Name: assessing neuroprotective effects of glycyrrhizae radix et rhizoma extract using a transient middle cerebral artery occlusion mouse model
Uploaded: 2018-12-09T13:00:00
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適用されません。

動物を含むすべてのプロシージャは、釜山国立大学 (承認番号、PNU-2016-1087) の倫理委員会によって承認されました。本研究のグラフィカルな概要は図 1に示します。
1. 準備と GRex の管理
注: この研究で使用される GR は製薬会社から購入しました。
<ol><li>2,000 mL のメタノールで GR の 200 g を置き、室温 (25 ° C) で 5 日間インキュ?...

<ol>
	<li>Bejot, Y., Delpont, B., Giroud, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rising+stroke+incidence+in+young+adults:+more+epidemiological+evidence,+more+questions+to+be+answered.">Rising stroke incidence in young adults: more epidemiological evidence, more questions to be answered.</a> Journal of the American Heart Association. 11 (5), (2016).</li><li>Hadadha, M., Vakili, A., Bandegi, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+the+inhibition+of+hydrogen+sulfide+synthesis+on+ischemic+injury+and+oxidative+stress+biomarkers+in+a+transient+model+of+focal+cerebral+ischemia+in+rats.">Effect of the inhibition of hydrogen sulfide synthesis on ischemic injury and oxidative stress biomarkers in a transient model of focal cerebral ischemia in rats.</a> Journal of Stroke and Cerebrovascular Diseases. 24 (12), 2676-2684 (2015).</li><li>Durukan, A., Tatlisumak, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+ischemic+stroke.">Animal models of ischemic stroke.</a> Article in Handbook of Clinical Neurology. 92, 43-66 (2009).</li><li>Kim, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+Models+of+Stroke.">Animal Models of Stroke.</a> Brain and Neurorehabilitation. 4 (1), 1-11 (2011).</li><li>Rizzato, G., Scalabrin, E., Radaelli, M., Capodaglio, G., Piccolo, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+exploration+of+licorice+metabolome.">A new exploration of licorice metabolome.</a> Food Chemistry. 221, 959-968 (2017).</li><li>Zhu, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+determination+of+flavonoids+in+licorice+and+comparison+of+three+licorice+species.">Rapid determination of flavonoids in licorice and comparison of three licorice species.</a> Journal of Separation Science. 39 (3), 473-482 (2016).</li><li>Ota, M., Mikage, M., Cai, S. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Herbological+study+on+the+medicinal+effects+of+roasted+licorice+and+honey-roasted+licorice.">Herbological study on the medicinal effects of roasted licorice and honey-roasted licorice.</a> Yakushigaku Zasshi. 50 (1), 38-45 (2015).</li><li>Lim, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Licorice+pretreatment+protects+against+brain+damage+induced+by+middle+cerebral+artery+occlusion+in+mice.">Licorice pretreatment protects against brain damage induced by middle cerebral artery occlusion in mice.</a> Journal of Medicinal Food. 21 (5), 474-480 (2018).</li><li>Koizumi, J. Y., Nakazawa, T., Ooneda, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+studies+of+ischemic+brain+edema.">Experimental studies of ischemic brain edema.</a> Nosotchu. 8 (1), 1-8 (1986).</li><li>Fischer, A. H., Jacobson, K. A., Rose, J., Zeller, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hematoxylin+and+eosin+staining+of+tissue+and+cell+sections.">Hematoxylin and eosin staining of tissue and cell sections.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2008, (2008).</li><li>Zhu, Y., Liu, F., Zou, X., Torbey, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+unbiased+estimation+of+neuronal+number+in+the+rat+hippocampus+with+different+staining+methods.">Comparison of unbiased estimation of neuronal number in the rat hippocampus with different staining methods.</a> Journal of Neuroscience Methods. 254, 73-79 (2005).</li><li>Alberts, M. J., Ovbiagele, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+strategies+for+ischemic+stroke+prevention:+role+of+multimodal+combination+therapies.">Current strategies for ischemic stroke prevention: role of multimodal combination therapies.</a> Journal of Neurology. 254 (10), 1414-1426 (2007).</li><li>Pinto, A., Tuttolomondo, A., Di Raimondo, D., Fernandez, P., Licata, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebrovascular+risk+factors+and+clinical+classification+of+strokes.">Cerebrovascular risk factors and clinical classification of strokes.</a> Seminars in Vascular Medicine. 4 (3), 287-303 (2004).</li><li>Barlow, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identifying+the+brain+regions+associated+with+acute+spasticity+in+patients+diagnosed+with+an+ischemic+stroke.">Identifying the brain regions associated with acute spasticity in patients diagnosed with an ischemic stroke.</a> Somatosensory and Motor Research. 33 (2), 1-8 (2016).</li><li>Roth, S., Liesz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stroke+research+at+the+crossroads+-+where+are+we+heading.">Stroke research at the crossroads - where are we heading.</a> Swiss Medical Weekly. 146, 14329 (2016).</li><li>Feuerstein, G. Z., Wang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+stroke.">Animal models of stroke.</a> Molecular Medicine Today. 6 (3), 133-135 (2000).</li><li>Herson, P. S., Traystman, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+stroke:+translational+potential+at+present+and+in+2050.">Animal models of stroke: translational potential at present and in 2050.</a> Future Neurology. 9 (5), 541-551 (2014).</li><li>Kumar, A., Gupta Aakriti, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+on+animal+models+of+stroke:+an+update.">A review on animal models of stroke: an update.</a> Brain Research Bulletin. 122, 35-44 (2016).</li><li>O'Collins, V. E., Donnan, G. A., Howells, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=History+of+animal+models+of+stroke.">History of animal models of stroke.</a> International Journal of Stroke. 6 (1), 77-78 (2011).</li><li>Ji, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioactive+constituents+of+Glycyrrhiza+uralensis+(licorice):+discovery+of+the+effective+components+of+a+traditional+herbal+medicine.">Bioactive constituents of Glycyrrhiza uralensis (licorice): discovery of the effective components of a traditional herbal medicine.</a> Journal of Natural Products. 79 (2), 281-292 (2016).</li><li>Yang, R., Wang, L. Q., Yuan, B. C., Liu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+pharmacological+activities+of+licorice.">The pharmacological activities of licorice.</a> Planta Medica. 81 (18), 1654-1669 (2015).</li><li>Yang, R., Yuan, B. C., Ma, Y. S., Zhou, S., Liu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+anti-inflammatory+activity+of+licorice,+a+widely+used+Chinese+herb.">The anti-inflammatory activity of licorice, a widely used Chinese herb.</a> Pharmaceutical Biology. 55 (1), 5-18 (2017).</li></ol>

脳卒中の主な危険因子は、慢性高血圧、糖尿病、高脂血症などの代謝性疾患の有病率増加、脳卒中の予防と治療医学研究12,の重要なエリアとなっています。13。 言語と脳卒中後の運動障害は脳の組織14と貧しい生活の質は、患者とその家族の15のへの損傷の程度と相関します。薬物治療の有効性を研究する人間の?...

脳損傷による虚血と再灌流脳血流は、神経細胞の死と脳組織の喪失に します。このタイプの脳損傷は、肥満、高血圧、糖尿病1,2など代謝性疾患の普及により脳血管疾患の増加率で増加を続けています。高齢脳卒中患者の絶対数は世界中で劇的に増加、長期障害残っている多くの場合、これらの患者のための医療費は大きな社会負担。したがって、経済的負担1,2を減らすために可能な限り、二次障害は軽減する必要があります。
脳梗塞の最も一般的に使用される齧歯動物モデルは、MCA が妨げられている血流をブロックするシリコン被覆手術縫合糸と虚血性脳卒中の3、の原因と中大脳動脈 (MCA) 閉塞 (MCAO) モデル4. 閉塞材料のため閉塞時間と永続性の制御内の内腔フィラメント挿入の期間を操作することによってフィラメントを使用しています。
以前の研究では、同じ齧歯類 MCAO モデルを使用するときにも脳梗塞の総量は異なります実験、研究の低再現性の原因を示しています。再現性を高めるためには、実験で使用されるフィラメント ミントの厚さを最適化されています。脳虚血期間 60 分よりも虚血期間が体積領域を許可されることを示した誘導の梗塞の予備的研究の結果では、脳組織観察し定量化を破損しています。
芩 et 大黄 (GR)、として知られている甘草乾燥した根やカンゾウ属の根茎から成っている、 G. glabra 。それは、食品添加物や医薬5,6,7を含む様々 な目的のため中国や韓国の伝統医学で使用されています。
以前研究8、MCAO マウスにおける抗アポトーシス効果を示したグラム メタノール抽出 (GRex) の前処理 (Bcl 2) B 細胞リンパ腫 2 の蛋白質発現の減少の重要な予防と Bcl 特大 (Bcl-xl) を含みます。GRex と梗塞後の治療効果的に削減 MCAO による脳損傷で梗塞ボリュームを判断する際の効率を評価することによって従来の MCAO マウス モデルの再現性を改善するために本研究を行った。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1416px;" width="1417">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:383px;">Glycyrrhizae Radix et Rhizoma</td>
			<td style="width:307px;">Gwangmyoung Pharmaceuticals Co., Korea</td>
			<td style="width:344px;"></td>
			<td style="width:383px;">Glycyrrhizae Radix et Rhizoma</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Qualitative filter paper</td>
			<td>Advantec</td>
			<td style="width:344px;">Filter paper No. 2</td>
			<td>Qualitative filter paper</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D8418-250ML</td>
			<td>Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Syringe filter (0.45 &#181;m)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>CLS431220</td>
			<td>Syringe filter (0.45 &#181;m)</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Stereo Microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>M50</td>
			<td>Stereo Microscope</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Stereo Microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>SMZ745</td>
			<td>Stereo Microscope</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Laser Doppler</td>
			<td>Moor Instrument</td>
			<td>moorVMS-LDF</td>
			<td>Laser Doppler</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Anesthesia Tabletop Bracket with N2O&#38;O2 Flowmeter System</td>
			<td>Harvard Appratus</td>
			<td>34-1352</td>
			<td>Anesthesia Tabletop Bracket with N2O&#38;O2 Flowmeter System</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Homeothermic Monitoring System</td>
			<td>Harvard Appratus</td>
			<td>55-7020</td>
			<td>Homeothermic Monitoring System</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Digital Camera</td>
			<td>Canon</td>
			<td>Eos-M2</td>
			<td>Digital Camera</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Cryostat</td>
			<td>Leica</td>
			<td>CM3050S</td>
			<td>Cryostat</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Microscope</td>
			<td>Carl Zeiss</td>
			<td>Zeiss Axio</td>
			<td>Microscope</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Data Analysis</td>
			<td>Systat Software Inc.</td>
			<td>SigmaPlot version 12</td>
			<td>Data Analysis</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Data Analysis</td>
			<td>NIH Image</td>
			<td>ImageJ</td>
			<td>Data Analysis</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Mouse diet</td>
			<td>Doo Yeol Biotech</td>
			<td>Standard rodent chow</td>
			<td>Mouse diet</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Isoflurane</td>
			<td>JOONGWAE</td>
			<td>A02104781</td>
			<td>Isoflurane</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Isoflurane</td>
			<td>TROIKAA</td>
			<td>ISOTROY 100</td>
			<td>Isoflurane</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Silk suture (4-0 Black silk)&#160;</td>
			<td>AILEE</td>
			<td>SK47510</td>
			<td>Silk suture (4-0 Black silk)&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Silk suture (3-0 White silk)&#160;</td>
			<td>Baekjae</td>
			<td>57</td>
			<td>Silk suture (3-0 White silk)&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Nylon suture (8-0 monofilament)&#160;</td>
			<td>AILEE</td>
			<td>NB825</td>
			<td>Nylon suture (8-0 monofilament)&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T8877-25G</td>
			<td>2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC)</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Formalin (Formaldehyde solution)</td>
			<td>JUNSEI</td>
			<td>69360-1263 20KG</td>
			<td>Formalin (Formaldehyde solution)</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Hematoxylin (Harris Hematoxylin)</td>
			<td>YD Diagnostics</td>
			<td>EasyStain</td>
			<td>Hematoxylin (Harris Hematoxylin)</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Eosin (1% Eosin Y Solution)</td>
			<td>MUTO PURE CHEMICALS</td>
			<td>3200-2</td>
			<td>Eosin (1% Eosin Y Solution)</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Cresyl violet (acetate)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C5042-10G</td>
			<td>Cresyl violet (acetate)</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Paraformaldehyde&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:344px;">P6148-1KG</td>
			<td>Paraformaldehyde&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Sucrose</td>
			<td>JUNSEI</td>
			<td>31365-0350 1KG</td>
			<td>Sucrose</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Optimum cutting temperature (OCT) compound</td>
			<td>Scigen</td>
			<td>4583</td>
			<td>Optimum cutting temperature (OCT) compound</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Disecting Knife</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>10055-12</td>
			<td>Disecting Knife</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">#4 Forcep</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11241-30</td>
			<td>#4 Forcep</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">#5 Forcep</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11254-20</td>
			<td>#5 Forcep</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">#6 Forcep</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11260-20</td>
			<td>#6 Forcep</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">#7 Fine Forcep</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11274-20</td>
			<td>#7 Fine Forcep</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Surgical Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14001-12</td>
			<td>Surgical Scissors</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Extra Fine Bonn Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14084-08</td>
			<td>Extra Fine Bonn Scissors</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Moria Pascheff-Wolff Spring Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15371-92</td>
			<td>Moria Pascheff-Wolff Spring Scissors</td>
		</tr>
		<tr height="31">
			<td height="31" style="height:31px;">Vessel Dilating Forcep</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>18153-11</td>
			<td>Vessel Dilating Forcep</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessing neuroprotective effects of glycyrrhizae radix et rhizoma extract using a transient middle cerebral artery occlusion mouse model

虚血後, 脳卒中後の脳血流の再灌流は、神経細胞の死と脳組織の喪失に します。ストロークを研究するための最も一般的に使用される動物モデルは中大脳動脈閉塞 (MCAO) モデルです。前の研究は、同じ実験動物種を MCAO の同様の条件の下で使用した場合にも異なる梗塞サイズを報告しています。そこで、この矛盾に対処する実験手法。マウスは MCAO 人間ストローク条件を模倣する閉塞材料としてフィラメントを使用して, より多くの再現性梗塞容積を確立するフィラメントの厚みを最適化しました。メタノールを投与したマウス抽出芩 et 根茎 (GRex) ストローク誘導を示した大幅減少総梗塞ボリュームと対照群に比べ細胞の生存数の増加。これは実験的プロトコルを正しく修正し、再現性をもって虚血性脳卒中に GRex の有益な効果を発揮します。

Sham の通常のグループ被災地の比較的広い範囲を観察対照群で脳梗塞が認められなかった。マウス投与 300 mg/kg GRex MCAO モデル グループ、被災地域の統計的に有意な減少は (図 2) に観察されます。
H & E またはクレシル バイオレットと虚血性脳セクションを汚す、組織学的変化を調べた。H & E 染色する?...

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Assessing Neuroprotective Effects of Glycyrrhizae Radix et Rhizoma Extract Using a Transient Middle Cerebral Artery Occlusion Mouse Model

本研究では、中大脳動脈閉塞 (MCAO) マウス モデルを確立することでより再現性のある結果を取得する既存の手法を変更します。芩の経口投与ら減少した根茎 (GR) メタノール抽出物 (GRex)、次のストロークの誘導、対照群に比べ総梗塞ボリューム。

芩の神経保護効果を評価する et 大黄抽出一過性中大脳動脈閉塞モデルマウスを使用して

Ischemia followed by reperfusion of cerebral blood flow after a stroke leads to the death of nerve cells and loss of brain tissue. The most commonly used ...

この方法は、モデルに関連する神経保護天然化合物のスクリーニングに関する神経科学および伝統的な口腔医学研究分野における重要な質問に答えるのに役立ちます。この技術の主な利点は、感染量の高い容積が虚血タイミング用量に従う点である。この方法の視覚的なデモンストレーションは、滅菌顕微鏡を使用して原型の中小脳動脈に非常に薄い実装物を挿入することが典型的であるため、重要である。この手順のデモンストレーションは、私の研究室で勉強している学年のセウン・リーです。グリチルリザエ・ラディックス・エ・ライゾーム抽出物(GRex)を調製するには、まず200グラムのグリチルリザエ・ラディックス・エ・リゾーム(GR)を2リットルのメタノールに加え、室温で5日間インキュベーションします。インキュベーションの最後に、5マイクロメートルの細孔サイズの厚さ0.26ミリメートルのフィルターペーパーを通して溶液をひずみます。GR残渣を1リットルのフレッシュメタノールに加え、再度溶液を濾過します。2つの濾液を組み合わせ、新しいフィルターペーパーでそれらを歪めます。その後、凍結乾燥する前に真空下で抽出物を濃縮し、GRexを生成します。GRexを投与用に調製するには、凍結乾燥物をジメチルスルホキシドに溶解し、0.9%生理食塩水で混合物を希釈する。その後、0.45マイクロメートルのシリンジフィルターを介して溶液をフィルタリングし、 DMSOの最終濃度を5%未満に調整して、マウス中脳動脈閉塞モデル(MCAO)を設定するには、麻酔付き6週間齢の22〜25グラムの雄C57BL/6マウスで尾刺激に対する応答性の欠如を確認し、マウスを36.5度の摂氏体温保持毛布に置き、温度計に接続する。剃毛と脱毛クリームでマウスの胸と首からすべての毛髪を取り除いた後、マウスを実体顕微鏡下に置き、首の中央に2センチメートルの皮膚切開を行います。左の一般的な頸動脈、外耳頸動脈、および周囲の結合組織から内頸動脈の枝を慎重に分離し、4.0シルク縫合糸を使用して外頸動脈および一般的な頸動脈を半ヒッチ結び目でリゲートし、一時的に内部頸動脈への血流を遮断する。0.1~0.12ミリメートルの厚さ11ミリメートルのシリコーンコーティング8.0シルク縫合糸を左中大脳動脈の原点まで内側頸動脈を通して挿入し、レーザードップラー流量計を使用して相対的な脳血流動脈の減少を測定します。挿入したフィラメントを血管に2時間固定し、脳動脈が閉塞している間に固定します。閉塞期間の終わりに、フィラメントを慎重に引き出して、22時間の再灌流のために血流を回復させる。そして、3.0シルクの縫合糸を使用して、2つの半分のヒッチノットを持つ5つの場所で皮膚を縫合します。その後、麻酔薬の回復のためにそのケージにマウスを戻します。再灌流終了から1時間後、体重GRex1キログラム当たり300ミリグラムを実験動物に投与し、経口ギャージのみで投与する。MCAOの発症後24時間、各実験動物の頭部の中皮膚に切開を行い、硬膜を剥がしながら斜め鉗子で頭頂骨を折る。慎重に頭蓋骨から脳を分離し、マウスの脳マトリックスを使用して、切除された組織を1ミリメートルの厚い部分に切断します。標準プロトコルに従って、2%TTC溶液で17分間セクションを染色します。そして、デジタルカメラでサンプルをイメージングする前に、少なくとも2時間10%ホルマリンでセクションを修正します。次に、ImageJを用いて各セクションの脳梗塞領域を分析し、定量化します。MCAO後の適切な実験時点で、各安楽死実験動物を10ミリリットルのPBSで経本的に穿刺し、続いて10ミリリットルのパラホルムアルデヒドを10ミリリットルずつ穿刺する。ちょうど実証したように脳を単離した後、収穫した器官を一晩で30%スクロースの10ミリリットルに浸す。翌朝、脳組織サンプルを最適な切断温度化合物に埋め込む。そして、シロスタットの厚さ15マイクロメートルのセクションに組織をコロニラでスライスします。ガラススライド上のセクションをマウントし、1分間80%エタノールでセクションを水没させます。H&E染色の場合は、サンプルにヘマトキシリン溶液を5分間ラベルし、続いて1%の酸アルコールに2ディップを付けます。次に、飽和炭酸リチウム溶液にスライドを30秒間浸し、続いて水道水で30秒間洗浄し、エオシン溶液で30秒間の対染色を行います。余分なエオシン溶液を水道水洗浄で取り除き、95%エタノールで1分間の上昇浸漬でスライドを脱水します。次に、スライドをエアドライし、少なくとも10分間キシレンでクリアし、カバースリップを取り付け媒体で取り付けます。クレシルバイオレット染色の場合は、80%エタノール処理スライドをスライドウォーマーに少なくとも1時間置き、続いてクロロホルムで希釈した50%エタノールに浸漬します。翌朝、40度のドライオーブンで10分間0.1%クレシルバイオレットでスライドを染色し、続いて95%エタノールで30分間脱水し、2つの5分100%エタノール浸漬を行います。次に、スライド2つの5分間のキシレン浸漬をクリアし、続いて空気乾燥を行います。次に、光顕微鏡による可視化用マウント媒体でスライドを取り付けます。シャム作動の正常なグループでは、脳梗塞は認められないが、一方、コントロールでは、未治療のMCAO動物は、損傷領域の比較的広い範囲が観察される。1キログラム当たり300ミリグラムGRex処理モデルマウスでは、損傷した組織の統計的に有意な減少が観察される。H&Eおよびクレシルバイオレット染色組織切片の組織学的分析は、細胞生存の指標を提供する。実際、H&Eおよびクレシルバイオレット染色強度は、対照において有意に減少し、未治療のMCAO群は、シャム作動正常群に対してである。一方、GRex治療動物は、より大きな組織学的完全性を示し、対照、未治療および偽式の両方の群よりも少ない神経細胞死を意味し、虚血再灌流誘発脳損傷に対する抽出物の強力な神経保護効果を示唆する。この手順を試みる間, この期間中に相対的な小脳血流を監視することを覚えておくことが重要です。.そして、プロセスの導体は、内皮層への損傷を最小限に抑えるために非常に慎重に

Research

JoVE Journal

Medicine

Modeling Stroke in Mice - Middle Cerebral Artery Occlusion with the Filament Model

マウスにおけるモデリングのストローク - フィラメントモデルと中大脳動脈閉塞

Stroke is among the most frequent causes of death and adult disability, especially in highly developed countries. However, treatment options to date are ...

Mouse Model of Middle Cerebral Artery Occlusion

中大脳動脈閉塞のマウスモデル

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the ...

Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Mice

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マウスにおけるレーザードップラー流量計の指針と虚血性脳卒中に対する腔内中大脳動脈閉塞（MCAO）モデル

Stroke is the third leading cause of death and the leading cause of disability in the world, with an estimated cost of near $70 billion 
in the United ...

The Application Of Permanent Middle Cerebral Artery Ligation in the Mouse

マウスの永久中大脳動脈結紮の応用

Focal cerebral ischemia is among the most common type of stroke seen in patients. Due to the clinical significance there has been a prolonged effort to ...

Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Rat

ラットにおけるレーザードップラー血流計の指針と虚血性脳卒中のエンドセリン-1誘発性中大脳動脈閉塞モデル

Stroke is the number one cause of disability and third leading cause of death in the world, costing an estimated $70 billion in the United States in ...

Utilizing a Cranial Window to Visualize the Middle Cerebral Artery During Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion

エンドセリン-1誘発性中大脳動脈閉塞中大脳動脈を可視化するために頭蓋窓を利用

Creation of a cranial window is a method that allows direct visualization of structures on the cortical surface of the brain1-3. This technique can be ...

Optimized System for Cerebral Perfusion Monitoring in the Rat Stroke Model of Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion

腔内中大脳動脈閉塞のラット脳卒中モデルにおける脳血流モニタリングのための最適化されたシステム

The translational potential of pre-clinical stroke research depends on the accuracy of experimental modeling. Cerebral perfusion monitoring in animal ...

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

ラットにおける同種血血栓による虚血性脳卒中のための塞栓中大脳動脈閉塞（MCAO）

Clinically, thrombolytic therapy with use of recombinant tissue plasminogen activator (tPA) remains the most effective treatment for acute ischemic ...

Quantification of Neurovascular Protection Following Repetitive Hypoxic Preconditioning and Transient Middle Cerebral Artery Occlusion in Mice

マウスにおける反復低酸素プレコンディショニングと過渡中大脳動脈閉塞後に神経血管保護の定量

Experimental animal models of stroke are invaluable tools for understanding stroke pathology and developing more effective treatment strategies. A 2 week ...

Performing Permanent Distal Middle Cerebral with Common Carotid Artery Occlusion in Aged Rats to Study Cortical Ischemia with Sustained Disability

持続的な障害と皮質虚血を研究するために高齢ラットにおける一般的な頸動脈閉塞と永久遠位中大脳の実行

Stroke typically occurs in elderly people with a range of comorbidities including carotid (or other arterial) atherosclerosis, high blood pressure, ...