Name: assessing neuroprotective effects of glycyrrhizae radix et rhizoma extract using a transient middle cerebral artery occlusion mouse model
Uploaded: 2018-12-09T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Assessing Neuroprotective Effects of Glycyrrhizae Radix et Rhizoma Extract Using a Transient Middle Cerebral Artery Occlusion Mouse Model at JoVE.com

Ikke aktuelt.

Alle prosedyrer som involverer dyr ble godkjent av den etiske komiteen av Pusan National University (godkjenningsnummer, PNU-2016-1087). En grafisk oversikt over denne studien er vist i figur 1.
1. forberedelse og administrasjon av GRex
Merk: GR brukt i denne studien ble kjøpt fra kommersielle farmasøytiske selskap.
<ol><li>Plasser 200 g GR i 2000 mL av metanol og ruge ved romtemperatur (25 ° C) i 5 dager.</li>
	<li>Filtrere blandi...

<ol>
	<li>Bejot, Y., Delpont, B., Giroud, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rising+stroke+incidence+in+young+adults:+more+epidemiological+evidence,+more+questions+to+be+answered.">Rising stroke incidence in young adults: more epidemiological evidence, more questions to be answered.</a> Journal of the American Heart Association. 11 (5), (2016).</li><li>Hadadha, M., Vakili, A., Bandegi, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+the+inhibition+of+hydrogen+sulfide+synthesis+on+ischemic+injury+and+oxidative+stress+biomarkers+in+a+transient+model+of+focal+cerebral+ischemia+in+rats.">Effect of the inhibition of hydrogen sulfide synthesis on ischemic injury and oxidative stress biomarkers in a transient model of focal cerebral ischemia in rats.</a> Journal of Stroke and Cerebrovascular Diseases. 24 (12), 2676-2684 (2015).</li><li>Durukan, A., Tatlisumak, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+ischemic+stroke.">Animal models of ischemic stroke.</a> Article in Handbook of Clinical Neurology. 92, 43-66 (2009).</li><li>Kim, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+Models+of+Stroke.">Animal Models of Stroke.</a> Brain and Neurorehabilitation. 4 (1), 1-11 (2011).</li><li>Rizzato, G., Scalabrin, E., Radaelli, M., Capodaglio, G., Piccolo, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+exploration+of+licorice+metabolome.">A new exploration of licorice metabolome.</a> Food Chemistry. 221, 959-968 (2017).</li><li>Zhu, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+determination+of+flavonoids+in+licorice+and+comparison+of+three+licorice+species.">Rapid determination of flavonoids in licorice and comparison of three licorice species.</a> Journal of Separation Science. 39 (3), 473-482 (2016).</li><li>Ota, M., Mikage, M., Cai, S. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Herbological+study+on+the+medicinal+effects+of+roasted+licorice+and+honey-roasted+licorice.">Herbological study on the medicinal effects of roasted licorice and honey-roasted licorice.</a> Yakushigaku Zasshi. 50 (1), 38-45 (2015).</li><li>Lim, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Licorice+pretreatment+protects+against+brain+damage+induced+by+middle+cerebral+artery+occlusion+in+mice.">Licorice pretreatment protects against brain damage induced by middle cerebral artery occlusion in mice.</a> Journal of Medicinal Food. 21 (5), 474-480 (2018).</li><li>Koizumi, J. Y., Nakazawa, T., Ooneda, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+studies+of+ischemic+brain+edema.">Experimental studies of ischemic brain edema.</a> Nosotchu. 8 (1), 1-8 (1986).</li><li>Fischer, A. H., Jacobson, K. A., Rose, J., Zeller, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hematoxylin+and+eosin+staining+of+tissue+and+cell+sections.">Hematoxylin and eosin staining of tissue and cell sections.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2008, (2008).</li><li>Zhu, Y., Liu, F., Zou, X., Torbey, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+unbiased+estimation+of+neuronal+number+in+the+rat+hippocampus+with+different+staining+methods.">Comparison of unbiased estimation of neuronal number in the rat hippocampus with different staining methods.</a> Journal of Neuroscience Methods. 254, 73-79 (2005).</li><li>Alberts, M. J., Ovbiagele, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+strategies+for+ischemic+stroke+prevention:+role+of+multimodal+combination+therapies.">Current strategies for ischemic stroke prevention: role of multimodal combination therapies.</a> Journal of Neurology. 254 (10), 1414-1426 (2007).</li><li>Pinto, A., Tuttolomondo, A., Di Raimondo, D., Fernandez, P., Licata, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebrovascular+risk+factors+and+clinical+classification+of+strokes.">Cerebrovascular risk factors and clinical classification of strokes.</a> Seminars in Vascular Medicine. 4 (3), 287-303 (2004).</li><li>Barlow, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identifying+the+brain+regions+associated+with+acute+spasticity+in+patients+diagnosed+with+an+ischemic+stroke.">Identifying the brain regions associated with acute spasticity in patients diagnosed with an ischemic stroke.</a> Somatosensory and Motor Research. 33 (2), 1-8 (2016).</li><li>Roth, S., Liesz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stroke+research+at+the+crossroads+-+where+are+we+heading.">Stroke research at the crossroads - where are we heading.</a> Swiss Medical Weekly. 146, 14329 (2016).</li><li>Feuerstein, G. Z., Wang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+stroke.">Animal models of stroke.</a> Molecular Medicine Today. 6 (3), 133-135 (2000).</li><li>Herson, P. S., Traystman, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+stroke:+translational+potential+at+present+and+in+2050.">Animal models of stroke: translational potential at present and in 2050.</a> Future Neurology. 9 (5), 541-551 (2014).</li><li>Kumar, A., Gupta Aakriti, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+on+animal+models+of+stroke:+an+update.">A review on animal models of stroke: an update.</a> Brain Research Bulletin. 122, 35-44 (2016).</li><li>O'Collins, V. E., Donnan, G. A., Howells, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=History+of+animal+models+of+stroke.">History of animal models of stroke.</a> International Journal of Stroke. 6 (1), 77-78 (2011).</li><li>Ji, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioactive+constituents+of+Glycyrrhiza+uralensis+(licorice):+discovery+of+the+effective+components+of+a+traditional+herbal+medicine.">Bioactive constituents of Glycyrrhiza uralensis (licorice): discovery of the effective components of a traditional herbal medicine.</a> Journal of Natural Products. 79 (2), 281-292 (2016).</li><li>Yang, R., Wang, L. Q., Yuan, B. C., Liu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+pharmacological+activities+of+licorice.">The pharmacological activities of licorice.</a> Planta Medica. 81 (18), 1654-1669 (2015).</li><li>Yang, R., Yuan, B. C., Ma, Y. S., Zhou, S., Liu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+anti-inflammatory+activity+of+licorice,+a+widely+used+Chinese+herb.">The anti-inflammatory activity of licorice, a widely used Chinese herb.</a> Pharmaceutical Biology. 55 (1), 5-18 (2017).</li></ol>

Med den økende utbredelsen av metabolske sykdommer som kronisk hypertensjon, diabetes og hyperlipidemi, som er større risk faktorene for hjerneslag, har hjerneslag forebygging og behandling blitt et viktig område av medisinsk forskning12, 13. underskudd i språk og bevegelse etter et hjerneslag er sterkt korrelert med graden av skade på hjernen vev14 og resultere i en dårlig livskvaliteten for pasienter og deres familier<sup class="xr...

Hjerneskade forårsaket av iskemi og reperfusion av cerebral blodstrøm fører til døden av nerve celler og tap av hjernevevet. Denne typen hjerneskade fortsetter å øke med økende utbredelsen av cerebrovascular sykdommer på grunn av spredning av metabolske sykdommer som fedme, hypertensjon og diabetes mellitus1,2. Absolutte antallet eldre pasienter med hjerneslag økt dramatisk over hele verden, og kostnaden for medisinsk behandling for disse pasienter, som ofte utelatt med langsiktige handikap, er en stor samfunnsmessig byrde. Sekundær funksjonshemninger bør derfor begrenses så mye som mulig å redusere den økonomiske byrde1,2.
Den vanligste gnagere modellen av cerebral hjerteinfarkt er arteria cerebri (MCA) okklusjon (MCAO) modellen, der MCA er okkludert med en silisium-belagt kirurgisk suturing filament blokkere blodstrøm, forårsaker iskemiske hjerneslag3, 4. bruke en filament som okklusjon materialet lar kontroll av okklusjon tid og varighet ved å manipulere varigheten av intra-luminal filament innsetting.
Tidligere studier har vist at selv når samme gnager MCAO modellen brukes, det totale volumet av cerebral hjerteinfarkt varierer mellom eksperimenter, forårsaker lav reproduserbarhet studiene. For å forbedre reproduserbarhet, optimalisert vi tykkelsen på filament mint brukes i eksperimentet. Resultatene av en innledende studie av cerebral iskemiske perioden og indusert hjerteinfarkt viste at en iskemiske lengre tid enn 60 min lov volumetriske regionen skadet hjernevev observert og kvantifisert.
Glycyrrhizae Radix et Rhizoma (GR), også kjent som lakris, består av tørkede røttene og rotstokker av Glycyrrhiza uralensis og G. glabra. Det er brukt i kinesisk og koreansk tradisjonell medisin for ulike formål, herunder som tilsetningsstoff og medicinally5,6,7.
I en tidligere studie8forbehandling med GR metanol ekstrakt (GRex) viste en anti-apoptotisk effekt i MCAO mus, inkludert betydelige forebygging av nedgangen i protein uttrykk for B-celle lymfom 2 (Bcl-2) og Bcl ekstra stor (Bcl-xL). Denne studien ble gjennomført for å forbedre reproduserbarhet av konvensjonelle MCAO musemodell ved å evaluere effektiviteten ved hvis etter betennelsessykdommer behandling med GRex effektivt redusert betennelsessykdommer volumet MCAO-indusert hjerne skade.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1416px;" width="1417">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:383px;">Glycyrrhizae Radix et Rhizoma</td>
			<td style="width:307px;">Gwangmyoung Pharmaceuticals Co., Korea</td>
			<td style="width:344px;"></td>
			<td style="width:383px;">Glycyrrhizae Radix et Rhizoma</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Qualitative filter paper</td>
			<td>Advantec</td>
			<td style="width:344px;">Filter paper No. 2</td>
			<td>Qualitative filter paper</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D8418-250ML</td>
			<td>Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Syringe filter (0.45 &#181;m)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>CLS431220</td>
			<td>Syringe filter (0.45 &#181;m)</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Stereo Microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>M50</td>
			<td>Stereo Microscope</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Stereo Microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>SMZ745</td>
			<td>Stereo Microscope</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Laser Doppler</td>
			<td>Moor Instrument</td>
			<td>moorVMS-LDF</td>
			<td>Laser Doppler</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Anesthesia Tabletop Bracket with N2O&#38;O2 Flowmeter System</td>
			<td>Harvard Appratus</td>
			<td>34-1352</td>
			<td>Anesthesia Tabletop Bracket with N2O&#38;O2 Flowmeter System</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Homeothermic Monitoring System</td>
			<td>Harvard Appratus</td>
			<td>55-7020</td>
			<td>Homeothermic Monitoring System</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Digital Camera</td>
			<td>Canon</td>
			<td>Eos-M2</td>
			<td>Digital Camera</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Cryostat</td>
			<td>Leica</td>
			<td>CM3050S</td>
			<td>Cryostat</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Microscope</td>
			<td>Carl Zeiss</td>
			<td>Zeiss Axio</td>
			<td>Microscope</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Data Analysis</td>
			<td>Systat Software Inc.</td>
			<td>SigmaPlot version 12</td>
			<td>Data Analysis</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Data Analysis</td>
			<td>NIH Image</td>
			<td>ImageJ</td>
			<td>Data Analysis</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Mouse diet</td>
			<td>Doo Yeol Biotech</td>
			<td>Standard rodent chow</td>
			<td>Mouse diet</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Isoflurane</td>
			<td>JOONGWAE</td>
			<td>A02104781</td>
			<td>Isoflurane</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Isoflurane</td>
			<td>TROIKAA</td>
			<td>ISOTROY 100</td>
			<td>Isoflurane</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Silk suture (4-0 Black silk)&#160;</td>
			<td>AILEE</td>
			<td>SK47510</td>
			<td>Silk suture (4-0 Black silk)&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Silk suture (3-0 White silk)&#160;</td>
			<td>Baekjae</td>
			<td>57</td>
			<td>Silk suture (3-0 White silk)&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Nylon suture (8-0 monofilament)&#160;</td>
			<td>AILEE</td>
			<td>NB825</td>
			<td>Nylon suture (8-0 monofilament)&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T8877-25G</td>
			<td>2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC)</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Formalin (Formaldehyde solution)</td>
			<td>JUNSEI</td>
			<td>69360-1263 20KG</td>
			<td>Formalin (Formaldehyde solution)</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Hematoxylin (Harris Hematoxylin)</td>
			<td>YD Diagnostics</td>
			<td>EasyStain</td>
			<td>Hematoxylin (Harris Hematoxylin)</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Eosin (1% Eosin Y Solution)</td>
			<td>MUTO PURE CHEMICALS</td>
			<td>3200-2</td>
			<td>Eosin (1% Eosin Y Solution)</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Cresyl violet (acetate)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C5042-10G</td>
			<td>Cresyl violet (acetate)</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Paraformaldehyde&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:344px;">P6148-1KG</td>
			<td>Paraformaldehyde&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Sucrose</td>
			<td>JUNSEI</td>
			<td>31365-0350 1KG</td>
			<td>Sucrose</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Optimum cutting temperature (OCT) compound</td>
			<td>Scigen</td>
			<td>4583</td>
			<td>Optimum cutting temperature (OCT) compound</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Disecting Knife</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>10055-12</td>
			<td>Disecting Knife</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">#4 Forcep</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11241-30</td>
			<td>#4 Forcep</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">#5 Forcep</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11254-20</td>
			<td>#5 Forcep</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">#6 Forcep</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11260-20</td>
			<td>#6 Forcep</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">#7 Fine Forcep</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11274-20</td>
			<td>#7 Fine Forcep</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Surgical Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14001-12</td>
			<td>Surgical Scissors</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Extra Fine Bonn Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14084-08</td>
			<td>Extra Fine Bonn Scissors</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Moria Pascheff-Wolff Spring Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15371-92</td>
			<td>Moria Pascheff-Wolff Spring Scissors</td>
		</tr>
		<tr height="31">
			<td height="31" style="height:31px;">Vessel Dilating Forcep</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>18153-11</td>
			<td>Vessel Dilating Forcep</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessing neuroprotective effects of glycyrrhizae radix et rhizoma extract using a transient middle cerebral artery occlusion mouse model

Ischemia etterfulgt av reperfusion av cerebral blodstrøm etter et hjerneslag fører til døden av nerve celler og tap av hjernevevet. Den mest brukte dyremodell for å studere slag er arteria cerebri okklusjon (MCAO) modell. Tidligere studier har rapportert betennelsessykdommer som forskjellige størrelser selv når de samme eksperimentelle dyrearter ble brukt under lignende MCAO forhold. Derfor har vi utviklet en forbedret eksperimentell metode for å løse dette avviket. Mus ble utsatt for MCAO hjelp av en filament som okklusjon materiale for å etterligne menneskelige slag forhold og filament tykkelse var optimalisert for å etablere mer reproduserbar hjerteinfarkt volum. Mus behandlet med en metanol ekstrakt av Glycyrrhizae Radix et Rhizome (GRex) etter slag induksjon viste et betydelig redusert totale hjerteinfarkt volum og økt antall gjenlevende celler i forhold til ubehandlet kontrollgruppen. Dette endret eksperimentelle protokollen vist reproduserbar gunstige effekten av GRex på iskemiske hjerneslag.

I humbug-opererte normal gruppen er ingen cerebral betennelsessykdommer observert mens i kontrollgruppen, et relativt bredt spekter av skadede områder er observert. I mus er administrert 300 mg/kg GRex i en statistisk signifikant reduksjon i skadet område-MCAO modellgruppen observert (figur 2).
Histologiske endringene blir etterforsket av flekker iskemiske hjerne seksjoner med H & E eller cresyl v...

Watch this Scientific Journal Video about Assessing Neuroprotective Effects of Glycyrrhizae Radix et Rhizoma Extract Using a Transient Middle Cerebral Artery Occlusion Mouse Model at JoVE.com

Assessing Neuroprotective Effects of Glycyrrhizae Radix et Rhizoma Extract Using a Transient Middle Cerebral Artery Occlusion Mouse Model

I denne studien endre vi en eksisterende eksperimentell metode for å få mer reproduserbar resultater, ved å etablere en arteria cerebri okklusjon (MCAO) musemodell. Peroral administrering av Glycyrrhizae Radix et Rhizome (GR) metanol ekstrakt (GRex), etter slag induksjon, betydelig redusert totale hjerteinfarkt volum i forhold til ubehandlet kontrollgruppen.

Vurdere Neuroprotective effekter av Glycyrrhizae Radix et Rhizoma Pakk ut med en forbigående arteria cerebri okklusjon musemodell

Ischemia followed by reperfusion of cerebral blood flow after a stroke leads to the death of nerve cells and loss of brain tissue. The most commonly used ...

Denne metoden kan bidra til å svare på viktige spørsmål innen nevrovitenskap og tradisjonelle oral medisin forskningsfelt om screening for nevrobeskyttende naturlige forbindelser som er relevante for modellen. Den største fordelen med denne teknikken er at den høyere producibility av infeksjonsvolumet er i samsvar med iskemisk timing dose. Visuell demonstrasjon av denne metoden er kritisk da det er typisk å sette inn et veldig tynt redskap i den opprinnelige, den midterste lillehjernen arterien ved hjelp av et sterilt mikroskop.Å demonstrere prosedyren vil være Se-Eun Lee, en klasse en skoleelev studerer i laboratoriet mitt. For å forberede Glycyrrhizae Radix et Rhizome ekstrakt, eller GRex, legg først til 200 gram Glycyrrhizae Radix et Rhizome, eller GR, til to liter metanol for en fem dagers inkubasjon ved romtemperatur. På slutten av inkubasjonen, spenne løsningen gjennom 0,26 millimeter tykt filterpapir med en fem-mikrometer pore størrelse.Tilsett GR-rester til en liter fersk metanol, og filtrer løsningen på nytt. Kombiner de to filtratene, og press dem gjennom et nytt stykke filterpapir. Konsentrat deretter ekstraktet under vakuum før frysetørking for å produsere GRex.For å forberede GRex for administrasjon, oppløs det frysetørkede produktet i dimetylsulfoksid, og fortynne blandingen med 0,9% fysiologisk saltvann. Filtrer deretter oppløsningen gjennom et sprøytefilter på 0,45 mikrometer, og justere den endelige konsentrasjonen av DMSO til mindre enn 5%For å sette opp en mus midtre cerebral arterie okklusjon modell, eller MCAO, bekrefter en mangel på responsiv til hale stimulans i en bedøvet seks uker gammel 22 til 25 gram mannlig C57BL/6 mus, og plasser musen på en 36,5-graders Celsius kroppstemperatur holder teppe, koblet til et termometer. Etter å ha fjernet alt håret fra brystet og nakken på musen ved barbering og hårfjerningskrem, legg musen under et stereomikroskop og lag et to centimeter hud snitt i midten av nakken.Isoler forsiktig den venstre vanlige halspulsåren, den ytre halspulsåren og grenen av den indre halspulsåren fra de omkringliggende bindevevene, og bruk en 4,0-silkesug for å ligate den ytre halspulsåren og den vanlige halspulsåren med en halv-hitch knute for å midlertidig blokkere blodstrømmen inn i den indre halspulsåren. Sett inn en 0,1 til 0,12 millimeter tykk 11 millimeter lang silikonbelagt 8,0-monofilament 4,0-silkesug gjennom den indre halspulsåren til opprinnelsen til venstre midthalsåren, og bruk en laser Doppler strømningsmåler for å måle reduksjonen i relativ cerebral blodstrømarterie. Fest den innsatte filamentet til blodkaret i to timer mens hjernearterien er okkludert.På slutten av okklusjonsperioden trekker du forsiktig filamentet for å gjenopprette blodstrømmen i 22 timer med reperfusjon. Og bruk 3,0-silkesuturer for å suturere huden på fem steder med to halvfestekner. Deretter returnerer musen til buret for bedøvelse utvinning.En time etter slutten av reperfusjon, administrere 300-milligram per kilo kroppsvekt GRex til eksperimentelle dyr, bare ved muntlig gavage. 24 timer etter utbruddet av MCAO, gjør et snitt i midten av hodet på hvert eksperimentelle dyr, og bryte parietal bein med vinklede tang, mens peeling av dura mater. Isoler hjernen forsiktig fra skallen, og bruk en musehjernematrise til å kutte det utskåret vevet i en millimeter tykke seksjoner.Beis seksjonene i 17 minutter i 2% TTC-løsning, i henhold til standardprotokoller. Og fikse seksjonene i 10% formalin i minst 2 timer før du avbilde prøvene med et digitalt kamera. Analyser og kvantifisere det cerebrale infarktområdet i hver seksjon ved hjelp av ImageJ.På riktig eksperimentelt tidspunkt post-MCAO, perfuse hver euthanized eksperimentelle dyr transcardially med 10-milliliter PBS, etterfulgt av 10-milliliter på 4% paraformaldehyd. Etter å ha isolert hjernen som nettopp demonstrert, senk de høstede organene i 10-milliliter med 30% sukrose over natten. Neste morgen, bygge inn hjernevevsprøver i optimal kutte temperatur sammensatte.Og skjær vevet koronart i 15-mikrometer tykke seksjoner på en cyrostat. Monter seksjonene på glasssklier og senk seksjonene i 80% etanol i 1 minutt. For H&E-farging, merk prøvene med Hematoxylin-oppløsning i 5 minutter, etterfulgt av to dips i 1% sur alkohol.Deretter senker du lysbildene i mettet litiumkarbonatløsning i 30 sekunder, etterfulgt av en 30-sekunders vask i vann fra springen og 30 sekunder med motfarging med Eosin-løsning. Fjern overflødig Eosin-løsning med vannvask fra springen, og dehydrere lysbildene med ett minutts stigende nedsenking i 95 og deretter 100% etanol. Deretter lufttørke lysbildene, fjerne dem i xylen i minst 10 minutter, og montere dekkglass med monteringsmedium.For cresylfiolett farging, plasser de 80% etanolbehandlede lysbildene på en glidevarmer i minst en time, etterfulgt av nedsenking i 50% etanol fortynnet med kloroform over natten. Neste morgen, beis lysbildene med 0,1% cresyl fiolett i 10 minutter i en 40-graders Celsius tørr ovn, etterfulgt av en dehydrering i 95% etanol i 30 minutter, og to fem minutters 100% etanol nedsenking. Deretter fjerner du lysbildene to fem minutters xylen nedsenking, etterfulgt av lufttørking.Monter deretter lysbildene med monteringsmedium for visualisering ved lett mikroskopi. I sham-opererte normale grupper observeres ingen cerebral infarkt;mens det har kontroll, ubehandlede MCAO-dyr, observeres et relativt bredt spekter av skadede områder. I 300 mg per kilo GRex-behandlet modellmus observeres en statistisk signifikant reduksjon i skadet vev.Histologisk analyse av H&E og cresyl fiolett-farget vev seksjoner gir en indeks av celle overlevelse. H&E og cresylfiolett fargingsintensitet reduseres betydelig i kontrollen, ubehandlet MCAO-gruppe i forhold til den sham-opererte normale gruppen. De GRex-behandlede dyrene viser derimot en større histologisk integritet, noe som innebærer mindre nevronal celledød enn både kontroll, ubehandlede og sham-opererte grupper, noe som tyder på en potent nevrobeskyttende effekt av ekstraktet mot iskemi reperfusjonsindusert hjerneskade.Mens du prøver denne prosedyren, Det er viktig å huske å overvåke den relative lillehjernen blodstrømmen i denne perioden. Og ledere av prosesser svært nøye for å minimere skader på endotellagene i

Research

JoVE Journal

Medicine

Modeling Stroke in Mice - Middle Cerebral Artery Occlusion with the Filament Model

Stroke is among the most frequent causes of death and adult disability, especially in highly developed countries. However, treatment options to date are ...

Mouse Model of Middle Cerebral Artery Occlusion

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the ...

Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Mice

Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Mice

Stroke is the third leading cause of death and the leading cause of disability in the world, with an estimated cost of near $70 billion 
in the United ...

The Application Of Permanent Middle Cerebral Artery Ligation in the Mouse

Focal cerebral ischemia is among the most common type of stroke seen in patients. Due to the clinical significance there has been a prolonged effort to ...

Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Rat

Endotelin-1 Induced Middle Cerebral arterieokklusjon Modell for iskemisk slag med laser Doppler Flowmetry Veiledning i Rat

Stroke is the number one cause of disability and third leading cause of death in the world, costing an estimated $70 billion in the United States in ...

Utilizing a Cranial Window to Visualize the Middle Cerebral Artery During Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion

Utnytte en Kranio vindu for å visualisere Midt Cerebral arterie under Endotelin-1 Induced Middle Cerebral arterieokklusjon

Creation of a cranial window is a method that allows direct visualization of structures on the cortical surface of the brain1-3. This technique can be ...

Optimized System for Cerebral Perfusion Monitoring in the Rat Stroke Model of Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion

Optimalisert System for cerebral perfusjon Monitoring i Rat Stroke Modell av intraluminal Middle Cerebral arterieokklusjon

The translational potential of pre-clinical stroke research depends on the accuracy of experimental modeling. Cerebral perfusion monitoring in animal ...

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

Embolisk Middle Cerebral arterieokklusjon (MCAO) for hjerneinfarkt med Homologe blodpropp i Rats

Clinically, thrombolytic therapy with use of recombinant tissue plasminogen activator (tPA) remains the most effective treatment for acute ischemic ...

Quantification of Neurovascular Protection Following Repetitive Hypoxic Preconditioning and Transient Middle Cerebral Artery Occlusion in Mice

Kvantifisering av neurovascular Protection Etter Repetitive hypoksisk prekondisjonering og Transient Middle Cerebral arterieokklusjon i Mus

Experimental animal models of stroke are invaluable tools for understanding stroke pathology and developing more effective treatment strategies. A 2 week ...

Performing Permanent Distal Middle Cerebral with Common Carotid Artery Occlusion in Aged Rats to Study Cortical Ischemia with Sustained Disability

Utføre Permanent Distal Middle Cerebral med arteria carotis communis okklusjon i eldre rotter å studere kortikal iskemi med vedvarende Disability

Stroke typically occurs in elderly people with a range of comorbidities including carotid (or other arterial) atherosclerosis, high blood pressure, ...