Name: generation of cationic nanoliposomes for the efficient delivery of in vitro transcribed messenger rna
Uploaded: 2019-02-01T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Generation of Cationic Nanoliposomes for the Efficient Delivery of In Vitro Transcribed Messenger RNA at JoVE.com

1. Generation der kationischen Nanoliposomes (Abbildung 1)
<ol><li>Lösen Sie die Lipide DC-Cholesterin (3β-[N-(N′,N′-dimethylaminoethane)-Carbamoylproxyl] Cholesterin Hydrochlorid) und Schmiere (Dioleoyl Phosphatidylethanolamine), geliefert als Pulver, in Chloroform, eine Endkonzentration von 25 mg/mL zu erreichen. Hinweis: Bewahren Sie die gelösten Lipide bei-20 ° C.</li>
	<li>Arbeiten Sie mit 25 mg/mL Stammlösung sowohl Lipide. Mix-40 µL der gelösten DC-Cholesterin und 80 ?...

Die vorgestellte Protokoll beschreibt die Generation des NLps mit hohen Kapselung Wirksamkeit für synthetisch veränderte mRNA, sowie die zuverlässige Transfektion von Zellen in Vitro. Darüber hinaus garantieren die NLps die Freisetzung von mRNA, die wiederum in ein funktionsfähiges Protein in der Zelle übersetzt ist. Zusätzlich die Transfektionen mit NLps in regelmäßige Zelle Medium durchgeführt werden kann, was zu hohen Zelle künstliche während Transfektion, und dauern bis zu drei Tage nach Transfek...

Die Verwendung von modifizierten mRNA für therapeutische Anwendungen hat großes Potenzial in den letzten Jahren gezeigt. In Herz-Kreislauf-, Entzündungs- und monogenetischen Krankheiten, sowie bei der Entwicklung von Impfstoffen ist mRNA eine vielversprechende therapeutische Mittel1.
Protein-Ersatz-Therapie mit mRNA bietet mehrere Vorteile gegenüber der klassischen Gentherapie, die auf DNA-Transfektion in die Ziel-Zellen2basiert. Die mRNA-Funktion startet direkt in das Zytosol. Obwohl das Plasmid DNA (pDNA), ein Konstrukt der doppelsträngigen, Rundschreiben kann DNA mit einem Promotor-Region und die Sequenz eines Gens, die Codierung der therapeutische Protein3, auch Handlungen im Zytosol, es nur in Zellen aufzunehmen die Mitose durchlaufen zum Zeitpunkt der Transfektion. Dies reduziert die Anzahl von transfizierten Zellen im Gewebe1,4. Insbesondere ist die Transfektion von Geweben mit schwachen Mitose Aktivität, z. B. Herzzellen, schwieriges5. Im Gegensatz zu pDNA treten die Transfektion und Übersetzung von mRNA in mitotischen und nicht mitotischen Zellen im Gewebe1,6. Die virale Integration von DNA in das Wirtsgenom kann mit mutagenen Effekte oder Immunreaktionen7,8, aber nach der Transfektion von Zellen mit einer Protein-Codierung mRNA, die de-Novo -Synthese des gewünschten Proteins kommen. startet autonom9,10. Darüber hinaus kann die Proteinsynthese genau auf den Patienten müssen durch Einzeldosen, ohne zu stören das Genom und riskieren mutagenen Effekte11eingestellt werden. Das Immunsystem aktivierende Potential der synthetisch erzeugten mRNA konnte drastisch gesenkt werden, mithilfe von Pseudo-Uridin und 5'-Methylcytidine anstelle von Uridin und Cytidin12. Pseudo-Uridin modifizierte mRNA auch gezeigt hat, haben eine erhöhte biologische Stabilität und eine deutlich höhere translationale Kapazität13.
Um die vielversprechenden Eigenschaften der mRNA-basierte Therapie in der klinischen Anwendung profitieren zu können, ist es wichtig, ein geeignetes Fahrzeug für den Transport von mRNA in die Zelle zu schaffen. Dieses Fahrzeug sollte nicht toxischen Eigenschaften in Vitro und in Vivozu tragen, schützen die mRNA gegen Nuklease-Abbau und bieten ausreichend zelluläre Aufnahme für eine längere Verfügbarkeit und Übersetzung der mRNA14.
Zwischen allen möglichen Träger für in Vivo Drug-Delivery, wie Kohlenstoff-Nanoröhren, Quantenpunkte und Liposomen, letztere wurden studierte am meisten15,16. Liposomen sind Vesikel bestehend aus einer Lipid Bilayer10. Sie sind amphiphil mit einer hydrophoben und einen hydrophilen Teil, und durch die selbständige Anordnung dieser Moleküle ist eine kugelförmige Doppelschicht gebildeten17. Im Inneren der Liposomen können Therapeutika oder Drogen gekapselt und somit geschützt von enzymatischen Abbau18. Mit N-[1-(2,3-dioleyloxy)propyl]-N,N,N-trimethylammonium-Chlorid (DOTMA)19, Liposomen [1,2-Bis (Oleoyloxy)-3-Propan (Trimethylammonio)] (DOTAP)20und Dioctadecylamidoglycylspermine (Hunde)21, oder DC-Cholesterin22, gut charakterisiert sind und häufig für zelluläre Transfektion mit DNA oder RNA.
Kationische Liposomen umfassen eine positiv geladene Lipid und einer ungeladenen Phospholipid-23. Transfektion durch kationische Liposomen gehört zu den am häufigsten verwendeten Methoden für den Transport von Nukleinsäuren in Zellen24,25. Die kationischen Lipid-Partikel bilden komplexe mit den negativ geladenen Phosphatgruppen in das Rückgrat der Nukleinsäure-Moleküle26. Diese sogenannten Lipoplexes befestigen Sie an der Oberfläche der Zellmembran und geben Sie die Zelle durch Endozytose oder Endozytose ähnliche Mechanismen27.
Im Jahr 1989 Malone Et Al. erfolgreich beschrieben kationischen Lipid-mediated mRNA Transfektion28. Jedoch fand mit einer Mischung von DOTMA und 1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine (Schmiere), die Gruppe, dass DOTMA zytotoxische Effekte28manifestiert. Zohra Et Al. zeigten darüber hinaus, dass DOTAP (1,2-Dioleoyloxy-3-Trimethylammonium-Propan-Chlorid) als ein mRNA Transfektion Reagenz29genutzt werden kann. Allerdings sollte für die effiziente Transfektion von Zellen, DOTAP in Kombination mit anderen Reagenzien, wie Fibronektin29 oder Schmiere30verwendet werden. Bisher wurde DOTMA die erste kationische Lipid auf dem Markt für die gen-Lieferung-31verwendet. Andere Fette dienen als therapeutische Träger oder in verschiedenen Phasen der klinischen Studien getestet (z. B. EndoTAG-I, mit DOTAP als Lipid-Carrier), wird derzeit in einer Phase-II-klinische Studie32untersucht.
Diese Arbeit beschreibt ein Protokoll für die Generation des NLps mit DC-Cholesterin und Schmiere. Diese Methode ist einfach durchzuführen und ermöglicht die Erzeugung von NLps in verschiedenen Größen. Das allgemeine Ziel der NLp-Generation mit der trocken-Film-Methode ist die Schaffung von Liposomen für mRNA Komplexierung, wodurch effizient und biokompatible Zelle Transfektion in-vitro-14,33.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT)</td>
			<td>AppliChem, Darmstadt, Germany</td>
			<td>A2231</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>(3&#946;-[N-(N&#8242;,N&#8242;-dimethylaminoethane)-carbamoyl]cholesterol hydrochloride (DC-Cholesterol)</td>
			<td>Avanti, Alabama, USA</td>
			<td>700001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4&#160;&#8242;,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Darmstadt, Germany</td>
			<td>D1306</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACScan system</td>
			<td>BD Biosciences, Heidelberg, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Fix (10x)</td>
			<td>BD Biosciences, Heidelberg, Germany</td>
			<td>340181</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloroform</td>
			<td>Merck, Darmstadt, Germany</td>
			<td>102445</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxid (DMSO)</td>
			<td>Serva Electrophoresis GmbH, Heidelberg, Germany</td>
			<td>20385.02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dioleoyl phosphatidylethanolamine (DOPE)</td>
			<td>Avanti, Alabama, USA</td>
			<td>850725</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence microscope</td>
			<td>Zeiss Axio, Oberkochen, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipofectamine 2000</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Darmstadt, Germany</td>
			<td>11668019</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini extruder</td>
			<td>Avanti, Alabama, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nuclease-free water</td>
			<td>Qiagen, Hilden, Germany</td>
			<td>129114</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opti-Mem</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Darmstadt, Germany</td>
			<td>11058021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS buffer (w/o Ca2+/Mg2+)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Darmstadt, Germany</td>
			<td>70011044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quant-iT Ribo Green RNA reagent kit</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Darmstadt, Germany</td>
			<td>Q33140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI (w/o phenol red)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Darmstadt, Germany</td>
			<td>11835030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silica gel</td>
			<td>Carl Roth, Karlsruhe, Germany</td>
			<td>P077</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin/EDTA (0.05%)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Darmstadt, Germany</td>
			<td>25300054</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HotStar HiFidelity Polymerase Kit</td>
			<td>Qiagen, Hilden, Germany</td>
			<td>202602</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>QIAquick PCR Purification Kit</td>
			<td>Qiagen, Hilden, Germany</td>
			<td>28104</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td> 
			Pseudouridine-5&#39;-Triphosphate (&#936;-UTP)</td>
			<td>TriLink Biotechnologies, San Diego, USA</td>
			<td>N-1019</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5-Methylcytidine-5&#39;-Triphosphate (Methyl-CTP)</td>
			<td>TriLink Biotechnologies, San Diego, USA</td>
			<td>N-1014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cyanine 3-CTP</td>
			<td>PerkinElmer, Baesweiler, Germany</td>
			<td>NEL580001EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNeasy Mini Kit</td>
			<td>Qiagen, Hilden, Germany</td>
			<td>74104</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEGAscript T7 Transcription Kit</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Darmstadt, Germany</td>
			<td>AM1333</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3&#180;-O-Me-m7G(5&#39;)ppp(5&#39;)G RNA Cap Structure Analog</td>
			<td>New England Biolabs, Ipswich, USA</td>
			<td>S1411L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antarctic Phosphatase</td>
			<td>New England Biolabs, Ipswich, USA</td>
			<td>M0289S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Darmstadt, Germany</td>
			<td>16500-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GelRed</td>
			<td>Biotium, Fremont, USA</td>
			<td>41003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>peqGOLD DNA ladder mix</td>
			<td>VWR, Pennsylvania, USA</td>
			<td>25-2040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Invitrogen 0.5-10kb RNA ladder</td>
			<td>Fisher Scientific, G&#246;teborg, 
			Sweden</td>
			<td>11528766</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

generation of cationic nanoliposomes for the efficient delivery of in vitro transcribed messenger rna

Die Entwicklung der Boten-RNA (mRNA)-basierten Therapeutika für die Behandlung von verschiedenen Krankheiten mehr und mehr an Bedeutung aufgrund der positiven wird Eigenschaften von in Vitro (IVT) mRNA transkribiert. Mit Hilfe von IVT mRNA kann die de-Novo -Synthese des gewünschten Proteins induziert werden, ohne den physiologischen Zustand der Zielzelle. Darüber hinaus kann Protein-Biosynthese durch die vorübergehende Wirkung der IVT mRNA exakt gesteuert werden.
Für die effiziente Transfektion von Zellen kann Nanoliposomes (NLps) eine sichere und effiziente Transportvehikel für therapeutische mRNA darstellen. Diese Studie beschreibt ein Protokoll zur sicheren und effizienten kationischen NLps bestehend aus DC-Cholesterin und 1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine (Schmiere) als Lieferung Vektor für IVT mRNA zu generieren. NLps haben eine definierte Größe, eine homogene Verteilung und eine hohe Komplexierung Kapazität und kann mit der trocken-Film-Methode erzeugt werden. Darüber hinaus präsentieren wir unterschiedliche Testsysteme zu analysieren, ihre Komplexierung und Transfektion Ähnlichkeit mit synthetischen verstärkt grünes fluoreszierendes Protein (eGFP) mRNA, sowie ihre Auswirkungen auf die Zellviabilität. Insgesamt bietet der vorgestellte Protokoll einen effektiven und sicheren Zugang für mRNA Komplexierung, die Weiterentwicklung und Verbesserung die Verwaltung des therapeutischen mRNA kann.

Unter Verwendung des Protokolls wie beschrieben, wurden NLps bestehend aus den Lipiden DC-Cholesterin und Schmiere vorbereitet mit der trocken-Film-Methode (Abbildung 1). Während der Vorbereitung zeigt die Nanoliposome Lösung verschiedene Stufen der Trübung (Abbildung 2).
Die Kapselung Wirksamkeit des NLps kann dann nach der Kapselung von 1 µg eGFP-Codierung mRNA an...

Watch this Scientific Journal Video about Generation of Cationic Nanoliposomes for the Efficient Delivery of In Vitro Transcribed Messenger RNA at JoVE.com

Generation of Cationic Nanoliposomes for the Efficient Delivery of In Vitro Transcribed Messenger RNA

Generation von kationischen Nanoliposomes für die effiziente Bereitstellung von In-vitro- transkribiert Boten-RNA

Hier beschreiben wir ein Protokoll für die Generation der kationischen Nanoliposomes, basiert auf der Methode der trocken-Film und eignet sich für die sichere und effiziente Bereitstellung von in-vitro- Boten-RNA transkribiert.

The development of messenger RNA (mRNA)-based therapeutics for the treatment of various diseases becomes more and more important because of the positive ...

Dieses Protokoll ermöglicht die Herstellung sicherer und effizienter Nanoliposomen, die als Transfektionsvehikel für therapeutische Boten-RNA verwendet werden können. Diese Nanoliposomen erleichtern die mRNA-Aufnahme in Zellen, was zu einer erhöhten Proteinexpression führt, ohne die Zelllebensfähigkeit zu beeinträchtigen. Der Hauptvorteil dieser Technik ist die schnelle und einfache Erzeugung stabiler Nanoliposomen mit definierter Größe und homogener Verteilung.Darüber hinaus schützen sie die gekapselte mRNA vor Abbau und führen zu einer längeren Translation. Demonstriert wird das Verfahren von Antonia Link, einer Doktorandin aus unserem Labor. Um dieses Verfahren zu beginnen, bereiten Sie Lagerlösungen für die Lipide, DC-Cholesterin und DOPE durch Auflösen jeder in Chloroform auf eine endgültige Konzentration von 25 Milligramm pro Milliliter.40 Mikroliter des gelösten DC-Cholesterins mit 80 Mikrolitern des gelösten DOPE in einem Glaskolben vermischen. Verdampfen Sie das Chloroform unter einem Argongasstrom für 15 Minuten. Als nächstes füllen Sie einen Trockenbau mit Kieselgel.Legen Sie den offenen Glaskolben innen und tragen Sie über Nacht ein Vakuum auf, um sicherzustellen, dass die verbleibende Chloroform verdampft ist. Der resultierende Lipidfilm bildet sich im Inneren des Glaskolbens. Am nächsten Tag einen Milliliter Nuklease-freies Wasser hinzufügen, um den Lipidfilm zu rehydrieren.Und wirbeln Sie die Federung für 15 Minuten. Legen Sie die Suspension für eine Stunde in ein Beschallungsbad. Montieren Sie anschließend den Miniextruder gemäß den Anweisungen des Herstellers.Füllen Sie eine Spritze mit der Flüssigkeitssuspension und legen Sie sie eine Seite des Extruders. Legen Sie eine leere Spritze auf die andere Seite. Drücken Sie die Lipidsuspension durch die Membran von einer Spritze zur anderen, etwa 20-25 Mal, um die Suspension zu extrudieren.Dann lagern Sie die Nanoliposomen in einem Glaskolben bei vier Grad Celsius, bis sie einsatzbereit sind. Zuerst tauen Sie die synthetische mRNA auf Eis auf. Wirbeln Sie die gefrorene mRNA und zentrifugieren Sie sie dann kurz vor dem Öffnen des Rohres.Mischen Sie dann ein Mikrogramm der synthetischen mRNA mit verschiedenen Mengen an Nanoliposomensuspension. Zentrifugieren Sie kurz und inkubieren bei Raumtemperatur für 20 Minuten für Nanolipoplex Bildung. Dann fügen Sie Milliliter reguläres Zellmedium zu den Nanolipoplex es und mischen Durch Pipettieren nach oben und unten.Bereiten Sie die Zellen einen Tag vor der Transfektion vor. Daher Platte 150, 000 A549 Zellen in jeden Brunnen einer 12 WellPlatte einen Tag vor der Transfektion. Inkubieren Sie die Zellen bei 37 Grad Celsius mit 5% Kohlendioxid und regulärem Zellmedium für 24 Stunden.Dann am nächsten Tag, waschen Sie jeden Brunnen von vorbereiteten Zellen einmal mit einem Milliliter PBS. Fügen Sie einen Milliliter einer vorbereiteten Nanolipoplex-Mischung in einen der Brunnen, die die A549-Zellen enthalten. Inkubieren Sie unter regelmäßigen Bedingungen für 24 Stunden, um die Transfektionseffizienz zu analysieren, oder für 24-72 Stunden, um die Zelllebensfähigkeit nach der Transfektion zu analysieren.Entfernen Sie den Überstand und waschen Sie jeden Brunnen mit einem Milliliter PBS, um die restlichen Nanoliposomen zu entfernen. Um die Zellen auf die Zytometrie vorzubereiten, fügen Sie zunächst 500 Mikroliter Trypsin EDTA zu jedem Brunnen hinzu und inkubieren sie bei 37 Grad Celsius für drei Minuten, um die Zellen zu trypsinisieren. Als nächstes fügen Sie 500 Mikroliter reguläres FBS-haltiges Medium hinzu, um den Prozess zu stoppen und das Trypsin zu inaktivieren.Zentrifugieren Sie die Zellen bei 400 mal G für fünf Minuten. Und entfernen Sie vorsichtig den Überstand, ohne das Zellpellet zu stören. Waschen Sie die Zellen mit einem Milliliter PBS.Dann setzen Sie die Zellen in 300 Mikroliter zellfixierungslösung wieder auf und übertragen sie in Durchflusszytometrieröhrchen. Verwenden Sie ein Durchflusszytometer, um die Zellen mit 488 Nanometern zu analysieren. Um die Zellen auf die Fluoreszenzmikroskopie vorzubereiten, fügen Sie jedem Brunnen einen Milliliter gekühltes Methanol hinzu, um die Zellen zu fixieren.Fügen Sie 500 Mikroliter einer 300 Nanomolaren-Lösung von DAPI in PBS gelöst zu jedem Brunnen. Fünf Minuten im Dunkeln bebrüten. Danach entfernen Sie die DAPI-Lösung und waschen Sie die Zellen erneut mit 100% Methanol, das zuvor bei minus 20 Grad Celsius gelagert wurde.Verwenden Sie ein Fluoreszenzmikroskop, um die Zellen anhand der hier gezeigten Anregungs- und Emissionswellenlängen zu analysieren. In dieser Studie werden Nanoliposomen mit hoher Verkapselungswirksamkeit für synthetisch modifizierte mRNA erzeugt. Mit Hilfe des RNA-Quantifizierungskits kann die Verkapselungswirksamkeit der Nanoliposomen nach der Verkapselung eines Mikrogramms eGFP-Codierung mRNA analysiert werden, indem die freie Menge an mRNA analysiert wird, die nicht gekapselt ist.Nach der Verkapselung von EGFP mRNA in verschiedenen Mengen von Nanoliposomen können die gebildeten Nanolipoplexe mit Zellen in vitro inkubiert und der Prozentsatz der eGFP-exemitten Zellen mit Durchflusszytometrie 24 Stunden nach der Transfektion analysiert werden. Wie hier zu sehen, reicht sogar nur ein Mikroliter der Nanoliposomenlösung aus, um eine hohe Transfektion der Zellen invitro zu erreichen. Wenn die Zellen mit Nanoliposomen transfiziert werden, die Cy3-markierte eGFP mRNA enthalten, kann das Vorhandensein der eGFP mRNA im Zytoplasma sowie des bereits produzierten eGFP-Proteins visualisiert werden.Da die Transfektion von Zellen mit Nanolipoplexen nachteilige Auswirkungen auf Zellen haben kann, wurde die Lebensfähigkeit der Zellen nach 24 Stunden und 72 Stunden nach der Transfektion getestet. Bei der Behandlung der Zellen mit 2,5 oder fünf MikroliterN Nanolipoplexen konnten keine Auswirkungen auf die Zelllebensfähigkeit nachgewiesen werden. Beim Versuch dieses Verfahrens ist es wichtig, sich daran zu erinnern, die ganze Zeit in einer ethanolfreien Umgebung zu arbeiten, da dies die Nanolipominstabilität beeinträchtigen könnte.Beim Vorbereiten und Mischen des DC-Cholesterins mit DOPE sollten Sie eine Glaspipette verwenden, um eine Kontamination der gelösten Lipide mit löslichen Komponenten von Kunststoffpipettenspitzen zu vermeiden. Nach diesem Protokoll können die erzeugten Nanoliposomen während oder nach der Zubereitung leicht manipuliert werden. Beispielsweise würde die Einbeziehung von PEG-Molekülen oder spezifischen Antikörpern zu erhöhter Stabilität führen oder aktivegewebe-Targeting initiieren.Die erzeugten Nanoliposomen erfüllen die notwendigen Sicherheitsaspekte und erleichtern die mRNA-Aufnahme in die Zielzellen. Nanoliposomen, die mit einer spezifischen therapeutischen nRNA komplex iert sind, können einen wesentlichen Beitrag zur Entwicklung neuartiger mRNA-basierter Therapeutika beispielsweise im Bereich der Gewebetechnik oder Ersatztherapie leisten.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Generation of Cationic Nanoliposomes for the Efficient Delivery of In Vitro Transcribed Messenger RNA

Microscale Vortex-assisted Electroporator for Sequential Molecular Delivery

Microscale Vortex-unterstützte Electroporator für Sequential Molekulare Liefer

Electroporation has received increasing attention in the past years, because it is a very powerful technique for physically introducing non-permeant ...

Forschung

Biotechnik

Generation of a Three-dimensional Full Thickness Skin Equivalent and Automated Wounding

Erzeugung eines dreidimensionalen Vollhaut Equivalent und automatisierte Verwundung

In vitro models are a cost effective and ethical alternative to study cutaneous wound healing processes. Moreover, by using human cells, these models ...

Eye Irritation Test (EIT) for Hazard Identification of Eye Irritating Chemicals using Reconstructed Human Cornea-like Epithelial (RhCE) Tissue Model

Eye Irritation Test EIT for Hazard Identification of Eye Irritating Chemicals using Reconstructed Human Cornea-like Epithelial RhCE Tissue Model

Test auf Augenreizung (EIT) zur Kennzeichnung der Gefahr von Augen Reizt Chemicals mit rekonstruierter menschlicher Hornhaut-ähnlichen Epithelial (RhCE) Gewebemodell

To comply with the Seventh Amendment to the EU Cosmetics Directive and EU REACH legislation, validated non-animal alternative methods for reliable and ...

Adapting the Electrospinning Process to Provide Three Unique Environments for a Tri-layered In Vitro Model of the Airway Wall

Adapting the Electrospinning Process to Provide Three Unique Environments for a Tri-layered In Vitro Model of the Airway Wall

Anpassung der Elektrospinnverfahren für einen Dreischicht stellen drei einzigartige Umgebungen<em&gt; In-vitro-</em&gt; Modell der Atemwegswand

Electrospinning is a highly adaptable method producing porous 3D fibrous scaffolds that can be exploited in in vitro cell culture. Alterations to ...

Delivery of Therapeutic siRNA to the CNS Using Cationic and Anionic Liposomes

Abgabe von therapeutischen siRNA an das ZNS mit kationischen und anionische Liposome

Prion diseases result from the misfolding of the normal, cellular prion protein (PrPC) to an abnormal protease resistant isomer called PrPRes.  The ...

Polyelectrolyte Complex for Heparin Binding Domain Osteogenic Growth Factor Delivery

Polyelektrolytkomplex für Heparin-Bindungsdomäne Osteogenisches Growth Factor Lieferung

During reconstructive bone surgeries, supraphysiological amounts of growth factors are empirically loaded onto scaffolds to promote successful bone ...

An In Vitro Organ Culture Model of the Murine Intervertebral Disc

An In Vitro Organ Culture Model of the Murine Intervertebral Disc

Ein<em&gt; In Vitro</em&gt; Organ Culture Modell der Murine Bandscheiben

Intervertebral disc (IVD) degeneration is a significant contributor to low back pain. The IVD is a fibrocartilaginous joint that serves to transmit and ...

Efficient Generation and Editing of Feeder-free IPSCs from Human Pancreatic Cells Using the CRISPR-Cas9 System

Effiziente Erzeugung und Bearbeitung von Feeder-freie IPSCs aus menschlichen Zellen der Bauchspeicheldrüse mit dem CRISPR-Cas9-System

Embryonic and induced pluripotent stem cells can self-renew and differentiate into multiple cell types of the body. The pluripotent cells are thus coveted ...

Preparation and Characterization of Nanoliposomes for the Entrapment of Bioactive Hydrophilic Globular Proteins

Vorbereitung und Charakterisierung von Nanoliposomen zur Entrapment ierung bioaktiver hydrophiler Globularproteine

Liposome nanocapsules have been applied for many purposes in the pharmaceutical, cosmetic, and food industries. Attributes of liposomes include their ...

Bioparticle Microarrays for Chemotactic and Molecular Analysis of Human Neutrophil Swarming in vitro

Biopartikel-Mikroarrays für chemotaktische und molekulare Analysen des menschlichen Neutrophilen-Schwärmens in vitro

Neutrophil swarming is a cooperative process by which neutrophils seal off a site of infection and promote tissue reorganization. Swarming has classically ...