Name: isolation, characterization, and differentiation of cardiac stem cells from the adult mouse heart
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation, Characterization, and Differentiation of Cardiac Stem Cells from the Adult Mouse Heart at JoVE.com

Detta arbete stöds, i delar av National Institutes of Health bidragen HL-113281 och HL116205 att Paras Kumar Mishra.

I bostäder, anestesi och offrandet av möss utfördes efter godkänd IACUC protokollet av University of Nebraska Medical Center.
1. material
<ol><li>Använd 10 - till 12-vecka-gammal C57BL/6J svart hanmöss, hålls internt på institutionella djuranläggningen, för isolering av CSCs. CSCs kan också isoleras från icke-dräktiga honmöss.</li>
	<li>Sterilisera alla nödvändiga kirurgiska instrument, inklusive kirurgisk sax, fina kirurgiska saxar, krökt skaft pincett och en kirurgisk blad...

<ol>
	<li>Benjamin, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+Disease+and+Stroke+Statistics-2017+Update:+A+Report+From+the+American+Heart+Association.">Heart Disease and Stroke Statistics-2017 Update: A Report From the American Heart Association.</a> Circulation. 135, e146 (2017).</li><li>Nguyen, P. K., Rhee, J. W., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adult+Stem+Cell+Therapy+and+Heart+Failure,+2000+to+2016:+A+Systematic+Review.">Adult Stem Cell Therapy and Heart Failure, 2000 to 2016: A Systematic Review.</a> The Journal of the American Medical Association Cardiology. 1, 831-841 (2000).</li><li>Emmert, M. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Safety+and+efficacy+of+cardiopoietic+stem+cells+in+the+treatment+of+post-infarction+left-ventricular+dysfunction+-+From+cardioprotection+to+functional+repair+in+a+translational+pig+infarction+model.">Safety and efficacy of cardiopoietic stem cells in the treatment of post-infarction left-ventricular dysfunction - From cardioprotection to functional repair in a translational pig infarction model.</a> Biomaterials. 122, 48-62 (2017).</li><li>Silvestre, J. S., Menasche, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Evolution+of+the+Stem+Cell+Theory+for+Heart+Failure.">The Evolution of the Stem Cell Theory for Heart Failure.</a> EBioMedicine. 2, 1871-1879 (2015).</li><li>Terzic, A., Behfar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cell+therapy+for+heart+failure:+Ensuring+regenerative+proficiency.">Stem cell therapy for heart failure: Ensuring regenerative proficiency.</a> Trends in Cardiovascular Medicine. 26, 395-404 (2016).</li><li>Yamada, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+stem+cell+therapy+of+heart+failure+in+genetic+cardiomyopathy.">Embryonic stem cell therapy of heart failure in genetic cardiomyopathy.</a> Stem Cells. 26, 2644-2653 (2008).</li><li>Sadek, H. A., Martin, C. M., Latif, S. S., Garry, M. G., Garry, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bone-marrow-derived+side+population+cells+for+myocardial+regeneration.">Bone-marrow-derived side population cells for myocardial regeneration.</a> Journal of Cardiovascular Translational Research. 2, 173-181 (2009).</li><li>Vrtovec, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+intracoronary+CD34++stem+cell+transplantation+in+nonischemic+dilated+cardiomyopathy+patients:+5-year+follow-up.">Effects of intracoronary CD34+ stem cell transplantation in nonischemic dilated cardiomyopathy patients: 5-year follow-up.</a> Circulation Research. 112, 165-173 (2013).</li><li>Hare, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+allogeneic+vs+autologous+bone+marrow-derived+mesenchymal+stem+cells+delivered+by+transendocardial+injection+in+patients+with+ischemic+cardiomyopathy:+the+POSEIDON+randomized+trial.">Comparison of allogeneic vs autologous bone marrow-derived mesenchymal stem cells delivered by transendocardial injection in patients with ischemic cardiomyopathy: the POSEIDON randomized trial.</a> The Journal of American Medical Association. 308, 2369-2379 (2012).</li><li>Guijarro, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intramyocardial+transplantation+of+mesenchymal+stromal+cells+for+chonic+myocardial+ischemia+and+impaired+left+ventricular+function:+Results+of+the+MESAMI+1+pilot+trial.">Intramyocardial transplantation of mesenchymal stromal cells for chonic myocardial ischemia and impaired left ventricular function: Results of the MESAMI 1 pilot trial.</a> International Journal of Cardiology. 209, 258-265 (2016).</li><li>Bobi, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracoronary+Administration+of+Allogeneic+Adipose+Tissue-Derived+Mesenchymal+Stem+Cells+Improves+Myocardial+Perfusion+But+Not+Left+Ventricle+Function,+in+a+Translational+Model+of+Acute+Myocardial+Infarction.">Intracoronary Administration of Allogeneic Adipose Tissue-Derived Mesenchymal Stem Cells Improves Myocardial Perfusion But Not Left Ventricle Function, in a Translational Model of Acute Myocardial Infarction.</a> Journal of the American Heart Association. 6, (2017).</li><li>Suzuki, E., Fujita, D., Takahashi, M., Oba, S., Nishimatsu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipose+tissue-derived+stem+cells+as+a+therapeutic+tool+for+cardiovascular+disease.">Adipose tissue-derived stem cells as a therapeutic tool for cardiovascular disease.</a> World Journal of Cardiology. 7, 454-465 (2015).</li><li>Gao, L. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracoronary+infusion+of+Wharton's+jelly-derived+mesenchymal+stem+cells+in+acute+myocardial+infarction:+double-blind,+randomized+controlled+trial.">Intracoronary infusion of Wharton's jelly-derived mesenchymal stem cells in acute myocardial infarction: double-blind, randomized controlled trial.</a> BMC Medicine. 13, 162 (2015).</li><li>Simpson, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+strong+regenerative+ability+of+cardiac+stem+cells+derived+from+neonatal+hearts.">A strong regenerative ability of cardiac stem cells derived from neonatal hearts.</a> Circulation. , S46-S53 (2012).</li><li>Kazakov, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=C-kit(+)+resident+cardiac+stem+cells+improve+left+ventricular+fibrosis+in+pressure+overload.">C-kit(+) resident cardiac stem cells improve left ventricular fibrosis in pressure overload.</a> Stem Cell Research. 15, 700-711 (2015).</li><li>Ong, S. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross+talk+of+combined+gene+and+cell+therapy+in+ischemic+heart+disease:+role+of+exosomal+microRNA+transfer.">Cross talk of combined gene and cell therapy in ischemic heart disease: role of exosomal microRNA transfer.</a> Circulation. 130, S60-S69 (2014).</li><li>Sahoo, S., Losordo, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exosomes+and+cardiac+repair+after+myocardial+infarction.">Exosomes and cardiac repair after myocardial infarction.</a> Circulation Research. 114, 333-344 (2014).</li><li>Zhang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pretreatment+of+Cardiac+Stem+Cells+With+Exosomes+Derived+From+Mesenchymal+Stem+Cells+Enhances+Myocardial+Repair.">Pretreatment of Cardiac Stem Cells With Exosomes Derived From Mesenchymal Stem Cells Enhances Myocardial Repair.</a> Journal of the American Heart Association. 5, (2016).</li><li>Ibrahim, A. G., Cheng, K., Marban, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exosomes+as+critical+agents+of+cardiac+regeneration+triggered+by+cell+therapy.">Exosomes as critical agents of cardiac regeneration triggered by cell therapy.</a> Stem Cell Reports. 2, 606-619 (2014).</li><li>Emanueli, C., Shearn, A. I., Angelini, G. D., Sahoo, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exosomes+and+exosomal+miRNAs+in+cardiovascular+protection+and+repair.">Exosomes and exosomal miRNAs in cardiovascular protection and repair.</a> Vascular Pharmacology. 71, 24-30 (2015).</li><li>Menasche, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+cell+therapy:+lessons+from+clinical+trials.">Cardiac cell therapy: lessons from clinical trials.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 50, 258-265 (2011).</li><li>Trounson, A., McDonald, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+Cell+Therapies+in+Clinical+Trials:+Progress+and+Challenges.">Stem Cell Therapies in Clinical Trials: Progress and Challenges.</a> Cell Stem Cell. 17, 11-22 (2015).</li><li>Takamiya, M., Haider, K. H., Ashaf, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+characterization+of+a+novel+multipotent+sub-population+of+Sca-1(+)+cardiac+progenitor+cells+for+myocardial+regeneration.">Identification and characterization of a novel multipotent sub-population of Sca-1(+) cardiac progenitor cells for myocardial regeneration.</a> PLoS One. 6, e25265 (2011).</li><li>Cambria, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Translational+cardiac+stem+cell+therapy:+advancing+from+first-generation+to+next-generation+cell+types.">Translational cardiac stem cell therapy: advancing from first-generation to next-generation cell types.</a> NPJ Regenerative Medicine. 2, 17 (2017).</li><li>Bruyneel, A. A., Sehgal, A., Malandraki-Miller, S., Carr, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+Cell+Therapy+for+the+Heart:+Blind+Alley+or+Magic+Bullet?.">Stem Cell Therapy for the Heart: Blind Alley or Magic Bullet?.</a> Journal of Cardiovascular Translational Research. 9, 405-418 (2016).</li><li>Garbern, J. C., Lee, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+stem+cell+therapy+and+the+promise+of+heart+regeneration.">Cardiac stem cell therapy and the promise of heart regeneration.</a> Cell Stem Cell. 12, 689-698 (2013).</li><li>Oh, H., Ito, H., Sano, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Challenges+to+success+in+heart+failure:+Cardiac+cell+therapies+in+patients+with+heart+diseases.">Challenges to success in heart failure: Cardiac cell therapies in patients with heart diseases.</a> Journal of Cardiology. 68, 361-367 (2016).</li><li>Smith, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+resident+endogenous+c-Kit++cardiac+stem+cells+from+the+adult+mouse+and+rat+heart.">Isolation and characterization of resident endogenous c-Kit+ cardiac stem cells from the adult mouse and rat heart.</a> Nature Protocols. 9, 1662-1681 (2014).</li><li>Rutering, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+Method+for+Isolation+of+Neonatal+Rat+Cardiomyocytes+with+Increased+Yield+of+C-Kit++Cardiac+Progenitor+Cells.">Improved Method for Isolation of Neonatal Rat Cardiomyocytes with Increased Yield of C-Kit+ Cardiac Progenitor Cells.</a> Journal of Stem Cell Research and Therapy. 5, 1-8 (2015).</li><li>Saravanakumar, M., Devaraj, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distribution+and+homing+pattern+of+c-kit++Sca-1++CXCR4++resident+cardiac+stem+cells+in+neonatal,+postnatal,+and+adult+mouse+heart.">Distribution and homing pattern of c-kit+ Sca-1+ CXCR4+ resident cardiac stem cells in neonatal, postnatal, and adult mouse heart.</a> Cardiovascular Pathology. 22, 257-263 (2013).</li><li>Monsanto, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Concurrent+Isolation+of+3+Distinct+Cardiac+Stem+Cell+Populations+From+a+Single+Human+Heart+Biopsy.">Concurrent Isolation of 3 Distinct Cardiac Stem Cell Populations From a Single Human Heart Biopsy.</a> Circulation Research. 121, 113-124 (2017).</li><li>Vidyasekar, P., Shyamsunder, P., Santhakumar, R., Arun, R., Verma, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simplified+protocol+for+the+isolation+and+culture+of+cardiomyocytes+and+progenitor+cells+from+neonatal+mouse+ventricles.">A simplified protocol for the isolation and culture of cardiomyocytes and progenitor cells from neonatal mouse ventricles.</a> European Journal of Cell Biology. 94, 444-452 (2015).</li><li>Dergilev, K. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+cardiac+stem+cell+sheets+detached+by+Versene+solution+and+from+thermoresponsive+dishes+reveals+similar+properties+of+constructs.">Comparison of cardiac stem cell sheets detached by Versene solution and from thermoresponsive dishes reveals similar properties of constructs.</a> Tissue Cell. 49, 64-71 (2017).</li><li>Zaruba, M. M., Soonpaa, M., Reuter, S., Field, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiomyogenic+potential+of+C-kit(+)-expressing+cells+derived+from+neonatal+and+adult+mouse+hearts.">Cardiomyogenic potential of C-kit(+)-expressing cells derived from neonatal and adult mouse hearts.</a> Circulation. 121, 1992-2000 (1992).</li><li>Wang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+a+Sca-1+/CD31-+progenitor+cell+lineage+derived+from+mouse+heart+tissue.">Isolation and characterization of a Sca-1+/CD31- progenitor cell lineage derived from mouse heart tissue.</a> BMC Biotechnology. 14, 75 (2014).</li><li>Smits, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+cardiomyocyte+progenitor+cells+differentiate+into+functional+mature+cardiomyocytes:+an+in+vitro+model+for+studying+human+cardiac+physiology+and+pathophysiology.">Human cardiomyocyte progenitor cells differentiate into functional mature cardiomyocytes: an in vitro model for studying human cardiac physiology and pathophysiology.</a> Nature Protocols. 4, 232-243 (2009).</li></ol>

De kritiska steg i detta CSC isolering protokoll är följande. (1) en steriliserad skick måste upprätthållas för utvinning av hjärtan från mössen. All kontaminering under hjärtat utvinning kan äventyra kvaliteten i CSCs. 2) blodet måste tas bort helt före malning hjärtat, vilket görs genom flera tvättar av hela hjärtat och hjärta bitar med HBSS lösning. (3) hjärtat bitar måste vara helt lyserat till en enskild cell suspension med kollagenas lösning. (4) polysucrose och natrium diatrizoate gradient l?...

Ischemisk hjärtsjukdom, inklusive hjärtinfarkt (MI), är en viktig orsak till dödsfall runt om världen1. Stamcellsterapi för regenererande döda hjärtmuskeln förblir en viktig strategi för att förbättra hjärtfunktionen en MI hjärtat2,3,4,5. Olika typer av stamceller har använts att fylla på döda hjärtmuskeln och förbättra hjärtfunktionen i en MI-hjärta. De kan i huvudsak delas in i embryonala stamceller6 och vuxna stamceller. I vuxna stamceller, har olika typer av stamceller använts, såsom benmärg-derived mononukleära celler7,8, mesenkymala stamceller som härstammar från benmärgen9,10, fettvävnad 11,12, och navelsträngen13och CSCs14,15. Stamceller kan främja hjärt regenerering genom endokrina eller parakrin åtgärder16,17,18,19,20. En stor begränsning av stamcellsterapi är dock att få ett tillräckligt antal stamceller som kan föröka sig och differentiera mot en specifik hjärt härstamning21,22. Autologa och prövningar transplantation av stamceller är en viktig utmaning i stamceller terapi9. CSCs kan vara en bättre strategi för hjärtats förnyelse eftersom de härstammar från hjärtat och de kan skiljas lättare in i hjärt härstamningar än icke-kardiell stamceller. Det minskar därför risken för teratoma. Dessutom kunde endokrina och parakrin effekterna av CSCs, såsom exosomes och MicroRNA härrör från CSCs, vara mer effektivt än andra typer av stamceller. CSCs förblir således ett bättre alternativ för hjärtats förnyelse23,24.
Även om CSCs är en bättre kandidat för hjärtats förnyelse i ett MI hjärta på grund av deras hjärt ursprung, är en stor begränsning med CSCs mindre avkastning på grund av bristen på en effektiv isolering metod. En annan begränsning kan vara nedsatt differentiering av CSCs mot hjärtmuskelceller lineage2,25,26,27. För att kringgå dessa begränsningar, är det viktigt att utveckla en effektiv protokoll för CSC isolering, karakterisering och differentiering mot hjärt härstamning. Det finns ingen enda godtagbara markör för CSCs och en specifik cellytan markör-baserade isolering av CSCs ger mindre CSCs. Här, standardisera vi en enkel lutning centrifugering metod för att isolera CSCs från mus hjärtat som är kostnadseffektiv och resulterar i en ökad avkastning av CSCs. Dessa isolerade CSCs kan väljas för särskilda cell-yta markörer genom fluorescens-aktiverad cell kortsluter. Förutom CSCs isolering som vi ett protokoll för CSC kultur, karakterisering och differentiering mot hjärtmuskelcellen härstamning. Således presenterar vi en elegant metod för att isolera, karakterisera, kultur, och differentiera CSCs från vuxen mus hjärtan (figur 5).

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Mice</td>
			<td>The Jackson laboratory, USA</td>
			<td>Stock no. 000664</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibodies:</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OCT4-</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab18976 (rabbit polyclonal)</td>
			<td>OCT4-Primary antibody- 1:100 dilution, Secondar antibody- 1:200 dilution, in blocking solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SOX2</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab97959 (rabbit polyclonal)</td>
			<td>SOX2-Primary antibody- 1:100 dilution, Secondar antibody- 1:200 dilution, in blocking solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nanog</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab80892 (rabbit polyclonal)</td>
			<td>Nanog-Primary antibody- 1:100 dilution, Secondar antibody- 1:200 dilution, in blocking solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ki67</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab16667 (rabbit polyclonal)</td>
			<td>Ki67-Primary antibody- 1:100 dilution, Secondar antibody- 1:200 dilution, in blocking solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sca I</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>AB4336 (rabbit polyclonal)</td>
			<td>Sca I Primary antibody- 1:100 dilution, Secondar antibody- 1:200 dilution, in blocking solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NKX2-5</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>sc-8697 (goat polyclonal)</td>
			<td>NKX2-5-Primary antibody- 1:50 dilution, Secondar antibody- 1:200 dilution, in blocking solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GATA4</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab84593 (rabbit polyclonal)</td>
			<td>GATA4-Primary antibody- 1:100 dilution, Secondar antibody- 1:200 dilution, in blocking solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEF2C</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>sc-13268 (goat polyclonal)</td>
			<td>MEF2C-Primary antibody- 1:50 dilution, Secondar antibody- 1:200 dilution, in blocking solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Troponin I</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>MAB1691 (mouse monoclonal)</td>
			<td>Troponin I-Primary antibody- 1:100 dilution, Secondar antibody- 1:200 dilution, in blocking solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Actinin</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>MAB1682 (mouse monoclonal)</td>
			<td>Actinin-Primary antibody- 1:100 dilution, Secondar antibody- 1:200 dilution, in blocking solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ANP</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>AB5490 (mouse polyclonal)</td>
			<td>ANP-Primary antibody- 1:100 dilution, Secondar antibody- 1:200 dilution, in blocking solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alex Fluor-488 checken anti-rabbit</td>
			<td>Life technology</td>
			<td>Ref no. A21441</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alex Fluor-594 goat anti-rabbit</td>
			<td>Life technology</td>
			<td>Ref no. A11012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alex Fluor-594 rabbit anti-goat</td>
			<td>Life technology</td>
			<td>Ref no. A11078</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alex Fluor-488 checken anti-mouse</td>
			<td>Life technology</td>
			<td>Ref no. A21200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alex Fluor-594 checken anti-goat</td>
			<td>Life technology</td>
			<td>Ref no. A21468</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Culture medium: </td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CSC maintenance medium</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>SCM101</td>
			<td>Note: For CSC culture, PBS or incomplete DMEM medium was used for washing the cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cardiomyocytes differentiation medium</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>SCM102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D5546</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Isolation buffer:</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>polysucrose and sodium diatrizoate solution (Histopaque1077)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>10771</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>2018-03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase I</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C0130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispase solution</td>
			<td>STEMCELL Technologies</td>
			<td>7913</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>LONZA</td>
			<td>S1226</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>StemPro Accutase Cell Dissociation Reagent</td>
			<td>Thermoscientific</td>
			<td>A1110501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Other reagents:</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A7030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal checken serum</td>
			<td>Vector laboratory</td>
			<td>S3000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI solution</td>
			<td>Applichem</td>
			<td>A100,0010</td>
			<td>Dapi, working concentration-1 &#181;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan blue</td>
			<td>Biorad</td>
			<td>145-0013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T4049</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>StemPro Accutase Cell Dissociation Reagent</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A1110501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formaldehyde</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>158127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>ACROS</td>
			<td>Cas No. 900-293-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 20</td>
			<td>Fisher Sceintific</td>
			<td>Lot No. 160170</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue culture materials:</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 mm petri dish</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-well plate</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24-well plate</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T-25 flask</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T-75 flask</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 ml conical tube</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL conical tube</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>40 &#181;m cell stainer</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22363547</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 &#181;m cell stainer</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22363549</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.22 &#181;m filter</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>09-719C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 mL syring</td>
			<td>BD</td>
			<td>Ref no. 309604</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 &#181;L, 200 &#181;L, 1000 &#181;L pipette tips</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL, 10mL, 25 mL disposible plastic pipette</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Instruments</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrufuge machine</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>LEGEND X1R centrifuge</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EVOS microscope</td>
			<td>Life technology</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automated cell counter</td>
			<td>Biorad</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell counting slide</td>
			<td>Biorad</td>
			<td>145-0011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pippte aid</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>S1 pipet filler</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Instruments:</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical scissors</td>
			<td>Fine Scientific Tool</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine surgical scissors</td>
			<td>Fine Scientific Tool</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curve shank forceps</td>
			<td>Fine Scientific Tool</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical blade</td>
			<td>Fine Scientific Tool</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation, characterization, and differentiation of cardiac stem cells from the adult mouse heart

Hjärtinfarkt (MI) är en ledande orsak till sjuklighet och dödlighet runt om i världen. Ett viktigt mål för regenerativ medicin är att fylla på den döda hjärtmuskeln efter MI. Även om flera strategier har använts för att regenerera myokardiet, fortfarande stamcellsterapi en större strategi för att fylla på den döda hjärtmuskeln i en MI-hjärta. Ackumulerande bevis tyder på förekomsten av bosatta hjärt stamceller (CSCs) i vuxen hjärtat och deras endokrina eller parakrin effekter på hjärtats förnyelse. CSC isolering samt karakterisering och differentiering mot hjärtmuskelceller, särskilt hjärtmuskelceller, förblir dock en teknisk utmaning. I den aktuella studien gett vi en enkel metod för isolering, karakterisering och differentiering av CSCs från vuxen mus hjärtat. Här beskriver vi en densitet gradient metod för isolering av CSCs, där hjärtat är smälta av en 0,2% kollagenas II lösning. För att karakterisera de isolerade CSCs, utvärderade vi uttrycket av CSCs/hjärt markörer Sca-1, NKX2-5 och GATA4, och pluripotency/stemness markörer OCT4, SOX2 och Nanog. Vi har också konstaterat isolerade CSCs spridning potential genom att odla dem i en petriskål och utvärdera uttryck för spridning markören Ki-67. För att utvärdera CSCs differentiering potential, vi valt ut sju till tio - dagar odlade CSCs. Vi överfört dem till en ny platta med en hjärtmuskelcellen differentiering medium. De inkuberas i en cell kultur inkubator i 12 dagar, medan differentiering mediet byts var tredje dag. De differentierade CSCs express hjärtmuskelcellen-specifika markörer: actinin och troponin jag. Således, CSCs isolerad med detta protokoll har stemness och kardiella markörer, och de har en potential för spridning och differentiering mot hjärtmuskelcellen härstamning.

I den aktuella studien isolerade vi CSCs från 10 - till 12-vecka-gammal C57BL/6J hanmöss hjärtan. Här har vi presenterat en enkel metod för CSC isolering och karakterisering med hjälp av markörer för pluripotens. Vi presenterade också en elegant metod för CSC differentiering och karakterisering av CSCs som differentierade mot hjärtmuskelceller härstamning. Vi observerade en spindel form morfologi av 2 - till 3-dagar-odlade CSCs under ett faskontrastmikroskop (<strong class="xf...

Watch this Scientific Journal Video about Isolation, Characterization, and Differentiation of Cardiac Stem Cells from the Adult Mouse Heart at JoVE.com

Isolation, Characterization, and Differentiation of Cardiac Stem Cells from the Adult Mouse Heart

Det övergripande målet med denna artikel är att standardisera protokollet för isolering, karakterisering och differentiering av hjärt stamceller (CSCs) från vuxen mus hjärtat. Här, beskriver vi en täthet lutning centrifugering metod att isolera murina CSCs och utarbetade metoder för CSC kultur, proliferation och differentiering in hjärtmuskelcellerna.

Isolering, karakterisering och differentiering av hjärt stamceller från vuxna mus hjärtat

Myocardial infarction (MI) is a leading cause of morbidity and mortality around the world. A major goal of regenerative medicine is to replenish the dead ...

Det övergripande målet med denna artikel, är att standardisera protokollet för isolering, karakterisering, och differentiering av hjärt stamceller, CSCs från Adult Mouse Heart. Denna metod kan hjälpa till att svara på viktiga frågor, inom hjärt-kärlsjukdom och regional terapi såsom, hjärt stamcellsterapi och hjärtsvikt. Den största fördelen med denna teknik är att det är kostnadseffektivt, med höga stöd i liten tidsperiod.Starta detta experiment genom att förbereda alla nödvändiga material, instrument och isoleringsbuffertar i ett steriliserat tillstånd enligt beskrivningen i protokollet. Efter att ha tagit bort huden från buken av en avlivad mus, skär bröstkorgen inuti den sterila huven för att öppna brösthålan. Exponera hjärtat och ta sedan bort blodet nära hjärtat med hjälp av en milliliter spruta.För att avlägsna eventuellt blod nära hjärtat, tvätta det omgivande området med iskall PBS. Med hjälp av kirurgisk sax och pincett för att dissekera hjärtat, placera den i en 100 millimeter Petriskål som innehåller 10 milliliter iskall PBS. Använd böjda skaft-forceps för att palpitate hjärtat, och ta bort kvarvarande blod inuti hjärtat.Överför fyra till fem isolerade hjärtan till en petriskål på 100 milliliter som innehåller 10 milliliter iskall Skinkas balanserade saltlösning. Palpare hjärtan igen för att tvätta dem och ta bort kvarvarande blod inuti hjärtat. För att säkerställa att blodet fullständigt avlägsnas, ändra HBSS-lösningen efter varje tvätt.Håll varje hjärta med ett par tlysen och använd ett kirurgiskt blad för att skära varje hjärta i två till fyra millimeter bitar i en 100 millimeter petriskål, som innehåller fem till sju milliliter HBSS. Ofta ändra lösningen för att säkerställa fullständig blodborttagning. Slutligen, finhacka hjärtana i HBSS-lösningen.Centrifugera de malda hjärtan placeras i en 50 milliliter koniska rör på 500 gånger G, vid fyra grader Celsius i fem minuter, och sedan kasta supernatant. Tillsätt fem till sex milliliter, 0,2%Kollagenas II lösning på pelleten för att smälta vävnaden. Åter upphäva pelleten ordentligt genom att gunga röret på en shaker på 75 gånger G, vid 37 grader Celsius i 45 till 60 minuter.Varje 20 till 30 minuter, skaka röret kraftigt för hand för att förbättra lysen. Triturate den lyst vävnad mix med hjälp av fem milliliters serologiska pipetten, och en en milliliter pipett spets att dissociate vävnaden klump i den enda cell suspensionen. För att stoppa den enzymatiska lysen av vävnaden, tillsätt två till tre gånger så mycket kommersiellt tillgängliga CSC underhållsmedium som volymen av den lyserade vävnaden.För den smälta cellupphängningen genom en 100 mikrometercellsil som placeras på ett koniskt rör på 50 milliliter för att avlägsna osmält vävnadsbitar. För att separera cellerna till densitetsgradientcentrifugation, tillsätt 37 grader Celsius, förvarad, polysucrose och natriumdiatrizoatlösning till ett 50 milliliter koniskt rör. Tillsätt sedan försiktigt och långsamt en lika stor mängd filtrat över lösningen, vilket undviker blandning av de två lösningarna.Det är kritiskt att lägga filtrat över polysucaros och natriumdiatrizoatlösning långsamt utan att blanda genom att luta röret i 45 grader och mot väggen i röret. Tillsätt inte polysucrose- och natriumdiatrisoatlösning över filtrat. Placera röret mycket långsamt i en gunga hink centrifug se till att inte störa lösningarna.Centrifugera vid 500 gånger G i 20 minuter vid rumstemperatur inställd på en lägre acceleration och retardationshastighet för att undvika att blanda de två lösningarna, och för korrekt separation av hjärtstamcellerna. Det är kritiskt att sätta lutningslösningen mycket försiktigt utan störning i centrifugen. Sätt acceleration och retardation av centrifugen måste vara på lägsta hastighet, såsom en eller noll.Använd en en millimeters pipett för att överföra buffy coat som innehåller CSCs tillsammans med extra lösning från det övre lagret till en 15 milliliter steriliserad slang. Tillsätt en lika stor volym csc underhållsmedium, och blanda det ordentligt för att neutralisera den kvarvarande polysucaros och natriumdiatrizoatlösning. Centrifugera denna suspension vid 500 gånger G i fem minuter vid fyra grader Celsius.Kassera supernatanten. Upprepa tvättningen av CSCs med ofullständig DMEM Solution minst i två gånger. Centrifug vid 500 gånger G i fem minuter vid fyra grader Celsius för att bli av med någon kvarvarande polysucrose och natriumdiatrizoatlösning.Efter att du har tagit bort supernatanten, resuspend pelleten som innehåller renade CSCs i en milliliter CSC underhållsmedium, och sedan räkna cellerna. Utsäde CSCs i en sex-brunn kultur platta belagd med en 0,02%gelatin lösning som innehåller 0,5%fibronectin, och tillsätt två milliliter av komplett underhåll medium. Odla cellerna i 37 grader Celsius i 5%CO2.När CSC-kulturen når konfluency, överför cellerna till en ny gelatin och fibronectin belagda platta som beskrivs i textprotokollet. Kultur dessa överförs P0 CSCs i komplett CSC underhållsmedium vid 37 grader Celsius i en 5%CO2 inkubator tills sammanflytande. Upprepa cellöverföringen till en ny platta för att göra P1 CSCs som kan användas för ytterligare experiment.För att upprätthålla CSC-kulturen i sitt inledningsskede, sås cellerna ytterligare enligt beskrivningen i textprotokollet. För att karakterisera de odlade cellerna, placera CSC som innehåller plattan på målet för ett fluorescerande mikroskop. Använd tio gånger förstoring för att fokusera cellerna.Om du vill observera cellerna använder du bländare med faskontrast och ökar förstoringen till 20 gånger genom att ändra objektivet och sedan avbilda CSCs. Efter att ha utfört immunfärgningen, placera odlingsplattan under fluorescensmikroskopet. Fokusera cellerna i olika förstoringar, och observera cellerna under faskontrast och olika excitationsfilter, och spara bilderna.För celldifferentiering, odla CSC i en sex-brunnsplatta med två milliliter på 37 grader Celsius, förvuppverat CSC-underhållsmedium. När cellerna når 80 till 95%konfluency, ersätta underhållsmediet med två milliliter, 37 grader Celsius, förvuppvade kardiomyocyter differentiering medium. Inkubera vid 37 grader Celsius, i en 5%CO2 i upp till två till tre veckor.Ändra differentieringsmediet varannan till var tredje dag. Under mediet förändring, observera cellen morfologi under ett mikroskop för att säkerställa den goda odlingsförhållanden. Efter 12 dagar, bild cellerna för differentiering markörer efter en standard immunfärgning protokoll.Två till tre dagar odlade CSCs visar en spindel-formad morfologi när observeras under en fas-kontrast mikroskop. Efter sju dagar av kultur, visar de en förändring i morfologi blir avlånga. Efter immunfärgning för markörer av pluripotency, CSCs visa uttryck för OCT4, SOX2, och Nanog.Vidare förökar sig CSCs i odlingsmedium, och uttrycker spridningsmarkören Ki67. För att karakterisera hjärt ursprung CSCs undersöktes uttryck för hjärt markörer och cellerna visade sig vara positiva för hjärt markörer Sca-1, NKX2.5 och GATA4. Efter odling i kardiomyocyte differentiering medium för 12 dagar, differentierade CSCs visa uttryck för kardiomyocyte markörer ACTININ, och TROPONIN-I.Medan du försöker detta förfarande, Är det viktigt att komma ihåg att inte tillåta blandning av lutningslösningen och filtratet. Det är också viktigt att ställa in accelerationen och retardationen på lägsta hastighet. Den som förorenar dem, rekommenderas att utföra alla cell isolering process inuti en biosäkerhet skåp.Efter detta förfarande, andra metoder som magnetisk-bead baserad separation eller flöde cytometisk baserade cell sortering metoder kan utföras för att besvara ytterligare frågor såsom, hur tydlig är den homogena populationen av hjärt stamceller? Spricka radie i en hjärtstamcell är stora markörer, och det finns skillnader mot kardiomyocyter. Efter det utveckling, denna teknik kommer att bana väg för forskarna inom hjärt-kärlsjukdom som ofta hög avkastning av hjärt stamceller från mus hjärta som kan vara viktiga för regenerativ terapi i ischemisk hjärtsvikt.Glöm inte att det kan vara farligt att arbeta med operationssåga, blekmedel och DMSO, och försiktighetsåtgärder som att använda Personnel Protective Equipments, PPE, bör alltid vidtas när du utför denna procedur.

Research

JoVE Journal

Biology

Isolation of Retinal Stem Cells from the Mouse Eye

Isolering av näthinnan stamceller från mus Eye

The adult mouse retinal stem cell (RSC) is a rare quiescent cell found within the ciliary epithelium (CE) of the mammalian eye1,2,3. The CE is made up of ...

Isolation and Culture of Adult Epithelial Stem Cells from Human Skin

Isolering och odling av vuxna Epithelial stamceller från mänskliga Skin

The homeostasis of all self-renewing tissues is dependent on adult stem cells. As undifferentiated stem cells undergo asymmetric divisions, they generate ...

Isolation &#38; Characterization of Hoechstlow CD45negative Mouse Lung Mesenchymal Stem Cells

Isolation & Characterization of Hoechstlow CD45negative Mouse Lung Mesenchymal Stem Cells

Isolering och karakterisering av Hoechst Låg CD45 Negativa Mus Lung mesenkymala stamceller

Tissue resident mesenchymal stem cells (MSC) are important regulators of tissue repair or regeneration, fibrosis, inflammation, angiogenesis and tumor ...

Generation of Mice Derived from Induced Pluripotent Stem Cells

Generering av möss härledda från inducerade pluripotenta stamceller

The production of induced pluripotent stem cells (iPSCs) from somatic cells provides a means to create valuable tools for basic research and may also ...

Isolation and Culture of Individual Myofibers and their Satellite Cells from Adult Skeletal Muscle

Isolering och odling av individuella Myofibers och deras satellit celler från vuxna skelettmuskulatur

Muscle  regeneration in the adult is performed by resident stem cells called satellite  cells. Satellite cells are defined by  their position between the ...

Na&iuml;ve Adult Stem Cells Isolation from Primary Human Fibroblast Cultures

NaÃƒÆ’Ã‚Â¯ve Adult Stem Cells Isolation from Primary Human Fibroblast Cultures

Naiv Vuxna stamceller Isolering från primära humana fibroblastkulturer

Over the last decade, several adult stem cell  populations have been identified in human skin 1-4.  The isolation of multipotent adult dermal precursors ...

Isolation, Culture, and Functional Characterization of Adult Mouse Cardiomyoctyes

Isolering, kultur, och funktionell karakterisering av vuxen mus Cardiomyoctyes

The use of primary cardiomyocytes (CMs) in culture has provided a powerful complement to murine models of heart disease in advancing our understanding of ...

Manual Isolation of Adipose-derived Stem Cells from Human Lipoaspirates

Manuell Isolering av Fett-härledda stamceller från mänskliga Lipoaspirates

In 2001, researchers at the University of  California, Los Angeles, described the isolation of a new population of adult  stem cells from liposuctioned ...

Isolation and Culture of Dental Epithelial Stem Cells from the Adult Mouse Incisor

Isolering och kultur av Dental epitelceller stamceller från vuxen mus Incisor

Understanding the cellular and molecular mechanisms that underlie tooth regeneration and renewal has become a topic of great interest1-4, and the mouse ...

Isolation of Enteric Glial Cells from the Submucosa and Lamina Propria of the Adult Mouse

Isolering av enteriska gliaceller från Submucosa och Lamina Propria av vuxen musen

The enteric nervous system (ENS) consists of neurons and enteric glial cells (EGCs) that reside within the smooth muscle wall, submucosa and lamina ...