Name: isolation, characterization, and differentiation of cardiac stem cells from the adult mouse heart
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation, Characterization, and Differentiation of Cardiac Stem Cells from the Adult Mouse Heart at JoVE.com

هذا العمل تدعمه، في أجزاء، منح "المعاهد الوطنية للصحة" HL-113281 و HL116205 إلى الفقرات كومار ميشرا.

الإسكان، والتخدير، والتضحية بالفئران أجريت بعد البروتوكول IACUC المعتمدة من المركز الطبي في جامعة نبراسكا.
1-المواد
<ol><li>10-12 أسبوع استخدام C57BL/6J الأسود يمكن أيضا أن الفئران الذكور، أبقى داخلية في منشأة الحيوان المؤسسية، لعزل CSCs. CSCs تكون معزولة من الفئران الإناث غير الحوامل.</li...

<ol>
	<li>Benjamin, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+Disease+and+Stroke+Statistics-2017+Update:+A+Report+From+the+American+Heart+Association.">Heart Disease and Stroke Statistics-2017 Update: A Report From the American Heart Association.</a> Circulation. 135, e146 (2017).</li><li>Nguyen, P. K., Rhee, J. W., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adult+Stem+Cell+Therapy+and+Heart+Failure,+2000+to+2016:+A+Systematic+Review.">Adult Stem Cell Therapy and Heart Failure, 2000 to 2016: A Systematic Review.</a> The Journal of the American Medical Association Cardiology. 1, 831-841 (2000).</li><li>Emmert, M. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Safety+and+efficacy+of+cardiopoietic+stem+cells+in+the+treatment+of+post-infarction+left-ventricular+dysfunction+-+From+cardioprotection+to+functional+repair+in+a+translational+pig+infarction+model.">Safety and efficacy of cardiopoietic stem cells in the treatment of post-infarction left-ventricular dysfunction - From cardioprotection to functional repair in a translational pig infarction model.</a> Biomaterials. 122, 48-62 (2017).</li><li>Silvestre, J. S., Menasche, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Evolution+of+the+Stem+Cell+Theory+for+Heart+Failure.">The Evolution of the Stem Cell Theory for Heart Failure.</a> EBioMedicine. 2, 1871-1879 (2015).</li><li>Terzic, A., Behfar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cell+therapy+for+heart+failure:+Ensuring+regenerative+proficiency.">Stem cell therapy for heart failure: Ensuring regenerative proficiency.</a> Trends in Cardiovascular Medicine. 26, 395-404 (2016).</li><li>Yamada, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+stem+cell+therapy+of+heart+failure+in+genetic+cardiomyopathy.">Embryonic stem cell therapy of heart failure in genetic cardiomyopathy.</a> Stem Cells. 26, 2644-2653 (2008).</li><li>Sadek, H. A., Martin, C. M., Latif, S. S., Garry, M. G., Garry, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bone-marrow-derived+side+population+cells+for+myocardial+regeneration.">Bone-marrow-derived side population cells for myocardial regeneration.</a> Journal of Cardiovascular Translational Research. 2, 173-181 (2009).</li><li>Vrtovec, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+intracoronary+CD34++stem+cell+transplantation+in+nonischemic+dilated+cardiomyopathy+patients:+5-year+follow-up.">Effects of intracoronary CD34+ stem cell transplantation in nonischemic dilated cardiomyopathy patients: 5-year follow-up.</a> Circulation Research. 112, 165-173 (2013).</li><li>Hare, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+allogeneic+vs+autologous+bone+marrow-derived+mesenchymal+stem+cells+delivered+by+transendocardial+injection+in+patients+with+ischemic+cardiomyopathy:+the+POSEIDON+randomized+trial.">Comparison of allogeneic vs autologous bone marrow-derived mesenchymal stem cells delivered by transendocardial injection in patients with ischemic cardiomyopathy: the POSEIDON randomized trial.</a> The Journal of American Medical Association. 308, 2369-2379 (2012).</li><li>Guijarro, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intramyocardial+transplantation+of+mesenchymal+stromal+cells+for+chonic+myocardial+ischemia+and+impaired+left+ventricular+function:+Results+of+the+MESAMI+1+pilot+trial.">Intramyocardial transplantation of mesenchymal stromal cells for chonic myocardial ischemia and impaired left ventricular function: Results of the MESAMI 1 pilot trial.</a> International Journal of Cardiology. 209, 258-265 (2016).</li><li>Bobi, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracoronary+Administration+of+Allogeneic+Adipose+Tissue-Derived+Mesenchymal+Stem+Cells+Improves+Myocardial+Perfusion+But+Not+Left+Ventricle+Function,+in+a+Translational+Model+of+Acute+Myocardial+Infarction.">Intracoronary Administration of Allogeneic Adipose Tissue-Derived Mesenchymal Stem Cells Improves Myocardial Perfusion But Not Left Ventricle Function, in a Translational Model of Acute Myocardial Infarction.</a> Journal of the American Heart Association. 6, (2017).</li><li>Suzuki, E., Fujita, D., Takahashi, M., Oba, S., Nishimatsu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipose+tissue-derived+stem+cells+as+a+therapeutic+tool+for+cardiovascular+disease.">Adipose tissue-derived stem cells as a therapeutic tool for cardiovascular disease.</a> World Journal of Cardiology. 7, 454-465 (2015).</li><li>Gao, L. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracoronary+infusion+of+Wharton's+jelly-derived+mesenchymal+stem+cells+in+acute+myocardial+infarction:+double-blind,+randomized+controlled+trial.">Intracoronary infusion of Wharton's jelly-derived mesenchymal stem cells in acute myocardial infarction: double-blind, randomized controlled trial.</a> BMC Medicine. 13, 162 (2015).</li><li>Simpson, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+strong+regenerative+ability+of+cardiac+stem+cells+derived+from+neonatal+hearts.">A strong regenerative ability of cardiac stem cells derived from neonatal hearts.</a> Circulation. , S46-S53 (2012).</li><li>Kazakov, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=C-kit(+)+resident+cardiac+stem+cells+improve+left+ventricular+fibrosis+in+pressure+overload.">C-kit(+) resident cardiac stem cells improve left ventricular fibrosis in pressure overload.</a> Stem Cell Research. 15, 700-711 (2015).</li><li>Ong, S. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross+talk+of+combined+gene+and+cell+therapy+in+ischemic+heart+disease:+role+of+exosomal+microRNA+transfer.">Cross talk of combined gene and cell therapy in ischemic heart disease: role of exosomal microRNA transfer.</a> Circulation. 130, S60-S69 (2014).</li><li>Sahoo, S., Losordo, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exosomes+and+cardiac+repair+after+myocardial+infarction.">Exosomes and cardiac repair after myocardial infarction.</a> Circulation Research. 114, 333-344 (2014).</li><li>Zhang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pretreatment+of+Cardiac+Stem+Cells+With+Exosomes+Derived+From+Mesenchymal+Stem+Cells+Enhances+Myocardial+Repair.">Pretreatment of Cardiac Stem Cells With Exosomes Derived From Mesenchymal Stem Cells Enhances Myocardial Repair.</a> Journal of the American Heart Association. 5, (2016).</li><li>Ibrahim, A. G., Cheng, K., Marban, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exosomes+as+critical+agents+of+cardiac+regeneration+triggered+by+cell+therapy.">Exosomes as critical agents of cardiac regeneration triggered by cell therapy.</a> Stem Cell Reports. 2, 606-619 (2014).</li><li>Emanueli, C., Shearn, A. I., Angelini, G. D., Sahoo, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exosomes+and+exosomal+miRNAs+in+cardiovascular+protection+and+repair.">Exosomes and exosomal miRNAs in cardiovascular protection and repair.</a> Vascular Pharmacology. 71, 24-30 (2015).</li><li>Menasche, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+cell+therapy:+lessons+from+clinical+trials.">Cardiac cell therapy: lessons from clinical trials.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 50, 258-265 (2011).</li><li>Trounson, A., McDonald, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+Cell+Therapies+in+Clinical+Trials:+Progress+and+Challenges.">Stem Cell Therapies in Clinical Trials: Progress and Challenges.</a> Cell Stem Cell. 17, 11-22 (2015).</li><li>Takamiya, M., Haider, K. H., Ashaf, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+characterization+of+a+novel+multipotent+sub-population+of+Sca-1(+)+cardiac+progenitor+cells+for+myocardial+regeneration.">Identification and characterization of a novel multipotent sub-population of Sca-1(+) cardiac progenitor cells for myocardial regeneration.</a> PLoS One. 6, e25265 (2011).</li><li>Cambria, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Translational+cardiac+stem+cell+therapy:+advancing+from+first-generation+to+next-generation+cell+types.">Translational cardiac stem cell therapy: advancing from first-generation to next-generation cell types.</a> NPJ Regenerative Medicine. 2, 17 (2017).</li><li>Bruyneel, A. A., Sehgal, A., Malandraki-Miller, S., Carr, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+Cell+Therapy+for+the+Heart:+Blind+Alley+or+Magic+Bullet?.">Stem Cell Therapy for the Heart: Blind Alley or Magic Bullet?.</a> Journal of Cardiovascular Translational Research. 9, 405-418 (2016).</li><li>Garbern, J. C., Lee, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+stem+cell+therapy+and+the+promise+of+heart+regeneration.">Cardiac stem cell therapy and the promise of heart regeneration.</a> Cell Stem Cell. 12, 689-698 (2013).</li><li>Oh, H., Ito, H., Sano, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Challenges+to+success+in+heart+failure:+Cardiac+cell+therapies+in+patients+with+heart+diseases.">Challenges to success in heart failure: Cardiac cell therapies in patients with heart diseases.</a> Journal of Cardiology. 68, 361-367 (2016).</li><li>Smith, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+resident+endogenous+c-Kit++cardiac+stem+cells+from+the+adult+mouse+and+rat+heart.">Isolation and characterization of resident endogenous c-Kit+ cardiac stem cells from the adult mouse and rat heart.</a> Nature Protocols. 9, 1662-1681 (2014).</li><li>Rutering, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+Method+for+Isolation+of+Neonatal+Rat+Cardiomyocytes+with+Increased+Yield+of+C-Kit++Cardiac+Progenitor+Cells.">Improved Method for Isolation of Neonatal Rat Cardiomyocytes with Increased Yield of C-Kit+ Cardiac Progenitor Cells.</a> Journal of Stem Cell Research and Therapy. 5, 1-8 (2015).</li><li>Saravanakumar, M., Devaraj, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distribution+and+homing+pattern+of+c-kit++Sca-1++CXCR4++resident+cardiac+stem+cells+in+neonatal,+postnatal,+and+adult+mouse+heart.">Distribution and homing pattern of c-kit+ Sca-1+ CXCR4+ resident cardiac stem cells in neonatal, postnatal, and adult mouse heart.</a> Cardiovascular Pathology. 22, 257-263 (2013).</li><li>Monsanto, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Concurrent+Isolation+of+3+Distinct+Cardiac+Stem+Cell+Populations+From+a+Single+Human+Heart+Biopsy.">Concurrent Isolation of 3 Distinct Cardiac Stem Cell Populations From a Single Human Heart Biopsy.</a> Circulation Research. 121, 113-124 (2017).</li><li>Vidyasekar, P., Shyamsunder, P., Santhakumar, R., Arun, R., Verma, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simplified+protocol+for+the+isolation+and+culture+of+cardiomyocytes+and+progenitor+cells+from+neonatal+mouse+ventricles.">A simplified protocol for the isolation and culture of cardiomyocytes and progenitor cells from neonatal mouse ventricles.</a> European Journal of Cell Biology. 94, 444-452 (2015).</li><li>Dergilev, K. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+cardiac+stem+cell+sheets+detached+by+Versene+solution+and+from+thermoresponsive+dishes+reveals+similar+properties+of+constructs.">Comparison of cardiac stem cell sheets detached by Versene solution and from thermoresponsive dishes reveals similar properties of constructs.</a> Tissue Cell. 49, 64-71 (2017).</li><li>Zaruba, M. M., Soonpaa, M., Reuter, S., Field, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiomyogenic+potential+of+C-kit(+)-expressing+cells+derived+from+neonatal+and+adult+mouse+hearts.">Cardiomyogenic potential of C-kit(+)-expressing cells derived from neonatal and adult mouse hearts.</a> Circulation. 121, 1992-2000 (1992).</li><li>Wang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+a+Sca-1+/CD31-+progenitor+cell+lineage+derived+from+mouse+heart+tissue.">Isolation and characterization of a Sca-1+/CD31- progenitor cell lineage derived from mouse heart tissue.</a> BMC Biotechnology. 14, 75 (2014).</li><li>Smits, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+cardiomyocyte+progenitor+cells+differentiate+into+functional+mature+cardiomyocytes:+an+in+vitro+model+for+studying+human+cardiac+physiology+and+pathophysiology.">Human cardiomyocyte progenitor cells differentiate into functional mature cardiomyocytes: an in vitro model for studying human cardiac physiology and pathophysiology.</a> Nature Protocols. 4, 232-243 (2009).</li></ol>

فيما يلي الخطوات الأساسية لهذا البروتوكول العزلة ديوان الخدمة المدنية. 1) يجب المحافظة على شرط معقمة لاستخراج القلوب من الفئران. وقد خرق أي تلوث أثناء استخراج قلب نوعية CSCs. 2) يجب إزالة الدم تماما قبل تنميق القلب، والتي تتم بواسطة عدة يغسل القلب كله والقلب القطع مع الحل هبس. 3) يجب أن يكون تفك?...

مرض القلب الاقفاري، بما في ذلك احتشاء عضلة القلب (ميتشيغن)، سبب رئيسي للوفاة في جميع أنحاء العالم1. ويظل العلاج بالخلايا الجذعية لتجديد عضلة القلب الميت نهجاً رئيسيا لتحسين وظيفة القلب مي2،القلب3،،من45. استخدمت أنواع مختلفة من الخلايا الجذعية لتجديد عضلة القلب الميت وتحسين وظيفة القلب قلب مي. يمكن تصنيفها على نطاق واسع في الخلايا الجذعية6 وبالغ في الخلايا الجذعية الجنينية. استخدمت في الخلايا الجذعية البالغة، أنواع مختلفة من الخلايا الجذعية، مثل الخلايا وحيدات النوى المشتقة من نخاع العظام7،8، الخلايا الجذعية الوسيطة المشتقة من نخاع العظام9،10، الأنسجة الدهنية 11،12، والحبل السري13و14،CSCs15. الخلايا الجذعية يمكن تعزيز إنعاش القلب عن طريق الغدد الصماء و/أو paracrine الإجراءات16،17،18،،من1920. ومع ذلك، قيداً رئيسيا للعلاج بالخلايا الجذعية هو الحصول على عدد كاف من الخلايا الجذعية التي يمكن أن تتكاثر و/أو التفريق نحو21،محددة نسب القلب22. زرع الخلايا الجذعية الذاتي و allogenic يشكل تحديا هاما في العلاج بالخلايا الجذعية9. ويمكن CSCs نهج أفضل لإنعاش القلب نظراً لأنها مشتقة من القلب، وأنها يمكن أن تكون أكثر سهولة متباينة في الأنساب القلب من الخلايا الجذعية غير القلب. وهكذا، فإنه يقلل من خطر تيراتوما. وبالإضافة إلى ذلك، آثار CSCs، والغدد الصماء وباراكريني مثل اكسوسوميس وميرناس المستمدة من CSCs، يمكن أن يكون أكثر فعالية من أنواع أخرى من الخلايا الجذعية. وهكذا، CSCs يبقى خيار أفضل لإنعاش القلب23،24.
على الرغم من أن CSCs أفضل مرشح لتجديد القلب في قلب مي سبب أصلهم القلب، قيداً رئيسيا مع CSCs هو أقل العائد نظراً لعدم وجود طريقة العزل الفعال. قيد آخر يمكن التفريق بين CSCs البصر نحو cardiomyocytes النسب2،25،،من2627. للالتفاف على هذه القيود، من المهم وضع بروتوكول فعال لعزل وتوصيف التمايز تجاه النسب القلب ديوان الخدمة المدنية. هناك لا علامة مقبولة واحدة ل CSCs وعزله محددة سطح الخلية المستندة إلى علامة من CSCs غلة أقل CSCs. هنا، علينا توحيد نهج الطرد المركزي تدرج بسيطة لعزل CSCs من قلب الماوس التي هي فعالة من حيث التكلفة ويؤدي زيادة غلة CSCs. يمكن تحديد هذه CSCs معزولة لعلامات سطح الخلية المحددة بخلية تنشيط fluorescence المكشوف. بالإضافة إلى العزلة CSCs، قدمنا بروتوكولا للثقافة ديوان الخدمة المدنية، وتوصيف والتمايز تجاه النسب كارديوميوسيتي. وهكذا، فإننا نعرض طريقة أنيقة لعزل وتوصيف، الثقافة، والتفريق بين CSCs من قلوب الماوس الكبار (الشكل 5).

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Mice</td>
			<td>The Jackson laboratory, USA</td>
			<td>Stock no. 000664</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibodies:</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OCT4-</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab18976 (rabbit polyclonal)</td>
			<td>OCT4-Primary antibody- 1:100 dilution, Secondar antibody- 1:200 dilution, in blocking solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SOX2</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab97959 (rabbit polyclonal)</td>
			<td>SOX2-Primary antibody- 1:100 dilution, Secondar antibody- 1:200 dilution, in blocking solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nanog</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab80892 (rabbit polyclonal)</td>
			<td>Nanog-Primary antibody- 1:100 dilution, Secondar antibody- 1:200 dilution, in blocking solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ki67</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab16667 (rabbit polyclonal)</td>
			<td>Ki67-Primary antibody- 1:100 dilution, Secondar antibody- 1:200 dilution, in blocking solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sca I</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>AB4336 (rabbit polyclonal)</td>
			<td>Sca I Primary antibody- 1:100 dilution, Secondar antibody- 1:200 dilution, in blocking solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NKX2-5</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>sc-8697 (goat polyclonal)</td>
			<td>NKX2-5-Primary antibody- 1:50 dilution, Secondar antibody- 1:200 dilution, in blocking solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GATA4</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab84593 (rabbit polyclonal)</td>
			<td>GATA4-Primary antibody- 1:100 dilution, Secondar antibody- 1:200 dilution, in blocking solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEF2C</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>sc-13268 (goat polyclonal)</td>
			<td>MEF2C-Primary antibody- 1:50 dilution, Secondar antibody- 1:200 dilution, in blocking solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Troponin I</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>MAB1691 (mouse monoclonal)</td>
			<td>Troponin I-Primary antibody- 1:100 dilution, Secondar antibody- 1:200 dilution, in blocking solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Actinin</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>MAB1682 (mouse monoclonal)</td>
			<td>Actinin-Primary antibody- 1:100 dilution, Secondar antibody- 1:200 dilution, in blocking solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ANP</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>AB5490 (mouse polyclonal)</td>
			<td>ANP-Primary antibody- 1:100 dilution, Secondar antibody- 1:200 dilution, in blocking solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alex Fluor-488 checken anti-rabbit</td>
			<td>Life technology</td>
			<td>Ref no. A21441</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alex Fluor-594 goat anti-rabbit</td>
			<td>Life technology</td>
			<td>Ref no. A11012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alex Fluor-594 rabbit anti-goat</td>
			<td>Life technology</td>
			<td>Ref no. A11078</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alex Fluor-488 checken anti-mouse</td>
			<td>Life technology</td>
			<td>Ref no. A21200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alex Fluor-594 checken anti-goat</td>
			<td>Life technology</td>
			<td>Ref no. A21468</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Culture medium: </td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CSC maintenance medium</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>SCM101</td>
			<td>Note: For CSC culture, PBS or incomplete DMEM medium was used for washing the cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cardiomyocytes differentiation medium</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>SCM102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D5546</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Isolation buffer:</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>polysucrose and sodium diatrizoate solution (Histopaque1077)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>10771</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>2018-03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase I</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C0130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispase solution</td>
			<td>STEMCELL Technologies</td>
			<td>7913</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>LONZA</td>
			<td>S1226</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>StemPro Accutase Cell Dissociation Reagent</td>
			<td>Thermoscientific</td>
			<td>A1110501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Other reagents:</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A7030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal checken serum</td>
			<td>Vector laboratory</td>
			<td>S3000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI solution</td>
			<td>Applichem</td>
			<td>A100,0010</td>
			<td>Dapi, working concentration-1 &#181;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan blue</td>
			<td>Biorad</td>
			<td>145-0013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T4049</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>StemPro Accutase Cell Dissociation Reagent</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A1110501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formaldehyde</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>158127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>ACROS</td>
			<td>Cas No. 900-293-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 20</td>
			<td>Fisher Sceintific</td>
			<td>Lot No. 160170</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue culture materials:</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 mm petri dish</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-well plate</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24-well plate</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T-25 flask</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T-75 flask</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 ml conical tube</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL conical tube</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>40 &#181;m cell stainer</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22363547</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 &#181;m cell stainer</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22363549</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.22 &#181;m filter</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>09-719C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 mL syring</td>
			<td>BD</td>
			<td>Ref no. 309604</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 &#181;L, 200 &#181;L, 1000 &#181;L pipette tips</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL, 10mL, 25 mL disposible plastic pipette</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Instruments</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrufuge machine</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>LEGEND X1R centrifuge</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EVOS microscope</td>
			<td>Life technology</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automated cell counter</td>
			<td>Biorad</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell counting slide</td>
			<td>Biorad</td>
			<td>145-0011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pippte aid</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>S1 pipet filler</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Instruments:</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical scissors</td>
			<td>Fine Scientific Tool</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine surgical scissors</td>
			<td>Fine Scientific Tool</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curve shank forceps</td>
			<td>Fine Scientific Tool</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical blade</td>
			<td>Fine Scientific Tool</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation, characterization, and differentiation of cardiac stem cells from the adult mouse heart

احتشاء عضلة القلب (ميتشيغن) سبب الرئيسي للاعتلال والوفيات العالم. أحد الأهداف رئيسية للطب التجديدي لتغذية عضلة القلب الميت بعد مي. وقد استخدمت عدة استراتيجيات لتجديد عضلة القلب، العلاج بالخلايا الجذعية لا تزال نهجاً رئيسيا لتغذية عضلة القلب الميت قلب مي. تتراكم الأدلة تشير إلى وجود الخلايا الجذعية القلب المقيم (CSCs) في قلب الكبار وآثارها الغدد الصماء و/أو باراكريني على تجديد القلب. ومع ذلك، CSC عزل وتوصيف والتمايز تجاه الخلايا احتشاء عضلة القلب، ولا سيما كارديوميوسيتيس، لا يزال يشكل تحديا تقنية. في هذه الدراسة، قدمنا طريقة بسيطة لعزل وتوصيف، والتفريق بين CSCs من قلب الماوس الكبار. هنا، يمكننا وصف أسلوب تدرج كثافة لعزل CSCs، حيث يهضم القلب بحل الثاني كولاجيناز 0.2%. تميز CSCs معزولة، يمكننا تقييم التعبير عن علامات CSCs/القلب Sca-1، NKX2-5، و GATA4، وعلامات بلوريبوتينسي/ستيمنيس OCT4، SOX2، ونانج. كما عقدنا العزم إمكانات الانتشار CSCs معزولة باستزراع لهم في طبق بتري وتقييم التعبير عن علامة الانتشار كي-67. لتقييم إمكانيات التمايز CSCs، اخترنا CSCs بين سبع وعشر أيام مثقف. نحن نقلتهم إلى لوحة جديدة مع وسيلة تمايز كارديوميوسيتي. أنها هي المحتضنة في حاضنة ثقافة خلية لمدة 12 يوما، بينما متوسطة التمايز يتم تغييره كل ثلاثة أيام. CSCs المتباينة التعبير عن علامات محددة كارديوميوسيتي: أكتينين وتروبونين أنا. وهكذا، CSCs معزولة مع هذا البروتوكول ستيمنيس وعلامات القلب، ولديهم إمكانيات للانتشار والتفرقة تجاه النسب كارديوميوسيتي.

في هذه الدراسة، ونحن عزل CSCs من 10 إلى 12 أسبوع-عمرها C57BL/6J قلوب الفئران الذكور. هنا، وقد قدمنا طريقة بسيطة لعزل ديوان الخدمة المدنية، وتوصيف استخدام علامات بلوريبوتينسي. كما قدمنا طريقة أنيقة للتمايز CSC وتوصيف CSCs متباينة تجاه النسب كارديوميوسيتيس. لاحظنا مورفولوجية شكل مغز?...

Watch this Scientific Journal Video about Isolation, Characterization, and Differentiation of Cardiac Stem Cells from the Adult Mouse Heart at JoVE.com

Isolation, Characterization, and Differentiation of Cardiac Stem Cells from the Adult Mouse Heart

والهدف العام لهذه المادة توحيد البروتوكول لعزل وتوصيف، وتمايز الخلايا الجذعية القلبية (CSCs) من قلب الماوس الكبار. هنا، يمكننا وصف أسلوب الطرد المركزي تدرج كثافة لعزل CSCs موريني ووضع أساليب لديوان الخدمة المدنية الثقافة وانتشارها، والتمايز في cardiomyocytes.

عزل وتوصيف والتفريق في القلب من الخلايا الجذعية من قلب الماوس الكبار

Myocardial infarction (MI) is a leading cause of morbidity and mortality around the world. A major goal of regenerative medicine is to replenish the dead ...

الهدف العام من هذه المادة، هو توحيد بروتوكول لعزل، وتوصيف، والتمايز من الخلايا الجذعية القلبية، CSCs من القلب ماوس الكبار. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية، في مجال أمراض القلب والأوعية الدموية والعلاج الإقليمي مثل، العلاج بالخلايا الجذعية القلبية وفشل القلب. والميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها فعالة من حيث التكلفة ، مع ارتفاع المعونة في فترة صغيرة من الزمن.ابدأ هذه التجربة من خلال إعداد جميع المواد والأدوات الضرورية ومخازن العزل في حالة معقمة كما هو موضح في البروتوكول. بعد إزالة الجلد من البطن من الماوس القتل الرحيم، وقطع القفص الصدري داخل غطاء محرك السيارة المعقم لفتح تجويف الصدر. كشف القلب ثم إزالة الدم بالقرب من القلب باستخدام حقنة ملليلتر واحد.لإزالة أي دم بالقرب من القلب، اغسل المنطقة المحيطة بـ PBS البارد. باستخدام مقص جراحي وملاقط لتشريح القلب، وضعه في طبق بيتري 100 ملليمتر يحتوي على 10 ملليلترات الجليد الباردة PBS. استخدام ملقط ساق منحنية لخفقان القلب، وإزالة الدم المتبقي داخل القلب.نقل أربعة إلى خمسة قلوب معزولة إلى طبق بيتري 100 ملليلتر تحتوي على 10 ملليلتر من الجليد الباردة حل الملح المتوازن لحم الخنزير. خفقت القلوب مرة أخرى لغسلها وإزالة أي الدم المتبقي داخل القلب. لضمان الإزالة الكاملة للدم، قم بتغيير حل HBSS بعد كل غسل.عقد كل قلب مع زوج من ملقط واستخدام شفرة الجراحية لقطع كل قلب إلى قطعتين إلى أربعة ملليمترات في طبق بيتري 100 ملليمتر، تحتوي على خمسة إلى سبعة ملليلتر من HBSS. تغيير حل في كثير من الأحيان لضمان إزالة الدم الكامل. وأخيراً، اِنّكِ القلب في حلّ HBSS.الطرد المركزي قلوب مفروم وضعت في أنبوب مخروطي 50 ملليلتر في 500 مرة G، في أربع درجات مئوية لمدة خمس دقائق، ومن ثم التخلص من افرا. إضافة خمسة إلى ستة ملليلتر، 0.2٪ كولاجيناز الثاني حل إلى بيليه لهضم الأنسجة. إعادة تعليق بيليه بدقة عن طريق هزاز الأنبوب على شاكر في 75 مرات G، في 37 درجة مئوية لمدة 45 إلى 60 دقيقة.كل 20 إلى 30 دقيقة ، صافح الأنبوب بقوة باليد لتعزيز التحلل. قم بتكفير مزيج الأنسجة المتحللة باستخدام خمسة ملليلترات ماصة سيرولوجية ، وطرف ماص ملليلتر واحد لفك كتلة الأنسجة في تعليق الخلية المفردة. لوقف الانزيمية من الأنسجة، إضافة مرتين إلى ثلاثة أضعاف ما هو متاح تجارياً صيانة CSC المتوسطة مثل حجم الأنسجة lysed.تمرير تعليق الخلية المهضمة من خلال مصفاة خلية 100 ميكرومتر وضعت على أنبوب مخروطي 50 ملليلتر لإزالة أي قطع الأنسجة غير مهضومة. لفصل الخلايا إلى الطارد المركزي للتدرج الكثافة، إضافة 37 درجة مئوية، قبل الدافئة، البولي السكروز والصوديوم محلول دياتريوسات إلى أنبوب مخروطي 50 ملليلتر. ثم بلطف وببطء إضافة حجم متساو من الترشيح على الحل، وتجنب أي خلط من الحلين.من الأهمية بمكان إضافة سترات على محلول البولي السكروز والصوديوم diatrizoate ببطء دون خلط عن طريق إمالة الأنبوب عند 45 درجة وضد جدار الأنبوب. لا تضيف محلول البولي السكروز والصوديوم دياتراتزات على الترشيح. ضع الأنبوب ببطء شديد في جهاز طرد مركزي دلو سوينغ التأكد من عدم إزعاج الحلول.أجهزة الطرد المركزي في 500 مرة G لمدة 20 دقيقة في درجة حرارة الغرفة تعيين في سرعة تسارع وتباطؤ أقل لتجنب خلط الحلين، وللفصل السليم للخلايا الجذعية القلبية. ومن الأهمية بمكان وضع حل التدرج بعناية فائقة دون حدوث اضطراب في أجهزة الطرد المركزي. وضع تسارع وتباطؤ جهاز الطرد المركزي يجب أن يكون في أدنى سرعة، مثل واحد أو صفر.استخدام ماصة ملليمتر واحد لنقل معطف بافي تحتوي على CSCs جنبا إلى جنب مع حل إضافي من الطبقة العليا إلى أنبوب 15 ملليلتر تعقيم. إضافة حجم متساو من وسيط الصيانة CSC، ومزجها بشكل صحيح لتحييد محلول الصوديوم وdiatrizoate المتبقية. الطرد المركزي هذا التعليق في 500 مرة G لمدة خمس دقائق في أربع درجات مئوية.تجاهل المُندفع. كرر غسل CSCs مع حل DMEM غير مكتملة على الأقل مرتين. أجهزة الطرد المركزي في 500 مرة G لمدة خمس دقائق في أربع درجات مئوية للتخلص من أي محلول ثنائي السكروز والصوديوم.بعد إزالة فائقة، resuspend بيليه تحتوي على CSCs المنقى في متوسط صيانة CSC ملليلتر واحد، ومن ثم عد الخلايا. بذور CSCs في لوحة ثقافة ستة جيدا المغلفة مع حل الجيلاتين 0.02٪ تحتوي على 0.5٪ فيبرومينكتين، وإضافة ملليلتر اثنين من متوسط الصيانة الكاملة. تنمو الخلايا في 37 درجة مئوية في 5٪ ثاني أكسيد الكربون.عندما تصل ثقافة CSC إلى التقاء، قم بنقل الخلايا إلى لوحة جديدة مغلفة بالجيلاتين والليفي كما هو موضح في بروتوكول النص. ثقافة هذا نقل [ب 0] [كس] في كاملة [سيّ] صيانة وسط في 37 درجات مئويّة في 5٪ ثاني أكسيد الكربون حاضنة حتّى التقاء. كرر نقل الخلية إلى لوحة جديدة لجعل P1 CSCs التي يمكن استخدامها لإجراء مزيد من التجارب.للحفاظ على ثقافة CSC في مرحلته الأولى، بذور الخلايا أبعد كما هو موضح في بروتوكول النص. لتوصيف الخلايا المستزرعة، ضع CSC تحتوي على لوحة على الهدف من المجهر الفلورسنت. استخدام التكبير عشر مرات لتركيز الخلايا.لمراقبة الخلايا، استخدم فتحة التباين الطورية، وقم بزيادة التكبير إلى 20 مرة عن طريق تغيير العدسة الموضوعية، ثم قم بـصورة CSCs. بعد إجراء المثبطة للمناعة، ضع لوحة الثقافة تحت مجهر الفلوريسانس. تركيز الخلايا في التكبير مختلفة، ومراقبة الخلايا تحت النقيض من المرحلة ومرشحات الإثارة المختلفة، وحفظ الصور.لتمايز الخلية، تنمو CSCs في لوحة ستة جيدا مع ملليلتر اثنين من 37 درجة مئوية، قبل الدافئة CSC صيانة المتوسطة. عندما تصل الخلايا إلى 80 إلى 95٪ التقاء، استبدال وسط الصيانة مع ملليلتر اثنين، 37 درجة مئوية، قبل تدفئة cardiomyocytes التمايز المتوسطة. احتضان في 37 درجة مئوية، في CO2 5٪ لمدة تصل إلى أسبوعين إلى ثلاثة أسابيع.تغيير التمايز المتوسط كل يومين إلى ثلاثة أيام. أثناء التغيير المتوسط، لاحظ مورفولوجيا الخلية تحت المجهر لضمان ظروف الثقافة الجيدة. بعد 12 يوما، صورة الخلايا لعلامات التمايز بعد بروتوكول مناعة القياسية.تظهر مراكز الدراسات الصحية المُزَرَمة يومين إلى ثلاثة أيام مورفولوجيا على شكل مغزل عندما تُلاحظ تحت مجهر على النقيض من المرحلة. بعد سبعة أيام من الثقافة ، فإنها تظهر تغييرا في مورفولوجيا تصبح ممدود. بعد المناعة لعلامات متعددة القدرات، تظهر CSCs تعبيرات OCT4 و SOX2 و Nanog.وعلاوة على ذلك، تنتشر مراكز تنسيقية الاستدامة في الوسط الثقافي، وتعبر عن مؤشر الانتشار Ki67. لتوصيف أصل القلب من CSCs، تم فحص التعبير عن علامات القلب، وأظهرت الخلايا أن تكون إيجابية لعلامات القلب سكا-1، NKX2.5، وGATA4. بعد زراعة في cardiomyocyte التمايز المتوسطة لمدة 12 يوما، وCSCS متباينة تظهر التعبير عن علامات cardiomyocyte ACTININ، وTROPONIN-I.أثناء محاولة هذا الإجراء، من المهم أن نتذكر أن لا تسمح خلط حل التدرج ولتر. ومن المهم أيضا تعيين التسارع والتباطؤ في أدنى سرعة. من يلوثها، فمن المستحسن تنفيذ جميع عملية عزل الخلايا داخل مجلس الوزراء السلامة الأحيائية.بعد هذا الإجراء، يمكن تنفيذ طرق أخرى مثل الفصل المغناطيسي القائم على الخرز أو تدفق طرق فرز الخلايا الخلوية القائمة من أجل الإجابة على أسئلة إضافية مثل، ما مدى وضوح السكان المتجانسين للخلايا الجذعية القلبية؟ نصف قطر الكراك في الخلايا الجذعية القلبية هي علامات كبيرة، وهناك اختلافات حول خلايا القلب. بعد أن تطور، وهذه التقنية تمهد الطريق للباحثين في مجال أمراض القلب والأوعية الدموية الذين غالبا ما تكون عالية العائد من الخلايا الجذعية القلبية من قلب الماوس التي يمكن أن تكون مهمة للعلاج التجديدي في قصور القلب الإقفي.لا ننسى أن العمل مع شفرة جراحية، التبييض وDMSO يمكن أن تكون خطرة، والاحتياطات مثل استخدام معدات حماية الأفراد، معدات الوقاية الشخصية، ينبغي دائما أن تتخذ أثناء تنفيذ هذا الإجراء.

Research

JoVE Journal

Biology

Isolation of Retinal Stem Cells from the Mouse Eye

عزل الخلايا الجذعية من شبكية العين بالعين ماوس

The adult mouse retinal stem cell (RSC) is a rare quiescent cell found within the ciliary epithelium (CE) of the mammalian eye1,2,3. The CE is made up of ...

Isolation and Culture of Adult Epithelial Stem Cells from Human Skin

العزلة وثقافة الكبار الخلايا الجذعية الظهارية من الجلد البشري

The homeostasis of all self-renewing tissues is dependent on adult stem cells. As undifferentiated stem cells undergo asymmetric divisions, they generate ...

Isolation &#38; Characterization of Hoechstlow CD45negative Mouse Lung Mesenchymal Stem Cells

Isolation & Characterization of Hoechstlow CD45negative Mouse Lung Mesenchymal Stem Cells

العزلة وتوصيف هويشت منخفضة CD45 السلبية ماوس خلايا الرئة الجذعية الوسيطة

Tissue resident mesenchymal stem cells (MSC) are important regulators of tissue repair or regeneration, fibrosis, inflammation, angiogenesis and tumor ...

Generation of Mice Derived from Induced Pluripotent Stem Cells

جيل من الفئران المستمدة من الخلايا الجذعية المحفزة المستحثة

The production of induced pluripotent stem cells (iPSCs) from somatic cells provides a means to create valuable tools for basic research and may also ...

Isolation and Culture of Individual Myofibers and their Satellite Cells from Adult Skeletal Muscle

العزلة وثقافة فردية وMyofibers زنزاناتهم القمر الصناعي من العضلات الهيكلية الكبار

Muscle  regeneration in the adult is performed by resident stem cells called satellite  cells. Satellite cells are defined by  their position between the ...

Na&iuml;ve Adult Stem Cells Isolation from Primary Human Fibroblast Cultures

NaÃƒÆ’Ã‚Â¯ve Adult Stem Cells Isolation from Primary Human Fibroblast Cultures

السذاجة الكبار الخلايا الجذعية عزل من المرحلة الابتدائية الثقافات الخلايا الليفية الإنسان

Over the last decade, several adult stem cell  populations have been identified in human skin 1-4.  The isolation of multipotent adult dermal precursors ...

Isolation, Culture, and Functional Characterization of Adult Mouse Cardiomyoctyes

العزلة والثقافة، وتوصيف وظيفي من الكبار ماوس Cardiomyoctyes

The use of primary cardiomyocytes (CMs) in culture has provided a powerful complement to murine models of heart disease in advancing our understanding of ...

Manual Isolation of Adipose-derived Stem Cells from Human Lipoaspirates

عزل الخلايا الجذعية من دليل الدهنية المشتقة من Lipoaspirates الإنسان

In 2001, researchers at the University of  California, Los Angeles, described the isolation of a new population of adult  stem cells from liposuctioned ...

Isolation and Culture of Dental Epithelial Stem Cells from the Adult Mouse Incisor

العزلة وثقافة الأسنان طلائي الخلايا الجذعية من الكبار ماوس القاطعة

Understanding the cellular and molecular mechanisms that underlie tooth regeneration and renewal has become a topic of great interest1-4, and the mouse ...

Isolation of Enteric Glial Cells from the Submucosa and Lamina Propria of the Adult Mouse

عزل الخلايا الدبقية المعوي من سوبموكوسا والصفيحة بروبريا الماوس الكبار

The enteric nervous system (ENS) consists of neurons and enteric glial cells (EGCs) that reside within the smooth muscle wall, submucosa and lamina ...