Name: in vivo imaging of reactive oxygen species in a murine wound model
Uploaded: 2018-11-17T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Imaging of Reactive Oxygen Species in a Murine Wound Model at JoVE.com

Wir sind dankbar für die präklinische Imaging Core an der New York University School of Medicine, mit besonderem Dank an Orlando Aristizabal und Youssef Zaim Wadghiri. Der Kern ist eine gemeinsam genutzte Ressource, teilweise unterstützt von Laura und Isaac Perlmutter Cancer Center Support Grant NIH/NCI 5P30CA016087 und NIBIB Biomedizinische Technologie Resource Center Grant NIH P41 EB017183. Diese Arbeit wurde unterstützt von der American Diabetes Association "Weg zu stoppen Diabetes" D.C. [Grant-Nummer 1-16-ACE-08] und NYU angewendet Unterstützung Forschungsfonds, P.R.

Alle hier beschriebene Methoden wurden von den institutionellen Animal Care und Nutzung Ausschuss der New York University School of Medicine genehmigt. Alle Mäuse sind hinter einer Schranke untergebracht und alle Mitarbeiter tragen geeigneten persönlichen Schutzausrüstung.
1. Tag 0: Vorbereitung der Mausmodell der Excisional Wundheilung
<ol><li>Diabetiker (LeprDb/Db) Mäuse, im Alter von 8 – 12 Wochen, mit inhalativer 2 % Isofluran zu betäuben. Bestätigen Sie, dass jede Mau...

<ol>
	<li>Nishinaka, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+sensitive+chemiluminescence+probe,+L-012,+for+measuring+the+production+of+superoxide+anion+by+cells.">A new sensitive chemiluminescence probe, L-012, for measuring the production of superoxide anion by cells.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 193 (2), 554-559 (1993).</li><li>Daiber, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+NAD(P)H+oxidase-derived+superoxide+with+the+luminol+analogue+L-012.">Measurement of NAD(P)H oxidase-derived superoxide with the luminol analogue L-012.</a> Free Radical Biology and Medicine. 36 (1), 101-111 (2004).</li><li>Imada, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+reactive+oxygen+species+generated+by+neutrophils+using+a+chemiluminescence+probe+L-012.">Analysis of reactive oxygen species generated by neutrophils using a chemiluminescence probe L-012.</a> Analytical Biochemistry. 271 (1), 53-58 (1999).</li><li>Sohn, H. Y., Gloe, T., Keller, M., Schoenafinger, K., Pohl, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensitive+superoxide+detection+in+vascular+cells+by+the+new+chemiluminescence+dye+L-012.">Sensitive superoxide detection in vascular cells by the new chemiluminescence dye L-012.</a> Journal of Vascular Research. 36 (6), 456-464 (1999).</li><li>Fuchs, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+Hypoxia+PET+Imaging+Quantifies+the+Severity+of+Arthritic+Joint+Inflammation+in+Line+with+Overexpression+of+Hypoxia-Inducible+Factor+and+Enhanced+Reactive+Oxygen+Species+Generation.">In vivo Hypoxia PET Imaging Quantifies the Severity of Arthritic Joint Inflammation in Line with Overexpression of Hypoxia-Inducible Factor and Enhanced Reactive Oxygen Species Generation.</a> The Journal of Nuclear Medicine. 58 (5), 853-860 (2017).</li><li>Asghar, M. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+reactive+oxygen+and+nitrogen+species+in+murine+colitis.">In vivo imaging of reactive oxygen and nitrogen species in murine colitis.</a> Inflammatory Bowel Diseases. 20 (8), 1435-1447 (2014).</li><li>Galiano, R. D., Michaels, J. t., Dobryansky, M., Levine, J. P., Gurtner, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+and+reproducible+murine+model+of+excisional+wound+healing.">Quantitative and reproducible murine model of excisional wound healing.</a> Wound Repair and Regeneration. 12 (4), 485-492 (2004).</li><li>Soares, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Restoration+of+Nrf2+Signaling+Normalizes+the+Regenerative+Niche.">Restoration of Nrf2 Signaling Normalizes the Regenerative Niche.</a> Diabetes. 65 (3), 633-646 (2016).</li><li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+ROS+signaling+in+cells+and+animals.">Imaging ROS signaling in cells and animals.</a> Journal of Molecular Medicine. 91 (8), 917-927 (2013).</li><li>Kielland, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+reactive+oxygen+and+nitrogen+species+in+inflammation+using+the+luminescent+probe+L-012.">In vivo imaging of reactive oxygen and nitrogen species in inflammation using the luminescent probe L-012.</a> Free Radical Biology and Medicine. 47 (6), 760-766 (2009).</li><li>Balke, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualizing+Oxidative+Cellular+Stress+Induced+by+Nanoparticles+in+the+Subcytotoxic+Range+Using+Fluorescence+Lifetime+Imaging.">Visualizing Oxidative Cellular Stress Induced by Nanoparticles in the Subcytotoxic Range Using Fluorescence Lifetime Imaging.</a> Small. , (2018).</li><li>Zielonka, J., Lambeth, J. D., Kalyanaraman, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+use+of+L-012,+a+luminol-based+chemiluminescent+probe,+for+detecting+superoxide+and+identifying+inhibitors+of+NADPH+oxidase:+a+reevaluation.">On the use of L-012, a luminol-based chemiluminescent probe, for detecting superoxide and identifying inhibitors of NADPH oxidase: a reevaluation.</a> Free Radical Biology and Medicine. 65, 1310-1314 (2013).</li><li>Dikalov, S. I., Harrison, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+for+detection+of+mitochondrial+and+cellular+reactive+oxygen+species.">Methods for detection of mitochondrial and cellular reactive oxygen species.</a> Antioxidants &amp; Redox Signalling. 20 (2), 372-382 (2014).</li><li>Rabbani, P. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+Nrf2+activation+therapy+with+RTA+408+enhances+regenerative+capacity+of+diabetic+wounds.">Targeted Nrf2 activation therapy with RTA 408 enhances regenerative capacity of diabetic wounds.</a> Diabetes Research and Clinical Practice. 139, 11-23 (2018).</li><li>Rabbani, P. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+lipoproteoplex+delivers+Keap1+siRNA+based+gene+therapy+to+accelerate+diabetic+wound+healing.">Novel lipoproteoplex delivers Keap1 siRNA based gene therapy to accelerate diabetic wound healing.</a> Biomaterials. 132, 1-15 (2017).</li></ol>

Gängige Techniken zur Messung von ROS haben durch komplexe Protokolle erfordern Gewebe Extraktion oder ähnlich invasive Techniken beschränkt wurde. In den letzten Jahren wurden Messungen von oxidativem Stress auf der Grundlage innovativer bildgebender Verfahren, wodurch für räumlich-zeitliche Einschätzungen9,10,11beschrieben. L-012 hat mehrere Vorteile als Chemilumineszenz Sonde relativ Luminol, Lucigenin und MCLA<sup clas...

Sauerstoff-Metabolite erzeugt durch entzündliche Prozesse tragen zu verschiedenen Signalisierung Kaskaden sowie destruktiven Änderung der zellulären Komponenten1. Sensitiver und spezifischer Techniken zur Messung der ROS ist entscheidend für entzündliche Prozesse zu studieren und zu charakterisieren die Effekte von oxidativem Stress. In-Vivo Bildgebung ist wertvoll wegen seiner Fähigkeit, dynamische räumliche und zeitliche Angaben im lebenden Gewebe. L-012 ist eine synthetische Chemilumineszenz-Sonde, die ist sehr empfindlich für Superoxid-Anionen und erzeugt eine höhere Lichtintensität als andere fluoreszierenden Sonden in Zellen, Geweben und Vollblut1,2,3, 4. es hat mehrere entzündliche Erkrankungen, wie Arthritis und Kolitis5,6studieren erfolgreich für die in-Vivo Bildgebung in murinen Modellen eingesetzt. Es ist noch nicht in einer etablierten kutanen Wundheilung Modell eingesetzt werden. Messung von ROS erzeugt ist ebenso relevant für den Verlauf der Wundheilung unter verschiedenen Bedingungen zu bewerten. Die Empfindlichkeit und die nicht-invasive Natur dieser Methode macht es eine vielversprechende Technik für Wundheilung in murinen Modellen zu studieren.
Nrf2 ist eine wichtige Triebfeder der antioxidativen Reaktion und ein transcriptional Faktor mit Spezifität für die Antioxidant Response-Element (sind) für den Projektträger Regionen mehrere antioxidative Enzyme8. In Ermangelung von oxidativem Stress ist Nrf2 im Zytoplasma von Keap1, abgesondert, wodurch anschließend seine Ubiquitination und Abbau. Ungleichgewicht des Nrf2/Keap1-Signalwegs hat in ungeeigneten Redox-Homöostase und verzögerte Wundheilung in der Umgebung von erhöhtem oxidativen Stress9verwickelt. Wir haben bereits gezeigt, dass die Unterdrückung der Keap1 erhöhten Nrf2-Aktivität anregt und fördert Rettung der pathologischen kutanen Wundheilung in diabetischen Wunden9.
Hier beschreiben wir eine Protokoll, die nutzt L-012-gestützte Biolumineszenz imaging um zu ROS Ebenen in einem excisional kutanen Wunde heilende Modell zu messen, die kritisch für die Hervorhebung der Assoziation zwischen ROS und Wundheilung ist. Diese Technik zeigt Änderungen in Echtzeit oxidativen Belastung innerhalb von Wunden und unmittelbaren Peripherie. Darüber hinaus ermöglicht diese Methode zur schnellen Beurteilung der Interventionen und Mechanismen dieser Affekt Redox Handhabung. Hier verwenden wir ein Modell des Keap1 Zuschlag für die Wiederherstellung des Redox-Homöostase, um die Anwendbarkeit unserer Strategie zu bewerten. Da unsere Technik nicht-invasiv ist und Wunden ungestört sind, kann das gleiche Tier für weitere bestätigende Analysen auf der Grundlage der Histologie oder Zelle Lysates verwendet werden.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="618">
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:265px;">BKS.Cg-Dock7m+/+ Leprdb/J mice</td>
			<td style="width:164px;">Jackson Laboratories</td>
			<td style="width:111px;">000642</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">13 cm x 18 cm Silicone sheet (0.6 mm)</td>
			<td>Sigma Aldrich&#160;</td>
			<td>665581</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">3M Tegaderm Transparent Film Dressings</td>
			<td>3M</td>
			<td>88-1626W</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Lipofectamine 2000 Transfection Reagent</td>
			<td>Life Technologies&#160;</td>
			<td>11668027</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Keap1 Stealth siRNA</td>
			<td>Thermofisher Scientific</td>
			<td>1299001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Silencer negative control&#160;</td>
			<td>Thermofisher Scientific&#160;</td>
			<td>AM4635</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Opti-MEM Reduced Serum</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>11058021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">DPBS</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>14040133</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Methyl-cellulose&#160;</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>9004-67-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">L-012</td>
			<td>Wako Chemicals</td>
			<td>120-04891</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">IVIS Lumina III XR In Vivo Imaging System&#160;</td>
			<td>PerkinElmer</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vivo imaging of reactive oxygen species in a murine wound model

Die Generation von reaktiven Sauerstoffspezies (ROS) ist ein Markenzeichen von entzündlichen Prozessen, aber im Übermaß, oxidativer Stress ist weit verbreitet in verschiedenen Krankheiten wie Krebs, Arteriosklerose und Diabetes beteiligt. Wir haben zuvor gezeigt, dass Dysfunktion des nuklearen Faktors (2 erythroiden abgeleitet)-wie 2 (Nrf2) / Kelch-ähnliche erythroiden Zelle abgeleitete Protein 1 (Keap-1) Signalisierung Weg führt zu extremen ROS Ungleichgewicht bei kutanen Wundheilung bei Diabetes. Da ROS Ebenen ein wichtiger Indikator für den Verlauf sind der Wundheilung, sind spezifische und genaue Quantifizierung Techniken wertvoll. Mehrere in-vitro- Tests, ROS in Zellen und Geweben zu messen sind beschrieben worden; Sie liefern jedoch nur eine kumulative Einzelmessung pro Probe. Vor kurzem haben die Entwicklung von Protein-basierten Indikatoren und bildgebender Verfahren für einzigartige räumlich-zeitliche Analysen erlaubt. L-012 (C13H8ClN4NaO2) ist ein Luminol-Derivat, das für in Vivo und in Vitro Chemolumineszenz verwendet werden kann Erkennung von ROS von NAPDH Oxidase generiert. L-012 strahlt ein stärkeres Signal als andere fluoreszierenden Sonden und hat gezeigt, dass sowohl empfindlich und zuverlässig für die Erkennung von ROS. Die Zeit verfallen Anwendbarkeit des L-012-erleichtert Imaging liefert wertvolle Informationen über entzündliche Prozesse reduzieren die Notwendigkeit für Opfer und insgesamt senken die Zahl der Studie Tiere. Hier beschreiben wir ein Protokoll, die Verwendung von L-012-erleichtert, in Vivo imaging um zu oxidativen Stress in einem Modell der excisional Wundheilung mit diabetischen Mäusen mit lokal dysfunktionalen Nrf2/Keap1 zu quantifizieren.

In der bildgebenden Kammer befinden sich drei Tage nach dem Erstellen der bilateralen Wunden nach einem etablierten excisional Wunde Modell (Abbildung 1A), diabetische Mäusen. Eine erste Foto und ein Maß für die Biolumineszenz sind vor der Injektion des L-012 ergriffen, um Hintergrundsignal (Abbildung 1 b) zu berücksichtigen. Nach intraperitonealer Injektion mit der L-012-Lösung, die Mäuse werden neu positioniert, in der Ka...

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In Vivo Imaging of Reactive Oxygen Species in a Murine Wound Model

Wir beschreiben eine nicht-invasive in Vivo imaging-Protokoll, das schlanke und kostengünstige, Verwendung von L-012, eine Chemolumineszenz Luminol-Analog, zu visualisieren und reaktive Sauerstoffspezies (ROS) erzielte eine excisional Wunde Mausmodell zu quantifizieren.

In Vivo Bildgebung von reaktiven Sauerstoffspezies in einem Murine Wunde Modell

The generation of reactive oxygen species (ROS) is a hallmark of inflammatory processes, but in excess, oxidative stress is widely implicated in various ...

Diese Methode kann helfen, wichtige Fragen im Bereich der Gewebereparatur und Regeneration über die Assoziationen zwischen den zytoprotektive Bahnen, oxidativen Stress, und die Wundheilung Reaktion zu beantworten. Der Hauptvorteil dieser leistungsstarken Technik ist, dass Sie reaktive Sauerstoffspezies in einer Wunde in Echtzeit messen können, um ihre Auswirkungen auf die Geweberegeneration zu bestimmen. Mit mir wird Jennifer Kwong, eine wissenschaftliche Mitarbeiterin in meinem Labor, das Verfahren demonstrieren.Verwenden Sie ein Glukometer, um den Blutzucker jeder anästhesierten acht bis zwölf Wochen alten Diabetikermaus zu messen. Und verwenden Sie einen Haarschneider und Enthaarungscreme, um das rückende Haar vom ersten Tier zu entfernen. Verwenden Sie alkoholtücher zweimal, um die exponierte Haut zu reinigen und drapieren Sie das Tier, so dass nur der chirurgische Bereich ausgesetzt ist.Wenn der Alkohol getrocknet ist, verwenden Sie sterile 10-Millimeter-Biopsie-Punche, um zwei, 10 Millimeter volle Dickenwunden zu erzeugen, die sich durch den Panniculus-Carnosus nach einer gut etablierten exzisionalen Wundheilungstechnik erstrecken. Verwenden Sie eine 0,5 Millimeter dicke Silikonfolie mit 10 Millimeter kreisförmigen Ausschnitten, um die Wunden zu bestreichen und die Stints mit unterbrochenen 4/0 Seidennähten zu sichern. Dann legen Sie die Mäuse auf ein Heatpad mit Überwachung bis zur vollständigen Genesung, bevor Sie in ihren individuellen Käfig zurückkehren, Papierhandtücher als zusätzliches Nistmaterial für zwei Wochen zur Verfügung stellen.Am nächsten Tag entweder kontrollieren Sie entweder unsinniges kleines störendes RNA-Gel oder experimentelles kleines störendes Keap1-Gel an der Oberseite der Wunde jedes Tieres und wickeln Sie jeden Oberkörper mit transparentem Filmdressing, um das Gel an Ort und Stelle zu halten, während die Gliedmaßen frei bleiben. Laden Sie am dritten Tag des Experiments eine ein Millimeter spritze mit einer 27-Spur-Nadel mit frisch zubereiteter L-012-Lösung ausgestattet und wickeln Sie die Spritze, um die Lösung vor Licht zu schützen. Um die Wunden abzubilden, entfernen Sie vorsichtig den transparenten Filmverband von jeder der Mäuse, ohne die Wunden zu stören, und legen Sie die Mäuse in die Bildkammer eines Biolumineszenz-Bildgebungssystems.Stellen Sie den Sauerstoffzufluss des Bildgebungssystems und den Sauerstoffgehalt der Induktionskammer auf einen Liter pro Minute ein und stellen Sie die Mäuse anhand von Biolumineszenz und hellem Feld an der Grundlinie dar. Als nächstes wischen Sie den Bauch mit Alkoholtüchern und injizieren Sie dann fünf Milligramm L-012 Lösung pro 200 Gramm Körpergewicht, IP, in jede Maus, sobald der Alkohol getrocknet ist. Die Injektion der L-012-Lösung, ohne die Wunden auf der Rückenhaut zu stören, ist entscheidend, da jede Verzerrung die Wundheilungsbahn und die Dateninterpretation beeinflusst.Stellen Sie sicher, dass das Tier vor der Injektion sicher in dorsaler Rekumbency ist. Unmittelbar nach der Injektion legen Sie die Mäuse wieder an ihre jeweiligen Stellen in der Bildkammer und stellen die Tiere alle vier Minuten über einen 60-minütigen Bildzeitraum eine Minute lang dar, indem Sie die 10-Millimeter-Wunde als Interessensbereich für die Bestimmung des Niveaus der reaktiven Sauerstoffspezies definieren. Dann legen Sie die Mäuse auf ein Wärmepolster mit Überwachung bis zur vollständigen Genesung, bevor Sie die Tiere in ihre einzelnen Käfige zurück.Drei Tage nach der Bildung bilateraler Wunden nach dem etablierten Exzisionswwmodell wird vor der L-012-Injektion keine Biolumineszenz beobachtet. Nach intraperintonealer L-012-Lösungsinjektion wird die Biolumineszenz in den Bereichen der Wunde beobachtet, in denen reaktive Sauerstoffspezies nachgewiesen werden. Die Aufzeichnung der Biolumineszenz für eine Minute alle vier bis fünf Minuten im Laufe von 60 Minuten zeigt die biolumineszierende Sättigung der Region von Interesse im Laufe der Zeit, mit der optimalen Bildgebungszeit, um eine vollständige L-012-Sättigung zu erreichen, die bei etwa 50 Minuten beobachtet wird.Die Biolumineszenz in jeder Wundregion von Interesse vor und nach der L-012-Injektion in unsinnige kleine interferierende RNA behandelte oder Keap1 kleine interferierende RNA behandelte Mäuse kann dann berechnet werden, indem die Gesamtzahl der Lichtintensität durch das Gebiet dividiert wird. Die Analyse von Wundgewebeabschnitten des Tages 10 zur Bestätigung der Genauigkeit der Messung des Niveaus der reaktiven Sauerstoffspezies durch H&E-Färbung zeigt eine reduzierte zelluläre Infiltration in kleine, von Keap1 behandelte Wunden im Vergleich zu kleinen störenden, unsinnig behandelten Geweben, was auf eine reduzierte entzündliche Morphologie bei den experimentellen gelbehandelten Tieren hindeutet. Die Analyse der Immunreaktivität von F4/80, einem Protein-Makrophagenmarker auf Wundgewebeabschnitten, zeigt eine reduzierte Anzahl von Makrophagen in kleinen, von Keap1 behandelten Wunden im Vergleich zu kleinen störenden, unsinnig behandelten Wunden, was die Gültigkeit dieser Methode weiter unterstreicht.Stellen Sie beim Versuch dieses Verfahrens sicher, dass die L-012 nicht abgelaufen ist, und rühren Sie die Lösung an einem lichtgeschützten Ort. Nach diesem Verfahren können gezielte Sonden und immun-assaybasierte Methoden verwendet werden, um die subzelluläre Lokalisierung von reaktiven Sauerstoffspezies und deren Korrelationen zu untersuchen, was eine schnelle Bewertung von Interventionen und Mechanismen ermöglicht, die die Redux-Statistiken von Wunden beeinflussen.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

In Vivo Imaging of Reactive Oxygen Species in a Murine Wound Model

In vivo Imaging of Transgenic Leishmania Parasites in a Live Host

In vivo Imaging of Transgenic Leishmania Parasites in a Live Host

In-vivo-Imaging von transgenen Leishmania Parasiten in einer Live-Host

Distinct species of Leishmania, a protozoan parasite of the family Trypanosomatidae, typically cause different human disease manifestations. The most ...

Forschung

Immunologie und Infektion

Non-invasive Imaging of Leukocyte Homing and Migration in vivo

Non-invasive Imaging of Leukocyte Homing and Migration in vivo

Nicht-invasive Bildgebung von Leukozyten Homing und Migration In vivo</em

Two-photon (2P) microscopy is a high resolution imaging technique that has been broadly adapted by biologists.  The value of 2P microscopy is that it ...

Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model

Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model

Induktion der Graft-versus-Host-Krankheit und<em&gt; In Vivo</em&gt; T-Zell-Überwachung mit einem MHC-matched Mausmodell

Graft-versus-host disease (GVHD) is the limiting barrier to the broad use of bone marrow transplant as a curative therapy for a variety of hematological ...

Total Protein Extraction and 2-D Gel Electrophoresis Methods for Burkholderia Species

Total Protein Extraction and 2-D Gel Electrophoresis Methods for Burkholderia Species

Gesamtproteinextraktion und 2-D Gelelektrophorese-Methoden für<em&gt; Burkholderia</em&gt; Arten

The investigation of  the intracellular protein levels of bacterial species is of importance to  understanding the pathogenic mechanisms of diseases ...

Femur Window Chamber Model for In Vivo Cell Tracking in the Murine Bone Marrow

Femur Window Chamber Model for In Vivo Cell Tracking in the Murine Bone Marrow

Femur Fensterkammer Modell für<em&gt; In Vivo</em&gt; Zelltracking im Knochenmark der Maus

Bone marrow is a complex organ that contains various hematopoietic and non-hematopoietic cells. These cells are involved in many biological processes, ...

Murine Lymphocyte Labeling by 64Cu-Antibody Receptor Targeting for In Vivo Cell Trafficking by PET/CT

Murine Lymphocyte Labeling by 64Cu-Antibody Receptor Targeting for In Vivo  Cell Trafficking by PET/CT

Murine Lymphocyte Kennzeichnung von<sup&gt; 64</sup&gt; Cu-Antikörper-Rezeptor-Targeting für<em&gt; In Vivo</em&gt; Zellhandel von PET / CT

This protocol illustrates the production of 64Cu and the chelator conjugation/radiolabeling of a monoclonal antibody (mAb) followed by murine lymphocyte ...

Come to the Light Side: In Vivo Monitoring of Pseudomonas aeruginosa Biofilm Infections in Chronic Wounds in a Diabetic Hairless Murine Model

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Besuchen Sie die Licht-Seite: In Vivo Monitoring von Pseudomonas Aeruginosa Biofilms Infektionen bei chronischen Wunden in einer diabetischen haarlose Mausmodell

The presence of bacteria as structured biofilms in chronic wounds, especially in diabetic patients, is thought to prevent wound healing and resolution. ...

A Delayed Inoculation Model of Chronic Pseudomonas aeruginosa Wound Infection

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Ein verzögertes Impfmodell der chronischen Pseudomonas aeruginosa Wundinfektion

Pseudomonas aeruginosa (P. aeruginosa) is a major nosocomial pathogen of increasing relevance to human health and disease, particularly in the setting of ...

Live Imaging of Chemokine Receptors in Zebrafish Neutrophils During Wound Responses

Live-Bildgebung von Chemokinrezeptoren in Zebrafisch-Neutrophilen während Wundreaktionen

Leukocyte guidance by chemical gradients is essential for immune responses. Neutrophils are the first cells to be recruited to sites of tissue damage ...

Recurrent Escherichia coli Urinary Tract Infection Triggered by Gardnerella vaginalis Bladder Exposure in Mice

Recurrent Escherichia coli Urinary Tract Infection Triggered by Gardnerella vaginalis Bladder Exposure in Mice

Rezidivierende Escherichia coli Harnwegsinfektion, ausgelöst durch Gardnerella vaginalis Blasenexposition bei Mäusen

Recurrent urinary tract infections (rUTI) caused by uropathogenic Escherichia coli (UPEC) are common and costly. Previous articles describing models of ...