Name: assessing neuroprotective effects of glycyrrhizae radix et rhizoma extract using a transient middle cerebral artery occlusion mouse model
Uploaded: 2018-12-09T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Assessing Neuroprotective Effects of Glycyrrhizae Radix et Rhizoma Extract Using a Transient Middle Cerebral Artery Occlusion Mouse Model at JoVE.com

Ikke gældende.

Alle procedurer, der involverer dyr blev godkendt af den etiske komité i Pusan National University (godkendelsesnummer, PNU-2016-1087). En grafisk oversigt over denne undersøgelse er vist i figur 1.
1. forberedelse og forvaltning af GRex
Bemærk: GR bruges i denne undersøgelse blev købt fra en kommerciel medicinalvirksomhed.
<ol><li>200 g af GR anbringes i 2.000 mL methanol og inkuberes ved stuetemperatur (25 ° C) i 5 dage.</li>
...

<ol>
	<li>Bejot, Y., Delpont, B., Giroud, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rising+stroke+incidence+in+young+adults:+more+epidemiological+evidence,+more+questions+to+be+answered.">Rising stroke incidence in young adults: more epidemiological evidence, more questions to be answered.</a> Journal of the American Heart Association. 11 (5), (2016).</li><li>Hadadha, M., Vakili, A., Bandegi, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+the+inhibition+of+hydrogen+sulfide+synthesis+on+ischemic+injury+and+oxidative+stress+biomarkers+in+a+transient+model+of+focal+cerebral+ischemia+in+rats.">Effect of the inhibition of hydrogen sulfide synthesis on ischemic injury and oxidative stress biomarkers in a transient model of focal cerebral ischemia in rats.</a> Journal of Stroke and Cerebrovascular Diseases. 24 (12), 2676-2684 (2015).</li><li>Durukan, A., Tatlisumak, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+ischemic+stroke.">Animal models of ischemic stroke.</a> Article in Handbook of Clinical Neurology. 92, 43-66 (2009).</li><li>Kim, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+Models+of+Stroke.">Animal Models of Stroke.</a> Brain and Neurorehabilitation. 4 (1), 1-11 (2011).</li><li>Rizzato, G., Scalabrin, E., Radaelli, M., Capodaglio, G., Piccolo, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+exploration+of+licorice+metabolome.">A new exploration of licorice metabolome.</a> Food Chemistry. 221, 959-968 (2017).</li><li>Zhu, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+determination+of+flavonoids+in+licorice+and+comparison+of+three+licorice+species.">Rapid determination of flavonoids in licorice and comparison of three licorice species.</a> Journal of Separation Science. 39 (3), 473-482 (2016).</li><li>Ota, M., Mikage, M., Cai, S. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Herbological+study+on+the+medicinal+effects+of+roasted+licorice+and+honey-roasted+licorice.">Herbological study on the medicinal effects of roasted licorice and honey-roasted licorice.</a> Yakushigaku Zasshi. 50 (1), 38-45 (2015).</li><li>Lim, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Licorice+pretreatment+protects+against+brain+damage+induced+by+middle+cerebral+artery+occlusion+in+mice.">Licorice pretreatment protects against brain damage induced by middle cerebral artery occlusion in mice.</a> Journal of Medicinal Food. 21 (5), 474-480 (2018).</li><li>Koizumi, J. Y., Nakazawa, T., Ooneda, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+studies+of+ischemic+brain+edema.">Experimental studies of ischemic brain edema.</a> Nosotchu. 8 (1), 1-8 (1986).</li><li>Fischer, A. H., Jacobson, K. A., Rose, J., Zeller, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hematoxylin+and+eosin+staining+of+tissue+and+cell+sections.">Hematoxylin and eosin staining of tissue and cell sections.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2008, (2008).</li><li>Zhu, Y., Liu, F., Zou, X., Torbey, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+unbiased+estimation+of+neuronal+number+in+the+rat+hippocampus+with+different+staining+methods.">Comparison of unbiased estimation of neuronal number in the rat hippocampus with different staining methods.</a> Journal of Neuroscience Methods. 254, 73-79 (2005).</li><li>Alberts, M. J., Ovbiagele, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+strategies+for+ischemic+stroke+prevention:+role+of+multimodal+combination+therapies.">Current strategies for ischemic stroke prevention: role of multimodal combination therapies.</a> Journal of Neurology. 254 (10), 1414-1426 (2007).</li><li>Pinto, A., Tuttolomondo, A., Di Raimondo, D., Fernandez, P., Licata, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebrovascular+risk+factors+and+clinical+classification+of+strokes.">Cerebrovascular risk factors and clinical classification of strokes.</a> Seminars in Vascular Medicine. 4 (3), 287-303 (2004).</li><li>Barlow, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identifying+the+brain+regions+associated+with+acute+spasticity+in+patients+diagnosed+with+an+ischemic+stroke.">Identifying the brain regions associated with acute spasticity in patients diagnosed with an ischemic stroke.</a> Somatosensory and Motor Research. 33 (2), 1-8 (2016).</li><li>Roth, S., Liesz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stroke+research+at+the+crossroads+-+where+are+we+heading.">Stroke research at the crossroads - where are we heading.</a> Swiss Medical Weekly. 146, 14329 (2016).</li><li>Feuerstein, G. Z., Wang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+stroke.">Animal models of stroke.</a> Molecular Medicine Today. 6 (3), 133-135 (2000).</li><li>Herson, P. S., Traystman, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+stroke:+translational+potential+at+present+and+in+2050.">Animal models of stroke: translational potential at present and in 2050.</a> Future Neurology. 9 (5), 541-551 (2014).</li><li>Kumar, A., Gupta Aakriti, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+on+animal+models+of+stroke:+an+update.">A review on animal models of stroke: an update.</a> Brain Research Bulletin. 122, 35-44 (2016).</li><li>O'Collins, V. E., Donnan, G. A., Howells, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=History+of+animal+models+of+stroke.">History of animal models of stroke.</a> International Journal of Stroke. 6 (1), 77-78 (2011).</li><li>Ji, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioactive+constituents+of+Glycyrrhiza+uralensis+(licorice):+discovery+of+the+effective+components+of+a+traditional+herbal+medicine.">Bioactive constituents of Glycyrrhiza uralensis (licorice): discovery of the effective components of a traditional herbal medicine.</a> Journal of Natural Products. 79 (2), 281-292 (2016).</li><li>Yang, R., Wang, L. Q., Yuan, B. C., Liu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+pharmacological+activities+of+licorice.">The pharmacological activities of licorice.</a> Planta Medica. 81 (18), 1654-1669 (2015).</li><li>Yang, R., Yuan, B. C., Ma, Y. S., Zhou, S., Liu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+anti-inflammatory+activity+of+licorice,+a+widely+used+Chinese+herb.">The anti-inflammatory activity of licorice, a widely used Chinese herb.</a> Pharmaceutical Biology. 55 (1), 5-18 (2017).</li></ol>

Med den stigende forekomst af metaboliske sygdomme, såsom kronisk hypertension, diabetes, og hyperlipidæmi, som er vigtige risikofaktorer for slagtilfælde, er slagtilfælde forebyggelse og behandling blevet et vigtigt område af medicinsk forskning12, 13. underskud i sprog og bevægelse efter et slagtilfælde er stærkt korreleret med graden af skade på hjernen væv14 og resultere i en dårlig livskvalitet for patienterne og deres fami...

Hjerneskader forårsaget af iskæmi og reperfusion af cerebral blodgennemstrømning fører til død af nerveceller og tab af hjernevæv. Denne type af hjerneskade fortsætter med at stige med den stigende forekomst af cerebrovaskulære sygdomme på grund af spredningen af metaboliske sygdomme som fedme, forhøjet blodtryk og diabetes mellitus1,2. Det absolutte antal af ældre patienter med slagtilfælde steget dramatisk på verdensplan, og udgifterne til lægebehandling for disse patienter, der ofte tilbage med langsigtede handicap, er en større samfundsmæssig byrde. Derfor bør sekundær handicap mindskes så vidt muligt at mindske den økonomiske byrde1,2.
De mest almindeligt anvendte gnaver model af cerebral infarkt er den midterste cerebral arterie (MCA) okklusion (MCAO) model, hvor MCA er tilstoppet med en silicium-belagt kirurgisk suturing glødelampe at blokere blodgennemstrømning, forårsager iskæmisk slagtilfælde3, 4. ved hjælp af en glødetråd, da okklusion materiale giver mulighed for kontrol af okklusion tid og varighed ved at manipulere varigheden af intra-luminale glødetrådens indsættelse.
Tidligere undersøgelser har vist, at selv når de samme gnaver MCAO model anvendes, den samlede mængde af cerebral infarkt varierer mellem eksperimenter, forårsager lav reproducerbarhed af undersøgelserne. For at forbedre reproducerbarhed, optimeret vi tykkelsen af glødetrådens mynte bruges i eksperimentet. Resultater af en forundersøgelse af cerebral iskæmisk periode og induceret infarkt viste, at en iskæmisk periode længere end 60 min. tilladt den volumetriske region af beskadiget hjernevæv til observeres og kvantificeret.
Glycyrrhizae Radix et Rhizoma (GR), også kendt som lakrids, består af tørrede rødder og jordstængler af Glycyrrhiza uralensis og G. glabra. Det har været brugt i kinesisk og koreansk traditionel medicin til forskellige formål, herunder som en fødevaretilsætningsstoffet og medicinsk5,6,7.
I en tidligere undersøgelse8, forbehandling med GR methanol ekstrakt (GRex) viste en anti-apoptotiske effekt i MCAO mus, herunder væsentlig forebyggelse af fald i protein udtryk for B-celle lymfom 2 (Bcl-2) og Bcl ekstra store (Bcl-xL). Denne undersøgelse blev udført for at forbedre reproducerbarhed af de konventionelle MCAO musen model ved at evaluere dets effektivitet bestemme, hvis post infarkt behandling med GRex effektivt reduceret infarkt volumen i MCAO-induceret cerebral skade.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1416px;" width="1417">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:383px;">Glycyrrhizae Radix et Rhizoma</td>
			<td style="width:307px;">Gwangmyoung Pharmaceuticals Co., Korea</td>
			<td style="width:344px;"></td>
			<td style="width:383px;">Glycyrrhizae Radix et Rhizoma</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Qualitative filter paper</td>
			<td>Advantec</td>
			<td style="width:344px;">Filter paper No. 2</td>
			<td>Qualitative filter paper</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D8418-250ML</td>
			<td>Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Syringe filter (0.45 &#181;m)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>CLS431220</td>
			<td>Syringe filter (0.45 &#181;m)</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Stereo Microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>M50</td>
			<td>Stereo Microscope</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Stereo Microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>SMZ745</td>
			<td>Stereo Microscope</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Laser Doppler</td>
			<td>Moor Instrument</td>
			<td>moorVMS-LDF</td>
			<td>Laser Doppler</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Anesthesia Tabletop Bracket with N2O&#38;O2 Flowmeter System</td>
			<td>Harvard Appratus</td>
			<td>34-1352</td>
			<td>Anesthesia Tabletop Bracket with N2O&#38;O2 Flowmeter System</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Homeothermic Monitoring System</td>
			<td>Harvard Appratus</td>
			<td>55-7020</td>
			<td>Homeothermic Monitoring System</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Digital Camera</td>
			<td>Canon</td>
			<td>Eos-M2</td>
			<td>Digital Camera</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Cryostat</td>
			<td>Leica</td>
			<td>CM3050S</td>
			<td>Cryostat</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Microscope</td>
			<td>Carl Zeiss</td>
			<td>Zeiss Axio</td>
			<td>Microscope</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Data Analysis</td>
			<td>Systat Software Inc.</td>
			<td>SigmaPlot version 12</td>
			<td>Data Analysis</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Data Analysis</td>
			<td>NIH Image</td>
			<td>ImageJ</td>
			<td>Data Analysis</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Mouse diet</td>
			<td>Doo Yeol Biotech</td>
			<td>Standard rodent chow</td>
			<td>Mouse diet</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Isoflurane</td>
			<td>JOONGWAE</td>
			<td>A02104781</td>
			<td>Isoflurane</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Isoflurane</td>
			<td>TROIKAA</td>
			<td>ISOTROY 100</td>
			<td>Isoflurane</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Silk suture (4-0 Black silk)&#160;</td>
			<td>AILEE</td>
			<td>SK47510</td>
			<td>Silk suture (4-0 Black silk)&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Silk suture (3-0 White silk)&#160;</td>
			<td>Baekjae</td>
			<td>57</td>
			<td>Silk suture (3-0 White silk)&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Nylon suture (8-0 monofilament)&#160;</td>
			<td>AILEE</td>
			<td>NB825</td>
			<td>Nylon suture (8-0 monofilament)&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T8877-25G</td>
			<td>2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC)</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Formalin (Formaldehyde solution)</td>
			<td>JUNSEI</td>
			<td>69360-1263 20KG</td>
			<td>Formalin (Formaldehyde solution)</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Hematoxylin (Harris Hematoxylin)</td>
			<td>YD Diagnostics</td>
			<td>EasyStain</td>
			<td>Hematoxylin (Harris Hematoxylin)</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Eosin (1% Eosin Y Solution)</td>
			<td>MUTO PURE CHEMICALS</td>
			<td>3200-2</td>
			<td>Eosin (1% Eosin Y Solution)</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Cresyl violet (acetate)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C5042-10G</td>
			<td>Cresyl violet (acetate)</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Paraformaldehyde&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:344px;">P6148-1KG</td>
			<td>Paraformaldehyde&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Sucrose</td>
			<td>JUNSEI</td>
			<td>31365-0350 1KG</td>
			<td>Sucrose</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Optimum cutting temperature (OCT) compound</td>
			<td>Scigen</td>
			<td>4583</td>
			<td>Optimum cutting temperature (OCT) compound</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Disecting Knife</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>10055-12</td>
			<td>Disecting Knife</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">#4 Forcep</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11241-30</td>
			<td>#4 Forcep</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">#5 Forcep</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11254-20</td>
			<td>#5 Forcep</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">#6 Forcep</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11260-20</td>
			<td>#6 Forcep</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">#7 Fine Forcep</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11274-20</td>
			<td>#7 Fine Forcep</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Surgical Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14001-12</td>
			<td>Surgical Scissors</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Extra Fine Bonn Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14084-08</td>
			<td>Extra Fine Bonn Scissors</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Moria Pascheff-Wolff Spring Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15371-92</td>
			<td>Moria Pascheff-Wolff Spring Scissors</td>
		</tr>
		<tr height="31">
			<td height="31" style="height:31px;">Vessel Dilating Forcep</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>18153-11</td>
			<td>Vessel Dilating Forcep</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessing neuroprotective effects of glycyrrhizae radix et rhizoma extract using a transient middle cerebral artery occlusion mouse model

Iskæmi efterfulgt af reperfusion af cerebral blodgennemstrømning efter et slagtilfælde fører til død af nerveceller og tab af hjernevæv. De mest almindeligt anvendte dyremodeller for at studere slagtilfælde er den midterste cerebral arterie okklusion (MCAO) model. Tidligere undersøgelser har rapporteret forskellige infarkt størrelser, selv når de samme eksperimentelle dyrearter blev brugt på lignende betingelser, MCAO. Derfor, har vi udviklet en forbedret eksperimentelle metode for at løse denne uoverensstemmelse. Mus blev udsat for MCAO ved hjælp af en glødetråd okklusion materiale som efterligner humane slagtilfælde betingelser og glødetrådens tykkelse er optimeret for at etablere mere reproducerbare infarkt volumen. Mus behandlet med en methanol uddrag af Glycyrrhizae Radix et rhizom (GRex) efter slagtilfælde induktion viste en betydeligt nedsat total infarkt volumen og øget antallet af overlevende celler i forhold til den ubehandlede kontrolgruppe. Dette ændrede forsøgsplan med succes og demonstreret reproducerbar den gavnlige effekt af GRex på iskæmisk slagtilfælde.

I sham-drives normal-gruppen, er ingen cerebral infarkt observeret i kontrolgruppen, en forholdsvis bred vifte af beskadigede områder er konstaterede. I mus er administreret 300 mg/kg GRex i gruppen MCAO model, en statistisk signifikant reduktion i beskadigede område observeret (figur 2).
De histologiske ændringer er undersøgt af farvning iskæmisk hjernen sektioner med H & E eller cresyl violet...

Watch this Scientific Journal Video about Assessing Neuroprotective Effects of Glycyrrhizae Radix et Rhizoma Extract Using a Transient Middle Cerebral Artery Occlusion Mouse Model at JoVE.com

Assessing Neuroprotective Effects of Glycyrrhizae Radix et Rhizoma Extract Using a Transient Middle Cerebral Artery Occlusion Mouse Model

I denne undersøgelse ændre vi en eksisterende Eksperimentel metode til at opnå mere reproducerbare resultater, ved at etablere en midterste cerebral arterie okklusion (MCAO) musemodel. Oral administration af Glycyrrhizae Radix et rhizom (GR) methanol ekstrakt (GRex), efter slagtilfælde induktion, faldt betydeligt samlede infarkt volumen i forhold til den ubehandlede kontrolgruppe.

Vurdering af neuroprotektive effekter af Glycyrrhizae Radix et Rhizoma uddrag ved hjælp af en forbigående midt Cerebral arterie okklusion musemodel

Ischemia followed by reperfusion of cerebral blood flow after a stroke leads to the death of nerve cells and loss of brain tissue. The most commonly used ...

Denne metode kan hjælpe med at besvare centrale spørgsmål i neurovidenskab og traditionel oral medicin forskningsområder om screening for neuroprotektive naturlige forbindelser er relevante for modellen. Den største fordel ved denne teknik er, at infektionsvolumenets højere produktionsdukitet er i overensstemmelse med den iskæmiske timingdosis. Visuel demonstration af denne metode er kritisk, da det er typisk at indsætte et meget tyndt redskab i den oprindelige, den midterste cerebellar arterie ved hjælp af et sterilt mikroskop.Demonstration af proceduren vil være Se-Eun Lee, en klasse en skoleelev studerer i mit laboratorium. For at forberede Glycyrrhizae Radix et Rhizome ekstrakt, eller GRex, først tilføje 200-gram Glycyrrhizae Radix et Rhizome, eller GR, til to-liters methanol for en fem dages inkubation ved stuetemperatur. Ved slutningen af inkubationen belastes opløsningen gennem 0,26 millimeter tykt filterpapir med en fem mikrometer porestørrelse.Tilsæt GR-restproduktet til en liter frisk methanol, og filtrer opløsningen igen. Kombiner de to filtrater, og belaste dem gennem et nyt stykke filterpapir. Koncentrer derefter ekstraktet under vakuum før frysetørring for at producere GRex.For at forberede GRex til administration opløses det frysetørrede produkt i dimethylsulfoxid, og blandingen fortyndes med 0,9 % fysiologisk saltvand. Derefter filtreres opløsningen gennem et sprøjtefilter på 0,45 mikrometer, og justere den endelige koncentration af DMSO til mindre end 5%For at oprette en mus midterste cerebral arterie okklusion model, eller MCAO, bekræfte en mangel på lydhøre over for hale stimulus i en bedøvet seks uger gamle 22 til 25-gram mandlige C57BL/6 mus, og placere musen på en 36,5-graders Celsius kropstemperatur holde tæppe, forbundet til et termometer. Efter fjernelse af alle hår fra brystet og halsen af musen ved barbering og depilatory creme, placere musen under et stereomisk skær og gøre en to-centimeter hud snit i midten af halsen.Omhyggeligt isolere venstre fælles halspulsåren, eksterne halspulsåren, og grenen af den interne halspulsåren fra de omkringliggende bindevæv, og bruge en 4.0-silke sutur til at ligate den eksterne halspulsåren og den fælles halspulsåren med en halv-hitch knude til midlertidigt at blokere blodstrømmen ind i den interne halspulsåren. Indsæt en 0,1 til 0,12-millimeter tyk 11-millimeter lang silikone-belagt 8,0-monofilament 4,0-silke sutur gennem den interne halspulsåren til oprindelsen af venstre midterste cerebral arterie, og bruge en laser Doppler flow meter til at måle faldet i relative cerebral blodflow arterie. Fix den indsatte glødetråd til blodkarrene i to timer, mens cerebral arterie er okkluderet.Ved afslutningen af okklusion periode, forsigtigt trække glødetråden for at genoprette blodgennemstrømningen i 22 timers reperfusion. Og brug 3,0-silke suturer til at sutur huden i fem steder med to halve hitches knob. Derefter returnere musen til sit bur for bedøvelse opsving.En time efter afslutningen af reperfusion, administrere 300-milligram per kg kropsvægt GRex til forsøgsdyr, kun ved oral sonde. 24 timer efter starten af MCAO, foretage et snit i den midterste hud af hovedet af hvert forsøgsdyr, og bryde parietal knogler med vinklede arforrækkere, mens peeling off dura mater. Forsigtigt isolere hjernen fra kraniet, og bruge en mus hjerne matrix til at skære det punkterede væv i en millimeter tykke sektioner.Plet sektionerne i 17 minutter i 2%TTC løsning, i henhold til standard protokoller. Og fastsætte sektioner i 10% formalin i mindst 2 timer før billedbehandling prøverne med et digitalt kamera. Derefter analysere og kvantificere cerebral infarkt område af hver sektion ved hjælp af ImageJ.På det relevante forsøgstidspunkt efter MCAO skal hvert aflivet forsøgsdyr transcardially med 10 milliliter PBS, efterfulgt af 10 milliliter 4% paraformaldehyd. Efter isolering af hjerner som netop påvist, nedsænke de høstede organer i 10-milliliter af 30% saccharose natten over. Den næste morgen, integrere hjernen vævsprøver i optimal skæretemperatur sammensatte.Og skær væv koronalt i 15-mikrometer tykke sektioner på en cyrostat. Monter sektionerne på glasdias og nedsænk sektionerne i 80% ethanol i 1 minut. For H&E-farvning mærkes prøverne med Hematoxylin-opløsningen i 5 minutter efterfulgt af to dips i 1% syrealkohol.Dernæst nedsænkes diasene i mættet lithiumcarbonatopløsning i 30 sekunder, efterfulgt af en 30-sekunders vask i postevand og 30 sekunders modfarvning med Eosin-opløsning. Fjern den overskydende Eosin opløsning med en poste vand vask, og dehydrere dias med et minut stigende nedsænkning i 95 derefter 100% ethanol. Derefter lufttørre dias, klare dem i xylen i mindst 10 minutter, og montere coverslips med montering medium.For cresyl violet farvning, placere 80% ethanol-behandlede dias på et dias varmere i mindst en time, efterfulgt af nedsænkning i 50% ethanol fortyndet med chloroform natten over. Den næste morgen, pletter dias med 0,1% cresyl violet i 10 minutter i en 40-graders Celsius tør ovn, efterfulgt af en dehydrering i 95% ethanol i 30 minutter, og to fem-minutters 100% ethanol nedsænkning. Dernæst rydde dias to fem minutters xylen nedsænkning, efterfulgt af lufttørring.Monter derefter diasene med monteringsmedium til visualisering ved hjælp af lysmikroskopi. I fingeret-opererede normale grupper, ingen cerebral infarkt er observeret;mens der i kontrol, ubehandlede MCAO dyr, en forholdsvis bred vifte af beskadigede områder er observeret. I 300-milligram pr kg GRex-behandlede model mus, en statistisk signifikant reduktion i beskadiget væv er observeret.Histologisk analyse af H&E og cresyl violet-farvede væv sektioner giver et indeks over celle overlevelse. Faktisk, H & E og cresyl violet farvning intensiteter betydeligt fald i kontrollen, ubehandlet MCAO gruppe i forhold til den sham-opererede normale gruppe. De GRex-behandlede dyr udviser derimod en større histologisk integritet, hvilket indebærer mindre neuronal celledød end både de kontrol-, ubehandlede og sham-opererede grupper, hvilket tyder på en potent neuroprotektive virkning af ekstraktet mod iskæmi reperfusion-induceret hjerneskade.Mens du forsøger denne procedure, Det er vigtigt at huske at overvåge den relative cerebellar blodgennemstrømning i denne periode. Og ledere af processer meget omhyggeligt for at minimere skader på endotellag af

Research

JoVE Journal

Medicine

Modeling Stroke in Mice - Middle Cerebral Artery Occlusion with the Filament Model

Stroke is among the most frequent causes of death and adult disability, especially in highly developed countries. However, treatment options to date are ...

Mouse Model of Middle Cerebral Artery Occlusion

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the ...

Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Mice

Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Mice

Stroke is the third leading cause of death and the leading cause of disability in the world, with an estimated cost of near $70 billion 
in the United ...

The Application Of Permanent Middle Cerebral Artery Ligation in the Mouse

Focal cerebral ischemia is among the most common type of stroke seen in patients. Due to the clinical significance there has been a prolonged effort to ...

Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Rat

Endothelin-1-induceret mellem-cerebral arterieokklusion Model for iskæmisk slagtilfælde med laser-doppler-flowmetri Vejledning i Rat

Stroke is the number one cause of disability and third leading cause of death in the world, costing an estimated $70 billion in the United States in ...

Utilizing a Cranial Window to Visualize the Middle Cerebral Artery During Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion

Anvendelse af en Cranial vindue for at visualisere den midterste cerebrale arterie Under endothelin-1-induceret mellem-cerebral arterieokklusion

Creation of a cranial window is a method that allows direct visualization of structures on the cortical surface of the brain1-3. This technique can be ...

Optimized System for Cerebral Perfusion Monitoring in the Rat Stroke Model of Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion

Optimeret System for Cerebral Perfusion Overvågning i Rat Stroke Model af intraluminal mellem-cerebral arterieokklusion

The translational potential of pre-clinical stroke research depends on the accuracy of experimental modeling. Cerebral perfusion monitoring in animal ...

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

Embolisk cerbri arterieokklusion (MCAO) for iskæmisk slagtilfælde med Homologe Blodpropper i rotter

Clinically, thrombolytic therapy with use of recombinant tissue plasminogen activator (tPA) remains the most effective treatment for acute ischemic ...

Quantification of Neurovascular Protection Following Repetitive Hypoxic Preconditioning and Transient Middle Cerebral Artery Occlusion in Mice

Kvantificering af neurovaskulær Protection Efter Gentagne Hypoksisk Forkonditionering og Forbigående mellem-cerebral arterieokklusion i mus

Experimental animal models of stroke are invaluable tools for understanding stroke pathology and developing more effective treatment strategies. A 2 week ...

Performing Permanent Distal Middle Cerebral with Common Carotid Artery Occlusion in Aged Rats to Study Cortical Ischemia with Sustained Disability

Udførelse Permanent Distal Mellemøsten Cerebral med Common Arteria carotis Okklusion i Aged Rotter at studere Kortikal Iskæmi med vedvarende handicap

Stroke typically occurs in elderly people with a range of comorbidities including carotid (or other arterial) atherosclerosis, high blood pressure, ...