Name: isolation, characterization, and differentiation of cardiac stem cells from the adult mouse heart
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation, Characterization, and Differentiation of Cardiac Stem Cells from the Adult Mouse Heart at JoVE.com

Diese Arbeit wird in Teilen, durch die National Institutes of Health Zuschüsse HL-113281 und HL116205, Paras Kumar Mishra unterstützt.

Gehäuse, Anästhesie und Opfer von Mäusen wurden nach dem genehmigten Protokoll der IACUC von der University of Nebraska Medical Center durchgeführt.
(1) Materialien
<ol><li>Einsatz 10 bis 12 Wochen alten C57BL/6J schwarz können auch männliche Mäuse auf der institutionellen Tierhaus für die Isolierung von CSCs. CSCs im Haus gehalten werden von nicht-schwangeren weiblichen Mäusen isoliert.</li>
	<li>Alle notwendigen chirurgischen Instrumente, einschließlich Chirurgische Scheren, fein...

<ol>
	<li>Benjamin, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+Disease+and+Stroke+Statistics-2017+Update:+A+Report+From+the+American+Heart+Association.">Heart Disease and Stroke Statistics-2017 Update: A Report From the American Heart Association.</a> Circulation. 135, e146 (2017).</li><li>Nguyen, P. K., Rhee, J. W., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adult+Stem+Cell+Therapy+and+Heart+Failure,+2000+to+2016:+A+Systematic+Review.">Adult Stem Cell Therapy and Heart Failure, 2000 to 2016: A Systematic Review.</a> The Journal of the American Medical Association Cardiology. 1, 831-841 (2000).</li><li>Emmert, M. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Safety+and+efficacy+of+cardiopoietic+stem+cells+in+the+treatment+of+post-infarction+left-ventricular+dysfunction+-+From+cardioprotection+to+functional+repair+in+a+translational+pig+infarction+model.">Safety and efficacy of cardiopoietic stem cells in the treatment of post-infarction left-ventricular dysfunction - From cardioprotection to functional repair in a translational pig infarction model.</a> Biomaterials. 122, 48-62 (2017).</li><li>Silvestre, J. S., Menasche, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Evolution+of+the+Stem+Cell+Theory+for+Heart+Failure.">The Evolution of the Stem Cell Theory for Heart Failure.</a> EBioMedicine. 2, 1871-1879 (2015).</li><li>Terzic, A., Behfar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cell+therapy+for+heart+failure:+Ensuring+regenerative+proficiency.">Stem cell therapy for heart failure: Ensuring regenerative proficiency.</a> Trends in Cardiovascular Medicine. 26, 395-404 (2016).</li><li>Yamada, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+stem+cell+therapy+of+heart+failure+in+genetic+cardiomyopathy.">Embryonic stem cell therapy of heart failure in genetic cardiomyopathy.</a> Stem Cells. 26, 2644-2653 (2008).</li><li>Sadek, H. A., Martin, C. M., Latif, S. S., Garry, M. G., Garry, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bone-marrow-derived+side+population+cells+for+myocardial+regeneration.">Bone-marrow-derived side population cells for myocardial regeneration.</a> Journal of Cardiovascular Translational Research. 2, 173-181 (2009).</li><li>Vrtovec, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+intracoronary+CD34++stem+cell+transplantation+in+nonischemic+dilated+cardiomyopathy+patients:+5-year+follow-up.">Effects of intracoronary CD34+ stem cell transplantation in nonischemic dilated cardiomyopathy patients: 5-year follow-up.</a> Circulation Research. 112, 165-173 (2013).</li><li>Hare, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+allogeneic+vs+autologous+bone+marrow-derived+mesenchymal+stem+cells+delivered+by+transendocardial+injection+in+patients+with+ischemic+cardiomyopathy:+the+POSEIDON+randomized+trial.">Comparison of allogeneic vs autologous bone marrow-derived mesenchymal stem cells delivered by transendocardial injection in patients with ischemic cardiomyopathy: the POSEIDON randomized trial.</a> The Journal of American Medical Association. 308, 2369-2379 (2012).</li><li>Guijarro, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intramyocardial+transplantation+of+mesenchymal+stromal+cells+for+chonic+myocardial+ischemia+and+impaired+left+ventricular+function:+Results+of+the+MESAMI+1+pilot+trial.">Intramyocardial transplantation of mesenchymal stromal cells for chonic myocardial ischemia and impaired left ventricular function: Results of the MESAMI 1 pilot trial.</a> International Journal of Cardiology. 209, 258-265 (2016).</li><li>Bobi, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracoronary+Administration+of+Allogeneic+Adipose+Tissue-Derived+Mesenchymal+Stem+Cells+Improves+Myocardial+Perfusion+But+Not+Left+Ventricle+Function,+in+a+Translational+Model+of+Acute+Myocardial+Infarction.">Intracoronary Administration of Allogeneic Adipose Tissue-Derived Mesenchymal Stem Cells Improves Myocardial Perfusion But Not Left Ventricle Function, in a Translational Model of Acute Myocardial Infarction.</a> Journal of the American Heart Association. 6, (2017).</li><li>Suzuki, E., Fujita, D., Takahashi, M., Oba, S., Nishimatsu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipose+tissue-derived+stem+cells+as+a+therapeutic+tool+for+cardiovascular+disease.">Adipose tissue-derived stem cells as a therapeutic tool for cardiovascular disease.</a> World Journal of Cardiology. 7, 454-465 (2015).</li><li>Gao, L. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracoronary+infusion+of+Wharton's+jelly-derived+mesenchymal+stem+cells+in+acute+myocardial+infarction:+double-blind,+randomized+controlled+trial.">Intracoronary infusion of Wharton's jelly-derived mesenchymal stem cells in acute myocardial infarction: double-blind, randomized controlled trial.</a> BMC Medicine. 13, 162 (2015).</li><li>Simpson, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+strong+regenerative+ability+of+cardiac+stem+cells+derived+from+neonatal+hearts.">A strong regenerative ability of cardiac stem cells derived from neonatal hearts.</a> Circulation. , S46-S53 (2012).</li><li>Kazakov, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=C-kit(+)+resident+cardiac+stem+cells+improve+left+ventricular+fibrosis+in+pressure+overload.">C-kit(+) resident cardiac stem cells improve left ventricular fibrosis in pressure overload.</a> Stem Cell Research. 15, 700-711 (2015).</li><li>Ong, S. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross+talk+of+combined+gene+and+cell+therapy+in+ischemic+heart+disease:+role+of+exosomal+microRNA+transfer.">Cross talk of combined gene and cell therapy in ischemic heart disease: role of exosomal microRNA transfer.</a> Circulation. 130, S60-S69 (2014).</li><li>Sahoo, S., Losordo, D. 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G., Cheng, K., Marban, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exosomes+as+critical+agents+of+cardiac+regeneration+triggered+by+cell+therapy.">Exosomes as critical agents of cardiac regeneration triggered by cell therapy.</a> Stem Cell Reports. 2, 606-619 (2014).</li><li>Emanueli, C., Shearn, A. I., Angelini, G. D., Sahoo, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exosomes+and+exosomal+miRNAs+in+cardiovascular+protection+and+repair.">Exosomes and exosomal miRNAs in cardiovascular protection and repair.</a> Vascular Pharmacology. 71, 24-30 (2015).</li><li>Menasche, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+cell+therapy:+lessons+from+clinical+trials.">Cardiac cell therapy: lessons from clinical trials.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 50, 258-265 (2011).</li><li>Trounson, A., McDonald, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+Cell+Therapies+in+Clinical+Trials:+Progress+and+Challenges.">Stem Cell Therapies in Clinical Trials: Progress and Challenges.</a> Cell Stem Cell. 17, 11-22 (2015).</li><li>Takamiya, M., Haider, K. H., Ashaf, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+characterization+of+a+novel+multipotent+sub-population+of+Sca-1(+)+cardiac+progenitor+cells+for+myocardial+regeneration.">Identification and characterization of a novel multipotent sub-population of Sca-1(+) cardiac progenitor cells for myocardial regeneration.</a> PLoS One. 6, e25265 (2011).</li><li>Cambria, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Translational+cardiac+stem+cell+therapy:+advancing+from+first-generation+to+next-generation+cell+types.">Translational cardiac stem cell therapy: advancing from first-generation to next-generation cell types.</a> NPJ Regenerative Medicine. 2, 17 (2017).</li><li>Bruyneel, A. A., Sehgal, A., Malandraki-Miller, S., Carr, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+Cell+Therapy+for+the+Heart:+Blind+Alley+or+Magic+Bullet?.">Stem Cell Therapy for the Heart: Blind Alley or Magic Bullet?.</a> Journal of Cardiovascular Translational Research. 9, 405-418 (2016).</li><li>Garbern, J. C., Lee, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+stem+cell+therapy+and+the+promise+of+heart+regeneration.">Cardiac stem cell therapy and the promise of heart regeneration.</a> Cell Stem Cell. 12, 689-698 (2013).</li><li>Oh, H., Ito, H., Sano, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Challenges+to+success+in+heart+failure:+Cardiac+cell+therapies+in+patients+with+heart+diseases.">Challenges to success in heart failure: Cardiac cell therapies in patients with heart diseases.</a> Journal of Cardiology. 68, 361-367 (2016).</li><li>Smith, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+resident+endogenous+c-Kit++cardiac+stem+cells+from+the+adult+mouse+and+rat+heart.">Isolation and characterization of resident endogenous c-Kit+ cardiac stem cells from the adult mouse and rat heart.</a> Nature Protocols. 9, 1662-1681 (2014).</li><li>Rutering, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+Method+for+Isolation+of+Neonatal+Rat+Cardiomyocytes+with+Increased+Yield+of+C-Kit++Cardiac+Progenitor+Cells.">Improved Method for Isolation of Neonatal Rat Cardiomyocytes with Increased Yield of C-Kit+ Cardiac Progenitor Cells.</a> Journal of Stem Cell Research and Therapy. 5, 1-8 (2015).</li><li>Saravanakumar, M., Devaraj, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distribution+and+homing+pattern+of+c-kit++Sca-1++CXCR4++resident+cardiac+stem+cells+in+neonatal,+postnatal,+and+adult+mouse+heart.">Distribution and homing pattern of c-kit+ Sca-1+ CXCR4+ resident cardiac stem cells in neonatal, postnatal, and adult mouse heart.</a> Cardiovascular Pathology. 22, 257-263 (2013).</li><li>Monsanto, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Concurrent+Isolation+of+3+Distinct+Cardiac+Stem+Cell+Populations+From+a+Single+Human+Heart+Biopsy.">Concurrent Isolation of 3 Distinct Cardiac Stem Cell Populations From a Single Human Heart Biopsy.</a> Circulation Research. 121, 113-124 (2017).</li><li>Vidyasekar, P., Shyamsunder, P., Santhakumar, R., Arun, R., Verma, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simplified+protocol+for+the+isolation+and+culture+of+cardiomyocytes+and+progenitor+cells+from+neonatal+mouse+ventricles.">A simplified protocol for the isolation and culture of cardiomyocytes and progenitor cells from neonatal mouse ventricles.</a> European Journal of Cell Biology. 94, 444-452 (2015).</li><li>Dergilev, K. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+cardiac+stem+cell+sheets+detached+by+Versene+solution+and+from+thermoresponsive+dishes+reveals+similar+properties+of+constructs.">Comparison of cardiac stem cell sheets detached by Versene solution and from thermoresponsive dishes reveals similar properties of constructs.</a> Tissue Cell. 49, 64-71 (2017).</li><li>Zaruba, M. M., Soonpaa, M., Reuter, S., Field, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiomyogenic+potential+of+C-kit(+)-expressing+cells+derived+from+neonatal+and+adult+mouse+hearts.">Cardiomyogenic potential of C-kit(+)-expressing cells derived from neonatal and adult mouse hearts.</a> Circulation. 121, 1992-2000 (1992).</li><li>Wang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+a+Sca-1+/CD31-+progenitor+cell+lineage+derived+from+mouse+heart+tissue.">Isolation and characterization of a Sca-1+/CD31- progenitor cell lineage derived from mouse heart tissue.</a> BMC Biotechnology. 14, 75 (2014).</li><li>Smits, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+cardiomyocyte+progenitor+cells+differentiate+into+functional+mature+cardiomyocytes:+an+in+vitro+model+for+studying+human+cardiac+physiology+and+pathophysiology.">Human cardiomyocyte progenitor cells differentiate into functional mature cardiomyocytes: an in vitro model for studying human cardiac physiology and pathophysiology.</a> Nature Protocols. 4, 232-243 (2009).</li></ol>

Die entscheidenden Schritte dieses CSC-Isolierung-Protokolls sind wie folgt. (1) ein sterilisierter Zustand ist für die Extraktion der Herzen von den Mäusen einzuhalten. Eine Kontamination während der Extraktion des Herzens beeinträchtigen die Qualität des CSCs. 2) Blut muss vollständig entfernt werden, bevor trippelnd Herzens, die durch mehrere Wäschen von ganzem Herzen und dem Herzen Stücke mit HBSS Lösung erfolgt. (3) das Herz-Stück müssen vollständig in einer einzelligen Suspension mit Kollagenase Lösung...

Ischämische Herzkrankheiten, einschließlich Myokardinfarkt (MI), ist eine der Hauptursachen des Todes rund um die Welt1. Stammzell-Therapie für die Regeneration Tote Herzmuskel bleibt ein wichtiger Ansatz zur Verbesserung der Herzfunktion eine MI Herz2,3,4,5. Verschiedene Arten von Stammzellen haben, Tote Herzmuskel wieder aufzufüllen und die Herzfunktion eines MI Herzens zu verbessern. Sie können im großen und ganzen in6 und Erwachsenen Stammzellen embryonaler Stammzellen eingeteilt werden. In adulten Stammzellen wurden verschiedene Arten von Stammzellen, wie Knochenmark gewonnenen mononukleären Zellen7,8, mesenchymale Stammzellen aus dem Knochenmark9,10, Fettgewebe verwendet 11,12, und Nabelschnur13und CSCs14,15. Stammzellen können kardiale Erholung durch endokrine und/oder parakrine Aktionen16,17,18,19,20fördern. Jedoch ist eine große Einschränkung der Stammzell-Therapie eine ausreichende Anzahl von Stammzellen erhalten, das vermehren und/oder gegenüber einem bestimmten kardialen Linie21,22unterscheiden können. Autologen und allogenen Transplantation von Stammzellen ist eine wichtige Herausforderung in Stammzell-Therapie-9. CSCs könnte ein besserer Ansatz zur kardialen Regeneration, denn sie aus dem Herzen stammen und sie können als nicht-kardialen Stammzellen leichter ins Herz Linien differenziert. Also, es reduziert das Risiko von Teratom. Darüber hinaus könnte die endokrinen und parakrine Effekte des CSCs, wie Exosomen und MiRNAs abgeleitet von CSCs, effektiver als andere Arten von Stammzellen. CSCs bleibt daher eine bessere Option für kardialen Regeneration23,24.
Obwohl CSCs ein besserer Anwärter zur kardialen Regeneration in einem MI Herzen aufgrund ihrer kardialen Ursprungs sind, ist eine große Einschränkung mit CSCs weniger Ertrag aufgrund des Fehlens einer effizienten Isolierung-Methode. Eine weitere Einschränkung könnte beeinträchtigt Differenzierung des CSCs in Richtung Herzzellen Lineage2,25,26,27. Um diese Einschränkungen zu umgehen, ist es wichtig, ein effizientes Protokoll für CSC-Isolierung, Charakterisierung und Differenzierung in Richtung Herz Linie zu entwickeln. Es gibt keine einzige akzeptable Marker für CSCs und eine spezifische Zelloberfläche Marker-basierte Isolation des CSCs ergibt weniger CSCs. Hier, standardisieren wir einen einfachen Farbverlauf Zentrifugation Ansatz zur CSCs aus dem Herzen der Maus zu isolieren, ist kostengünstig und führt zu einer erhöhten Rendite von CSCs. Diese isolierten CSCs können für spezifische Zelloberfläche Marker durch Fluoreszenz-aktivierte Zelle kurzschließen ausgewählt werden. Neben CSCs isoliert haben wir ein Protokoll für CSC-Kultur, Charakterisierung und Differenzierung gegenüber Cardiomyocyte Abstammung. So präsentieren wir eine elegante Methode um zu isolieren, zu charakterisieren, Kultur, und CSCs von Erwachsenen Mäuseherzen (Abbildung 5) zu unterscheiden.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Mice</td>
			<td>The Jackson laboratory, USA</td>
			<td>Stock no. 000664</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibodies:</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OCT4-</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab18976 (rabbit polyclonal)</td>
			<td>OCT4-Primary antibody- 1:100 dilution, Secondar antibody- 1:200 dilution, in blocking solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SOX2</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab97959 (rabbit polyclonal)</td>
			<td>SOX2-Primary antibody- 1:100 dilution, Secondar antibody- 1:200 dilution, in blocking solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nanog</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab80892 (rabbit polyclonal)</td>
			<td>Nanog-Primary antibody- 1:100 dilution, Secondar antibody- 1:200 dilution, in blocking solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ki67</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab16667 (rabbit polyclonal)</td>
			<td>Ki67-Primary antibody- 1:100 dilution, Secondar antibody- 1:200 dilution, in blocking solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sca I</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>AB4336 (rabbit polyclonal)</td>
			<td>Sca I Primary antibody- 1:100 dilution, Secondar antibody- 1:200 dilution, in blocking solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NKX2-5</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>sc-8697 (goat polyclonal)</td>
			<td>NKX2-5-Primary antibody- 1:50 dilution, Secondar antibody- 1:200 dilution, in blocking solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GATA4</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab84593 (rabbit polyclonal)</td>
			<td>GATA4-Primary antibody- 1:100 dilution, Secondar antibody- 1:200 dilution, in blocking solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEF2C</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>sc-13268 (goat polyclonal)</td>
			<td>MEF2C-Primary antibody- 1:50 dilution, Secondar antibody- 1:200 dilution, in blocking solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Troponin I</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>MAB1691 (mouse monoclonal)</td>
			<td>Troponin I-Primary antibody- 1:100 dilution, Secondar antibody- 1:200 dilution, in blocking solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Actinin</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>MAB1682 (mouse monoclonal)</td>
			<td>Actinin-Primary antibody- 1:100 dilution, Secondar antibody- 1:200 dilution, in blocking solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ANP</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>AB5490 (mouse polyclonal)</td>
			<td>ANP-Primary antibody- 1:100 dilution, Secondar antibody- 1:200 dilution, in blocking solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alex Fluor-488 checken anti-rabbit</td>
			<td>Life technology</td>
			<td>Ref no. A21441</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alex Fluor-594 goat anti-rabbit</td>
			<td>Life technology</td>
			<td>Ref no. A11012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alex Fluor-594 rabbit anti-goat</td>
			<td>Life technology</td>
			<td>Ref no. A11078</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alex Fluor-488 checken anti-mouse</td>
			<td>Life technology</td>
			<td>Ref no. A21200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alex Fluor-594 checken anti-goat</td>
			<td>Life technology</td>
			<td>Ref no. A21468</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Culture medium: </td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CSC maintenance medium</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>SCM101</td>
			<td>Note: For CSC culture, PBS or incomplete DMEM medium was used for washing the cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cardiomyocytes differentiation medium</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>SCM102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D5546</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Isolation buffer:</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>polysucrose and sodium diatrizoate solution (Histopaque1077)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>10771</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>2018-03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase I</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C0130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispase solution</td>
			<td>STEMCELL Technologies</td>
			<td>7913</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>LONZA</td>
			<td>S1226</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>StemPro Accutase Cell Dissociation Reagent</td>
			<td>Thermoscientific</td>
			<td>A1110501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Other reagents:</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A7030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal checken serum</td>
			<td>Vector laboratory</td>
			<td>S3000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI solution</td>
			<td>Applichem</td>
			<td>A100,0010</td>
			<td>Dapi, working concentration-1 &#181;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan blue</td>
			<td>Biorad</td>
			<td>145-0013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T4049</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>StemPro Accutase Cell Dissociation Reagent</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A1110501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formaldehyde</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>158127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>ACROS</td>
			<td>Cas No. 900-293-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 20</td>
			<td>Fisher Sceintific</td>
			<td>Lot No. 160170</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue culture materials:</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 mm petri dish</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-well plate</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24-well plate</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T-25 flask</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T-75 flask</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 ml conical tube</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL conical tube</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>40 &#181;m cell stainer</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22363547</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 &#181;m cell stainer</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22363549</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.22 &#181;m filter</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>09-719C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 mL syring</td>
			<td>BD</td>
			<td>Ref no. 309604</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 &#181;L, 200 &#181;L, 1000 &#181;L pipette tips</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL, 10mL, 25 mL disposible plastic pipette</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Instruments</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrufuge machine</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>LEGEND X1R centrifuge</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EVOS microscope</td>
			<td>Life technology</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automated cell counter</td>
			<td>Biorad</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell counting slide</td>
			<td>Biorad</td>
			<td>145-0011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pippte aid</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>S1 pipet filler</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Instruments:</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical scissors</td>
			<td>Fine Scientific Tool</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine surgical scissors</td>
			<td>Fine Scientific Tool</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curve shank forceps</td>
			<td>Fine Scientific Tool</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical blade</td>
			<td>Fine Scientific Tool</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation, characterization, and differentiation of cardiac stem cells from the adult mouse heart

Myokardinfarkt (MI) ist eine der Hauptursachen für Morbidität und Mortalität auf der ganzen Welt. Ein wesentliches Ziel der regenerativen Medizin ist der Tote Herzmuskel nach MI wieder aufzufüllen. Obwohl mehrere Strategien verwendet wurden, um den Herzmuskel zu regenerieren, bleibt Stammzell-Therapie einen wichtigen Ansatz für Tote Herzmuskel eines MI Herzens wieder aufzufüllen. Beweise sammeln schlägt das Vorhandensein von resident kardiale Stammzellen (CSCs) in das Erwachsene Herz und ihre endokrine und/oder parakrine Effekte auf die kardialen Regeneration. CSC-Isolierung und deren Charakterisierung und Differenzierung in Richtung Herzmuskelzellen, vor allem Kardiomyozyten bleibt jedoch eine technische Herausforderung. In der vorliegenden Studie haben wir eine einfache Methode zur Isolierung, Charakterisierung und Differenzierung von CSCs aus dem Herzen der erwachsenen Maus. Hier beschreiben wir eine Dichte Gradienten Methode zur Isolierung von CSCs, wo das Herz durch eine 0,2 % Kollagenase II Lösung verdaut wird. Um das isolierte CSCs zu charakterisieren, haben wir den Ausdruck von CSCs/Cardiac Marker, Sca-1, NKX2-5 und GATA4 und Pluripotenz/Stemness Marker OCT4, SOX2 und Nanog ausgewertet. Wir bestimmt auch die Proliferation Potenzial der isolierten CSCs durch sie in einer Petrischale züchten und die Bewertung des Ausdrucks der Verbreitung Markierung Ki-67. Für die Bewertung der Differenzierung Potenzial des CSCs, wählten wir sieben - zehn - Tage kultiviert CSCs. Wir übertragen sie auf eine neue Platte mit einem Cardiomyocyte Differenzierung Medium. Sie werden in einer Zelle-Kultur-Inkubator für 12 Tage inkubiert, während die Differenzierung Medium alle drei Tage gewechselt wird. Die differenzierte CSCs express Cardiomyocyte-spezifische Marker: Actinin und Troponin ich. So CSCs isoliert mit diesem Protokoll haben Stemness und kardialen Marker, und sie haben ein Potenzial für Proliferation und Differenzierung in Richtung Cardiomyocyte Abstammung.

In der vorliegenden Studie werden CSCs von 10 bis 12 Wochen alten C57BL/6J männliche Mäuse Herz isoliert. Hier haben wir eine einfache Methode für CSC-Isolierung und Charakterisierung mit Hilfe von Markern der Pluripotenz präsentiert. Wir stellten auch eine elegante Methode zur Differenzierung der CSC und die Charakterisierung von CSCs, die in Richtung Herzzellen Linie unterschieden. Wir beobachteten eine Spindel Form Morphologie des 2 -, 3-Tage-kultivierte CSCs unter dem Phasenkontra...

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Isolation, Characterization, and Differentiation of Cardiac Stem Cells from the Adult Mouse Heart

Das übergeordnete Ziel dieses Artikels soll das Protokoll zur Isolierung, Charakterisierung und Differenzierung von kardialen Stammzellen (CSCs) aus dem Herzen der erwachsenen Maus zu standardisieren. Hier beschreiben wir eine Dichte Gradienten Zentrifugation Methode, murine CSCs zu isolieren und ausgearbeiteten Methoden für CSC-Kultur, Proliferation und Differenzierung in Herzmuskelzellen.

Isolierung, Charakterisierung und Differenzierung von kardialen Stammzellen von Erwachsenen Maus Herzen

Myocardial infarction (MI) is a leading cause of morbidity and mortality around the world. A major goal of regenerative medicine is to replenish the dead ...

Das übergeordnete Ziel dieses Artikels ist es, das Protokoll für die Isolierung, Charakterisierung und Differenzierung von Herzstammzellen, CSCs aus dem Adult Mouse Heart, zu standardisieren. Diese Methode kann helfen, wichtige Fragen im Bereich der Herz-Kreislauf-Erkrankungen und der regionalen Therapie wie Herzstammzelltherapie und Herzinsuffizienz zu beantworten. Der Hauptvorteil dieser Technik ist, dass sie kostengünstig ist, mit hoher Hilfe in kurzer Zeit.Starten Sie dieses Experiment, indem Sie alle notwendigen Materialien, Instrumente und Isolationspuffer in einem sterilisierten Zustand vorbereiten, wie im Protokoll beschrieben. Nachdem Sie die Haut aus dem Bauch einer eingeschläferten Maus entfernt haben, schneiden Sie den Brustkorb in der sterilen Kapuze, um die Brusthöhle zu öffnen. Setzen Sie das Herz aus und entfernen Sie dann das Blut in der Nähe des Herzens mit einer Ein-Milliliter-Spritze.Um Blut in der Nähe des Herzens zu entfernen, waschen Sie die Umgebung mit eiskaltem PBS. Mit chirurgischen Scheren und Pinzetten, um das Herz zu sezieren, legen Sie es in eine 100 Millimeter Petrischale mit 10 Milliliter eiskalte PBS. Verwenden Sie gekrümmte Schaftzangen, um das Herz zu lähmen, und entfernen Sie das Restblut im Herzen.Übertragen Sie vier bis fünf isolierte Herzen auf eine 100 Milliliter Petrischale mit 10 Millilitereise. Palpate die Herzen wieder, um sie zu waschen und entfernen Sie restliches Blut im Herzen. Um die vollständige Entfernung des Blutes zu gewährleisten, ändern Sie die HBSS-Lösung nach jeder Wäsche.Halten Sie jedes Herz mit einer Zange und verwenden Sie eine chirurgische Klinge, um jedes Herz in zwei bis vier Millimeter Stücke in einer 100-Millimeter-Petrischale zu schneiden, die fünf bis sieben Milliliter HBSS enthält. Ändern Sie häufig die Lösung, um eine vollständige Blutentnahme zu gewährleisten. Schließlich, hacken Sie die Herzen in der HBSS-Lösung.Zentrifugieren Sie die gehackten Herzen in einem 50 Milliliter konischen Rohr bei 500 mal G, bei vier Grad Celsius für fünf Minuten, und dann den Überstand entsorgen. Fügen Sie fünf bis sechs Milliliter, 0,2%Collagenase II Lösung auf das Pellet, um das Gewebe zu verdauen. Das Pellet gründlich wieder aufhängen, indem man die Röhre auf einem Shaker bei 75-fachem G, bei 37 Grad Celsius für 45 bis 60 Minuten schaukelt.Alle 20 bis 30 Minuten das Rohr kräftig von Hand schütteln, um die Lyse zu verbessern. Trituieren Sie den lysierten Gewebemix mit fünf Millilitern serologischer Pipette und einer Ein-Milliliter-Pipettenspitze, um den Gewebeklumpen in die einzellige Suspension zu dissoziieren. Um die enzymatische Lyse des Gewebes zu stoppen, fügen Sie zwei- bis dreimal so viel kommerziell erhältliches CSC-Wartungsmedium hinzu wie das Volumen des lysierten Gewebes.Passieren Sie die verdaute Zellsuspension durch ein 100 Mikrometer Zellsieb, das auf einem 50 Milliliter konischen Rohr platziert wird, um unverdaute Gewebestücke zu entfernen. Um die Zellen auf Dichtegradientzentrifugation zu trennen, fügen Sie 37 Grad Celsius, vorgewärmt, Polysucrose und Natriumdiatrizoat Lösung zu einem 50 Milliliter konischen Rohr. Dann sanft und langsam fügen Sie ein gleiches Volumen von Filtrat über die Lösung, vermeidung jede Mischung der beiden Lösungen.Es ist wichtig, Filtrat über Polysucrose und Natriumdiatrizoat Lösung langsam ohne Mischen durch Kippen des Rohres bei 45 Grad und gegen die Wand des Rohres hinzuzufügen. Setzen Sie keine Polysucrose- und Natriumdiatrizoatlösung über Filtrat bei. Legen Sie das Rohr sehr langsam in eine Schwenk-Eimer-Zentrifuge, um sicherzustellen, dass die Lösungen nicht stören.Zentrifuge bei 500 mal G für 20 Minuten bei Raumtemperatur bei einer niedrigeren Beschleunigungs- und Verzögerungsgeschwindigkeit eingestellt, um das Mischen der beiden Lösungen zu vermeiden, und für eine ordnungsgemäße Trennung der Herzstammzellen. Es ist wichtig, die Gradientenlösung sehr sorgfältig und ohne Störung in der Zentrifuge zu setzen. Setzen Sie die Beschleunigung und Verzögerung der Zentrifuge muss bei der niedrigsten Geschwindigkeit sein, wie ein oder null.Verwenden Sie eine 1-Millimeter-Pipette, um die buffy Schicht mit den CSCs zusammen mit zusätzlicher Lösung von der oberen Schicht auf ein 15 Milliliter sterilisiertes Rohr zu übertragen. Fügen Sie ein gleiches Volumen von CSC-Wartungsmedium hinzu, und mischen Sie es richtig, um die Rest-Polysucrose- und Natriumdiatrizoatlösung zu neutralisieren. Zentrifugieren Sie diese Suspension bei 500 mal G für fünf Minuten bei vier Grad Celsius.Entsorgen Sie den Überstand. Wiederholen Sie das Waschen von CSCs mit unvollständiger DMEM-Lösung mindestens zwei Mal. Zentrifuge bei 500 mal G für fünf Minuten bei vier Grad Celsius, um jede Rest-Polysucrose- und Natriumdiatrizoatlösung loszuwerden.Nach dem Entfernen des Überstandes setzen Sie das Pellet, das gereinigte CSCs enthält, in einem Milliliter CSC-Wartungsmedium wieder auf und zählen Sie dann die Zellen. Säen Sie die CSCs in einer Sechs-Brunnen-Kulturplatte, die mit einer 0,02%igen Gelatinelösung mit 0,5% Fibronectin beschichtet ist, und fügen Sie zwei Milliliter komplettes Pflegemedium hinzu. Wachsen Sie die Zellen bei 37 Grad Celsius in 5%CO2.Wenn die CSC-Kultur die Koninfluenza erreicht, übertragen Sie die Zellen auf eine neue Gelatine- und Fibronectin-beschichtete Platte, wie im Textprotokoll beschrieben. Kultur diese übertragen P0 CSCs in komplette CSC Wartungsmedium bei 37 Grad Celsius in einem 5%CO2-Inkubator bis zum Einfluss. Wiederholen Sie den Zelltransfer auf eine neue Platte, um P1-CSCs herzustellen, die für weitere Experimente verwendet werden können.Um die CSC-Kultur in ihrer Anfangsphase beizubehalten, säen Sie die Zellen weiter aus, wie im Textprotokoll beschrieben. Um die kultivierten Zellen zu charakterisieren, legen Sie die CSC-haltige Platte auf das Ziel eines Fluoreszenzmikroskops. Verwenden Sie die zehnfache Vergrößerung, um die Zellen zu fokussieren.Um die Zellen zu beobachten, verwenden Sie phasenkontrastige Blende, und erhöhen Sie die Vergrößerung auf das 20-fache, indem Sie die Objektivlinse ändern, und stellen Sie dann die CSCs ab. Nach der Durchführung der Immunfärbung, legen Sie die Kulturplatte unter das Fluoreszenzmikroskop. Fokussieren Sie die Zellen auf verschiedene Vergrößerungen, beobachten Sie die Zellen unter Phasenkontrast und verschiedenen Anregungsfiltern, und speichern Sie die Bilder.Zur Zelldifferenzierung die CSCs in einer Sechs-Brunnen-Platte mit zwei Millilitern 37 Grad Celsius, vorgewärmtem CSC-Wartungsmedium, anbauen. Wenn die Zellen 80 bis 95% Konfluenz erreichen, ersetzen Sie das Pflegemedium durch zwei Milliliter, 37 Grad Celsius, vorgewärmte Kardiomyozyten Differenzierungsmedium. Inkubieren bei 37 Grad Celsius, in einem 5%CO2 für bis zu zwei bis drei Wochen.Ändern Sie das Differenzierungsmedium alle zwei bis drei Tage. Beobachten Sie während des mittleren Wechsels die Zellmorphologie unter dem Mikroskop, um die guten Kulturbedingungen zu gewährleisten. Nach 12 Tagen die Zellen nach einem Standard-Immunstainierungsprotokoll für Differenzierungsmarker abbilden.Zwei- bis dreitage kultivierte CSCs zeigen eine spindelförmige Morphologie, wenn sie unter einem Phasenkontrastmikroskop beobachtet werden. Nach sieben Tagen Kultur zeigen sie einen Wandel in der Morphologie, der sich länglich entwickelt. Nach der Immunfärbung für Marker der Pluripotenz zeigen CSCs Ausdrücke von OCT4, SOX2 und Nanog.Darüber hinaus vermehren sich CSCs im Kulturmedium und drücken den Proliferationsmarker Ki67 aus. Um den kardialen Ursprung von CSCs zu charakterisieren, wurde die Expression von Herzmarkern untersucht, und die Zellen zeigten sich positiv für die Herzmarker Sca-1, NKX2.5 und GATA4. Nach der Kultivierung im Kardiomyozytendifferenzierungsmedium für 12 Tage zeigen differenzierte CSCs die Expression der Kardiomyozytenmarker ACTININ und TROPONIN-I.Beim Versuch dieses Verfahrens ist es wichtig, daran zu denken, dass das Mischen der Gradientenlösung und des Filtrats nicht zugelassen wird. Es ist auch wichtig, die Beschleunigung und Verzögerung auf niedrigste Geschwindigkeit einzustellen. Wer auch immer sie verunreinigt, es wird empfohlen, alle Zellisolationsprozess in einem Biosicherheitsschrank durchzuführen.Nach diesem Verfahren können andere Methoden wie magnetisch-perlenbasierte Trennung oder strömungszytomettische Zellsortierungsmethoden durchgeführt werden, um zusätzliche Fragen zu beantworten, wie z. B. wie klar die homogene Population von Herzstammzellen ist? Der Rissradius in einer Herzstammzelle ist ein großer Marker, und es gibt Unterschiede zu Kardiomyozyten. Nach der Entwicklung wird diese Technik den Weg für die Forscher auf dem Gebiet der Herz-Kreislauf-Erkrankungen ebnen, die oft hohe Ausbeute von Herzstammzellen aus dem Mausherz, die für die regenerative Therapie bei ischämischer Herzinsuffizienz wichtig sein könnte.Vergessen Sie nicht, dass die Arbeit mit chirurgischen Klinge, Bleichmittel und DMSO gefährlich sein kann, und Vorsichtsmaßnahmen wie die Verwendung von PersonalSchutzausrüstungen, PSA, sollte immer während der Durchführung dieses Verfahrens getroffen werden.

Research

JoVE Journal

Biology

Isolation of Retinal Stem Cells from the Mouse Eye

Isolierung von Retinal Stammzellen aus der Maus Eye

The adult mouse retinal stem cell (RSC) is a rare quiescent cell found within the ciliary epithelium (CE) of the mammalian eye1,2,3. The CE is made up of ...

Forschung

Biologie

Isolation and Culture of Adult Epithelial Stem Cells from Human Skin

Isolierung und Kultivierung von Adult epithelialen Stammzellen aus menschlicher Haut

The homeostasis of all self-renewing tissues is dependent on adult stem cells. As undifferentiated stem cells undergo asymmetric divisions, they generate ...

Isolation &#38; Characterization of Hoechstlow CD45negative Mouse Lung Mesenchymal Stem Cells

Isolation & Characterization of Hoechstlow CD45negative Mouse Lung Mesenchymal Stem Cells

Isolation und Charakterisierung von Hoechst Low CD45 Negative Mouse Lung mesenchymalen Stammzellen

Tissue resident mesenchymal stem cells (MSC) are important regulators of tissue repair or regeneration, fibrosis, inflammation, angiogenesis and tumor ...

Generation of Mice Derived from Induced Pluripotent Stem Cells

Generation der Mäuse aus induzierten pluripotenten Stammzellen

The production of induced pluripotent stem cells (iPSCs) from somatic cells provides a means to create valuable tools for basic research and may also ...

Isolation and Culture of Individual Myofibers and their Satellite Cells from Adult Skeletal Muscle

Isolation und Kultur der einzelnen Muskelfasern und ihre Satelliten aus adulten Skelettmuskel

Muscle  regeneration in the adult is performed by resident stem cells called satellite  cells. Satellite cells are defined by  their position between the ...

Na&iuml;ve Adult Stem Cells Isolation from Primary Human Fibroblast Cultures

NaÃƒÆ’Ã‚Â¯ve Adult Stem Cells Isolation from Primary Human Fibroblast Cultures

Naive Adult Stem Cells Isolation von primären humanen Fibroblasten Kulturen

Over the last decade, several adult stem cell  populations have been identified in human skin 1-4.  The isolation of multipotent adult dermal precursors ...

Isolation, Culture, and Functional Characterization of Adult Mouse Cardiomyoctyes

Isolierung, Kultur, und funktionelle Charakterisierung der erwachsenen Maus Cardiomyoctyes

The use of primary cardiomyocytes (CMs) in culture has provided a powerful complement to murine models of heart disease in advancing our understanding of ...

Manual Isolation of Adipose-derived Stem Cells from Human Lipoaspirates

Manuelle Isolierung von Fettgewebe gewonnene Stammzellen aus menschlichen Lipoaspirates

In 2001, researchers at the University of  California, Los Angeles, described the isolation of a new population of adult  stem cells from liposuctioned ...

Isolation and Culture of Dental Epithelial Stem Cells from the Adult Mouse Incisor

Isolation und Kultur der Dental epithelialen Stammzellen aus dem erwachsenen Maus Schneidezahn

Understanding the cellular and molecular mechanisms that underlie tooth regeneration and renewal has become a topic of great interest1-4, and the mouse ...

Isolation of Enteric Glial Cells from the Submucosa and Lamina Propria of the Adult Mouse

Isolierung der magensaftresistenten Gliazellen aus der Submukosa und Lamina Propria der Erwachsenen Maus

The enteric nervous system (ENS) consists of neurons and enteric glial cells (EGCs) that reside within the smooth muscle wall, submucosa and lamina ...