Name: isolation, characterization, and differentiation of cardiac stem cells from the adult mouse heart
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation, Characterization, and Differentiation of Cardiac Stem Cells from the Adult Mouse Heart at JoVE.com

Este trabajo es apoyado, en parte, por las institutos nacionales de salud subvenciones HL-113281 HL116205 a Paras Kumar Mishra.

La vivienda, la anestesia y el sacrificio de ratones fueron realizadas siguiendo el protocolo IACUC aprobado de la Universidad de Nebraska Medical Center.
1. materiales
<ol><li>Negro de C57BL/6J de 10 a 12 semanas de edad uso ratones machos, mantenidos internos en las instalaciones animales institucional, para el aislamiento de las CMC. CSC también pueden ser aislado de ratones hembras no preñadas.</li>
	<li>Esterilizar todos los instrumentos quirúrgicos necesarios, incluyendo tijeras qui...

<ol>
	<li>Benjamin, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+Disease+and+Stroke+Statistics-2017+Update:+A+Report+From+the+American+Heart+Association.">Heart Disease and Stroke Statistics-2017 Update: A Report From the American Heart Association.</a> Circulation. 135, e146 (2017).</li><li>Nguyen, P. K., Rhee, J. W., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adult+Stem+Cell+Therapy+and+Heart+Failure,+2000+to+2016:+A+Systematic+Review.">Adult Stem Cell Therapy and Heart Failure, 2000 to 2016: A Systematic Review.</a> The Journal of the American Medical Association Cardiology. 1, 831-841 (2000).</li><li>Emmert, M. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Safety+and+efficacy+of+cardiopoietic+stem+cells+in+the+treatment+of+post-infarction+left-ventricular+dysfunction+-+From+cardioprotection+to+functional+repair+in+a+translational+pig+infarction+model.">Safety and efficacy of cardiopoietic stem cells in the treatment of post-infarction left-ventricular dysfunction - From cardioprotection to functional repair in a translational pig infarction model.</a> Biomaterials. 122, 48-62 (2017).</li><li>Silvestre, J. S., Menasche, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Evolution+of+the+Stem+Cell+Theory+for+Heart+Failure.">The Evolution of the Stem Cell Theory for Heart Failure.</a> EBioMedicine. 2, 1871-1879 (2015).</li><li>Terzic, A., Behfar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cell+therapy+for+heart+failure:+Ensuring+regenerative+proficiency.">Stem cell therapy for heart failure: Ensuring regenerative proficiency.</a> Trends in Cardiovascular Medicine. 26, 395-404 (2016).</li><li>Yamada, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+stem+cell+therapy+of+heart+failure+in+genetic+cardiomyopathy.">Embryonic stem cell therapy of heart failure in genetic cardiomyopathy.</a> Stem Cells. 26, 2644-2653 (2008).</li><li>Sadek, H. A., Martin, C. M., Latif, S. S., Garry, M. G., Garry, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bone-marrow-derived+side+population+cells+for+myocardial+regeneration.">Bone-marrow-derived side population cells for myocardial regeneration.</a> Journal of Cardiovascular Translational Research. 2, 173-181 (2009).</li><li>Vrtovec, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+intracoronary+CD34++stem+cell+transplantation+in+nonischemic+dilated+cardiomyopathy+patients:+5-year+follow-up.">Effects of intracoronary CD34+ stem cell transplantation in nonischemic dilated cardiomyopathy patients: 5-year follow-up.</a> Circulation Research. 112, 165-173 (2013).</li><li>Hare, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+allogeneic+vs+autologous+bone+marrow-derived+mesenchymal+stem+cells+delivered+by+transendocardial+injection+in+patients+with+ischemic+cardiomyopathy:+the+POSEIDON+randomized+trial.">Comparison of allogeneic vs autologous bone marrow-derived mesenchymal stem cells delivered by transendocardial injection in patients with ischemic cardiomyopathy: the POSEIDON randomized trial.</a> The Journal of American Medical Association. 308, 2369-2379 (2012).</li><li>Guijarro, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intramyocardial+transplantation+of+mesenchymal+stromal+cells+for+chonic+myocardial+ischemia+and+impaired+left+ventricular+function:+Results+of+the+MESAMI+1+pilot+trial.">Intramyocardial transplantation of mesenchymal stromal cells for chonic myocardial ischemia and impaired left ventricular function: Results of the MESAMI 1 pilot trial.</a> International Journal of Cardiology. 209, 258-265 (2016).</li><li>Bobi, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracoronary+Administration+of+Allogeneic+Adipose+Tissue-Derived+Mesenchymal+Stem+Cells+Improves+Myocardial+Perfusion+But+Not+Left+Ventricle+Function,+in+a+Translational+Model+of+Acute+Myocardial+Infarction.">Intracoronary Administration of Allogeneic Adipose Tissue-Derived Mesenchymal Stem Cells Improves Myocardial Perfusion But Not Left Ventricle Function, in a Translational Model of Acute Myocardial Infarction.</a> Journal of the American Heart Association. 6, (2017).</li><li>Suzuki, E., Fujita, D., Takahashi, M., Oba, S., Nishimatsu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipose+tissue-derived+stem+cells+as+a+therapeutic+tool+for+cardiovascular+disease.">Adipose tissue-derived stem cells as a therapeutic tool for cardiovascular disease.</a> World Journal of Cardiology. 7, 454-465 (2015).</li><li>Gao, L. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracoronary+infusion+of+Wharton's+jelly-derived+mesenchymal+stem+cells+in+acute+myocardial+infarction:+double-blind,+randomized+controlled+trial.">Intracoronary infusion of Wharton's jelly-derived mesenchymal stem cells in acute myocardial infarction: double-blind, randomized controlled trial.</a> BMC Medicine. 13, 162 (2015).</li><li>Simpson, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+strong+regenerative+ability+of+cardiac+stem+cells+derived+from+neonatal+hearts.">A strong regenerative ability of cardiac stem cells derived from neonatal hearts.</a> Circulation. , S46-S53 (2012).</li><li>Kazakov, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=C-kit(+)+resident+cardiac+stem+cells+improve+left+ventricular+fibrosis+in+pressure+overload.">C-kit(+) resident cardiac stem cells improve left ventricular fibrosis in pressure overload.</a> Stem Cell Research. 15, 700-711 (2015).</li><li>Ong, S. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross+talk+of+combined+gene+and+cell+therapy+in+ischemic+heart+disease:+role+of+exosomal+microRNA+transfer.">Cross talk of combined gene and cell therapy in ischemic heart disease: role of exosomal microRNA transfer.</a> Circulation. 130, S60-S69 (2014).</li><li>Sahoo, S., Losordo, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exosomes+and+cardiac+repair+after+myocardial+infarction.">Exosomes and cardiac repair after myocardial infarction.</a> Circulation Research. 114, 333-344 (2014).</li><li>Zhang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pretreatment+of+Cardiac+Stem+Cells+With+Exosomes+Derived+From+Mesenchymal+Stem+Cells+Enhances+Myocardial+Repair.">Pretreatment of Cardiac Stem Cells With Exosomes Derived From Mesenchymal Stem Cells Enhances Myocardial Repair.</a> Journal of the American Heart Association. 5, (2016).</li><li>Ibrahim, A. G., Cheng, K., Marban, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exosomes+as+critical+agents+of+cardiac+regeneration+triggered+by+cell+therapy.">Exosomes as critical agents of cardiac regeneration triggered by cell therapy.</a> Stem Cell Reports. 2, 606-619 (2014).</li><li>Emanueli, C., Shearn, A. I., Angelini, G. D., Sahoo, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exosomes+and+exosomal+miRNAs+in+cardiovascular+protection+and+repair.">Exosomes and exosomal miRNAs in cardiovascular protection and repair.</a> Vascular Pharmacology. 71, 24-30 (2015).</li><li>Menasche, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+cell+therapy:+lessons+from+clinical+trials.">Cardiac cell therapy: lessons from clinical trials.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 50, 258-265 (2011).</li><li>Trounson, A., McDonald, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+Cell+Therapies+in+Clinical+Trials:+Progress+and+Challenges.">Stem Cell Therapies in Clinical Trials: Progress and Challenges.</a> Cell Stem Cell. 17, 11-22 (2015).</li><li>Takamiya, M., Haider, K. H., Ashaf, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+characterization+of+a+novel+multipotent+sub-population+of+Sca-1(+)+cardiac+progenitor+cells+for+myocardial+regeneration.">Identification and characterization of a novel multipotent sub-population of Sca-1(+) cardiac progenitor cells for myocardial regeneration.</a> PLoS One. 6, e25265 (2011).</li><li>Cambria, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Translational+cardiac+stem+cell+therapy:+advancing+from+first-generation+to+next-generation+cell+types.">Translational cardiac stem cell therapy: advancing from first-generation to next-generation cell types.</a> NPJ Regenerative Medicine. 2, 17 (2017).</li><li>Bruyneel, A. A., Sehgal, A., Malandraki-Miller, S., Carr, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+Cell+Therapy+for+the+Heart:+Blind+Alley+or+Magic+Bullet?.">Stem Cell Therapy for the Heart: Blind Alley or Magic Bullet?.</a> Journal of Cardiovascular Translational Research. 9, 405-418 (2016).</li><li>Garbern, J. C., Lee, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+stem+cell+therapy+and+the+promise+of+heart+regeneration.">Cardiac stem cell therapy and the promise of heart regeneration.</a> Cell Stem Cell. 12, 689-698 (2013).</li><li>Oh, H., Ito, H., Sano, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Challenges+to+success+in+heart+failure:+Cardiac+cell+therapies+in+patients+with+heart+diseases.">Challenges to success in heart failure: Cardiac cell therapies in patients with heart diseases.</a> Journal of Cardiology. 68, 361-367 (2016).</li><li>Smith, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+resident+endogenous+c-Kit++cardiac+stem+cells+from+the+adult+mouse+and+rat+heart.">Isolation and characterization of resident endogenous c-Kit+ cardiac stem cells from the adult mouse and rat heart.</a> Nature Protocols. 9, 1662-1681 (2014).</li><li>Rutering, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+Method+for+Isolation+of+Neonatal+Rat+Cardiomyocytes+with+Increased+Yield+of+C-Kit++Cardiac+Progenitor+Cells.">Improved Method for Isolation of Neonatal Rat Cardiomyocytes with Increased Yield of C-Kit+ Cardiac Progenitor Cells.</a> Journal of Stem Cell Research and Therapy. 5, 1-8 (2015).</li><li>Saravanakumar, M., Devaraj, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distribution+and+homing+pattern+of+c-kit++Sca-1++CXCR4++resident+cardiac+stem+cells+in+neonatal,+postnatal,+and+adult+mouse+heart.">Distribution and homing pattern of c-kit+ Sca-1+ CXCR4+ resident cardiac stem cells in neonatal, postnatal, and adult mouse heart.</a> Cardiovascular Pathology. 22, 257-263 (2013).</li><li>Monsanto, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Concurrent+Isolation+of+3+Distinct+Cardiac+Stem+Cell+Populations+From+a+Single+Human+Heart+Biopsy.">Concurrent Isolation of 3 Distinct Cardiac Stem Cell Populations From a Single Human Heart Biopsy.</a> Circulation Research. 121, 113-124 (2017).</li><li>Vidyasekar, P., Shyamsunder, P., Santhakumar, R., Arun, R., Verma, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simplified+protocol+for+the+isolation+and+culture+of+cardiomyocytes+and+progenitor+cells+from+neonatal+mouse+ventricles.">A simplified protocol for the isolation and culture of cardiomyocytes and progenitor cells from neonatal mouse ventricles.</a> European Journal of Cell Biology. 94, 444-452 (2015).</li><li>Dergilev, K. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+cardiac+stem+cell+sheets+detached+by+Versene+solution+and+from+thermoresponsive+dishes+reveals+similar+properties+of+constructs.">Comparison of cardiac stem cell sheets detached by Versene solution and from thermoresponsive dishes reveals similar properties of constructs.</a> Tissue Cell. 49, 64-71 (2017).</li><li>Zaruba, M. M., Soonpaa, M., Reuter, S., Field, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiomyogenic+potential+of+C-kit(+)-expressing+cells+derived+from+neonatal+and+adult+mouse+hearts.">Cardiomyogenic potential of C-kit(+)-expressing cells derived from neonatal and adult mouse hearts.</a> Circulation. 121, 1992-2000 (1992).</li><li>Wang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+a+Sca-1+/CD31-+progenitor+cell+lineage+derived+from+mouse+heart+tissue.">Isolation and characterization of a Sca-1+/CD31- progenitor cell lineage derived from mouse heart tissue.</a> BMC Biotechnology. 14, 75 (2014).</li><li>Smits, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+cardiomyocyte+progenitor+cells+differentiate+into+functional+mature+cardiomyocytes:+an+in+vitro+model+for+studying+human+cardiac+physiology+and+pathophysiology.">Human cardiomyocyte progenitor cells differentiate into functional mature cardiomyocytes: an in vitro model for studying human cardiac physiology and pathophysiology.</a> Nature Protocols. 4, 232-243 (2009).</li></ol>

Los pasos críticos de este protocolo de aislamiento de CSC son las siguientes. 1) una condición esterilizada debe mantenerse para la extracción de los corazones de los ratones. Cualquier contaminación durante la extracción del corazón puede comprometer la calidad de la CSC. 2) la sangre debe eliminarse completamente antes de picar el corazón, que se realiza por varios lavados de todo corazón y el corazón pedazos con solución HBSS. 3) las piezas de corazón deben lisis totalmente en una suspensión unicelular co...

Enfermedad isquémica del corazón, incluyendo infarto de miocardio (IM), es una causa importante de muerte en el mundo1. Terapia de células madre para regenerar el miocardio muerto sigue siendo un enfoque principal para mejorar la función cardiaca de un MI corazón2,3,4,5. Se han utilizado diferentes tipos de células madre para reponer el miocardio muerto y para mejorar la función cardiaca de un corazón de MI. Pueden categorizar ampliamente en células madre embrionarias6 y adulto células de vástago. En las células madre adultas, se han utilizado varios tipos de células, como las células mononucleares de médula ósea7,8, las células madre mesenquimales derivadas de médula ósea9,10, el tejido adiposo 11,12y13de cordón umbilical y CSC14,15. Las células madre pueden promover la regeneración cardiaca, endocrina o paracrina acciones16,17,18,19,20. Sin embargo, una limitación importante de la terapia de células madre es la obtención de un número suficiente de células madre que pueden proliferar y diferenciarse hacia un linaje cardíaco específico21,22. Trasplantes autólogos y alogénicos de células madre es un reto importante en la terapia de células madre9. CSCs podrían ser un mejor enfoque para la regeneración cardiaca porque proceden del corazón y pueden ser distinguidos más fácilmente en linajes cardíacos que células no cardiacas. Por lo tanto, reduce el riesgo de teratoma. Además, los efectos endocrinos y paracrinos de CSC, como exosomas y miRNAs derivados de la CSC, podrían ser más eficaces que otros tipos de células madre. Así, las CMC sigue siendo una mejor opción para la regeneración cardiaca23,24.
Aunque CSC es un mejor candidato para la regeneración cardiaca en un corazón de MI debido a su origen cardiaco, una limitación importante con CSC es menor rendimiento debido a la falta de un método de aislamiento eficientes. Otra limitación puede ser la diferenciación deteriorada de CSCs hacia cardiomiocitos linaje2,25,26,27. Para evitar estas limitaciones, es importante desarrollar un protocolo eficiente para el aislamiento, caracterización y diferenciación hacia linaje cardíaco de CSC. No hay ningún marcador aceptable solo para CSC y un aislamiento de basado en el marcador de superficie celular específico de CSCs rinde menos CSCs. Aquí, nos estandarizar un enfoque simple centrifugación gradiente para aislar CSC desde el corazón de ratón que es rentable y da lugar a un aumento del rendimiento de CSC. Estas CSCs aislados pueden seleccionarse para marcadores de superficie celular específicos cortocircuitando celular activado por fluorescencia. Además de aislamiento de las CMC, proporcionamos un protocolo para cultura de CSC, caracterización y diferenciación hacia linaje de cardiomiocitos. Así, presentamos un elegante método para aislar, caracterizar, cultura y distinguir las CMC de corazones de ratón adulto (figura 5).

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Mice</td>
			<td>The Jackson laboratory, USA</td>
			<td>Stock no. 000664</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibodies:</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OCT4-</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab18976 (rabbit polyclonal)</td>
			<td>OCT4-Primary antibody- 1:100 dilution, Secondar antibody- 1:200 dilution, in blocking solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SOX2</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab97959 (rabbit polyclonal)</td>
			<td>SOX2-Primary antibody- 1:100 dilution, Secondar antibody- 1:200 dilution, in blocking solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nanog</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab80892 (rabbit polyclonal)</td>
			<td>Nanog-Primary antibody- 1:100 dilution, Secondar antibody- 1:200 dilution, in blocking solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ki67</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab16667 (rabbit polyclonal)</td>
			<td>Ki67-Primary antibody- 1:100 dilution, Secondar antibody- 1:200 dilution, in blocking solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sca I</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>AB4336 (rabbit polyclonal)</td>
			<td>Sca I Primary antibody- 1:100 dilution, Secondar antibody- 1:200 dilution, in blocking solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NKX2-5</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>sc-8697 (goat polyclonal)</td>
			<td>NKX2-5-Primary antibody- 1:50 dilution, Secondar antibody- 1:200 dilution, in blocking solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GATA4</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab84593 (rabbit polyclonal)</td>
			<td>GATA4-Primary antibody- 1:100 dilution, Secondar antibody- 1:200 dilution, in blocking solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEF2C</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>sc-13268 (goat polyclonal)</td>
			<td>MEF2C-Primary antibody- 1:50 dilution, Secondar antibody- 1:200 dilution, in blocking solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Troponin I</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>MAB1691 (mouse monoclonal)</td>
			<td>Troponin I-Primary antibody- 1:100 dilution, Secondar antibody- 1:200 dilution, in blocking solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Actinin</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>MAB1682 (mouse monoclonal)</td>
			<td>Actinin-Primary antibody- 1:100 dilution, Secondar antibody- 1:200 dilution, in blocking solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ANP</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>AB5490 (mouse polyclonal)</td>
			<td>ANP-Primary antibody- 1:100 dilution, Secondar antibody- 1:200 dilution, in blocking solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alex Fluor-488 checken anti-rabbit</td>
			<td>Life technology</td>
			<td>Ref no. A21441</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alex Fluor-594 goat anti-rabbit</td>
			<td>Life technology</td>
			<td>Ref no. A11012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alex Fluor-594 rabbit anti-goat</td>
			<td>Life technology</td>
			<td>Ref no. A11078</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alex Fluor-488 checken anti-mouse</td>
			<td>Life technology</td>
			<td>Ref no. A21200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alex Fluor-594 checken anti-goat</td>
			<td>Life technology</td>
			<td>Ref no. A21468</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Culture medium: </td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CSC maintenance medium</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>SCM101</td>
			<td>Note: For CSC culture, PBS or incomplete DMEM medium was used for washing the cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cardiomyocytes differentiation medium</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>SCM102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D5546</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Isolation buffer:</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>polysucrose and sodium diatrizoate solution (Histopaque1077)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>10771</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>2018-03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase I</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C0130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispase solution</td>
			<td>STEMCELL Technologies</td>
			<td>7913</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>LONZA</td>
			<td>S1226</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>StemPro Accutase Cell Dissociation Reagent</td>
			<td>Thermoscientific</td>
			<td>A1110501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Other reagents:</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A7030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal checken serum</td>
			<td>Vector laboratory</td>
			<td>S3000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI solution</td>
			<td>Applichem</td>
			<td>A100,0010</td>
			<td>Dapi, working concentration-1 &#181;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan blue</td>
			<td>Biorad</td>
			<td>145-0013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T4049</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>StemPro Accutase Cell Dissociation Reagent</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A1110501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formaldehyde</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>158127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>ACROS</td>
			<td>Cas No. 900-293-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 20</td>
			<td>Fisher Sceintific</td>
			<td>Lot No. 160170</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue culture materials:</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 mm petri dish</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-well plate</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24-well plate</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T-25 flask</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T-75 flask</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 ml conical tube</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL conical tube</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>40 &#181;m cell stainer</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22363547</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 &#181;m cell stainer</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22363549</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.22 &#181;m filter</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>09-719C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 mL syring</td>
			<td>BD</td>
			<td>Ref no. 309604</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 &#181;L, 200 &#181;L, 1000 &#181;L pipette tips</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL, 10mL, 25 mL disposible plastic pipette</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Instruments</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrufuge machine</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>LEGEND X1R centrifuge</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EVOS microscope</td>
			<td>Life technology</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automated cell counter</td>
			<td>Biorad</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell counting slide</td>
			<td>Biorad</td>
			<td>145-0011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pippte aid</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>S1 pipet filler</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Instruments:</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical scissors</td>
			<td>Fine Scientific Tool</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine surgical scissors</td>
			<td>Fine Scientific Tool</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curve shank forceps</td>
			<td>Fine Scientific Tool</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical blade</td>
			<td>Fine Scientific Tool</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation, characterization, and differentiation of cardiac stem cells from the adult mouse heart

Infarto de miocardio (IM) es una causa importante de morbilidad y mortalidad en el mundo. Una meta importante de la medicina regenerativa es reponer el miocardio muerto después de MI. Aunque se han utilizado varias estrategias para regenerar el miocardio, terapia de células madre sigue siendo un enfoque importante para reponer el miocardio muerto de un corazón de MI. La acumulación de pruebas sugiere la presencia de células cardíacas residentes (CSCs) en el corazón de adultos y sus efectos endocrinos o paracrinos en la regeneración cardiaca. Sin embargo, aislamiento de CSC y su caracterización y diferenciación hacia células del miocardio, especialmente cardiomiocitos, sigue siendo un desafío técnico. En el presente estudio, nos proporciona un método simple para el aislamiento, caracterización y diferenciación de las CMC desde el corazón de ratón adulto. Aquí, describimos un método de gradiente de densidad para aislamiento de CSC, donde se digiere el corazón por una solución de 0,2% colagenasa II. Para caracterizar las CSCs aislados, se evaluó la expresión de marcadores de CSCs cardíaca Sca-1, NKX2-5 y GATA4 y marcadores de pluripotencia/troncalidad OCT4, SOX2 y Nanog. También determinamos el potencial de proliferación de las CMC aislados por cultivo en una placa de Petri y la evaluación de la expresión del marcador de proliferación Ki-67. Para evaluar el potencial de diferenciación de las CMC, se seleccionaron siete a diez días cultivadas CSCs. Nos trasladaron a una nueva placa con un medio de diferenciación de cardiomiocitos. Se incuban en una incubadora de cultivo celular de 12 días, mientras que el medio de diferenciación se cambia cada tres días. El CSC diferenciada expresa marcadores específicos de cardiomiocitos: actinina y troponina I. Así, CSCs aislados con este protocolo tienen troncalidad y marcadores cardiacos, y tienen un potencial de proliferación y diferenciación hacia linaje de cardiomiocitos.

En el presente estudio, se aislaron las CMC de corazones de ratones machos de 10 a 12 semanas de edad C57BL/6J. Aquí, hemos presentado un método sencillo para CSC aislamiento y la caracterización usando marcadores de pluripotencia. También presentamos un método elegante para la diferenciación de la CSC y la caracterización de las CMC que diferencian hacia cardiomiocitos linaje. Se observó una morfología de forma de huso de las CMC 2 - a 3-días-cultivadas bajo un microscopio de c...

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Isolation, Characterization, and Differentiation of Cardiac Stem Cells from the Adult Mouse Heart

El objetivo general de este artículo es estandarizar el protocolo para el aislamiento, caracterización y diferenciación de células madre cardiacas (CSCs) desde el corazón de ratón adulto. Aquí, describimos un método de centrifugación del gradiente de densidad para aislar las CMC murinas y métodos elaborados por la cultura, la proliferación y la diferenciación en cardiomiocitos de CSC.

Aislamiento, caracterización y diferenciación de células cardiacas desde el corazón de ratón adulto

Myocardial infarction (MI) is a leading cause of morbidity and mortality around the world. A major goal of regenerative medicine is to replenish the dead ...

El objetivo general de este artículo, es estandarizar el protocolo para el aislamiento, caracterización y diferenciación de células madre cardíacas, CSC del corazón de ratón adulto. Este método puede ayudar a responder preguntas clave, en el campo de las enfermedades cardiovasculares y la terapia regional como, terapia con células madre cardíacas e insuficiencia cardíaca. La principal ventaja de esta técnica es que es rentable, con una alta ayuda en un pequeño período de tiempo.Comience este experimento preparando todos los materiales, instrumentos y búferes de aislamiento necesarios en una condición esterilizada como se describe en el protocolo. Después de extraer la piel del abdomen de un ratón eutanizado, corte la caja torácica dentro de la capucha estéril para abrir la cavidad torácica. Exponga el corazón y luego retire la sangre cerca del corazón con una jeringa de un mililitro.Para eliminar cualquier sangre cerca del corazón, lave el área circundante con PBS helado. Usando tijeras quirúrgicas y pinzas para diseccionar el corazón, colóquelo en un plato de Petri de 100 milímetros que contenga 10 mililitros de hielo frío PBS. Usa fórceps de vástago curvo para palpitar el corazón y eliminar la sangre residual dentro del corazón.Transfiera de cuatro a cinco corazones aislados a un plato de Petri de 100 mililitros que contenga 10 mililitros de solución de sal equilibrada de Jamón helada. Palpúpa los corazones de nuevo para lavarlos y eliminar cualquier sangre residual dentro del corazón. Para garantizar la extracción completa de la sangre, cambie la solución de HBSS después de cada lavado.Sostenga cada corazón con un par de fórceps y use una cuchilla quirúrgica para cortar cada corazón en trozos de dos a cuatro milímetros en un plato petri de 100 milímetros, que contiene de cinco a siete mililitros de HBSS. Cambie con frecuencia la solución para garantizar la extracción completa de sangre. Por último, picar los corazones en la solución HBSS.Centrifugar los corazones picados colocados en un tubo cónico de 50 mililitros a 500 veces G, a cuatro grados centígrados durante cinco minutos, y luego desechar el sobrenadante. Añadir de cinco a seis mililitros, 0,2%Solución de collagenasa II al pellet para digerir el tejido. Vuelva a suspender el pellet a fondo meciendo el tubo en una coctelera a 75 veces G, a 37 grados Celsius durante 45 a 60 minutos.Cada 20 a 30 minutos, agita el tubo vigorosamente a mano para mejorar la lisis. Triturar la mezcla de tejido de lesed utilizando cinco mililitros de pipeta serológica, y una punta de pipeta de un mililitro para disociar el bulto tisular en la suspensión de una sola célula. Para detener la lelisis enzimática del tejido, agregue de dos a tres veces más medio de mantenimiento CSC disponible comercialmente que el volumen del tejido lesed.Pasar la suspensión celular digerida a través de un colador celular de 100 micrómetros colocado en un tubo cónico de 50 mililitros para eliminar cualquier pieza de tejido no digerido. Para separar las células a la centrifugación de gradiente de densidad, agregue 37 grados Celsius, precalentado, polisurosa y diatrizoato de sodio a un tubo cónico de 50 mililitros. A continuación, añadir suavemente y lentamente un volumen igual de filtrado sobre la solución, evitando cualquier mezcla de las dos soluciones.Es fundamental añadir filtrado sobre la polisurosa y la solución de diatrizoato sódico lentamente sin mezclarlo inclinando el tubo a 45 grados y contra la pared del tubo. No agregue solución de polisurosa y diatrizoato sódico sobre filtrado. Coloque el tubo muy lentamente en una centrífuga de cubo oscilante asegurándose de no molestar las soluciones.Centrifugar a 500 veces G durante 20 minutos a temperatura ambiente fijado a una menor velocidad de aceleración y desaceleración para evitar mezclar las dos soluciones, y para la separación adecuada de las células madre cardíacas. Es fundamental poner la solución de gradiente con mucho cuidado sin perturbaciones en la centrífuga. Ponga la aceleración y desaceleración de la centrífuga debe estar a la velocidad más baja, como uno o cero.Utilice una pipeta de un milímetro para transferir la capa buffy que contiene los CSC junto con una solución adicional de la capa superior a un tubo esterilizado de 15 mililitros. Agregue un volumen igual de medio de mantenimiento CSC y mezcle adecuadamente para neutralizar la solución residual de polisurosa y diatrizoato sódico. Centrifugar esta suspensión a 500 veces G durante cinco minutos a cuatro grados centígrados.Deseche el sobrenadante. Repita el lavado de los CSC con DMEM Solution incompleto al menos dos veces. Centrifugar a 500 veces G durante cinco minutos a cuatro grados Celsius para deshacerse de cualquier solución residual de polisurosa y diatrizoato sódico.Después de retirar el sobrenadante, resuspender el pellet que contiene CSC purificado en un medio de mantenimiento CSC de mililitro, y luego contar las células. Siembra las CSC en una placa de cultivo de seis pozos recubierta con una solución de gelatina de 0,02% que contiene 0,5% de fibronectina, y añade dos mililitros de medio de mantenimiento completo. Crecer las células a 37 grados celsius en 5%CO2.Cuando el cultivo CSC alcance la confluencia, transfiera las células a una nueva placa recubierta de gelatina y fibronectina como se describe en el protocolo de texto. Cultivo estos CSC P0 transferidos en medio de mantenimiento completo CSC a 37 grados Celsius en una incubadora de 5%CO2 hasta que confluen. Repita la transferencia de celdas a una nueva placa para crear CSC P1 que se pueden utilizar para experimentos posteriores.Para mantener la referencia cultural CSC en su etapa inicial, sembrar las celdas más como se describe en el protocolo de texto. Para caracterizar las células cultivadas, coloque la placa que contiene CSC en el objetivo de un microscopio fluorescente. Utilice diez veces la ampliación para enfocar las células.Para observar las celdas, utilice la apertura de contraste de fase y aumente la ampliación a 20 veces cambiando la lente objetivo y, a continuación, imagine las CSC. Después de realizar la inmunosuchación, coloque la placa de cultivo bajo el microscopio de fluorescencia. Enfoque las células en diferentes aumentos, y observe las células bajo contraste de fase y diferentes filtros de excitación, y guarde las imágenes.Para la diferenciación celular, haga crecer los CSC en una placa de seis pozos con dos mililitros de 37 grados Celsius, medio de mantenimiento CSC precalentado. Cuando las células alcancen el 80 al 95% de confluencia, reemplace el medio de mantenimiento por dos mililitros, 37 grados Celsius, medio de diferenciación de cardiomiocitos precalientados. Incubar a 37 grados centígrados, en un 5% de CO2 durante un máximo de dos a tres semanas.Cambie el medio de diferenciación cada dos o tres días. Durante el cambio medio, observe la morfología celular bajo un microscopio para asegurar las buenas condiciones de cultivo. Después de 12 días, imagine las células para ver los marcadores de diferenciación siguiendo un protocolo de inmunomancha estándar.De dos a tres días cultivadas, las CSC cultivadas muestran una morfología en forma de husillo cuando se observan bajo un microscopio de contraste de fase. Después de siete días de cultura, muestran un cambio en la morfología que se vuelve alargada. Después de la inmunomancha para marcadores de pluripotencia, los CSC muestran expresiones de OCT4, SOX2 y Nanog.Además, las CSC proliferan en el medio de cultivo y expresan el marcador de proliferación Ki67. Para caracterizar el origen cardíaco de las CSC, se examinó la expresión de marcadores cardíacos y las células mostraron ser positivas para los marcadores cardíacos Sca-1, NKX2.5 y GATA4. Después de cultivar en medio de diferenciación de cardiomiocitos durante 12 días, las CSC diferenciadas muestran la expresión de los marcadores de cardiomiocitos ACTININ, y TROPONIN-I.Al intentar este procedimiento, es importante recordar no permitir la mezcla de la solución de gradiente y el filtrado. También es importante ajustar la aceleración y la desaceleración a la velocidad más baja. Quien los contamine, se recomienda realizar todo el proceso de aislamiento celular dentro de un gabinete de bioseguridad.Después de este procedimiento, se pueden realizar otros métodos como la separación basada en cuentas magnéticas o los métodos de clasificación de células basados en citométicos de flujo para responder preguntas adicionales como, ¿qué tan clara es la población homogénea de células madre cardíacas? El radio de grieta en una célula madre cardíaca es un marcador grande, y hay diferencias hacia los cardiomiocitos. Después de su desarrollo, esta técnica allanará el camino para los investigadores en el campo de la enfermedad cardiovascular que a menudo alto rendimiento de células madre cardíacas del corazón del ratón que podría ser importante para la terapia regenerativa en la insuficiencia cardíaca isquémica.No olvide que trabajar con cuchilla quirúrgica, lejía y DMSO puede ser peligroso, y las precauciones como el uso de equipos de protección de personal, EPI, siempre deben tomarse durante la realización de este procedimiento.

Research

JoVE Journal

Biology

Isolation of Retinal Stem Cells from the Mouse Eye

Aislamiento de células madre de la retina del ojo del ratón

The adult mouse retinal stem cell (RSC) is a rare quiescent cell found within the ciliary epithelium (CE) of the mammalian eye1,2,3. The CE is made up of ...

Investigación

Biología

Isolation and Culture of Adult Epithelial Stem Cells from Human Skin

Aislamiento y cultivo de células madre adultas epiteliales de la piel humana

The homeostasis of all self-renewing tissues is dependent on adult stem cells. As undifferentiated stem cells undergo asymmetric divisions, they generate ...

Isolation &#38; Characterization of Hoechstlow CD45negative Mouse Lung Mesenchymal Stem Cells

Isolation & Characterization of Hoechstlow CD45negative Mouse Lung Mesenchymal Stem Cells

Aislamiento y Caracterización de Hoechst Baja CD45 Negativo Mouse células madre mesenquimales de pulmón

Tissue resident mesenchymal stem cells (MSC) are important regulators of tissue repair or regeneration, fibrosis, inflammation, angiogenesis and tumor ...

Generation of Mice Derived from Induced Pluripotent Stem Cells

Generación de ratones derivados de células madre pluripotentes inducidas

The production of induced pluripotent stem cells (iPSCs) from somatic cells provides a means to create valuable tools for basic research and may also ...

Isolation and Culture of Individual Myofibers and their Satellite Cells from Adult Skeletal Muscle

Aislamiento y cultivo de fibras individuales y sus células satélite del músculo esquelético adulto

Muscle  regeneration in the adult is performed by resident stem cells called satellite  cells. Satellite cells are defined by  their position between the ...

Na&iuml;ve Adult Stem Cells Isolation from Primary Human Fibroblast Cultures

NaÃƒÆ’Ã‚Â¯ve Adult Stem Cells Isolation from Primary Human Fibroblast Cultures

Naïve Adult Stem Cells Aislamiento de Primaria cultivos de fibroblastos humanos

Over the last decade, several adult stem cell  populations have been identified in human skin 1-4.  The isolation of multipotent adult dermal precursors ...

Isolation, Culture, and Functional Characterization of Adult Mouse Cardiomyoctyes

Aislamiento, cultivo y caracterización funcional de ratón adulto Cardiomyoctyes

The use of primary cardiomyocytes (CMs) in culture has provided a powerful complement to murine models of heart disease in advancing our understanding of ...

Manual Isolation of Adipose-derived Stem Cells from Human Lipoaspirates

Aislamiento Manual de células madre derivadas de tejido adiposo de Lipoaspirates Humanos

In 2001, researchers at the University of  California, Los Angeles, described the isolation of a new population of adult  stem cells from liposuctioned ...

Isolation and Culture of Dental Epithelial Stem Cells from the Adult Mouse Incisor

Aislamiento y cultivo de células madre epiteliales dental del adulto Ratón Incisivo

Understanding the cellular and molecular mechanisms that underlie tooth regeneration and renewal has become a topic of great interest1-4, and the mouse ...

Isolation of Enteric Glial Cells from the Submucosa and Lamina Propria of the Adult Mouse

Aislamiento de las células gliales entéricas de la Submucosa y la lámina propia del ratón adulto

The enteric nervous system (ENS) consists of neurons and enteric glial cells (EGCs) that reside within the smooth muscle wall, submucosa and lamina ...