikte huidequivalent en Automated Verwonden

In vitro models are a cost effective and ethical alternative to study cutaneous wound healing processes. Moreover, by using human cells, these models ...

Eye Irritation Test (EIT) for Hazard Identification of Eye Irritating Chemicals using Reconstructed Human Cornea-like Epithelial (RhCE) Tissue Model

Eye Irritation Test EIT for Hazard Identification of Eye Irritating Chemicals using Reconstructed Human Cornea-like Epithelial RhCE Tissue Model

Test op oogirritatie (EIT) voor Risico oog irriterende stoffen met gereconstrueerde humane Cornea-achtige Epithelial (RHCE) Tissue Model

To comply with the Seventh Amendment to the EU Cosmetics Directive and EU REACH legislation, validated non-animal alternative methods for reliable and ...

Adapting the Electrospinning Process to Provide Three Unique Environments for a Tri-layered In Vitro Model of the Airway Wall

Adapting the Electrospinning Process to Provide Three Unique Environments for a Tri-layered In Vitro Model of the Airway Wall

Aanpassing van de elektrospinproces te bieden drie unieke omgevingen voor een Tri-layered<em&gt; In Vitro</em&gt; Model van de Airway Muur

Electrospinning is a highly adaptable method producing porous 3D fibrous scaffolds that can be exploited in in vitro cell culture. Alterations to ...

Delivery of Therapeutic siRNA to the CNS Using Cationic and Anionic Liposomes

Levering van therapeutische siRNA het CZS gebruiken kationische en anionische liposomen

Prion diseases result from the misfolding of the normal, cellular prion protein (PrPC) to an abnormal protease resistant isomer called PrPRes.  The ...

Polyelectrolyte Complex for Heparin Binding Domain Osteogenic Growth Factor Delivery

Polyelectrolyte Complex voor Heparine Binding Domain osteogeen Growth Factor Delivery

During reconstructive bone surgeries, supraphysiological amounts of growth factors are empirically loaded onto scaffolds to promote successful bone ...

An In Vitro Organ Culture Model of the Murine Intervertebral Disc

An In Vitro Organ Culture Model of the Murine Intervertebral Disc

Een<em&gt; In Vitro</em&gt; Organ Culture Model van het Muizen tussenwervelschijf

Intervertebral disc (IVD) degeneration is a significant contributor to low back pain. The IVD is a fibrocartilaginous joint that serves to transmit and ...

Efficient Generation and Editing of Feeder-free IPSCs from Human Pancreatic Cells Using the CRISPR-Cas9 System

Efficiënte generatie en het bewerken van Feeder-vrije IPSCs van menselijke Pancreatic cellen met behulp van de CRISPR-Cas9-systeem

Embryonic and induced pluripotent stem cells can self-renew and differentiate into multiple cell types of the body. The pluripotent cells are thus coveted ...

Preparation and Characterization of Nanoliposomes for the Entrapment of Bioactive Hydrophilic Globular Proteins

Voorbereiding en karakterisering van Nanoliposomes voor de Entrapment van bioactieve hydrofiele bolvormige eiwitten

Liposome nanocapsules have been applied for many purposes in the pharmaceutical, cosmetic, and food industries. Attributes of liposomes include their ...

Bioparticle Microarrays for Chemotactic and Molecular Analysis of Human Neutrophil Swarming in vitro

Bioparticle Microarrays voor Chemotactic en Moleculaire Analyse van menselijke Neutrofiele Zwermen in vitro

Neutrophil swarming is a cooperative process by which neutrophils seal off a site of infection and promote tissue reorganization. Swarming has classically ...