Name: assessing neuroprotective effects of glycyrrhizae radix et rhizoma extract using a transient middle cerebral artery occlusion mouse model
Uploaded: 2018-12-09T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Assessing Neuroprotective Effects of Glycyrrhizae Radix et Rhizoma Extract Using a Transient Middle Cerebral Artery Occlusion Mouse Model at JoVE.com

לא ישים.

בכל ההליכים הכרוכים חיות אושרו על ידי ועדת האתיקה של האוניברסיטה הלאומית פוסאן (מספר אישור, PNU-2016-1087). סקירה גרפית של מחקר זה מוצג באיור1.
1. הכנה וניהול של GRex
הערה: כדי לבחור השתמשו במחקר זה נרכש מחברת התרופות מסחרי.
<ol><li>במקום 200 גר' GR ב- 2,000 מ של מ?...

<ol>
	<li>Bejot, Y., Delpont, B., Giroud, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rising+stroke+incidence+in+young+adults:+more+epidemiological+evidence,+more+questions+to+be+answered.">Rising stroke incidence in young adults: more epidemiological evidence, more questions to be answered.</a> Journal of the American Heart Association. 11 (5), (2016).</li><li>Hadadha, M., Vakili, A., Bandegi, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+the+inhibition+of+hydrogen+sulfide+synthesis+on+ischemic+injury+and+oxidative+stress+biomarkers+in+a+transient+model+of+focal+cerebral+ischemia+in+rats.">Effect of the inhibition of hydrogen sulfide synthesis on ischemic injury and oxidative stress biomarkers in a transient model of focal cerebral ischemia in rats.</a> Journal of Stroke and Cerebrovascular Diseases. 24 (12), 2676-2684 (2015).</li><li>Durukan, A., Tatlisumak, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+ischemic+stroke.">Animal models of ischemic stroke.</a> Article in Handbook of Clinical Neurology. 92, 43-66 (2009).</li><li>Kim, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+Models+of+Stroke.">Animal Models of Stroke.</a> Brain and Neurorehabilitation. 4 (1), 1-11 (2011).</li><li>Rizzato, G., Scalabrin, E., Radaelli, M., Capodaglio, G., Piccolo, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+exploration+of+licorice+metabolome.">A new exploration of licorice metabolome.</a> Food Chemistry. 221, 959-968 (2017).</li><li>Zhu, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+determination+of+flavonoids+in+licorice+and+comparison+of+three+licorice+species.">Rapid determination of flavonoids in licorice and comparison of three licorice species.</a> Journal of Separation Science. 39 (3), 473-482 (2016).</li><li>Ota, M., Mikage, M., Cai, S. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Herbological+study+on+the+medicinal+effects+of+roasted+licorice+and+honey-roasted+licorice.">Herbological study on the medicinal effects of roasted licorice and honey-roasted licorice.</a> Yakushigaku Zasshi. 50 (1), 38-45 (2015).</li><li>Lim, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Licorice+pretreatment+protects+against+brain+damage+induced+by+middle+cerebral+artery+occlusion+in+mice.">Licorice pretreatment protects against brain damage induced by middle cerebral artery occlusion in mice.</a> Journal of Medicinal Food. 21 (5), 474-480 (2018).</li><li>Koizumi, J. Y., Nakazawa, T., Ooneda, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+studies+of+ischemic+brain+edema.">Experimental studies of ischemic brain edema.</a> Nosotchu. 8 (1), 1-8 (1986).</li><li>Fischer, A. H., Jacobson, K. A., Rose, J., Zeller, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hematoxylin+and+eosin+staining+of+tissue+and+cell+sections.">Hematoxylin and eosin staining of tissue and cell sections.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2008, (2008).</li><li>Zhu, Y., Liu, F., Zou, X., Torbey, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+unbiased+estimation+of+neuronal+number+in+the+rat+hippocampus+with+different+staining+methods.">Comparison of unbiased estimation of neuronal number in the rat hippocampus with different staining methods.</a> Journal of Neuroscience Methods. 254, 73-79 (2005).</li><li>Alberts, M. J., Ovbiagele, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+strategies+for+ischemic+stroke+prevention:+role+of+multimodal+combination+therapies.">Current strategies for ischemic stroke prevention: role of multimodal combination therapies.</a> Journal of Neurology. 254 (10), 1414-1426 (2007).</li><li>Pinto, A., Tuttolomondo, A., Di Raimondo, D., Fernandez, P., Licata, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebrovascular+risk+factors+and+clinical+classification+of+strokes.">Cerebrovascular risk factors and clinical classification of strokes.</a> Seminars in Vascular Medicine. 4 (3), 287-303 (2004).</li><li>Barlow, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identifying+the+brain+regions+associated+with+acute+spasticity+in+patients+diagnosed+with+an+ischemic+stroke.">Identifying the brain regions associated with acute spasticity in patients diagnosed with an ischemic stroke.</a> Somatosensory and Motor Research. 33 (2), 1-8 (2016).</li><li>Roth, S., Liesz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stroke+research+at+the+crossroads+-+where+are+we+heading.">Stroke research at the crossroads - where are we heading.</a> Swiss Medical Weekly. 146, 14329 (2016).</li><li>Feuerstein, G. Z., Wang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+stroke.">Animal models of stroke.</a> Molecular Medicine Today. 6 (3), 133-135 (2000).</li><li>Herson, P. S., Traystman, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+stroke:+translational+potential+at+present+and+in+2050.">Animal models of stroke: translational potential at present and in 2050.</a> Future Neurology. 9 (5), 541-551 (2014).</li><li>Kumar, A., Gupta Aakriti, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+on+animal+models+of+stroke:+an+update.">A review on animal models of stroke: an update.</a> Brain Research Bulletin. 122, 35-44 (2016).</li><li>O'Collins, V. E., Donnan, G. A., Howells, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=History+of+animal+models+of+stroke.">History of animal models of stroke.</a> International Journal of Stroke. 6 (1), 77-78 (2011).</li><li>Ji, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioactive+constituents+of+Glycyrrhiza+uralensis+(licorice):+discovery+of+the+effective+components+of+a+traditional+herbal+medicine.">Bioactive constituents of Glycyrrhiza uralensis (licorice): discovery of the effective components of a traditional herbal medicine.</a> Journal of Natural Products. 79 (2), 281-292 (2016).</li><li>Yang, R., Wang, L. Q., Yuan, B. C., Liu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+pharmacological+activities+of+licorice.">The pharmacological activities of licorice.</a> Planta Medica. 81 (18), 1654-1669 (2015).</li><li>Yang, R., Yuan, B. C., Ma, Y. S., Zhou, S., Liu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+anti-inflammatory+activity+of+licorice,+a+widely+used+Chinese+herb.">The anti-inflammatory activity of licorice, a widely used Chinese herb.</a> Pharmaceutical Biology. 55 (1), 5-18 (2017).</li></ol>

עם השכיחות הגוברת של מחלות מטבוליות כגון יתר לחץ דם כרוני, סוכרת, היפרליפידמיה, המהווים גורמי סיכון עיקריים עבור קו, קו מניעה וטיפול הפכו אזור חשוב של המחקר הרפואי12, 13. לגירעונות שפה ותנועה לאחר שבץ חזק נמצאים בקורלציה עם מידת הנזק במוח רקמות14 , ?...

נזק מוחי שנגרם על ידי איסכמיה פגיעה reperfusion של זרימת הדם במוח מוביל למותו של תאי עצב ואובדן רקמת המוח. סוג זה של נזק מוחי ממשיך לגדול עם השכיחות הגוברת של מחלות כשאבדן עקב ההתפשטות של מחלות מטבוליות כגון השמנת יתר, לחץ דם גבוה, סוכרת1,2. המספר המוחלט בחולים קשישים עם קו גדל באופן דרמטי ברחבי העולם, העלות של טיפול רפואי עבור חולים אלו, מי הם לעתים קרובות נותר עם מוגבלות לטווח ארוך, הוא נטל ציבורי גדול. לכן, לקויות משניות צריך אפשרות לפתור כמה שיותר להפחית את הנטל הכלכלי1,2.
מכרסמים הדגם הנפוץ ביותר של אוטם מוחי הוא הדגם סגר (MCAO) בעורק האמצעי (MCA), שבו MCA הוא occluded עם מצופה סיליקון כירורגי הפתולוגיים פילמנט לחסום את זרימת הדם, גורם שבץ איסכמי3, 4. שימוש נימה של החומר סגר מאפשר השליטה של קביעות וזמן סגר על-ידי מניפולציה משך ההוספה פילמנט אינטרה-luminal.
מחקרים קודמים הראו כי גם כאשר נעשה שימוש באותו דגם MCAO מכרסם, הנפח הכולל של אוטם מוחי משתנה בין ניסויים, גורם הפארמצבטית נמוכה של המחקרים. כדי לשפר את הפארמצבטית, אנחנו אופטימיזציה העובי של המטבעות פילמנט המשמשים את הניסוי. התוצאות של מחקר ראשוני של תקופת איסכמי מוחי, אוטם המושרה הראה כי תקופה איסכמי יותר מ 60 דקות מותר האזור הנפחי של נזק לרקמת המוח ניתן להקליט ולצפות במעשיהם לכמת.
בסיס Glycyrrhizae et Rhizoma (גר), הידוע גם בשם שוש מורכב של שורשים מיובשים, המלבלבים של שוש uralensis , קרח ג. זה שימש ברפואה המסורתית סינית וקוריאנית למטרות שונות, כולל תוסף מזון, מסיבות בריאותיות5,6,7.
ב הקודם לימוד8, טיפול קדם עם תמצית מתנול גרם (GRex) הראה אפקט אנטי-מוות בעכברים MCAO, לרבות מניעה משמעותי של הירידה בביטוי חלבונים של B-cell לימפומה 2 (Bcl-2) Bcl גדולים במיוחד (Bcl-xL). מחקר זה נערך כדי לשפר את הפארמצבטית של דגם העכבר MCAO המקובלת על-ידי הערכת היעילות שלה בקביעת אם לאוטם שלאחר הטיפול עם GRex ביעילות מופחת לאוטם האחסון ב- MCAO-induced נזק מוחי.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1416px;" width="1417">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:383px;">Glycyrrhizae Radix et Rhizoma</td>
			<td style="width:307px;">Gwangmyoung Pharmaceuticals Co., Korea</td>
			<td style="width:344px;"></td>
			<td style="width:383px;">Glycyrrhizae Radix et Rhizoma</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Qualitative filter paper</td>
			<td>Advantec</td>
			<td style="width:344px;">Filter paper No. 2</td>
			<td>Qualitative filter paper</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D8418-250ML</td>
			<td>Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Syringe filter (0.45 &#181;m)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>CLS431220</td>
			<td>Syringe filter (0.45 &#181;m)</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Stereo Microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>M50</td>
			<td>Stereo Microscope</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Stereo Microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>SMZ745</td>
			<td>Stereo Microscope</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Laser Doppler</td>
			<td>Moor Instrument</td>
			<td>moorVMS-LDF</td>
			<td>Laser Doppler</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Anesthesia Tabletop Bracket with N2O&#38;O2 Flowmeter System</td>
			<td>Harvard Appratus</td>
			<td>34-1352</td>
			<td>Anesthesia Tabletop Bracket with N2O&#38;O2 Flowmeter System</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Homeothermic Monitoring System</td>
			<td>Harvard Appratus</td>
			<td>55-7020</td>
			<td>Homeothermic Monitoring System</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Digital Camera</td>
			<td>Canon</td>
			<td>Eos-M2</td>
			<td>Digital Camera</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Cryostat</td>
			<td>Leica</td>
			<td>CM3050S</td>
			<td>Cryostat</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Microscope</td>
			<td>Carl Zeiss</td>
			<td>Zeiss Axio</td>
			<td>Microscope</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Data Analysis</td>
			<td>Systat Software Inc.</td>
			<td>SigmaPlot version 12</td>
			<td>Data Analysis</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Data Analysis</td>
			<td>NIH Image</td>
			<td>ImageJ</td>
			<td>Data Analysis</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Mouse diet</td>
			<td>Doo Yeol Biotech</td>
			<td>Standard rodent chow</td>
			<td>Mouse diet</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Isoflurane</td>
			<td>JOONGWAE</td>
			<td>A02104781</td>
			<td>Isoflurane</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Isoflurane</td>
			<td>TROIKAA</td>
			<td>ISOTROY 100</td>
			<td>Isoflurane</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Silk suture (4-0 Black silk)&#160;</td>
			<td>AILEE</td>
			<td>SK47510</td>
			<td>Silk suture (4-0 Black silk)&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Silk suture (3-0 White silk)&#160;</td>
			<td>Baekjae</td>
			<td>57</td>
			<td>Silk suture (3-0 White silk)&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Nylon suture (8-0 monofilament)&#160;</td>
			<td>AILEE</td>
			<td>NB825</td>
			<td>Nylon suture (8-0 monofilament)&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T8877-25G</td>
			<td>2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC)</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Formalin (Formaldehyde solution)</td>
			<td>JUNSEI</td>
			<td>69360-1263 20KG</td>
			<td>Formalin (Formaldehyde solution)</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Hematoxylin (Harris Hematoxylin)</td>
			<td>YD Diagnostics</td>
			<td>EasyStain</td>
			<td>Hematoxylin (Harris Hematoxylin)</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Eosin (1% Eosin Y Solution)</td>
			<td>MUTO PURE CHEMICALS</td>
			<td>3200-2</td>
			<td>Eosin (1% Eosin Y Solution)</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Cresyl violet (acetate)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C5042-10G</td>
			<td>Cresyl violet (acetate)</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Paraformaldehyde&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:344px;">P6148-1KG</td>
			<td>Paraformaldehyde&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Sucrose</td>
			<td>JUNSEI</td>
			<td>31365-0350 1KG</td>
			<td>Sucrose</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Optimum cutting temperature (OCT) compound</td>
			<td>Scigen</td>
			<td>4583</td>
			<td>Optimum cutting temperature (OCT) compound</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Disecting Knife</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>10055-12</td>
			<td>Disecting Knife</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">#4 Forcep</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11241-30</td>
			<td>#4 Forcep</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">#5 Forcep</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11254-20</td>
			<td>#5 Forcep</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">#6 Forcep</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11260-20</td>
			<td>#6 Forcep</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">#7 Fine Forcep</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11274-20</td>
			<td>#7 Fine Forcep</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Surgical Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14001-12</td>
			<td>Surgical Scissors</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Extra Fine Bonn Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14084-08</td>
			<td>Extra Fine Bonn Scissors</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Moria Pascheff-Wolff Spring Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15371-92</td>
			<td>Moria Pascheff-Wolff Spring Scissors</td>
		</tr>
		<tr height="31">
			<td height="31" style="height:31px;">Vessel Dilating Forcep</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>18153-11</td>
			<td>Vessel Dilating Forcep</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessing neuroprotective effects of glycyrrhizae radix et rhizoma extract using a transient middle cerebral artery occlusion mouse model

איסכמיה ואחריו פגיעה reperfusion של זרימת דם מוחי לאחר שבץ מוביל למותו של תאי עצב ואובדן רקמת המוח. המודל הנפוץ ביותר בעלי חיים לימוד קו הוא הדגם סגר (MCAO) בעורק האמצעי. מחקרים קודמים דיווחו בגדלים שונים לאוטם גם כאשר בני אותו מין חיה ניסיוני שימש בתנאים MCAO דומה. לכן, פיתחנו שיטה ניסיונית משופרת כדי לטפל אי-התאמה זו. עכברים היו נתונים MCAO שימוש נימה של החומר סגר לחקות תנאי קו אנושי, עובי נימה אופטימלי להקים עוד נפח אוטם לשחזור. עכברים שטופלו מתנול תמצית של בסיס Glycyrrhizae et קנה שורש (GRex) בעקבות שבץ אינדוקציה הראה אמצעי אחסון אוטם הכולל ירד משמעותית של מספר רב יותר של הישרדות התאים ביחס קבוצת הביקורת שלא טופלו. זה שונה נסיוני בהצלחה והפגינו reproducibly על השפעה מיטיבה של GRex על שבץ איסכמי.

בקבוצה המופעלים באמצעות העמדת פנים רגיל, אין לאוטם מוחי הוא ציין ואילו בקבוצת הביקורת, נצפית מגוון רחב יחסית של אזורים פגועים. בעכברים מנוהל 300 מ"ג/ק"ג GRex בקבוצה מודל MCAO, ירידה משמעותית מבחינה סטטיסטית באזור הפגוע הוא ציין (איור 2).
<p class="jove_content" fo:keep-together.wit...

Watch this Scientific Journal Video about Assessing Neuroprotective Effects of Glycyrrhizae Radix et Rhizoma Extract Using a Transient Middle Cerebral Artery Occlusion Mouse Model at JoVE.com

Assessing Neuroprotective Effects of Glycyrrhizae Radix et Rhizoma Extract Using a Transient Middle Cerebral Artery Occlusion Mouse Model

במחקר זה, נוכל לשנות שיטה ניסיונית קיימת כדי להשיג תוצאות לשחזור יותר, על-ידי יצירת מודל העכבר סגר (MCAO) של עורק המוח התיכון. אוראלי מינהל Glycyrrhizae בסיס et תמצית מתנול קנה שורש (גר) (GRex), בעקבות שבץ אינדוקציה, ירד באופן משמעותי אוטם סה כ נפח ביחס קבוצת הביקורת שלא טופלו.

הערכת אפקטים Neuroprotective של בסיס Glycyrrhizae et Rhizoma לחלץ באמצעות מודל העכבר חסימה של עורק המוח התיכון ארעית

Ischemia followed by reperfusion of cerebral blood flow after a stroke leads to the death of nerve cells and loss of brain tissue. The most commonly used ...

שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח במדעי המוח ובתחומי המחקר המסורתיים של רפואת הפה על הקרנה של תרכובות טבעיות נוירו-פרוטקטיביות הרלוונטיות למודל. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא כי producibility גבוה יותר של נפח הזיהום הוא בהתאם מינון תזמון איסכמי. הדגמה חזותית של שיטה זו היא קריטית כפי שהוא אופייני להכניס יישום דק מאוד לתוך העורק המקורי, המוח הקטן באמצע באמצעות מיקרוסקופ סטרילי.הדגמת ההליך תהיה Se-Eun לי, תלמיד בית ספר בכיתה לומד במעבדה שלי. כדי להכין את תמצית Glycyrrhizae Radix et Rhizome, או GRex, תחילה להוסיף 200 גרם של Glycyrrhizae Radix et Rhizome, או GR, לשני ליטרים של מתנול עבור דגירה של חמישה ימים בטמפרטורת החדר. בסוף הדגירה, מסננים את הפתרון באמצעות נייר מסנן בעובי 0.26 מ"מ עם גודל נקבובית של חמישה מיקרומטר.הוסף את שאריות GR לליטר אחד של מתנול טרי, וסנן את הפתרון שוב. שלב את שני filtrates, ומאמץ אותם דרך פיסת נייר סינון חדשה. לאחר מכן לרכז את התמצית תחת ואקום לפני הקפאה ייבוש כדי לייצר GRex.כדי להכין את GRex לניהול, להמיס את המוצר מיובש בהקפאה ב dimethylsulfoxide, ולדלל את התערובת עם 0.9% מלוחים פיזיולוגיים. לאחר מכן סנן את הפתרון באמצעות מסנן מזרק 0.45 מיקרומטר, ולהתאים את הריכוז הסופי של DMSO לפחות מ 5%כדי להגדיר מודל העורק המוחי באמצע העכבר, או MCAO, לאשר חוסר תגובה לגירוי הזנב ב 22-25 גרם זכר C57BL/6 עכבר, ולמקם את העכבר על 36.5 מעלות צלזיוס טמפרטורת הגוף מחזיק שמיכה, מחובר לאחר הסרת כל השיער מן החזה והצוואר של העכבר על ידי גילוח קרם depilatory, מניחים את העכבר תחת stereomicroscope ולעשות חתך בעור שני סנטימטרים במרכז הצוואר.מבודדים בזהירות את העורק הראשי המשותף השמאלי, את העורק הראשי החיצוני ואת ענף העורק הראשי הפנימי מרקמות החיבור שמסביב, ולהשתמש בתפר משי 4.0 כדי לקשור את העורק הראשי החיצוני ואת העורק הראשי המשותף עם קשר חצי תקלה כדי לחסום באופן זמני את זרימת הדם לתוך העורק הראשי הפנימי. הכנס 0.1 עד 0.12 מילימטר עבה 11 מילימטר ארוך סיליקון מצופה 8.0-monofilament 4.0-תפר משי דרך העורק הראשי הפנימי למקור של עורק המוח באמצע שמאל, ולהשתמש מד זרימה דופלר לייזר כדי למדוד את הירידה עורק זרימת הדם המוחית יחסית. לתקן את התסיסה מוכנס לכלי הדם במשך שעתיים בעוד העורק המוחי הוא occluded.בסוף תקופת ההסחה, בזהירות למשוך את התסיסה כדי לשחזר את זרימת הדם במשך 22 שעות של רפרפוזיה. ולהשתמש בתפרים משי 3.0 כדי לתפור את העור בחמישה מקומות עם שני קשרים חצי תקלות. ואז להחזיר את העכבר לכלוב שלה להתאוששות הרדמה.שעה לאחר תום ההתהשלכות, יש לתת 300 מיליגרם לקילוגרם משקל גוף GRex לבעלי החיים הניסיוניים, רק באמצעות גבאז' אוראלי. 24 שעות לאחר תחילת MCAO, לעשות חתך בעור האמצעי של הראש של כל חיה ניסיונית, ולשבור את העצמותקודיות עם מטלפים זוויתיים, תוך קילוף את מאטר דורה. מבודדים בזהירות את המוח מהגולגולת, ולהשתמש במטריצת מוח של עכבר כדי לחתוך את הרקמה המגולקת לחלקים בעובי של מילימטר אחד.הכתם את המקטעים במשך 17 דקות בפתרון 2%TTC, על פי פרוטוקולים סטנדרטיים. ולתקן את הסעיפים ב 10% פורמלין לפחות 2 שעות לפני הדמיה הדגימות עם מצלמה דיגיטלית. לאחר מכן לנתח ולמת את האזור אוטם מוחי של כל קטע באמצעות ImageJ.בנקודת הזמן הניסיונית המתאימה שלאחר מקאו, תפלל כל חיה ניסיונית המתת דם באופן טרנסקרדיאלי עם 10 מיליליטר של PBS, ואחריו 10 מיליליטר של 4% paraformaldehyde. לאחר בידוד המוח כפי שהוכח רק, לטבול את האיברים שנקטפו 10 מיליליטר של 30% סוכרוז לילה. למחרת בבוקר, להטמיע את דגימות רקמת המוח בתרכובת טמפרטורת חיתוך אופטימלית.וחותכים את הרקמות לחתיכות בעובי 15 מיקרומטר על צירוסטאט. הר את החלקים על מגלשות זכוכית וטביע את החלקים ב 80%אתנול במשך דקה אחת. עבור כתמי H&E, סמן את הדגימות בתת פתרון Hematoxylin במשך 5 דקות, ואחריו שני מטבלים ב 1% אלכוהול חומצה.לאחר מכן, לטבול את השקופיות בתווית ליתיום קרבונט רווי במשך 30 שניות, ואחריו לשטוף 30 שניות במי ברז, ו 30 שניות של כתם נגדי עם פתרון Eosin. הסר את תסכול האאוסין העודף עם שטיפת מי ברז, וייבש את המגלשות עם טבילות עולות של דקה אחת ב-95 ואז 100%אתנול. לאחר מכן, airdry את השקופיות, לנקות אותם קסילן לפחות 10 דקות, ולהרים את כיסויים עם מדיום הרכבה.עבור כתמים סגולים cresyl, למקם את שקופיות 80%אתנול מטופלים על שקופית חם במשך שעה אחת לפחות, ואחריו טבילה 50% אתנול מדולל עם כלורופורם לילה. למחרת בבוקר, להכתים את המגלשות עם 0.1% cresyl סגול במשך 10 דקות בתנור יבש 40 מעלות צלזיוס, ואחריו התייבשות ב 95% אתנול במשך 30 דקות, ושתי חמש דקות 100% טבילות אתנול. לאחר מכן, לנקות את השקופיות שתי טבילות קסילן חמש דקות, ואחריו ייבוש אוויר.לאחר מכן תן את השקופיות עם מדיום הרכבה להדמיה על-ידי מיקרוסקופיה קלה. בקבוצות נורמליות המופעלות על ידי תרמית, לא נצפתה אוטם מוחי;ואילו בשליטה, בעלי חיים MCAO מטופלים, מגוון רחב יחסית של אזורים פגומים נצפתה. בעכברי מודל שטופלו ב-GRex ב-300 מיליגרם לקילוגרם, נצפית ירידה מובהקת סטטיסטית ברקמה הפגועה.ניתוח היסטולוגי של קטעי רקמות מוכתמות H&E וקרסיל סגול מספק אינדקס של הישרדות תאים. ואכן, ה-H&E ו-cresyl Violet מכתימים את הלחץ באופן משמעותי בשליטה, קבוצת MCAO לא מטופלת ביחס לקבוצה הנורמלית המופעלת על ידי זיופים. בעלי החיים שטופלו ב-GRex, לעומת זאת, מפגינים שלמות היסטולוגית גדולה יותר, מה שמרמז על מוות תאי פחות עצבי מאשר הקבוצות המופקדות, הלא מטופלות והתפעול המזויף, מה שמרמז על השפעה נוירו-פרוטקטיבית חזקה של התמצית נגד פגיעה מוחית הנגרמת על ידי כתוצאה מזיכומיה.בעת ניסיון הליך זה, חשוב לזכור לפקח על זרימת הדם המוחית היחסית במהלך תקופה זו. ומוליכי תהליכים בזהירות רבה כדי למזער את הנזקים לשכבות ה אנדותל של

Research

JoVE Journal

Medicine

Modeling Stroke in Mice - Middle Cerebral Artery Occlusion with the Filament Model

דוגמנות שבץ בעכברים - העורקים התיכון ספיגה מוחין עם דגם נימה

Stroke is among the most frequent causes of death and adult disability, especially in highly developed countries. However, treatment options to date are ...

Mouse Model of Middle Cerebral Artery Occlusion

עכבר דגם ספיגה התיכון עורק מוחי

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the ...

Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Mice

Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Mice

Intraluminal העורקים התיכון מוחין ספיגה (MCAO) מודל שבץ איסכמי עם הדרכה דופלר Flowmetry לייזר עכברים

Stroke is the third leading cause of death and the leading cause of disability in the world, with an estimated cost of near $70 billion 
in the United ...

The Application Of Permanent Middle Cerebral Artery Ligation in the Mouse

היישום של קשירת העורקים התיכון הקבע מוחין העכבר

Focal cerebral ischemia is among the most common type of stroke seen in patients. Due to the clinical significance there has been a prolonged effort to ...

Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Rat

אנדותלין-1 דגם מושרה מזרח מוחות עורקים ספיגים לשבץ איסכמי עם הדרכת Flowmetry ליזר דופלר בעכברוש

Stroke is the number one cause of disability and third leading cause of death in the world, costing an estimated $70 billion in the United States in ...

Utilizing a Cranial Window to Visualize the Middle Cerebral Artery During Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion

ניצול חלון גולגולת לדמיין עורק המוח האמצעי במהלך ספיג אנדותלין-1 מושרה מזרח מוחות עורקים

Creation of a cranial window is a method that allows direct visualization of structures on the cortical surface of the brain1-3. This technique can be ...

Optimized System for Cerebral Perfusion Monitoring in the Rat Stroke Model of Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion

מערכת אופטימלית לניטור זלוף מוחות במודל שבץ העכברוש של חסימת עורק מוח האמצעית intraluminal

The translational potential of pre-clinical stroke research depends on the accuracy of experimental modeling. Cerebral perfusion monitoring in animal ...

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

עורקי תסחיפים התיכון מוחין ספיגה (MCAO) לשבץ איסכמי עם קרישי דם הומולוגיים בחולדות

Clinically, thrombolytic therapy with use of recombinant tissue plasminogen activator (tPA) remains the most effective treatment for acute ischemic ...

Quantification of Neurovascular Protection Following Repetitive Hypoxic Preconditioning and Transient Middle Cerebral Artery Occlusion in Mice

כימות של הגנת עצבים וכלי דם בעקבות חסימת עורק חוזר חוסר חמצן אכשור קד וחלוף התיכון מוחין של עכברים

Experimental animal models of stroke are invaluable tools for understanding stroke pathology and developing more effective treatment strategies. A 2 week ...

Performing Permanent Distal Middle Cerebral with Common Carotid Artery Occlusion in Aged Rats to Study Cortical Ischemia with Sustained Disability

Performing מוחות תיכונים דיסטלי קבוע עם ספיגה עורקת Common הראש אצל חולדות בנים לחקר קורטיקלי איסכמיה עם נכות קבועה זה

Stroke typically occurs in elderly people with a range of comorbidities including carotid (or other arterial) atherosclerosis, high blood pressure, ...