Name: in vivo imaging of reactive oxygen species in a murine wound model
Uploaded: 2018-11-17T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Imaging of Reactive Oxygen Species in a Murine Wound Model at JoVE.com

हम NYU स्कूल ऑफ मेडिसिन में, ऑरलैंडो Aristizabal और Youssef Zaim Wadghiri के लिए विशेष धंयवाद के साथ नैदानिक इमेजिंग कोर के लिए आभारी हैं । कोर एक साझा संसाधन आंशिक रूप से लौरा और इसहाक Perlmutter कैंसर केंद्र सहायता अनुदान NIH/NCI 5P30CA016087 और NIBIB जैव प्रौद्योगिकी संसाधन केंद्र अनुदान NIH P41 EB017183 द्वारा समर्थित है । यह काम अमेरिकन डायबिटीज एसोसिएशन द्वारा समर्थित किया गया था "मधुमेह रोकने के लिए मार्ग" डीसी को [अनुदान संख्या 1-16-इक्का-08] और NYU एप्लाइड अनुसंधान सहायता कोष के लिए P.R.

सभी तरीकों यहां वर्णित संस्थागत पशु देखभाल और ंयूयॉर्क विश्वविद्यालय स्कूल ऑफ मेडिसिन के उपयोग की समिति द्वारा अनुमोदित किया गया है । सभी चूहों एक बाधा के पीछे स्थित हैं और सभी कर्मियों उचित व्यक्ति?...

<ol>
	<li>Nishinaka, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+sensitive+chemiluminescence+probe,+L-012,+for+measuring+the+production+of+superoxide+anion+by+cells.">A new sensitive chemiluminescence probe, L-012, for measuring the production of superoxide anion by cells.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 193 (2), 554-559 (1993).</li><li>Daiber, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+NAD(P)H+oxidase-derived+superoxide+with+the+luminol+analogue+L-012.">Measurement of NAD(P)H oxidase-derived superoxide with the luminol analogue L-012.</a> Free Radical Biology and Medicine. 36 (1), 101-111 (2004).</li><li>Imada, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+reactive+oxygen+species+generated+by+neutrophils+using+a+chemiluminescence+probe+L-012.">Analysis of reactive oxygen species generated by neutrophils using a chemiluminescence probe L-012.</a> Analytical Biochemistry. 271 (1), 53-58 (1999).</li><li>Sohn, H. Y., Gloe, T., Keller, M., Schoenafinger, K., Pohl, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensitive+superoxide+detection+in+vascular+cells+by+the+new+chemiluminescence+dye+L-012.">Sensitive superoxide detection in vascular cells by the new chemiluminescence dye L-012.</a> Journal of Vascular Research. 36 (6), 456-464 (1999).</li><li>Fuchs, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+Hypoxia+PET+Imaging+Quantifies+the+Severity+of+Arthritic+Joint+Inflammation+in+Line+with+Overexpression+of+Hypoxia-Inducible+Factor+and+Enhanced+Reactive+Oxygen+Species+Generation.">In vivo Hypoxia PET Imaging Quantifies the Severity of Arthritic Joint Inflammation in Line with Overexpression of Hypoxia-Inducible Factor and Enhanced Reactive Oxygen Species Generation.</a> The Journal of Nuclear Medicine. 58 (5), 853-860 (2017).</li><li>Asghar, M. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+reactive+oxygen+and+nitrogen+species+in+murine+colitis.">In vivo imaging of reactive oxygen and nitrogen species in murine colitis.</a> Inflammatory Bowel Diseases. 20 (8), 1435-1447 (2014).</li><li>Galiano, R. D., Michaels, J. t., Dobryansky, M., Levine, J. P., Gurtner, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+and+reproducible+murine+model+of+excisional+wound+healing.">Quantitative and reproducible murine model of excisional wound healing.</a> Wound Repair and Regeneration. 12 (4), 485-492 (2004).</li><li>Soares, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Restoration+of+Nrf2+Signaling+Normalizes+the+Regenerative+Niche.">Restoration of Nrf2 Signaling Normalizes the Regenerative Niche.</a> Diabetes. 65 (3), 633-646 (2016).</li><li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+ROS+signaling+in+cells+and+animals.">Imaging ROS signaling in cells and animals.</a> Journal of Molecular Medicine. 91 (8), 917-927 (2013).</li><li>Kielland, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+reactive+oxygen+and+nitrogen+species+in+inflammation+using+the+luminescent+probe+L-012.">In vivo imaging of reactive oxygen and nitrogen species in inflammation using the luminescent probe L-012.</a> Free Radical Biology and Medicine. 47 (6), 760-766 (2009).</li><li>Balke, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualizing+Oxidative+Cellular+Stress+Induced+by+Nanoparticles+in+the+Subcytotoxic+Range+Using+Fluorescence+Lifetime+Imaging.">Visualizing Oxidative Cellular Stress Induced by Nanoparticles in the Subcytotoxic Range Using Fluorescence Lifetime Imaging.</a> Small. , (2018).</li><li>Zielonka, J., Lambeth, J. D., Kalyanaraman, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+use+of+L-012,+a+luminol-based+chemiluminescent+probe,+for+detecting+superoxide+and+identifying+inhibitors+of+NADPH+oxidase:+a+reevaluation.">On the use of L-012, a luminol-based chemiluminescent probe, for detecting superoxide and identifying inhibitors of NADPH oxidase: a reevaluation.</a> Free Radical Biology and Medicine. 65, 1310-1314 (2013).</li><li>Dikalov, S. I., Harrison, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+for+detection+of+mitochondrial+and+cellular+reactive+oxygen+species.">Methods for detection of mitochondrial and cellular reactive oxygen species.</a> Antioxidants &amp; Redox Signalling. 20 (2), 372-382 (2014).</li><li>Rabbani, P. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+Nrf2+activation+therapy+with+RTA+408+enhances+regenerative+capacity+of+diabetic+wounds.">Targeted Nrf2 activation therapy with RTA 408 enhances regenerative capacity of diabetic wounds.</a> Diabetes Research and Clinical Practice. 139, 11-23 (2018).</li><li>Rabbani, P. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+lipoproteoplex+delivers+Keap1+siRNA+based+gene+therapy+to+accelerate+diabetic+wound+healing.">Novel lipoproteoplex delivers Keap1 siRNA based gene therapy to accelerate diabetic wound healing.</a> Biomaterials. 132, 1-15 (2017).</li></ol>

ROS मापने के लिए आम तकनीक जटिल ऊतक निष्कर्षण या इसी तरह इनवेसिव तकनीक की आवश्यकता प्रोटोकॉल द्वारा सीमित किया गया है । हाल के वर्षों में, ऑक्सीडेटिव तनाव की माप अभिनव इमेजिंग विधियों के आधार पर सूचित किय?...

भड़काऊ प्रक्रियाओं के माध्यम से उत्पन्न ऑक्सीजन चयापचयों विभिन्न संकेतन झरने के साथ ही सेलुलर घटक1के विनाशकारी परिवर्तन करने के लिए योगदान । ROS को मापने के लिए संवेदनशील और विशिष्ट तकनीकों का उपयोग भड़काऊ प्रक्रियाओं का अध्ययन करने और ऑक्सीडेटिव तनाव के प्रभाव निस्र्पक के लिए महत्वपूर्ण है । vivo इमेजिंग में अपने जीवित ऊतक में गतिशील स्थानिक और लौकिक डेटा प्रदान करने की क्षमता की वजह से मूल्यवान है । L-012 एक सिंथेटिक chemiluminescent जांच है कि सुपरऑक्साइड ॠणायन के लिए अत्यधिक संवेदनशील है और कोशिकाओं, ऊतकों में अन्य फ्लोरोसेंट जांच की तुलना में एक उच्च प्रकाश तीव्रता का उत्पादन है, और पूरे रक्त1,2,3, 4. यह सफलतापूर्वक murine मॉडल में vivo इमेजिंग में गठिया और कोलाइटिस5,6सहित कई भड़काऊ रोगों का अध्ययन करने के लिए, के लिए कार्यरत किया गया है । यह अभी तक एक की स्थापना की त्वचा के घाव भरने मॉडल में कार्यरत है । ROS उत्पन्न की माप विभिन्न स्थितियों के तहत घाव भरने की प्रगति का आकलन करने के लिए समान रूप से प्रासंगिक है । इस विधि की संवेदनशीलता और इनवेसिव प्रकृति यह murine मॉडल भर में घाव भरने का अध्ययन करने के लिए एक होनहार तकनीक बनाता है ।
Nrf2 एंटीऑक्सिडेंट प्रतिक्रिया के एक प्रमुख चालक और एंटीऑक्सीडेंट प्रतिक्रिया तत्व के लिए विशिष्टता के साथ एक transcriptional कारक है (कर रहे हैं) कई एंटीऑक्सीडेंट एंजाइमों8के प्रवर्तक क्षेत्रों के लिए आम है । ऑक्सीडेटिव तनाव के अभाव में Nrf2 Keap1 द्वारा कोशिका द्रव्य में तनहा है, जो बाद में इसके ubiquitination और क्षरण का कारण बनता है । Nrf2/Keap1 मार्ग के असंतुलन अनुचित redox homeostasis में फंसाया गया है और बढ़ी हुई ऑक्सीडेटिव तनाव9की सेटिंग में घाव भरने में देरी । हम पहले से पता चला है कि Keap1 के दमन वृद्धि हुई Nrf2 गतिविधि को उत्तेजित करता है और रोग के बचाव को बढ़ावा देता है मधुमेह घावों में घाव भरने की त्वचा घाव9।
यहां हम एक प्रोटोकॉल का वर्णन है कि एल-012-असिस्टेड bioluminescence इमेजिंग एक excisional त्वचा के घाव भरने मॉडल है, जो ROS और घाव भरने के बीच सहयोग पर प्रकाश डाला के लिए महत्वपूर्ण है में ROS स्तर को मापने के लिए इस्तेमाल करता है । यह तकनीक घाव और तत्काल परिधि के भीतर ऑक्सीडेटिव बोझ में वास्तविक समय परिवर्तन को दर्शाता है । इसके अलावा, इस विधि के हस्तक्षेप और तंत्र है कि redox हैंडलिंग को प्रभावित के तेजी से मूल्यांकन के लिए अनुमति देता है । यहां हम redox homeostasis की बहाली के लिए Keap1 पछाड़ना के एक मॉडल का उपयोग करने के लिए हमारी रणनीति की प्रयोज्यता का मूल्यांकन । क्योंकि हमारी तकनीक गैर इनवेसिव है और घाव परेशान कर रहे हैं, एक ही जानवर प्रोटोकॉल या कोशिका lysates के आधार पर आगे पुष्टि विश्लेषण के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है ।

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="618">
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:265px;">BKS.Cg-Dock7m+/+ Leprdb/J mice</td>
			<td style="width:164px;">Jackson Laboratories</td>
			<td style="width:111px;">000642</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">13 cm x 18 cm Silicone sheet (0.6 mm)</td>
			<td>Sigma Aldrich&#160;</td>
			<td>665581</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">3M Tegaderm Transparent Film Dressings</td>
			<td>3M</td>
			<td>88-1626W</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Lipofectamine 2000 Transfection Reagent</td>
			<td>Life Technologies&#160;</td>
			<td>11668027</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Keap1 Stealth siRNA</td>
			<td>Thermofisher Scientific</td>
			<td>1299001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Silencer negative control&#160;</td>
			<td>Thermofisher Scientific&#160;</td>
			<td>AM4635</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Opti-MEM Reduced Serum</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>11058021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">DPBS</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>14040133</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Methyl-cellulose&#160;</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>9004-67-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">L-012</td>
			<td>Wako Chemicals</td>
			<td>120-04891</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">IVIS Lumina III XR In Vivo Imaging System&#160;</td>
			<td>PerkinElmer</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vivo imaging of reactive oxygen species in a murine wound model

प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों (ROS) के उत्पादन भड़काऊ प्रक्रियाओं की एक बानगी है, लेकिन अतिरिक्त में, ऑक्सीडेटिव तनाव व्यापक रूप से कैंसर, atherosclerosis और मधुमेह जैसे विभिन्न विकृतियों में फंसा है । हम पहले से पता चला है कि परमाणु कारक की शिथिलता (erythroid-2 व्युत्पंन)-2 की तरह (Nrf2)/Kelch-जैसे erythroid कोशिका-1 प्रोटीन व्युत्पंन (Keap1) संकेतन मार्ग मधुमेह में त्वचा के घाव भरने के दौरान चरम ROS असंतुलन की ओर जाता है । चूंकि ROS स्तर घाव भरने की प्रगति का एक महत्वपूर्ण संकेतक हैं, विशिष्ट और सटीक ठहराव तकनीक मूल्यवान हैं । कई इन विट्रो में कोशिकाओं और ऊतकों में ROS को मापने के लिए परख वर्णित किया गया है; हालांकि, वे केवल प्रति नमूना एक संचई माप प्रदान करते हैं । हाल ही में, प्रोटीन के विकास आधारित संकेतकों और इमेजिंग मोडलों अद्वितीय spatiotemporal विश्लेषण के लिए अनुमति दी है । L-012 (सी13ज8ClN4नाव2) एक luminol व्युत्पंन है कि दोनों vivo में और इन विट्रो chemiluminescent NAPDH oxidase द्वारा उत्पंन ROS का पता लगाने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है । एल 012 अंय फ्लोरोसेंट जांच की तुलना में एक मजबूत संकेत उत्सर्जन करता है और ROS का पता लगाने के लिए दोनों संवेदनशील और विश्वसनीय होना दिखाया गया है । एल के समय चूक प्रयोज्य-012-सुविधा इमेजिंग भड़काऊ प्रक्रियाओं के बारे में बहुमूल्य जानकारी प्रदान करता है, जबकि बलिदान के लिए जरूरत को कम करने और समग्र अध्ययन पशुओं की संख्या को कम करने । यहां, हम का उपयोग प्रोटोकॉल का वर्णन एक एल-012- vivo इमेजिंग में सुविधा के लिए excisional घाव चिकित्सा के एक मॉडल में ऑक्सीडेटिव तनाव यों तो स्थानीय रूप से बेकार Nrf2 के साथ मधुमेह चूहों का उपयोग/Keap1 ।

एक स्थापित excisional घाव मॉडल (चित्रा 1a) के अनुसार द्विपक्षीय घाव बनाने के तीन दिन बाद, मधुमेह चूहों इमेजिंग चैंबर में तैनात हैं । एक प्रारंभिक तस्वीर और bioluminescence का एक उपाय करने के लिए एल 0...

Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Imaging of Reactive Oxygen Species in a Murine Wound Model at JoVE.com

In Vivo Imaging of Reactive Oxygen Species in a Murine Wound Model

हम एक गैर-इनवेसिव vivo इमेजिंग प्रोटोकॉल है कि सुव्यवस्थित और लागत प्रभावी है का वर्णन, एल 012 का उपयोग, एक chemiluminescent luminol-एनालॉग, कल्पना और प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों (ROS) एक माउस excisional घाव मॉडल में उत्पन्न करता है ।

वीवो में एक Murine घाव मॉडल में प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों की इमेजिंग

The generation of reactive oxygen species (ROS) is a hallmark of inflammatory processes, but in excess, oxidative stress is widely implicated in various ...

यह विधि साइटोप्रोटेक्टिव रास्तों, ऑक्सीडेटिव तनाव और घाव भरने की प्रतिक्रिया के बीच संघों के बारे में ऊतक मरम्मत और पुनर्जनन क्षेत्र में महत्वपूर्ण सवालों के जवाब देने में मदद कर सकती है। इस शक्तिशाली तकनीक का मुख्य लाभ यह है कि आप ऊतक उत्थान पर उनके प्रभाव को निर्धारित करने के लिए, वास्तविक समय में, घाव में प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों को माप सकते हैं। मेरे साथ प्रक्रिया का प्रदर्शन जेनिफर Kwong, मेरी प्रयोगशाला में एक अनुसंधान सहायक होगा ।आठ से 12 सप्ताह पुराने मधुमेह माउस प्रत्येक एनेस्थेटाइज्ड के रक्त ग्लूकोज को मापने के लिए एक ग्लूकोमीटर का उपयोग करें। और पहले जानवर से पृष्ठीय बालों को हटाने के लिए हेयर ट्रिमर और डिपिलेटरी क्रीम का उपयोग करें। उजागर त्वचा को साफ करने और जानवर को कपड़ा बनाने के लिए दो बार अल्कोहल वाइप्स का उपयोग करें ताकि केवल सर्जिकल क्षेत्र सामने आ सके।जब शराब सूख गया है, बाँझ 10 मिलीमीटर बायोप्सी घूंसे का उपयोग करने के लिए दो, 10 मिलीमीटर पूर्ण मोटाई एक अच्छी तरह से स्थापित उत्तेजना घाव चिकित्सा तकनीक के अनुसार panniculus कार्नोसस के माध्यम से विस्तार घाव बनाने के लिए । घावों को खुला और बाधित 4/0 रेशम टांके के साथ कार्यकाल सुरक्षित करने के लिए 10 मिलीमीटर परिपत्र कटआउट के साथ एक ०.५ मिलीमीटर मोटी सिलिकॉन शीट का प्रयोग करें । फिर चूहों को पूर्ण वसूली तक निगरानी के साथ एक हीट पैड पर रखें, अपने व्यक्तिगत पिंजरे में लौटने से पहले, दो सप्ताह के लिए अतिरिक्त घोंसले की सामग्री के रूप में पेपर तौलिए प्रदान करें।अगले दिन, या तो नियंत्रण बकवास छोटे हस्तक्षेप आरएनए जेल या प्रयोगात्मक छोटे हस्तक्षेप Keap1 जेल प्रत्येक जानवर के घाव के शीर्ष पर लागू होते हैं और पारदर्शी फिल्म ड्रेसिंग के साथ प्रत्येक धड़ लपेटो जगह में जेल रखने के लिए, जबकि अंग मुक्त छोड़ । प्रयोग के तीन दिन, हौसले से तैयार एल-012 समाधान के साथ एक 27 गेज सुई से लैस एक मिलीमीटर सिरिंज लोड करें और प्रकाश से समाधान की रक्षा के लिए सिरिंज लपेटें। घावों की छवि के लिए, धीरे-धीरे घावों को परेशान किए बिना चूहों में से प्रत्येक से पारदर्शी फिल्म ड्रेसिंग को हटा दें और चूहों को बायोल्यूमिनेसेंस इमेजिंग सिस्टम के इमेजिंग कक्ष में रखें।इमेजिंग सिस्टम प्रवाह और इंडक्शन चैंबर ऑक्सीजन के स्तर को प्रति मिनट एक लीटर तक सेट करें और बेसलाइन पर बायोल्यूमिनेसेंस और उज्ज्वल क्षेत्र द्वारा चूहों की छवि करें। इसके बाद, शराब पोंछे के साथ पेट पोंछें तो प्रत्येक माउस में एल-012 समाधान प्रति 200 ग्राम शरीर के वजन, आईपी, एक बार शराब सूख गया है पांच मिलीग्राम सुई। पृष्ठीय त्वचा पर घावों को परेशान किए बिना एल-012 समाधान इंजेक्शन महत्वपूर्ण है, क्योंकि कोई भी विरूपण घाव उपचार प्रक्षेपवक्र और डेटा व्याख्या को प्रभावित करेगा।सुनिश्चित करें कि इंजेक्शन से पहले जानवर पृष्ठीय प्रतिनक्षा में सुरक्षित रूप से है। इंजेक्शन के तुरंत बाद, चूहों को इमेजिंग चैंबर में अपने संबंधित स्थानों में वापस रखें और 60 मिनट की इमेजिंग अवधि में हर चार मिनट में एक मिनट के लिए जानवरों की छवि करें, प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों के स्तर का निर्धारण करने के लिए ब्याज के क्षेत्र के रूप में 10 मिलीमीटर घाव को परिभाषित करें। फिर जानवरों को उनके व्यक्तिगत पिंजरों में लौटने से पहले पूर्ण वसूली तक निगरानी के साथ एक हीट पैड पर चूहों को रखें।स्थापित उत्तेजना घाव मॉडल के अनुसार द्विपक्षीय घाव बनाने के तीन दिन बाद, एल-012 इंजेक्शन से पहले कोई बायोल्यूमिनेसेंस नहीं देखा जाता है। इंट्रापेरिनेन्टोनियल एल-012 समाधान इंजेक्शन के बाद, घाव के उन क्षेत्रों में बायोल्यूमिनेसेंस देखा जाता है जहां प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों का पता लगाया जाता है। 60 मिनट के दौरान हर चार से पांच मिनट में एक मिनट के लिए बायोल्यूमिनेसेंस की रिकॉर्डिंग समय के साथ ब्याज के क्षेत्र के बायोल्यूमिनेसेंट संतृप्ति को दर्शाती है, जिसमें इष्टतम इमेजिंग समय के साथ पूर्ण एल-012 संतृप्ति तक पहुंचने के लिए लगभग 50 मिनट पर मनाया जाता है।ब्याज के प्रत्येक घाव क्षेत्र में पहले और बाद में एल-012 इंजेक्शन में बकवास छोटे हस्तक्षेप आरएनए इलाज या Keap1 छोटे हस्तक्षेप आरएनए इलाज चूहों तो क्षेत्र द्वारा प्रकाश तीव्रता के कुल मायने रखता है विभाजित द्वारा गणना की जा सकती है । एच एंड ई धुंधला द्वारा प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों के स्तर माप की सटीकता की पुष्टि करने के लिए दिन 10 घाव ऊतक वर्गों के विश्लेषण छोटे हस्तक्षेप बकवास इलाज ऊतकों की तुलना में छोटे हस्तक्षेप Keap1 इलाज घावों में एक कम सेलुलर घुसपैठ से पता चलता है, प्रयोगात्मक जेल में एक कम भड़काऊ आकृति विज्ञान का संकेत-इलाज जानवरों का इलाज किया । F4/80 की इम्यूनो-रिएक्टिविटी का विश्लेषण, घाव ऊतक वर्गों पर एक प्रोटीन मैक्रोफेज मार्कर, छोटे हस्तक्षेप बकवास इलाज घावों की तुलना में छोटे हस्तक्षेप Keap1 इलाज घावों में मैक्रोफेज की एक कम संख्या इंगित करता है, आगे इस विधि की वैधता को रेखांकित ।इस प्रक्रिया का प्रयास करते समय, एल-012 की पुष्टि करना सुनिश्चित करें कि समाप्त नहीं हुआ है और प्रकाश से संरक्षित स्थान पर समाधान को उत्तेजित करना है। इस प्रक्रिया के बाद, लक्षित जांच और इम्यूनो-परख आधारित तरीकों का उपयोग प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों और उनके सहसंबंधों के उप-सेलुलर स्थानीयकरण का अध्ययन करने के लिए किया जा सकता है, जिससे घावों के रेडक्स आँकड़ों को प्रभावित करने वाले हस्तक्षेपों और तंत्रों का तेजी से आकलन किया जा सकता है।

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

In Vivo Imaging of Reactive Oxygen Species in a Murine Wound Model

In vivo Imaging of Transgenic Leishmania Parasites in a Live Host

In vivo Imaging of Transgenic Leishmania Parasites in a Live Host

ट्रांसजेनिक लीशमैनिया परजीवियों की एक लाइव होस्ट में vivo इमेजिंग में

Distinct species of Leishmania, a protozoan parasite of the family Trypanosomatidae, typically cause different human disease manifestations. The most ...

Non-invasive Imaging of Leukocyte Homing and Migration in vivo

Non-invasive Imaging of Leukocyte Homing and Migration in vivo

ल्युकोसैट घर वापस आना और प्रवासन की गैर इनवेसिव इमेजिंग Vivo में</em

Two-photon (2P) microscopy is a high resolution imaging technique that has been broadly adapted by biologists.  The value of 2P microscopy is that it ...

Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model

Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model

भ्रष्टाचार बनाम मेजबान रोग के प्रेरण और<em&gt; Vivo में</em&gt; टी सेल निगरानी एक MHC-मिलान murine मॉडल का उपयोग

Graft-versus-host disease (GVHD) is the limiting barrier to the broad use of bone marrow transplant as a curative therapy for a variety of hematological ...

Total Protein Extraction and 2-D Gel Electrophoresis Methods for Burkholderia Species

Total Protein Extraction and 2-D Gel Electrophoresis Methods for Burkholderia Species

कुल प्रोटीन निष्कर्षण और 2 डी जेल वैद्युतकणसंचलन तरीके के लिए<em&gt; Burkholderia</em&gt; प्रजाति

The investigation of  the intracellular protein levels of bacterial species is of importance to  understanding the pathogenic mechanisms of diseases ...

Femur Window Chamber Model for In Vivo Cell Tracking in the Murine Bone Marrow

Femur Window Chamber Model for In Vivo Cell Tracking in the Murine Bone Marrow

के लिए फीमर विंडो चैंबर मॉडल<em&gt; Vivo</em&gt; Murine अस्थि मज्जा में सेल ट्रैकिंग

Bone marrow is a complex organ that contains various hematopoietic and non-hematopoietic cells. These cells are involved in many biological processes, ...

Murine Lymphocyte Labeling by 64Cu-Antibody Receptor Targeting for In Vivo Cell Trafficking by PET/CT

Murine Lymphocyte Labeling by 64Cu-Antibody Receptor Targeting for In Vivo  Cell Trafficking by PET/CT

म्यूरीन लिम्फोसाइट लेबलिंग द्वारा<sup&gt; 64</sup&gt; Cu-एंटीबॉडी रिसेप्टर के लिए लक्ष्य निर्धारण<em&gt; में विवो</em&gt; पीईटी / सी टी द्वारा सेल तस्करी

This protocol illustrates the production of 64Cu and the chelator conjugation/radiolabeling of a monoclonal antibody (mAb) followed by murine lymphocyte ...

Come to the Light Side: In Vivo Monitoring of Pseudomonas aeruginosa Biofilm Infections in Chronic Wounds in a Diabetic Hairless Murine Model

Come to the Light Side: In Vivo Monitoring of Pseudomonas aeruginosa Biofilm Infections in Chronic Wounds in a Diabetic Hairless Murine Model

प्रकाश की ओर आओ: Vivo निगरानी में Pseudomonas aeruginosa एक मधुमेह गंजा Murine मॉडल में क्रोनिक घावों में फिल्म संक्रमण

The presence of bacteria as structured biofilms in chronic wounds, especially in diabetic patients, is thought to prevent wound healing and resolution. ...

A Delayed Inoculation Model of Chronic Pseudomonas aeruginosa Wound Infection

A Delayed Inoculation Model of Chronic Pseudomonas aeruginosa Wound Infection

क्रोनिक स्यूडोमोनास एरुजिनोसा घाव संक्रमण का एक विलंबित टीका मॉडल

Pseudomonas aeruginosa (P. aeruginosa) is a major nosocomial pathogen of increasing relevance to human health and disease, particularly in the setting of ...

Live Imaging of Chemokine Receptors in Zebrafish Neutrophils During Wound Responses

घाव प्रतिक्रियाओं के दौरान ज़ेबराफ़िश न्यूट्रोफिल में केमोकाइन रिसेप्टर्स की लाइव इमेजिंग

Leukocyte guidance by chemical gradients is essential for immune responses. Neutrophils are the first cells to be recruited to sites of tissue damage ...

Recurrent Escherichia coli Urinary Tract Infection Triggered by Gardnerella vaginalis Bladder Exposure in Mice

Recurrent Escherichia coli Urinary Tract Infection Triggered by Gardnerella vaginalis Bladder Exposure in Mice

चूहों में गार्डनेरेला योनि मूत्राशय एक्सपोजर द्वारा ट्रिगर आवर्तक एस्चेरिचिया कोलाई मूत्र पथ संक्रमण

Recurrent urinary tract infections (rUTI) caused by uropathogenic Escherichia coli (UPEC) are common and costly. Previous articles describing models of ...