Name: isolation, characterization, and differentiation of cardiac stem cells from the adult mouse heart
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation, Characterization, and Differentiation of Cardiac Stem Cells from the Adult Mouse Heart at JoVE.com

Este trabalho é apoiado, em partes, por subvenções a National Institutes of Health, HL-113281 e HL116205 para Paras Kumar Mishra.

A habitação, anestesia e sacrifício de ratos foram realizados seguindo o protocolo aprovado IACUC do centro médico da Universidade de Nebraska.
1. materiais
<ol><li>Uso 10 a 12-semanas C57BL/6J preto camundongos machos, mantidos internamente à instalação de animais institucional, para o isolamento de CSCs. CSCs podem também ser isolado de ratos fêmeas não-grávidas.</li>
	<li>Esterilizar todos os instrumentos cirúrgicos necessários, incluindo tesouras cirúrgicas, bem tesoura cir...

<ol>
	<li>Benjamin, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+Disease+and+Stroke+Statistics-2017+Update:+A+Report+From+the+American+Heart+Association.">Heart Disease and Stroke Statistics-2017 Update: A Report From the American Heart Association.</a> Circulation. 135, e146 (2017).</li><li>Nguyen, P. K., Rhee, J. W., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adult+Stem+Cell+Therapy+and+Heart+Failure,+2000+to+2016:+A+Systematic+Review.">Adult Stem Cell Therapy and Heart Failure, 2000 to 2016: A Systematic Review.</a> The Journal of the American Medical Association Cardiology. 1, 831-841 (2000).</li><li>Emmert, M. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Safety+and+efficacy+of+cardiopoietic+stem+cells+in+the+treatment+of+post-infarction+left-ventricular+dysfunction+-+From+cardioprotection+to+functional+repair+in+a+translational+pig+infarction+model.">Safety and efficacy of cardiopoietic stem cells in the treatment of post-infarction left-ventricular dysfunction - From cardioprotection to functional repair in a translational pig infarction model.</a> Biomaterials. 122, 48-62 (2017).</li><li>Silvestre, J. S., Menasche, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Evolution+of+the+Stem+Cell+Theory+for+Heart+Failure.">The Evolution of the Stem Cell Theory for Heart Failure.</a> EBioMedicine. 2, 1871-1879 (2015).</li><li>Terzic, A., Behfar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cell+therapy+for+heart+failure:+Ensuring+regenerative+proficiency.">Stem cell therapy for heart failure: Ensuring regenerative proficiency.</a> Trends in Cardiovascular Medicine. 26, 395-404 (2016).</li><li>Yamada, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+stem+cell+therapy+of+heart+failure+in+genetic+cardiomyopathy.">Embryonic stem cell therapy of heart failure in genetic cardiomyopathy.</a> Stem Cells. 26, 2644-2653 (2008).</li><li>Sadek, H. A., Martin, C. M., Latif, S. S., Garry, M. G., Garry, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bone-marrow-derived+side+population+cells+for+myocardial+regeneration.">Bone-marrow-derived side population cells for myocardial regeneration.</a> Journal of Cardiovascular Translational Research. 2, 173-181 (2009).</li><li>Vrtovec, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+intracoronary+CD34++stem+cell+transplantation+in+nonischemic+dilated+cardiomyopathy+patients:+5-year+follow-up.">Effects of intracoronary CD34+ stem cell transplantation in nonischemic dilated cardiomyopathy patients: 5-year follow-up.</a> Circulation Research. 112, 165-173 (2013).</li><li>Hare, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+allogeneic+vs+autologous+bone+marrow-derived+mesenchymal+stem+cells+delivered+by+transendocardial+injection+in+patients+with+ischemic+cardiomyopathy:+the+POSEIDON+randomized+trial.">Comparison of allogeneic vs autologous bone marrow-derived mesenchymal stem cells delivered by transendocardial injection in patients with ischemic cardiomyopathy: the POSEIDON randomized trial.</a> The Journal of American Medical Association. 308, 2369-2379 (2012).</li><li>Guijarro, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intramyocardial+transplantation+of+mesenchymal+stromal+cells+for+chonic+myocardial+ischemia+and+impaired+left+ventricular+function:+Results+of+the+MESAMI+1+pilot+trial.">Intramyocardial transplantation of mesenchymal stromal cells for chonic myocardial ischemia and impaired left ventricular function: Results of the MESAMI 1 pilot trial.</a> International Journal of Cardiology. 209, 258-265 (2016).</li><li>Bobi, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracoronary+Administration+of+Allogeneic+Adipose+Tissue-Derived+Mesenchymal+Stem+Cells+Improves+Myocardial+Perfusion+But+Not+Left+Ventricle+Function,+in+a+Translational+Model+of+Acute+Myocardial+Infarction.">Intracoronary Administration of Allogeneic Adipose Tissue-Derived Mesenchymal Stem Cells Improves Myocardial Perfusion But Not Left Ventricle Function, in a Translational Model of Acute Myocardial Infarction.</a> Journal of the American Heart Association. 6, (2017).</li><li>Suzuki, E., Fujita, D., Takahashi, M., Oba, S., Nishimatsu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipose+tissue-derived+stem+cells+as+a+therapeutic+tool+for+cardiovascular+disease.">Adipose tissue-derived stem cells as a therapeutic tool for cardiovascular disease.</a> World Journal of Cardiology. 7, 454-465 (2015).</li><li>Gao, L. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracoronary+infusion+of+Wharton's+jelly-derived+mesenchymal+stem+cells+in+acute+myocardial+infarction:+double-blind,+randomized+controlled+trial.">Intracoronary infusion of Wharton's jelly-derived mesenchymal stem cells in acute myocardial infarction: double-blind, randomized controlled trial.</a> BMC Medicine. 13, 162 (2015).</li><li>Simpson, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+strong+regenerative+ability+of+cardiac+stem+cells+derived+from+neonatal+hearts.">A strong regenerative ability of cardiac stem cells derived from neonatal hearts.</a> Circulation. , S46-S53 (2012).</li><li>Kazakov, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=C-kit(+)+resident+cardiac+stem+cells+improve+left+ventricular+fibrosis+in+pressure+overload.">C-kit(+) resident cardiac stem cells improve left ventricular fibrosis in pressure overload.</a> Stem Cell Research. 15, 700-711 (2015).</li><li>Ong, S. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross+talk+of+combined+gene+and+cell+therapy+in+ischemic+heart+disease:+role+of+exosomal+microRNA+transfer.">Cross talk of combined gene and cell therapy in ischemic heart disease: role of exosomal microRNA transfer.</a> Circulation. 130, S60-S69 (2014).</li><li>Sahoo, S., Losordo, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exosomes+and+cardiac+repair+after+myocardial+infarction.">Exosomes and cardiac repair after myocardial infarction.</a> Circulation Research. 114, 333-344 (2014).</li><li>Zhang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pretreatment+of+Cardiac+Stem+Cells+With+Exosomes+Derived+From+Mesenchymal+Stem+Cells+Enhances+Myocardial+Repair.">Pretreatment of Cardiac Stem Cells With Exosomes Derived From Mesenchymal Stem Cells Enhances Myocardial Repair.</a> Journal of the American Heart Association. 5, (2016).</li><li>Ibrahim, A. G., Cheng, K., Marban, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exosomes+as+critical+agents+of+cardiac+regeneration+triggered+by+cell+therapy.">Exosomes as critical agents of cardiac regeneration triggered by cell therapy.</a> Stem Cell Reports. 2, 606-619 (2014).</li><li>Emanueli, C., Shearn, A. I., Angelini, G. D., Sahoo, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exosomes+and+exosomal+miRNAs+in+cardiovascular+protection+and+repair.">Exosomes and exosomal miRNAs in cardiovascular protection and repair.</a> Vascular Pharmacology. 71, 24-30 (2015).</li><li>Menasche, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+cell+therapy:+lessons+from+clinical+trials.">Cardiac cell therapy: lessons from clinical trials.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 50, 258-265 (2011).</li><li>Trounson, A., McDonald, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+Cell+Therapies+in+Clinical+Trials:+Progress+and+Challenges.">Stem Cell Therapies in Clinical Trials: Progress and Challenges.</a> Cell Stem Cell. 17, 11-22 (2015).</li><li>Takamiya, M., Haider, K. H., Ashaf, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+characterization+of+a+novel+multipotent+sub-population+of+Sca-1(+)+cardiac+progenitor+cells+for+myocardial+regeneration.">Identification and characterization of a novel multipotent sub-population of Sca-1(+) cardiac progenitor cells for myocardial regeneration.</a> PLoS One. 6, e25265 (2011).</li><li>Cambria, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Translational+cardiac+stem+cell+therapy:+advancing+from+first-generation+to+next-generation+cell+types.">Translational cardiac stem cell therapy: advancing from first-generation to next-generation cell types.</a> NPJ Regenerative Medicine. 2, 17 (2017).</li><li>Bruyneel, A. A., Sehgal, A., Malandraki-Miller, S., Carr, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+Cell+Therapy+for+the+Heart:+Blind+Alley+or+Magic+Bullet?.">Stem Cell Therapy for the Heart: Blind Alley or Magic Bullet?.</a> Journal of Cardiovascular Translational Research. 9, 405-418 (2016).</li><li>Garbern, J. C., Lee, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+stem+cell+therapy+and+the+promise+of+heart+regeneration.">Cardiac stem cell therapy and the promise of heart regeneration.</a> Cell Stem Cell. 12, 689-698 (2013).</li><li>Oh, H., Ito, H., Sano, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Challenges+to+success+in+heart+failure:+Cardiac+cell+therapies+in+patients+with+heart+diseases.">Challenges to success in heart failure: Cardiac cell therapies in patients with heart diseases.</a> Journal of Cardiology. 68, 361-367 (2016).</li><li>Smith, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+resident+endogenous+c-Kit++cardiac+stem+cells+from+the+adult+mouse+and+rat+heart.">Isolation and characterization of resident endogenous c-Kit+ cardiac stem cells from the adult mouse and rat heart.</a> Nature Protocols. 9, 1662-1681 (2014).</li><li>Rutering, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+Method+for+Isolation+of+Neonatal+Rat+Cardiomyocytes+with+Increased+Yield+of+C-Kit++Cardiac+Progenitor+Cells.">Improved Method for Isolation of Neonatal Rat Cardiomyocytes with Increased Yield of C-Kit+ Cardiac Progenitor Cells.</a> Journal of Stem Cell Research and Therapy. 5, 1-8 (2015).</li><li>Saravanakumar, M., Devaraj, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distribution+and+homing+pattern+of+c-kit++Sca-1++CXCR4++resident+cardiac+stem+cells+in+neonatal,+postnatal,+and+adult+mouse+heart.">Distribution and homing pattern of c-kit+ Sca-1+ CXCR4+ resident cardiac stem cells in neonatal, postnatal, and adult mouse heart.</a> Cardiovascular Pathology. 22, 257-263 (2013).</li><li>Monsanto, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Concurrent+Isolation+of+3+Distinct+Cardiac+Stem+Cell+Populations+From+a+Single+Human+Heart+Biopsy.">Concurrent Isolation of 3 Distinct Cardiac Stem Cell Populations From a Single Human Heart Biopsy.</a> Circulation Research. 121, 113-124 (2017).</li><li>Vidyasekar, P., Shyamsunder, P., Santhakumar, R., Arun, R., Verma, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simplified+protocol+for+the+isolation+and+culture+of+cardiomyocytes+and+progenitor+cells+from+neonatal+mouse+ventricles.">A simplified protocol for the isolation and culture of cardiomyocytes and progenitor cells from neonatal mouse ventricles.</a> European Journal of Cell Biology. 94, 444-452 (2015).</li><li>Dergilev, K. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+cardiac+stem+cell+sheets+detached+by+Versene+solution+and+from+thermoresponsive+dishes+reveals+similar+properties+of+constructs.">Comparison of cardiac stem cell sheets detached by Versene solution and from thermoresponsive dishes reveals similar properties of constructs.</a> Tissue Cell. 49, 64-71 (2017).</li><li>Zaruba, M. M., Soonpaa, M., Reuter, S., Field, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiomyogenic+potential+of+C-kit(+)-expressing+cells+derived+from+neonatal+and+adult+mouse+hearts.">Cardiomyogenic potential of C-kit(+)-expressing cells derived from neonatal and adult mouse hearts.</a> Circulation. 121, 1992-2000 (1992).</li><li>Wang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+a+Sca-1+/CD31-+progenitor+cell+lineage+derived+from+mouse+heart+tissue.">Isolation and characterization of a Sca-1+/CD31- progenitor cell lineage derived from mouse heart tissue.</a> BMC Biotechnology. 14, 75 (2014).</li><li>Smits, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+cardiomyocyte+progenitor+cells+differentiate+into+functional+mature+cardiomyocytes:+an+in+vitro+model+for+studying+human+cardiac+physiology+and+pathophysiology.">Human cardiomyocyte progenitor cells differentiate into functional mature cardiomyocytes: an in vitro model for studying human cardiac physiology and pathophysiology.</a> Nature Protocols. 4, 232-243 (2009).</li></ol>

Os passos críticos do presente protocolo de isolamento do CSC são como segue. 1) uma condição esterilizada deve ser mantida para extração de corações de ratos. Qualquer contaminação durante a extração do coração pode comprometer a qualidade do CSCs. 2) o sangue deve ser completamente removido antes de a picar o coração, que é feito por várias lavagens de todo o coração e o coração peças com solução HBSS. 3) os pedaços do coração devem ser completamente lysed em uma suspensão de célula única...

Doença isquêmica do coração, incluindo infarto do miocárdio (MI), é das principais causas de morte em torno do mundo1. Terapia de células-tronco para regenerar o miocárdio morto continua a ser uma grande abordagem para melhorar a função cardíaca de um MI coração2,3,4,5. Diferentes tipos de células-tronco utilizaram para reabastecer o miocárdio morto e para melhorar a função cardíaca de um coração de MI. Eles podem ser amplamente classificados em células-tronco células-tronco embrionárias6 e adulto. Em células-tronco adultas, têm sido utilizados vários tipos de células-tronco, tais como células mononucleares de medula óssea-derivado7,8, células-tronco mesenquimais derivadas de medula óssea9,10, tecido adiposo 11,12e cordão umbilical13e CSCs14,15. Células-tronco podem promover regeneração cardíaca através do sistema endócrino e/ou parácrina ações16,17,18,19,20. No entanto, uma limitação importante da terapia de células-tronco está obtendo um número adequado de células-tronco que podem proliferar e/ou diferenciar-se em direção a uma linhagem cardíacas específicas21,22. Transplante autólogo e alogênico de células-tronco é um desafio importante na terapia de células-tronco9. CSCs poderiam ser uma melhor abordagem para regeneração cardíaca porque eles são derivados de coração e eles podem ser mais facilmente diferenciados em linhagens cardíacas do que as células-tronco não cardíaca. Assim, reduz o risco de teratoma. Além disso, os efeitos de glândula endócrina e parácrina da CSCs, tais como exosomes e miRNAs derivados os CSCs, poderiam ser mais eficazes do que outros tipos de células-tronco. Assim, CSCs continua a ser uma opção melhor para regeneração cardíaca23,24.
Embora CSCs são um candidato melhor para regeneração cardíaca em um coração MI devido a sua origem cardíaca, uma limitação principal com CSCs é menos rendimento devido à falta de um método eficiente de isolamento. Uma outra limitação pode ser a diferenciação prejudicada dos CSCs em direção cardiomyocytes lineage2,25,26,27. Para contornar essas limitações, é importante desenvolver um protocolo eficiente para CSC isolamento, caracterização e diferenciação no sentido de linhagem cardíaca. Não há nenhum marcador único aceitável para CSCs e um específico da pilha-superfície marcador de isolamento de CSCs produz menos CSCs. Aqui, podemos padronizar uma abordagem simples centrifugação gradiente para isolar CSCs partir o coração de rato que é cost-effective e resulta em um maior rendimento do CSCs. Estes CSCs isolados podem ser selecionados para marcadores de superfície celular específicos por fluorescência-ativado da pilha curto-circuito. Além do isolamento de CSCs, nós fornecemos um protocolo para CSC cultura, caracterização e diferenciação no sentido de linhagem de casos. Assim, apresentamos um método elegante para isolar, caracterizar, cultura e diferenciar CSCs de corações de rato adulto (Figura 5).

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Mice</td>
			<td>The Jackson laboratory, USA</td>
			<td>Stock no. 000664</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibodies:</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OCT4-</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab18976 (rabbit polyclonal)</td>
			<td>OCT4-Primary antibody- 1:100 dilution, Secondar antibody- 1:200 dilution, in blocking solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SOX2</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab97959 (rabbit polyclonal)</td>
			<td>SOX2-Primary antibody- 1:100 dilution, Secondar antibody- 1:200 dilution, in blocking solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nanog</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab80892 (rabbit polyclonal)</td>
			<td>Nanog-Primary antibody- 1:100 dilution, Secondar antibody- 1:200 dilution, in blocking solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ki67</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab16667 (rabbit polyclonal)</td>
			<td>Ki67-Primary antibody- 1:100 dilution, Secondar antibody- 1:200 dilution, in blocking solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sca I</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>AB4336 (rabbit polyclonal)</td>
			<td>Sca I Primary antibody- 1:100 dilution, Secondar antibody- 1:200 dilution, in blocking solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NKX2-5</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>sc-8697 (goat polyclonal)</td>
			<td>NKX2-5-Primary antibody- 1:50 dilution, Secondar antibody- 1:200 dilution, in blocking solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GATA4</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab84593 (rabbit polyclonal)</td>
			<td>GATA4-Primary antibody- 1:100 dilution, Secondar antibody- 1:200 dilution, in blocking solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEF2C</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>sc-13268 (goat polyclonal)</td>
			<td>MEF2C-Primary antibody- 1:50 dilution, Secondar antibody- 1:200 dilution, in blocking solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Troponin I</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>MAB1691 (mouse monoclonal)</td>
			<td>Troponin I-Primary antibody- 1:100 dilution, Secondar antibody- 1:200 dilution, in blocking solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Actinin</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>MAB1682 (mouse monoclonal)</td>
			<td>Actinin-Primary antibody- 1:100 dilution, Secondar antibody- 1:200 dilution, in blocking solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ANP</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>AB5490 (mouse polyclonal)</td>
			<td>ANP-Primary antibody- 1:100 dilution, Secondar antibody- 1:200 dilution, in blocking solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alex Fluor-488 checken anti-rabbit</td>
			<td>Life technology</td>
			<td>Ref no. A21441</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alex Fluor-594 goat anti-rabbit</td>
			<td>Life technology</td>
			<td>Ref no. A11012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alex Fluor-594 rabbit anti-goat</td>
			<td>Life technology</td>
			<td>Ref no. A11078</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alex Fluor-488 checken anti-mouse</td>
			<td>Life technology</td>
			<td>Ref no. A21200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alex Fluor-594 checken anti-goat</td>
			<td>Life technology</td>
			<td>Ref no. A21468</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Culture medium: </td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CSC maintenance medium</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>SCM101</td>
			<td>Note: For CSC culture, PBS or incomplete DMEM medium was used for washing the cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cardiomyocytes differentiation medium</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>SCM102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D5546</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Isolation buffer:</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>polysucrose and sodium diatrizoate solution (Histopaque1077)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>10771</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>2018-03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase I</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C0130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispase solution</td>
			<td>STEMCELL Technologies</td>
			<td>7913</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>LONZA</td>
			<td>S1226</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>StemPro Accutase Cell Dissociation Reagent</td>
			<td>Thermoscientific</td>
			<td>A1110501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Other reagents:</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A7030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal checken serum</td>
			<td>Vector laboratory</td>
			<td>S3000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI solution</td>
			<td>Applichem</td>
			<td>A100,0010</td>
			<td>Dapi, working concentration-1 &#181;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan blue</td>
			<td>Biorad</td>
			<td>145-0013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T4049</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>StemPro Accutase Cell Dissociation Reagent</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A1110501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formaldehyde</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>158127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>ACROS</td>
			<td>Cas No. 900-293-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 20</td>
			<td>Fisher Sceintific</td>
			<td>Lot No. 160170</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue culture materials:</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 mm petri dish</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-well plate</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24-well plate</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T-25 flask</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T-75 flask</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 ml conical tube</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL conical tube</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>40 &#181;m cell stainer</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22363547</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 &#181;m cell stainer</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22363549</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.22 &#181;m filter</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>09-719C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 mL syring</td>
			<td>BD</td>
			<td>Ref no. 309604</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 &#181;L, 200 &#181;L, 1000 &#181;L pipette tips</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL, 10mL, 25 mL disposible plastic pipette</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Instruments</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrufuge machine</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>LEGEND X1R centrifuge</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EVOS microscope</td>
			<td>Life technology</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automated cell counter</td>
			<td>Biorad</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell counting slide</td>
			<td>Biorad</td>
			<td>145-0011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pippte aid</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>S1 pipet filler</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Instruments:</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical scissors</td>
			<td>Fine Scientific Tool</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine surgical scissors</td>
			<td>Fine Scientific Tool</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curve shank forceps</td>
			<td>Fine Scientific Tool</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical blade</td>
			<td>Fine Scientific Tool</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation, characterization, and differentiation of cardiac stem cells from the adult mouse heart

Infarto do miocárdio (MI) é das principais causas de morbidade e mortalidade em todo o mundo. Dos principais objetivos da medicina regenerativa é reabastecer o miocárdio morto depois de MI. Embora várias estratégias têm sido usadas para regenerar o miocárdio, terapia de células-tronco permanece uma grande abordagem para reabastecer o miocárdio morto de um coração de MI. Acumular evidências sugere a presença de células-tronco cardíacas (CSCs) residentes no coração adulto e seus efeitos endócrinas e/ou parácrina sobre regeneração cardíaca. No entanto, o isolamento do CSC e sua caracterização e diferenciação para células do miocárdio, especialmente cardiomyocytes, permanece um desafio técnico. No presente estudo, nós fornecemos um método simples para o isolamento, caracterização e diferenciação do CSCs do coração de rato adulto. Aqui, descrevemos um método de gradiente de densidade para a isolação do CSCs, onde o coração é digerido por uma solução II de colagenase de 0,2%. Para caracterizar os CSCs isolados, avaliamos a expressão de marcadores de CSCs/cardíaco Sca-1, NKX2-5 e GATA4 e marcadores de pluripotência/stemness OCT4, SOX2 e Nanog. Nós também determinou o potencial de proliferação de CSCs isolados cultivo-os em um prato de Petri e avaliando a expressão do marcador de proliferação Ki-67. Para avaliar o potencial de diferenciação de CSCs, selecionamos sete a dez dias cultivada CSCs. Estamos transferindo-os para uma nova placa com meio de diferenciação de casos. Eles são incubados em um incubador de cultura celular durante 12 dias, enquanto meio de diferenciação é trocado a cada três dias. Os CSCs diferenciados expressam marcadores de casos específicos: actinin e troponina eu. Assim, CSCs isolados com este protocolo tem stemness e marcadores cardíacos, e eles têm um potencial de proliferação e diferenciação em direção a linhagem de casos.

No presente estudo, isolamos CSCs de corações de ratos machos C57BL/6J 10 a 12 semanas de idade. Aqui, apresentamos um método simples para CSC isolamento e caracterização utilizando marcadores de pluripotência. Também apresentamos um método elegante para diferenciação do CSC e a caracterização dos CSCs diferenciadas em direção a linhagem cardiomyocytes. Observamos uma morfologia de forma do eixo do CSCs 2 - a 3-dias-cultivadas sob um microscópio de contraste de fase (<stron...

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Isolation, Characterization, and Differentiation of Cardiac Stem Cells from the Adult Mouse Heart

O objetivo geral deste artigo é a padronização do protocolo para o isolamento, caracterização e diferenciação de células-tronco cardíacas (CSCs) do fundo do coração de rato adulto. Aqui, descrevemos um método de centrifugação gradiente de densidade para isolar murino CSCs e métodos elaborados para CSC cultura, proliferação e diferenciação em cardiomyocytes.

Isolamento, caracterização e diferenciação de células-tronco cardíacas do coração de rato adulto

Myocardial infarction (MI) is a leading cause of morbidity and mortality around the world. A major goal of regenerative medicine is to replenish the dead ...

O objetivo geral deste artigo é padronizar o protocolo para o isolamento, caracterização e diferenciação de células-tronco cardíacas, CSCs do Coração de Rato Adulto. Este método pode ajudar a responder a perguntas-chave, no campo das doenças cardiovasculares e terapia regional, como a terapia de células-tronco cardíacas e a insuficiência cardíaca. A principal vantagem dessa técnica é que ela é rentável, com alto auxílio em pequeno período de tempo.Inicie este experimento preparando todos os materiais, instrumentos e tampões de isolamento necessários em uma condição esterilizada, conforme descrito no protocolo. Depois de remover a pele do abdômen de um rato eutanizado, corte a caixa torácica dentro da coifa estéril para abrir a cavidade torácica. Exponha o coração e remova o sangue perto do coração usando uma seringa de um mililitro.Para remover qualquer sangue perto do coração, lave a área circundante com PBS gelado. Usando tesouras cirúrgicas e pinças para dissecar o coração, coloque-o em uma placa de Petri de 100 milímetros contendo 10 mililitros de PBS gelado. Use fórceps curvas para palpitar o coração e remover o sangue residual dentro do coração.Transfira de quatro a cinco corações isolados para uma placa petri de 100 mililitros contendo 10 mililitros de solução de sal balanceado do presunto gelado. Palpa os corações novamente para lavá-los e remover qualquer sangue residual dentro do coração. Para garantir a remoção completa do sangue, altere a solução HBSS após cada lavagem.Segure cada coração com um par de fórceps e use uma lâmina cirúrgica para cortar cada coração em pedaços de dois a quatro milímetros em uma placa de Petri de 100 milímetros, contendo cinco a sete mililitros de HBSS. Altere frequentemente a solução para garantir a remoção completa do sangue. Finalmente, pique os corações na solução HBSS.Centrifugar os corações picados colocados em um tubo cônico de 50 mililitros a 500 vezes G, a quatro graus Celsius por cinco minutos, e depois descartar o sobrenante. Adicione cinco a seis mililitros, 0,2% Solução de Colagenase II à pelota para digerir o tecido. Suspenda completamente a pelota balançando o tubo em um agitador a 75 vezes G, a 37 graus Celsius por 45 a 60 minutos.A cada 20 a 30 minutos, aperte o tubo vigorosamente à mão para melhorar a lise. Triturar a mistura de tecido lículo usando cinco mililitros pipeta sorológica, e uma ponta de pipeta de um mililitro para dissociar o nódulo tecidual na suspensão celular única. Para parar a lise enzimática do tecido, adicione duas a três vezes mais médio de manutenção CSC disponível comercialmente do que o volume do tecido líscido.Passe a suspensão celular digerida através de um coador de células de 100 micrômetros colocado em um tubo cônico de 50 mililitros para remover quaisquer pedaços de tecido não digeridos. Para separar as células à centrifugação gradiente de densidade, adicione 37 graus Celsius, pré-aquecido, polisucrose e solução de diatrizoato de sódio a um tubo cônico de 50 mililitros. Em seguida, adicione suavemente e lentamente um volume igual de filtrado sobre a solução, evitando qualquer mistura das duas soluções.É fundamental adicionar filtrado sobre polisucrose e solução de diatrizoato de sódio lentamente sem misturar inclinando o tubo a 45 graus e contra a parede do tubo. Não adicione polisucrose e solução de diatrizoato de sódio sobre filtrado. Coloque o tubo muito lentamente em uma centrífuga de balde de balanço certificando-se de não perturbar as soluções.Centrifugar a 500 vezes G por 20 minutos em temperatura ambiente fixada em uma velocidade de aceleração e desaceleração mais baixa para evitar misturar as duas soluções, e para a separação adequada das células-tronco cardíacas. É fundamental colocar a solução gradiente com muito cuidado sem perturbação na centrífuga. Colocar a aceleração e desaceleração da centrífuga deve ser de menor velocidade, como um ou zero.Use uma pipeta de um milímetro para transferir o revestimento buffy contendo os CSCs, juntamente com uma solução extra da camada superior para um tubo esterilizado de 15 mililitros. Adicione um volume igual de meio de manutenção CSC e misture-o adequadamente para neutralizar a solução de polisucrose residual e diatrizoato de sódio. Centrifugar esta suspensão a 500 vezes G por cinco minutos a quatro graus Celsius.Descarte o supernaspeso. Repita a lavagem de CSCs com solução DMEM incompleta pelo menos por duas vezes. Centrifugar a 500 vezes G por cinco minutos a quatro graus Celsius para se livrar de qualquer solução residual de polisucrose e diatrizoato de sódio.Depois de remover o supernascimento, resuspenque a pelota contendo CSCs purificados em um meio de manutenção CSC mililitro e, em seguida, conte as células. Semente os CSCs em uma placa de cultura de seis poços revestida com uma solução de gelatina de 0,02% contendo 0,5% de fibronectina, e adicione dois mililitros de meio de manutenção completa. Cresça as células a 37 graus Celsius em 5% de CO2.Quando a cultura CSC atingir a confluência, transfira as células para uma nova placa revestida de gelatina e fibronectina, conforme descrito no protocolo de texto. Cultura estes transferiram CSCs P0 em meio completo de manutenção CSC a 37 graus Celsius em uma incubadora de CO2 de 5% até confluente. Repita a transferência de células para uma nova placa para fazer CSCs P1 que podem ser usados para outros experimentos.Para manter a cultura CSC em seu estágio inicial, semeou ainda mais as células conforme descrito no protocolo de texto. Para caracterizar as células cultivadas, coloque o CSC contendo placa no objetivo de um microscópio fluorescente. Use dez vezes a ampliação para concentrar as células.Para observar as células, use abertura de contraste de fase e aumente a ampliação para 20 vezes alterando a lente objetiva e, em seguida, imagem dos CSCs. Depois de realizar a imunostaining, coloque a placa de cultura sob o microscópio de fluorescência. Concentre as células em diferentes ampliações, e observe as células sob contraste de fase e diferentes filtros de excitação, e salve as imagens.Para diferenciação celular, cresça os CSCs em uma placa de seis poços com dois mililitros de 37 graus Celsius, meio de manutenção CSC pré-aquecido. Quando as células atingirem 80 a 95% de confluência, substitua o meio de manutenção por dois mililitros, 37 graus Celsius, meio de diferenciação de cardiomiócitos pré-aquecidos. Incubar a 37 graus Celsius, em um CO2 de 5% por até duas a três semanas.Mude o meio de diferenciação a cada dois ou três dias. Durante a mudança média, observe a morfologia celular sob um microscópio para garantir as boas condições de cultura. Após 12 dias, imagem as células para marcadores de diferenciação seguindo um protocolo padrão de imunossuagem.CSCs cultivados de dois a três dias mostram uma morfologia em forma de fuso quando observada sob um microscópio de contraste de fase. Após sete dias de cultura, eles mostram uma mudança na morfologia se alongando. Depois de imunosmunficar para marcadores de pluripotência, CSCs mostram expressões de OCT4, SOX2 e Nanog.Além disso, os CSCs proliferam em meio de cultura e expressam o marcador de proliferação Ki67. Para caracterizar a origem cardíaca dos CSCs, foram examinadas expressões de marcadores cardíacos, e as células mostraram positivo para marcadores cardíacos Sca-1, NKX2.5 e GATA4. Após a culminação em meio de diferenciação de cardiomiócitos por 12 dias, CSCs diferenciados mostram expressão dos marcadores cardiomiócitos ACTININ e TROPONIN-I.Ao tentar este procedimento, é importante lembrar de não permitir a mistura da solução gradiente e do filtrado. Também é importante definir a aceleração e desaceleração em menor velocidade. Quem os contamina, é recomendável realizar todo o processo de isolamento celular dentro de um armário de biossegurança.Após esse procedimento, outros métodos como a separação baseada em contas magnéticas ou métodos de classificação celular baseadas em citomóticos de fluxo podem ser realizados para responder a perguntas adicionais, como, quão clara é a população homogênea das células-tronco cardíacas? O raio de crack em uma célula-tronco cardíaca é grande marcador, e há diferenças em relação aos cardiomiócitos. Após seu desenvolvimento, essa técnica abrirá caminho para os pesquisadores do campo de doenças cardiovasculares que muitas vezes têm alto rendimento de células-tronco cardíacas do coração do camundongo, o que pode ser importante para a terapia regenerativa na insuficiência cardíaca isquêmica.Não se esqueça que trabalhar com lâmina cirúrgica, alvejante e DMSO pode ser perigoso, e precauções como o uso de Equipamentos de Proteção pessoal, EPI, devem ser sempre tomadas durante a realização deste procedimento.

Research

JoVE Journal

Biology

Isolation of Retinal Stem Cells from the Mouse Eye

Isolamento de Células-Tronco da retina do olho do rato

The adult mouse retinal stem cell (RSC) is a rare quiescent cell found within the ciliary epithelium (CE) of the mammalian eye1,2,3. The CE is made up of ...

Biologia

Isolation and Culture of Adult Epithelial Stem Cells from Human Skin

Isolamento e Cultura de Células-Tronco Adultas epitelial da pele humana

The homeostasis of all self-renewing tissues is dependent on adult stem cells. As undifferentiated stem cells undergo asymmetric divisions, they generate ...

Isolation &#38; Characterization of Hoechstlow CD45negative Mouse Lung Mesenchymal Stem Cells

Isolation & Characterization of Hoechstlow CD45negative Mouse Lung Mesenchymal Stem Cells

Isolamento &amp; Caracterização da Hoechst Baixa CD45 Negativo Mouse Células-Tronco Mesenquimais de pulmão

Tissue resident mesenchymal stem cells (MSC) are important regulators of tissue repair or regeneration, fibrosis, inflammation, angiogenesis and tumor ...

Generation of Mice Derived from Induced Pluripotent Stem Cells

Geração de camundongos derivadas de células-tronco pluripotentes induzidas

The production of induced pluripotent stem cells (iPSCs) from somatic cells provides a means to create valuable tools for basic research and may also ...

Isolation and Culture of Individual Myofibers and their Satellite Cells from Adult Skeletal Muscle

Isolamento e Cultura de miofibras individuais e suas células satélites do músculo esquelético

Muscle  regeneration in the adult is performed by resident stem cells called satellite  cells. Satellite cells are defined by  their position between the ...

Na&iuml;ve Adult Stem Cells Isolation from Primary Human Fibroblast Cultures

NaÃƒÆ’Ã‚Â¯ve Adult Stem Cells Isolation from Primary Human Fibroblast Cultures

Naïve Adult Stem Cells isolamento de culturas primárias de fibroblastos humanos

Over the last decade, several adult stem cell  populations have been identified in human skin 1-4.  The isolation of multipotent adult dermal precursors ...

Isolation, Culture, and Functional Characterization of Adult Mouse Cardiomyoctyes

Isolamento, cultura e caracterização funcional de rato adulto Cardiomyoctyes

The use of primary cardiomyocytes (CMs) in culture has provided a powerful complement to murine models of heart disease in advancing our understanding of ...

Manual Isolation of Adipose-derived Stem Cells from Human Lipoaspirates

Isolamento manual de células-tronco adiposo-derivadas de Lipoaspirates Humanos

In 2001, researchers at the University of  California, Los Angeles, described the isolation of a new population of adult  stem cells from liposuctioned ...

Isolation and Culture of Dental Epithelial Stem Cells from the Adult Mouse Incisor

Isolamento e Cultura da Dental epiteliais células-tronco do Adulto Rato Incisivo

Understanding the cellular and molecular mechanisms that underlie tooth regeneration and renewal has become a topic of great interest1-4, and the mouse ...

Isolation of Enteric Glial Cells from the Submucosa and Lamina Propria of the Adult Mouse

Isolamento de células gliais entéricas da Submucosa e Propria do Lamina do rato adulto

The enteric nervous system (ENS) consists of neurons and enteric glial cells (EGCs) that reside within the smooth muscle wall, submucosa and lamina ...