Name: isolation, characterization, and differentiation of cardiac stem cells from the adult mouse heart
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation, Characterization, and Differentiation of Cardiac Stem Cells from the Adult Mouse Heart at JoVE.com

Bu eser, parçalar, HL-113281 ve HL116205 Paras Kumar Mishra için Ulusal Sağlık Enstitüleri hibe tarafından desteklenir.

Konut, anestezi ve kurban farelerin Nebraska Üniversitesi Tıp Merkezi onaylı IACUC protokolüne yapıldı.
1. malzeme
<ol><li>Kullanım 10 - için 12-hafta-yaşlı C57BL/6J siyah erkek fare, kurumsal hayvan tesis, CSCs. CSCs yalıtım için şirket içinde muhafaza-ebilmek da gebe olmayan dişi fareler izole edilmesi.</li>
	<li>Cerrahi makas, iyi cerrahi makas, eğri şaftlı forseps ve cerrahi bir bıçak, ısıyla tarafından da dahil olmak üzere tüm gerekli cerrahi aletler, sterilize...

<ol>
	<li>Benjamin, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+Disease+and+Stroke+Statistics-2017+Update:+A+Report+From+the+American+Heart+Association.">Heart Disease and Stroke Statistics-2017 Update: A Report From the American Heart Association.</a> Circulation. 135, e146 (2017).</li><li>Nguyen, P. K., Rhee, J. W., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adult+Stem+Cell+Therapy+and+Heart+Failure,+2000+to+2016:+A+Systematic+Review.">Adult Stem Cell Therapy and Heart Failure, 2000 to 2016: A Systematic Review.</a> The Journal of the American Medical Association Cardiology. 1, 831-841 (2000).</li><li>Emmert, M. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Safety+and+efficacy+of+cardiopoietic+stem+cells+in+the+treatment+of+post-infarction+left-ventricular+dysfunction+-+From+cardioprotection+to+functional+repair+in+a+translational+pig+infarction+model.">Safety and efficacy of cardiopoietic stem cells in the treatment of post-infarction left-ventricular dysfunction - From cardioprotection to functional repair in a translational pig infarction model.</a> Biomaterials. 122, 48-62 (2017).</li><li>Silvestre, J. S., Menasche, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Evolution+of+the+Stem+Cell+Theory+for+Heart+Failure.">The Evolution of the Stem Cell Theory for Heart Failure.</a> EBioMedicine. 2, 1871-1879 (2015).</li><li>Terzic, A., Behfar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cell+therapy+for+heart+failure:+Ensuring+regenerative+proficiency.">Stem cell therapy for heart failure: Ensuring regenerative proficiency.</a> Trends in Cardiovascular Medicine. 26, 395-404 (2016).</li><li>Yamada, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+stem+cell+therapy+of+heart+failure+in+genetic+cardiomyopathy.">Embryonic stem cell therapy of heart failure in genetic cardiomyopathy.</a> Stem Cells. 26, 2644-2653 (2008).</li><li>Sadek, H. A., Martin, C. M., Latif, S. S., Garry, M. G., Garry, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bone-marrow-derived+side+population+cells+for+myocardial+regeneration.">Bone-marrow-derived side population cells for myocardial regeneration.</a> Journal of Cardiovascular Translational Research. 2, 173-181 (2009).</li><li>Vrtovec, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+intracoronary+CD34++stem+cell+transplantation+in+nonischemic+dilated+cardiomyopathy+patients:+5-year+follow-up.">Effects of intracoronary CD34+ stem cell transplantation in nonischemic dilated cardiomyopathy patients: 5-year follow-up.</a> Circulation Research. 112, 165-173 (2013).</li><li>Hare, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+allogeneic+vs+autologous+bone+marrow-derived+mesenchymal+stem+cells+delivered+by+transendocardial+injection+in+patients+with+ischemic+cardiomyopathy:+the+POSEIDON+randomized+trial.">Comparison of allogeneic vs autologous bone marrow-derived mesenchymal stem cells delivered by transendocardial injection in patients with ischemic cardiomyopathy: the POSEIDON randomized trial.</a> The Journal of American Medical Association. 308, 2369-2379 (2012).</li><li>Guijarro, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intramyocardial+transplantation+of+mesenchymal+stromal+cells+for+chonic+myocardial+ischemia+and+impaired+left+ventricular+function:+Results+of+the+MESAMI+1+pilot+trial.">Intramyocardial transplantation of mesenchymal stromal cells for chonic myocardial ischemia and impaired left ventricular function: Results of the MESAMI 1 pilot trial.</a> International Journal of Cardiology. 209, 258-265 (2016).</li><li>Bobi, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracoronary+Administration+of+Allogeneic+Adipose+Tissue-Derived+Mesenchymal+Stem+Cells+Improves+Myocardial+Perfusion+But+Not+Left+Ventricle+Function,+in+a+Translational+Model+of+Acute+Myocardial+Infarction.">Intracoronary Administration of Allogeneic Adipose Tissue-Derived Mesenchymal Stem Cells Improves Myocardial Perfusion But Not Left Ventricle Function, in a Translational Model of Acute Myocardial Infarction.</a> Journal of the American Heart Association. 6, (2017).</li><li>Suzuki, E., Fujita, D., Takahashi, M., Oba, S., Nishimatsu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipose+tissue-derived+stem+cells+as+a+therapeutic+tool+for+cardiovascular+disease.">Adipose tissue-derived stem cells as a therapeutic tool for cardiovascular disease.</a> World Journal of Cardiology. 7, 454-465 (2015).</li><li>Gao, L. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracoronary+infusion+of+Wharton's+jelly-derived+mesenchymal+stem+cells+in+acute+myocardial+infarction:+double-blind,+randomized+controlled+trial.">Intracoronary infusion of Wharton's jelly-derived mesenchymal stem cells in acute myocardial infarction: double-blind, randomized controlled trial.</a> BMC Medicine. 13, 162 (2015).</li><li>Simpson, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+strong+regenerative+ability+of+cardiac+stem+cells+derived+from+neonatal+hearts.">A strong regenerative ability of cardiac stem cells derived from neonatal hearts.</a> Circulation. , S46-S53 (2012).</li><li>Kazakov, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=C-kit(+)+resident+cardiac+stem+cells+improve+left+ventricular+fibrosis+in+pressure+overload.">C-kit(+) resident cardiac stem cells improve left ventricular fibrosis in pressure overload.</a> Stem Cell Research. 15, 700-711 (2015).</li><li>Ong, S. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross+talk+of+combined+gene+and+cell+therapy+in+ischemic+heart+disease:+role+of+exosomal+microRNA+transfer.">Cross talk of combined gene and cell therapy in ischemic heart disease: role of exosomal microRNA transfer.</a> Circulation. 130, S60-S69 (2014).</li><li>Sahoo, S., Losordo, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exosomes+and+cardiac+repair+after+myocardial+infarction.">Exosomes and cardiac repair after myocardial infarction.</a> Circulation Research. 114, 333-344 (2014).</li><li>Zhang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pretreatment+of+Cardiac+Stem+Cells+With+Exosomes+Derived+From+Mesenchymal+Stem+Cells+Enhances+Myocardial+Repair.">Pretreatment of Cardiac Stem Cells With Exosomes Derived From Mesenchymal Stem Cells Enhances Myocardial Repair.</a> Journal of the American Heart Association. 5, (2016).</li><li>Ibrahim, A. G., Cheng, K., Marban, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exosomes+as+critical+agents+of+cardiac+regeneration+triggered+by+cell+therapy.">Exosomes as critical agents of cardiac regeneration triggered by cell therapy.</a> Stem Cell Reports. 2, 606-619 (2014).</li><li>Emanueli, C., Shearn, A. I., Angelini, G. D., Sahoo, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exosomes+and+exosomal+miRNAs+in+cardiovascular+protection+and+repair.">Exosomes and exosomal miRNAs in cardiovascular protection and repair.</a> Vascular Pharmacology. 71, 24-30 (2015).</li><li>Menasche, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+cell+therapy:+lessons+from+clinical+trials.">Cardiac cell therapy: lessons from clinical trials.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 50, 258-265 (2011).</li><li>Trounson, A., McDonald, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+Cell+Therapies+in+Clinical+Trials:+Progress+and+Challenges.">Stem Cell Therapies in Clinical Trials: Progress and Challenges.</a> Cell Stem Cell. 17, 11-22 (2015).</li><li>Takamiya, M., Haider, K. H., Ashaf, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+characterization+of+a+novel+multipotent+sub-population+of+Sca-1(+)+cardiac+progenitor+cells+for+myocardial+regeneration.">Identification and characterization of a novel multipotent sub-population of Sca-1(+) cardiac progenitor cells for myocardial regeneration.</a> PLoS One. 6, e25265 (2011).</li><li>Cambria, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Translational+cardiac+stem+cell+therapy:+advancing+from+first-generation+to+next-generation+cell+types.">Translational cardiac stem cell therapy: advancing from first-generation to next-generation cell types.</a> NPJ Regenerative Medicine. 2, 17 (2017).</li><li>Bruyneel, A. A., Sehgal, A., Malandraki-Miller, S., Carr, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+Cell+Therapy+for+the+Heart:+Blind+Alley+or+Magic+Bullet?.">Stem Cell Therapy for the Heart: Blind Alley or Magic Bullet?.</a> Journal of Cardiovascular Translational Research. 9, 405-418 (2016).</li><li>Garbern, J. C., Lee, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+stem+cell+therapy+and+the+promise+of+heart+regeneration.">Cardiac stem cell therapy and the promise of heart regeneration.</a> Cell Stem Cell. 12, 689-698 (2013).</li><li>Oh, H., Ito, H., Sano, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Challenges+to+success+in+heart+failure:+Cardiac+cell+therapies+in+patients+with+heart+diseases.">Challenges to success in heart failure: Cardiac cell therapies in patients with heart diseases.</a> Journal of Cardiology. 68, 361-367 (2016).</li><li>Smith, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+resident+endogenous+c-Kit++cardiac+stem+cells+from+the+adult+mouse+and+rat+heart.">Isolation and characterization of resident endogenous c-Kit+ cardiac stem cells from the adult mouse and rat heart.</a> Nature Protocols. 9, 1662-1681 (2014).</li><li>Rutering, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+Method+for+Isolation+of+Neonatal+Rat+Cardiomyocytes+with+Increased+Yield+of+C-Kit++Cardiac+Progenitor+Cells.">Improved Method for Isolation of Neonatal Rat Cardiomyocytes with Increased Yield of C-Kit+ Cardiac Progenitor Cells.</a> Journal of Stem Cell Research and Therapy. 5, 1-8 (2015).</li><li>Saravanakumar, M., Devaraj, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distribution+and+homing+pattern+of+c-kit++Sca-1++CXCR4++resident+cardiac+stem+cells+in+neonatal,+postnatal,+and+adult+mouse+heart.">Distribution and homing pattern of c-kit+ Sca-1+ CXCR4+ resident cardiac stem cells in neonatal, postnatal, and adult mouse heart.</a> Cardiovascular Pathology. 22, 257-263 (2013).</li><li>Monsanto, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Concurrent+Isolation+of+3+Distinct+Cardiac+Stem+Cell+Populations+From+a+Single+Human+Heart+Biopsy.">Concurrent Isolation of 3 Distinct Cardiac Stem Cell Populations From a Single Human Heart Biopsy.</a> Circulation Research. 121, 113-124 (2017).</li><li>Vidyasekar, P., Shyamsunder, P., Santhakumar, R., Arun, R., Verma, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simplified+protocol+for+the+isolation+and+culture+of+cardiomyocytes+and+progenitor+cells+from+neonatal+mouse+ventricles.">A simplified protocol for the isolation and culture of cardiomyocytes and progenitor cells from neonatal mouse ventricles.</a> European Journal of Cell Biology. 94, 444-452 (2015).</li><li>Dergilev, K. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+cardiac+stem+cell+sheets+detached+by+Versene+solution+and+from+thermoresponsive+dishes+reveals+similar+properties+of+constructs.">Comparison of cardiac stem cell sheets detached by Versene solution and from thermoresponsive dishes reveals similar properties of constructs.</a> Tissue Cell. 49, 64-71 (2017).</li><li>Zaruba, M. M., Soonpaa, M., Reuter, S., Field, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiomyogenic+potential+of+C-kit(+)-expressing+cells+derived+from+neonatal+and+adult+mouse+hearts.">Cardiomyogenic potential of C-kit(+)-expressing cells derived from neonatal and adult mouse hearts.</a> Circulation. 121, 1992-2000 (1992).</li><li>Wang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+a+Sca-1+/CD31-+progenitor+cell+lineage+derived+from+mouse+heart+tissue.">Isolation and characterization of a Sca-1+/CD31- progenitor cell lineage derived from mouse heart tissue.</a> BMC Biotechnology. 14, 75 (2014).</li><li>Smits, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+cardiomyocyte+progenitor+cells+differentiate+into+functional+mature+cardiomyocytes:+an+in+vitro+model+for+studying+human+cardiac+physiology+and+pathophysiology.">Human cardiomyocyte progenitor cells differentiate into functional mature cardiomyocytes: an in vitro model for studying human cardiac physiology and pathophysiology.</a> Nature Protocols. 4, 232-243 (2009).</li></ol>

Bu CSC yalıtım protokol kritik adımları aşağıdaki gibidir. 1) steril bir koşul fareler kalplerin çıkarılması için muhafaza edilmelidir. Kalp ayıklama sırasında herhangi bir kirlenme CSCs. 2 kalitesini bozabilir) kan tamamen birkaç yıkar bütün kalp ve kalp tarafından HBSS çözüm taşlarla yapılır kalp kıyma önce kaldırılmalıdır. 3) kalp parçaları tamamen içine bir tek hücre süspansiyon collagenase çözüm ile lysed gerekir. 4) polysucrose ve sodyum diatrizoate degrade çözüm hücrele...

İskemik kalp hastalığı, akut miyokard infarktüsü (mı), dahil olmak üzere ölüm1dünya çapında önemli bir nedenidir. Ölü Miyokardiyum Yenileyici için kök hücre tedavisi bir mı kalp2,3,4,5kardiyak fonksiyon geliştirmek için önemli bir yaklaşım kalır. Kök hücrelerin farklı türleri ölü Miyokardiyum doldurmak için ve bir MI kalp kardiyak fonksiyon geliştirmek için kullanılmıştır. Embriyonik kök hücre6 ve yetişkin kök hücre genel olarak sınıflandırılabilir. Yetişkin kök hücre, kök hücre türleri, mononükleer hücreler kemik iliği elde edilen7,8, kemik iliği9dan,10, yağ dokusu elde edilen mezenkimal kök hücre gibi kullanılmıştır 11,12ve göbek kordonu13ve CSCs14,15. Kök hücre den endokrin ve/veya parakrin eylemler16,17,18,19,20kardiyak rejenerasyon yükseltebilirsiniz. Ancak, kök hücre tedavisi büyük bir sınırlama çoğalırlar ve/veya doğru belirli kardiyak lineage21,22ayırt kök hücreleri yeterli sayıda almaktır. Otolog ve allojenik kök hücre nakli kök hücre tedavisi9önemli bir sorundur. CSCs onlar yürekten türetilmiştir ve onlar daha kolay kalp soy kalp kök hücreler farklı çünkü kardiyak rejenerasyon için daha iyi bir yaklaşım olabilir. Böylece, teratoma riskini azaltır. Buna ek olarak, CSCs, endokrin ve parakrin etkileri exosomes ve CSCs türetilmiş miRNAs gibi daha kök hücreler diğer tür daha etkili olabilir. Böylece, CSCs kardiyak rejenerasyon23,24için daha iyi bir seçenek kalır.
CSCs MI kalp kalp kökenlerine nedeniyle kardiyak rejenerasyon için daha iyi bir aday olmakla birlikte, önemli bir sınırlama CSCs ile daha az verimli yalıtım yöntemini eksikliği nedeniyle verimidir. Başka bir sınırlama CSCs Engelli farklılaşma cardiomyocytes lineage2,25,26,27doğru olabilir. Bu sınırlamaları aşmak için CSC yalıtım, karakterizasyonu ve farklılaşma kardiyak lineage doğru için verimli bir iletişim kuralı geliştirmek önemlidir. CSCs yok tek kabul edilebilir işaretçisi ve bir belirli hücre yüzeyine marker tabanlı yalıtım CSCs, daha az CSCs verim. Burada, düşük maliyetli ve CSCs artan bir verim içinde sonuç fare kalp CSCs yalıtmak için bir basit degrade Santrifüjü yaklaşım standartlaştırmak. Bu izole CSCs floresans aktif hücre kısa devre tarafından belirli hücre yüzeyine işaretler için seçilebilir. CSCs yalıtım ek olarak, biz CSC kültür, karakterizasyonu ve farklılaşma doğru cardiomyocyte lineage için bir protokol sağladı. Böylece, biz izole, karakterize, kültür ve CSCs yetişkin fare kalpler (Şekil 5) ayırt etmek için zarif bir yöntem mevcut.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Mice</td>
			<td>The Jackson laboratory, USA</td>
			<td>Stock no. 000664</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibodies:</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OCT4-</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab18976 (rabbit polyclonal)</td>
			<td>OCT4-Primary antibody- 1:100 dilution, Secondar antibody- 1:200 dilution, in blocking solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SOX2</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab97959 (rabbit polyclonal)</td>
			<td>SOX2-Primary antibody- 1:100 dilution, Secondar antibody- 1:200 dilution, in blocking solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nanog</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab80892 (rabbit polyclonal)</td>
			<td>Nanog-Primary antibody- 1:100 dilution, Secondar antibody- 1:200 dilution, in blocking solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ki67</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab16667 (rabbit polyclonal)</td>
			<td>Ki67-Primary antibody- 1:100 dilution, Secondar antibody- 1:200 dilution, in blocking solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sca I</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>AB4336 (rabbit polyclonal)</td>
			<td>Sca I Primary antibody- 1:100 dilution, Secondar antibody- 1:200 dilution, in blocking solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NKX2-5</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>sc-8697 (goat polyclonal)</td>
			<td>NKX2-5-Primary antibody- 1:50 dilution, Secondar antibody- 1:200 dilution, in blocking solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GATA4</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab84593 (rabbit polyclonal)</td>
			<td>GATA4-Primary antibody- 1:100 dilution, Secondar antibody- 1:200 dilution, in blocking solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEF2C</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>sc-13268 (goat polyclonal)</td>
			<td>MEF2C-Primary antibody- 1:50 dilution, Secondar antibody- 1:200 dilution, in blocking solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Troponin I</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>MAB1691 (mouse monoclonal)</td>
			<td>Troponin I-Primary antibody- 1:100 dilution, Secondar antibody- 1:200 dilution, in blocking solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Actinin</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>MAB1682 (mouse monoclonal)</td>
			<td>Actinin-Primary antibody- 1:100 dilution, Secondar antibody- 1:200 dilution, in blocking solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ANP</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>AB5490 (mouse polyclonal)</td>
			<td>ANP-Primary antibody- 1:100 dilution, Secondar antibody- 1:200 dilution, in blocking solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alex Fluor-488 checken anti-rabbit</td>
			<td>Life technology</td>
			<td>Ref no. A21441</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alex Fluor-594 goat anti-rabbit</td>
			<td>Life technology</td>
			<td>Ref no. A11012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alex Fluor-594 rabbit anti-goat</td>
			<td>Life technology</td>
			<td>Ref no. A11078</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alex Fluor-488 checken anti-mouse</td>
			<td>Life technology</td>
			<td>Ref no. A21200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alex Fluor-594 checken anti-goat</td>
			<td>Life technology</td>
			<td>Ref no. A21468</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Culture medium: </td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CSC maintenance medium</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>SCM101</td>
			<td>Note: For CSC culture, PBS or incomplete DMEM medium was used for washing the cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cardiomyocytes differentiation medium</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>SCM102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D5546</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Isolation buffer:</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>polysucrose and sodium diatrizoate solution (Histopaque1077)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>10771</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>2018-03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase I</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C0130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispase solution</td>
			<td>STEMCELL Technologies</td>
			<td>7913</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>LONZA</td>
			<td>S1226</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>StemPro Accutase Cell Dissociation Reagent</td>
			<td>Thermoscientific</td>
			<td>A1110501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Other reagents:</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A7030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal checken serum</td>
			<td>Vector laboratory</td>
			<td>S3000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI solution</td>
			<td>Applichem</td>
			<td>A100,0010</td>
			<td>Dapi, working concentration-1 &#181;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan blue</td>
			<td>Biorad</td>
			<td>145-0013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T4049</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>StemPro Accutase Cell Dissociation Reagent</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A1110501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formaldehyde</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>158127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>ACROS</td>
			<td>Cas No. 900-293-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 20</td>
			<td>Fisher Sceintific</td>
			<td>Lot No. 160170</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue culture materials:</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 mm petri dish</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-well plate</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24-well plate</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T-25 flask</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T-75 flask</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 ml conical tube</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL conical tube</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>40 &#181;m cell stainer</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22363547</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 &#181;m cell stainer</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22363549</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.22 &#181;m filter</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>09-719C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 mL syring</td>
			<td>BD</td>
			<td>Ref no. 309604</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 &#181;L, 200 &#181;L, 1000 &#181;L pipette tips</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL, 10mL, 25 mL disposible plastic pipette</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Instruments</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrufuge machine</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>LEGEND X1R centrifuge</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EVOS microscope</td>
			<td>Life technology</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automated cell counter</td>
			<td>Biorad</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell counting slide</td>
			<td>Biorad</td>
			<td>145-0011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pippte aid</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>S1 pipet filler</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Instruments:</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical scissors</td>
			<td>Fine Scientific Tool</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine surgical scissors</td>
			<td>Fine Scientific Tool</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curve shank forceps</td>
			<td>Fine Scientific Tool</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical blade</td>
			<td>Fine Scientific Tool</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation, characterization, and differentiation of cardiac stem cells from the adult mouse heart

Akut miyokard infarktüsü (mı) morbidite ve mortalite dünya çapında önde gelen nedenidir. Rejeneratif tıp ana amacı ölü Miyokardiyum MI sonra doldurmak etmektir. Her ne kadar çeşitli stratejiler Miyokardiyum yeniden oluşturmak için kullanılan, kök hücre tedavisi MI kalp ölü Miyokardiyum doldurmak için büyük bir yaklaşım kalır. Kanıt biriken yetişkin kalp ve kalp rejenerasyon endokrin ve/veya parakrin etkileri ikamet kardiyak kök hücreleri (CSCs) varlığını göstermektedir. Ancak, CSC yalıtım ve karakterizasyonu ve farklılaşma miyokard hücreleri, özellikle cardiomyocytes, doğru bir teknik sorun kalır. Bu da çalışmanın, yalıtım, karakterizasyonu ve CSCs farklılaşma yetişkin fare kalp için basit bir yöntem sağladı. Burada, CSCs nerede kalp % 0,2 collagenase II çözüm tarafından sindirilmiş, yalıtım için bir yoğunluk degrade yöntemi açıklanmaktadır. İzole CSCs ayırdetmek için CSCs/kalp işaretleri Sca-1, NKX2-5 ve GATA4 ve pluripotency/stemness işaretleri OCT4, SOX2 ve MicroRNAs ifadesi değerlendirilir. Biz de onları bir kabında kültür ve nükleer silahların yayılmasına karşı işaret Ki-67 ifade değerlendirirken izole CSCs yayılması potansiyelini belirledi. CSCs farklılaşma potansiyeli değerlendirmek için biz yedi - on - gün kültürlü CSCs seçildi. Biz onları cardiomyocyte farklılaşma orta ile yeni bir tabak transfer. Farklılaşma Orta üç günde değişti iken onlar 12 gün boyunca bir hücre kültür kuluçka makinesine inkübe. Cardiomyocyte özel işaretleri farklılaştırılmış CSCs hızlı: Aktinin ve troponin ı. Böylece, stemness ve kardiyak Marker CSCs bu iletişim kuralı ile izole var ve onlar için yayılma ve farklılaşma doğru cardiomyocyte lineage bir potansiyele sahip.

Bu da çalışmanın, CSCs 10 - için 12-hafta-yaşlı C57BL/6J erkek fareler kalpler izole. Burada, biz CSC yalıtım ve pluripotency işaretçileri kullanarak karakterizasyonu için basit bir yöntem sundu. Biz de CSC farklılaşma için zarif bir yöntemi ve cardiomyocytes lineage doğru Ayrıştırılan CSCs karakterizasyonu sundu. Biz 2 için 3-gün-kültürlü CSCs (Şekil 1A ve 1B) faz kontrast mikroskop altında bir Milli şekil morfo...

Watch this Scientific Journal Video about Isolation, Characterization, and Differentiation of Cardiac Stem Cells from the Adult Mouse Heart at JoVE.com

Isolation, Characterization, and Differentiation of Cardiac Stem Cells from the Adult Mouse Heart

Bu makalede genel izolasyon, karakterizasyonu ve kardiyak kök hücreleri (CSCs) Yetişkin fare kalp farklılaşma için protokolü standartlaştırmak için hedeftir. Burada, fare CSCs yalıtmak için bir yoğunluk degrade Santrifüjü yöntemi ve CSC kültür, yayılmasını önleme ve farklılaşma cardiomyocytes içine hazırlanmış yöntemlerini açıklar.

Yalıtım, karakterizasyonu ve yetişkin fare kalp kalp kök hücre farklılaşma

Myocardial infarction (MI) is a leading cause of morbidity and mortality around the world. A major goal of regenerative medicine is to replenish the dead ...

Bu makalenin genel amacı, kalp kök hücrelerinin, CSC'lerin Yetişkin Fare Kalbi'nden izolasyon, karakterizasyon ve farklılaşması için protokolü standartlaştırmaktır. Bu yöntem, kardiyovasküler hastalık ve bölgesel tedavi alanında, kardiyak kök hücre tedavisi ve kalp yetmezliği gibi önemli soruların cevaplanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin en büyük avantajı, küçük bir süre içinde yüksek yardım ile, maliyet etkin olmasıdır.Protokolde açıklandığı gibi gerekli tüm malzemeleri, aletleri ve izolasyon tamponlarını sterilize edilmiş bir durumda hazırlayarak bu deneye başlayın. Ötenazi li bir farenin karnından deri çıkardıktan sonra, göğüs boşluğu açmak için steril başlık içinde göğüs kafesi kesti. Kalbi açığa çıkarın ve sonra bir mililitreşon şırınga kullanarak kalbin yakınındaki kanı çıkarın.Kalp yakınındaki herhangi bir kan kaldırmak için, buz gibi PBS ile çevredeki alanı yıkayın. Kalbi incelemek için cerrahi makas ve cımbız kullanarak, 10 mililitre buz gibi PBS içeren 100 milimetrelik Petri kabına yerleştirin. Kalbi palpitate için kavisli sap forseps kullanın, ve kalp içinde kalan kan kaldırmak.10 mililitre buz gibi soğuk Ham'ın Dengeli Tuz Çözeltisi içeren 100 mililitrelik Petri kabına 4-5 izole kalp aktarın. Onları yıkamak ve kalp içinde kalan kan kaldırmak için tekrar kalpleri palpate. Kanın tamamen çıkarılmasını sağlamak için, her yıkamadan sonra HBSS çözeltisini değiştirin.Her kalbi bir çift forceps ile tutun ve her kalbi 100 milimetrelik Petri kabında iki ila dört milimetrelik parçalara kesmek için bir cerrahi bıçak kullanın, beş ila yedi mililitre HBSS içeren. Sık sık tam kan alma sağlamak için çözüm değiştirin. Son olarak, HBSS çözümünde kalpleri kıyma.500 kez G'de 50 mililitrelik konik bir tüpe yerleştirilen kıyılmış kalpleri beş dakika boyunca dört santigrat derecede santrifüj edin ve sonra süpernatantı atın. Doku sindirmek için pelet beş ila altı mililitre, 0.2% Kollajenaz II çözeltisi ekleyin. 45 ila 60 dakika boyunca 37 santigrat derece, 75 kez G bir shaker üzerinde tüp sallayarak iyice pelet yeniden askıya.Her 20-30 dakikada bir, lysis geliştirmek için elle şiddetle tüp sallayın. Beş mililitre serolojik pipet ve tek hücreli süspansiyon içine doku yumru ayırmak için bir mililitre pipet ucu kullanarak lysed doku karışımı triturate. Dokunun enzimatik lysis durdurmak için, iki ila üç kat daha fazla ticari csc bakım ortamı lysed doku hacmi olarak ekleyin.Sindirilmemiş doku parçalarını çıkarmak için 50 mililitrelik konik bir tüpe yerleştirilen 100 mikrometrelik hücresüzden sindirilmiş hücre süspansiyonu geçirin. Yoğunluk gradyan santrifüj hücreleri ayırmak için, 50 mililitrekonik tüp için 37 derece santigrat, önceden ısıtılmış, poliskopoz ve sodyum diarizoat çözeltisi ekleyin. Daha sonra yavaşça ve yavaşça çözelti üzerinde eşit hacimli filtrat ekleyin, iki çözeltinin herhangi bir karışımını önleyerek.Bu 45 derece ve tüp duvarına doğru tüp tilting tarafından karıştırma olmadan yavaş yavaş poliskroz ve sodyum diatrizoat çözeltisi üzerinde filtrat eklemek için önemlidir. Filtrat üzerine polikroz ve sodyum diarizoat çözeltisi eklemeyin. Tüpü çok yavaş bir salıncak kovasantrisine yerleştirin ve çözeltileri rahatsız etmemeye özen gösteriyor.İki çözeltinin karıştırılmasını önlemek ve kardiyak kök hücrelerin düzgün bir şekilde ayrılmasını önlemek için oda sıcaklığında 20 dakika boyunca 500 kez G'de santrifüj edin. Degrade çözeltisini santrifüjde rahatsızlık olmadan çok dikkatli bir şekilde koymak çok önemlidir. Santrifüjün ivmeve yavaşlamasını bir veya sıfır gibi en düşük hızda koyun.CSC'leri içeren buffy coat'u üst tabakadan 15 mililitrelik sterilize edilmiş bir tüpe ekstra solüsyonla birlikte aktarmak için bir milimetrelik pipet kullanın. Eşit hacimli CSC bakım ortamı ekleyin ve artık polisukroz ve sodyum diarizoat çözeltisini nötralize etmek için düzgün bir şekilde karıştırın. Bu süspansiyonu 500 kez G'de dört santigrat derecede beş dakika santrifüj edin.Supernatant atın. CSC'lerin eksik DMEM Solüsyonu ile yıkanması en az iki kez tekrarlayın. Herhangi bir kalıntı polisukroz ve sodyum diarizoat çözeltisi kurtulmak için dört santigrat derece beş dakika için 500 kez G santrifüj.Supernatant çıkardıktan sonra, bir mililitre CSC bakım ortamı saflaştırılmış CSCiçeren pelet resuspend ve sonra hücreleri saymak. Tohum CSCs altı iyi kültür plaka 0.02% 0.5 fibronektin içeren jelatin çözeltisi ile kaplı ve tam bakım ortamı iki mililitre ekleyin. Hücreleri %5 CO2'de 37 derecede büyütün.CSC kültürü biraraya geldiğinde, metin protokolünde açıklandığı gibi hücreleri yeni bir jelatin ve fibronektin kaplı plakaya aktarın. Kültür bu konfluent kadar% 5 CO2 inkübatör 37 santigrat derece tam CSC bakım ortamı P0 CSCs transfer. Daha fazla deney için kullanılabilecek P1 CSC'leri yapmak için hücre transferini yeni bir plakaya tekrarlayın.CSC kültürünü ilk aşamasında korumak için, hücreleri metin protokolünde açıklandığı şekilde daha fazla tohumlayın. Kültürlü hücreleri karakterize etmek için, bir floresan mikroskop amacı plaka içeren CSC yerleştirin. Hücreleri odaklamak için on kat büyütme kullanın.Hücreleri gözlemlemek için faz kontrastlı diyafram açıklığını kullanın ve objektif lensi değiştirerek büyütmeyi 20 katına yükseltin ve csc'leri görüntüleyin. İmmünoboyama yapıldıktan sonra, floresan mikroskobun altına kültür plakasını yerleştirin. Hücreleri farklı büyütmelere odakla ve faz kontrastı ve farklı uyarma filtreleri altındaki hücreleri gözlemleyin ve görüntüleri kaydedin.Hücre farklılaşması için, CSC'leri 37 santigrat derece, önceden ısıtılmış CSC bakım ortamı na sahip altı kuyulu bir tabakta büyütün. Hücreler %80 ila %95 biraraya geldiğinde, bakım ortamını iki mililitre, 37 santigrat derece, önceden ısıtılmış kardiyomiyosit farklılaşma ortamıyla değiştirin. 37 santigrat derecede kuluçka, 2-3 hafta kadar %5 CO2 ile.Her 2-3 günde bir farklılaşma ortamını değiştirin. Orta değişim sırasında, iyi kültür koşulları sağlamak için bir mikroskop altında hücre morfolojisi gözlemleyin. 12 gün sonra, standart bir immünboyama protokolü ne göre farklılaşma belirteçleri için hücreleri görüntüleyin.İki ila üç gün kültürlü CSCs bir faz kontrast mikroskop altında gözlendiğinde bir mil şeklinde morfoloji seve. Yedi günlük kültürden sonra morfolojide bir değişimin uzamış olduğunu gösteriyorlar. Pluripotency belirteçleri için immünboyama sonra, CSCs OCT4 ifadeleri gösterir, SOX2, ve Nanog.Ayrıca, CSC'ler kültür ortamında çoğalır ve ki67'de çoğalma işaretini ifade eder. KSK'ların kardiyak kökenini karakterize etmek için kardiyak belirteçlerin ekspresyonu incelendi ve sca-1, NKX2.5 ve GATA4 kardiyak belirteçleri için pozitif olduğu görüldü. Kardiyomiyosit farklılaşma ortamında 12 gün kalım sağlanmadan sonra, diferansiyel CSC'ler kardiyomiyosit belirteçlerinin ACTINin ve TROPONIN-I'nin ekspresyonunu göstermektedir.Bu yordamı çalışırken, degrade çözeltisi ve filtrat karıştırma izin vermemek önemlidir. Hızlanma ve yavaşlamayı en düşük hızda ayarlamak da önemlidir. Onları kim kirletir, bir biyogüvenlik kabiniçinde tüm hücre izolasyon işlemi gerçekleştirmek için tavsiye edilir.Bu prosedürü takiben, kardiyak kök hücrelerin homojen popülasyonu ne kadar açık olduğu gibi ek soruları cevaplamak için manyetik boncuk bazlı ayırma veya akış sitometik hücre ayrıştırma yöntemleri gibi diğer yöntemler de yapılabilir? Kardiyak kök hücredeki çatlak yarıçapı büyük belirteçlerdir ve kardiyomiyositlere karşı farklılıklar vardır. Bu teknik gelişiminden sonra, bu teknik, iskemik kalp yetmezliğirejeneratif tedavi için önemli olabilir fare kalp kalp kök hücrelerinin genellikle yüksek verim kardiyovasküler hastalık alanında araştırmacılar için önünü açacaktır.Cerrahi bıçak, çamaşır suyu ve DMSO ile çalışmanın tehlikeli olabileceğini ve bu işlemi gerçekleştirirken Personel Koruyucu Ekipman, PPE gibi önlemlerin her zaman alınması gerektiğini unutmayın.

Research

JoVE Journal

Biology

Isolation of Retinal Stem Cells from the Mouse Eye

Fare Göz Retina Kök Hücre İzolasyonu

The adult mouse retinal stem cell (RSC) is a rare quiescent cell found within the ciliary epithelium (CE) of the mammalian eye1,2,3. The CE is made up of ...

Isolation and Culture of Adult Epithelial Stem Cells from Human Skin

İnsan Cilt Yetişkin Epitel Kök Hücre İzolasyonu ve Kültür

The homeostasis of all self-renewing tissues is dependent on adult stem cells. As undifferentiated stem cells undergo asymmetric divisions, they generate ...

Isolation &#38; Characterization of Hoechstlow CD45negative Mouse Lung Mesenchymal Stem Cells

Isolation & Characterization of Hoechstlow CD45negative Mouse Lung Mesenchymal Stem Cells

Hoechst İzolasyonu ve Karakterizasyonu Düşük CD45 Negatif Fare Akciğer Mezenkimal Kök Hücre

Tissue resident mesenchymal stem cells (MSC) are important regulators of tissue repair or regeneration, fibrosis, inflammation, angiogenesis and tumor ...

Generation of Mice Derived from Induced Pluripotent Stem Cells

İsteyerek Pluripotent Kök Hücrelerinin Elde Edilen Fare Üretimi

The production of induced pluripotent stem cells (iPSCs) from somatic cells provides a means to create valuable tools for basic research and may also ...

Isolation and Culture of Individual Myofibers and their Satellite Cells from Adult Skeletal Muscle

Yetişkin İskelet Kası gelen bireysel Myofibers ve Uydu Hücre İzolasyonu ve Kültür

Muscle  regeneration in the adult is performed by resident stem cells called satellite  cells. Satellite cells are defined by  their position between the ...

Na&iuml;ve Adult Stem Cells Isolation from Primary Human Fibroblast Cultures

NaÃƒÆ’Ã‚Â¯ve Adult Stem Cells Isolation from Primary Human Fibroblast Cultures

İlköğretim İnsan fibroblast Kültürler gelen naif Erişkin Kök Hücre İzolasyon

Over the last decade, several adult stem cell  populations have been identified in human skin 1-4.  The isolation of multipotent adult dermal precursors ...

Isolation, Culture, and Functional Characterization of Adult Mouse Cardiomyoctyes

İzolasyon, Kültür ve Yetişkin Fare Cardiomyoctyes Fonksiyonel Karakterizasyonu

The use of primary cardiomyocytes (CMs) in culture has provided a powerful complement to murine models of heart disease in advancing our understanding of ...

Manual Isolation of Adipose-derived Stem Cells from Human Lipoaspirates

İnsan Lipoaspirates den Yağ-türetilen Kök Hücre Manuel İzolasyon

In 2001, researchers at the University of  California, Los Angeles, described the isolation of a new population of adult  stem cells from liposuctioned ...

Isolation and Culture of Dental Epithelial Stem Cells from the Adult Mouse Incisor

Yetişkin Fare insizör Diş Epitel Kök Hücreleri İzolasyon ve Kültür

Understanding the cellular and molecular mechanisms that underlie tooth regeneration and renewal has become a topic of great interest1-4, and the mouse ...

Isolation of Enteric Glial Cells from the Submucosa and Lamina Propria of the Adult Mouse

Submukoza ve Lamina Propria yetişkin fare enterik gliyal hücrelerini izolasyon

The enteric nervous system (ENS) consists of neurons and enteric glial cells (EGCs) that reside within the smooth muscle wall, submucosa and lamina ...