Name: assessing neuroprotective effects of glycyrrhizae radix et rhizoma extract using a transient middle cerebral artery occlusion mouse model
Uploaded: 2018-12-09T13:00:00
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No es aplicable.

Todos los procedimientos que involucran animales fueron aprobados por el Comité de ética de la Universidad Nacional de Pusan (número de aprobación, PNU-2016-1087). Una visión gráfica de este estudio se muestra en la figura 1.
1. preparación y administración de GRex
Nota: El GR utilizado en este estudio fue adquirido a una compañía farmacéutica comercial.
<ol><li>200 g de GR en 2.000 mL de metanol e incubar a temperatura amb...

<ol>
	<li>Bejot, Y., Delpont, B., Giroud, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rising+stroke+incidence+in+young+adults:+more+epidemiological+evidence,+more+questions+to+be+answered.">Rising stroke incidence in young adults: more epidemiological evidence, more questions to be answered.</a> Journal of the American Heart Association. 11 (5), (2016).</li><li>Hadadha, M., Vakili, A., Bandegi, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+the+inhibition+of+hydrogen+sulfide+synthesis+on+ischemic+injury+and+oxidative+stress+biomarkers+in+a+transient+model+of+focal+cerebral+ischemia+in+rats.">Effect of the inhibition of hydrogen sulfide synthesis on ischemic injury and oxidative stress biomarkers in a transient model of focal cerebral ischemia in rats.</a> Journal of Stroke and Cerebrovascular Diseases. 24 (12), 2676-2684 (2015).</li><li>Durukan, A., Tatlisumak, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+ischemic+stroke.">Animal models of ischemic stroke.</a> Article in Handbook of Clinical Neurology. 92, 43-66 (2009).</li><li>Kim, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+Models+of+Stroke.">Animal Models of Stroke.</a> Brain and Neurorehabilitation. 4 (1), 1-11 (2011).</li><li>Rizzato, G., Scalabrin, E., Radaelli, M., Capodaglio, G., Piccolo, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+exploration+of+licorice+metabolome.">A new exploration of licorice metabolome.</a> Food Chemistry. 221, 959-968 (2017).</li><li>Zhu, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+determination+of+flavonoids+in+licorice+and+comparison+of+three+licorice+species.">Rapid determination of flavonoids in licorice and comparison of three licorice species.</a> Journal of Separation Science. 39 (3), 473-482 (2016).</li><li>Ota, M., Mikage, M., Cai, S. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Herbological+study+on+the+medicinal+effects+of+roasted+licorice+and+honey-roasted+licorice.">Herbological study on the medicinal effects of roasted licorice and honey-roasted licorice.</a> Yakushigaku Zasshi. 50 (1), 38-45 (2015).</li><li>Lim, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Licorice+pretreatment+protects+against+brain+damage+induced+by+middle+cerebral+artery+occlusion+in+mice.">Licorice pretreatment protects against brain damage induced by middle cerebral artery occlusion in mice.</a> Journal of Medicinal Food. 21 (5), 474-480 (2018).</li><li>Koizumi, J. Y., Nakazawa, T., Ooneda, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+studies+of+ischemic+brain+edema.">Experimental studies of ischemic brain edema.</a> Nosotchu. 8 (1), 1-8 (1986).</li><li>Fischer, A. H., Jacobson, K. A., Rose, J., Zeller, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hematoxylin+and+eosin+staining+of+tissue+and+cell+sections.">Hematoxylin and eosin staining of tissue and cell sections.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2008, (2008).</li><li>Zhu, Y., Liu, F., Zou, X., Torbey, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+unbiased+estimation+of+neuronal+number+in+the+rat+hippocampus+with+different+staining+methods.">Comparison of unbiased estimation of neuronal number in the rat hippocampus with different staining methods.</a> Journal of Neuroscience Methods. 254, 73-79 (2005).</li><li>Alberts, M. J., Ovbiagele, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+strategies+for+ischemic+stroke+prevention:+role+of+multimodal+combination+therapies.">Current strategies for ischemic stroke prevention: role of multimodal combination therapies.</a> Journal of Neurology. 254 (10), 1414-1426 (2007).</li><li>Pinto, A., Tuttolomondo, A., Di Raimondo, D., Fernandez, P., Licata, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebrovascular+risk+factors+and+clinical+classification+of+strokes.">Cerebrovascular risk factors and clinical classification of strokes.</a> Seminars in Vascular Medicine. 4 (3), 287-303 (2004).</li><li>Barlow, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identifying+the+brain+regions+associated+with+acute+spasticity+in+patients+diagnosed+with+an+ischemic+stroke.">Identifying the brain regions associated with acute spasticity in patients diagnosed with an ischemic stroke.</a> Somatosensory and Motor Research. 33 (2), 1-8 (2016).</li><li>Roth, S., Liesz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stroke+research+at+the+crossroads+-+where+are+we+heading.">Stroke research at the crossroads - where are we heading.</a> Swiss Medical Weekly. 146, 14329 (2016).</li><li>Feuerstein, G. Z., Wang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+stroke.">Animal models of stroke.</a> Molecular Medicine Today. 6 (3), 133-135 (2000).</li><li>Herson, P. S., Traystman, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+stroke:+translational+potential+at+present+and+in+2050.">Animal models of stroke: translational potential at present and in 2050.</a> Future Neurology. 9 (5), 541-551 (2014).</li><li>Kumar, A., Gupta Aakriti, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+on+animal+models+of+stroke:+an+update.">A review on animal models of stroke: an update.</a> Brain Research Bulletin. 122, 35-44 (2016).</li><li>O'Collins, V. E., Donnan, G. A., Howells, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=History+of+animal+models+of+stroke.">History of animal models of stroke.</a> International Journal of Stroke. 6 (1), 77-78 (2011).</li><li>Ji, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioactive+constituents+of+Glycyrrhiza+uralensis+(licorice):+discovery+of+the+effective+components+of+a+traditional+herbal+medicine.">Bioactive constituents of Glycyrrhiza uralensis (licorice): discovery of the effective components of a traditional herbal medicine.</a> Journal of Natural Products. 79 (2), 281-292 (2016).</li><li>Yang, R., Wang, L. Q., Yuan, B. C., Liu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+pharmacological+activities+of+licorice.">The pharmacological activities of licorice.</a> Planta Medica. 81 (18), 1654-1669 (2015).</li><li>Yang, R., Yuan, B. C., Ma, Y. S., Zhou, S., Liu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+anti-inflammatory+activity+of+licorice,+a+widely+used+Chinese+herb.">The anti-inflammatory activity of licorice, a widely used Chinese herb.</a> Pharmaceutical Biology. 55 (1), 5-18 (2017).</li></ol>

Con la creciente prevalencia de enfermedades metabólicas como la hipertensión crónica, diabetes e hiperlipidemia, que son factores de riesgo para el accidente cerebrovascular, el tratamiento y prevención de accidentes cerebrovasculares han convertido en una importante área de investigación médica12, 13. los déficits en el lenguaje y el movimiento después de un accidente cerebrovascular se correlacionan fuertemente con el grado de daño cerebral de tejido...

Daño cerebral causado por isquemia y reperfusión del flujo sanguíneo cerebral conduce a la muerte de las células nerviosas y la pérdida de tejido cerebral. Este tipo de daño cerebral continúa aumentando con la creciente prevalencia de enfermedades cerebrovasculares debido a la propagación de enfermedades metabólicas como obesidad, hipertensión y diabetes mellitus1,2. El número absoluto de pacientes mayores con ictus ha aumentado en todo el mundo, y el costo de la atención médica de estos pacientes, que a menudo se quedan con discapacidades a largo plazo, es una carga social importante. Por lo tanto, discapacidad secundaria debe mitigarse lo más posible para reducir la carga económica1,2.
El modelo más utilizado de roedor del infarto cerebral es el modelo de oclusión (MCAO) de arteria cerebral media (MCA), en el que el MCA se ocluye con un filamento de sutura quirúrgico silicio para bloquear el flujo sanguíneo, causando accidente cerebrovascular isquémico3, 4. usando un filamento como el material de la obstrucción permite el control del tiempo de oclusión y permanencia mediante la manipulación de la duración de la inserción del filamento intra-luminales.
Estudios anteriores han demostrado que incluso cuando se utiliza el mismo modelo MCAO roedor, el volumen total del infarto cerebral varía entre experimentos, causando baja reproducibilidad de los estudios. Para mejorar la reproducibilidad, hemos optimizado el grueso de la menta de filamentos utilizado en el experimento. Los resultados de un estudio preliminar del período isquémico cerebral y el infarto inducido demostrada que un período isquémico de más de 60 min permitió la región volumétrica del dañan tejido cerebral para ser observados y cuantificados.
Glycyrrhizae Radix et Rhizoma (GR), también conocido como regaliz, consiste en el secado raíces y rizomas de Glycyrrhiza uralensis y g. glabra. Se ha utilizado en la medicina tradicional China y coreana para los varios propósitos incluyendo como un aditivo alimenticio y medicinal5,6,7.
En un anterior estudio8, pre-tratamiento con el extracto de metanol GR (GRex) demostrado un efecto anti-apoptotic en ratones MCAO, incluyendo prevención significativa de la disminución en la expresión de la proteína de linfoma de células B 2 (Bcl-2) y Bcl extra grande (Bcl-xL). Este estudio se llevó a cabo para mejorar la reproducibilidad del modelo de ratón MCAO convencional evaluando su eficiencia en la determinación de si el tratamiento postinfarto con GRex efectivamente reduce el volumen de infarto en daño cerebral inducido por MCAO.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1416px;" width="1417">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:383px;">Glycyrrhizae Radix et Rhizoma</td>
			<td style="width:307px;">Gwangmyoung Pharmaceuticals Co., Korea</td>
			<td style="width:344px;"></td>
			<td style="width:383px;">Glycyrrhizae Radix et Rhizoma</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Qualitative filter paper</td>
			<td>Advantec</td>
			<td style="width:344px;">Filter paper No. 2</td>
			<td>Qualitative filter paper</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D8418-250ML</td>
			<td>Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Syringe filter (0.45 &#181;m)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>CLS431220</td>
			<td>Syringe filter (0.45 &#181;m)</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Stereo Microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>M50</td>
			<td>Stereo Microscope</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Stereo Microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>SMZ745</td>
			<td>Stereo Microscope</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Laser Doppler</td>
			<td>Moor Instrument</td>
			<td>moorVMS-LDF</td>
			<td>Laser Doppler</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Anesthesia Tabletop Bracket with N2O&#38;O2 Flowmeter System</td>
			<td>Harvard Appratus</td>
			<td>34-1352</td>
			<td>Anesthesia Tabletop Bracket with N2O&#38;O2 Flowmeter System</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Homeothermic Monitoring System</td>
			<td>Harvard Appratus</td>
			<td>55-7020</td>
			<td>Homeothermic Monitoring System</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Digital Camera</td>
			<td>Canon</td>
			<td>Eos-M2</td>
			<td>Digital Camera</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Cryostat</td>
			<td>Leica</td>
			<td>CM3050S</td>
			<td>Cryostat</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Microscope</td>
			<td>Carl Zeiss</td>
			<td>Zeiss Axio</td>
			<td>Microscope</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Data Analysis</td>
			<td>Systat Software Inc.</td>
			<td>SigmaPlot version 12</td>
			<td>Data Analysis</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Data Analysis</td>
			<td>NIH Image</td>
			<td>ImageJ</td>
			<td>Data Analysis</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Mouse diet</td>
			<td>Doo Yeol Biotech</td>
			<td>Standard rodent chow</td>
			<td>Mouse diet</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Isoflurane</td>
			<td>JOONGWAE</td>
			<td>A02104781</td>
			<td>Isoflurane</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Isoflurane</td>
			<td>TROIKAA</td>
			<td>ISOTROY 100</td>
			<td>Isoflurane</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Silk suture (4-0 Black silk)&#160;</td>
			<td>AILEE</td>
			<td>SK47510</td>
			<td>Silk suture (4-0 Black silk)&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Silk suture (3-0 White silk)&#160;</td>
			<td>Baekjae</td>
			<td>57</td>
			<td>Silk suture (3-0 White silk)&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Nylon suture (8-0 monofilament)&#160;</td>
			<td>AILEE</td>
			<td>NB825</td>
			<td>Nylon suture (8-0 monofilament)&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T8877-25G</td>
			<td>2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC)</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Formalin (Formaldehyde solution)</td>
			<td>JUNSEI</td>
			<td>69360-1263 20KG</td>
			<td>Formalin (Formaldehyde solution)</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Hematoxylin (Harris Hematoxylin)</td>
			<td>YD Diagnostics</td>
			<td>EasyStain</td>
			<td>Hematoxylin (Harris Hematoxylin)</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Eosin (1% Eosin Y Solution)</td>
			<td>MUTO PURE CHEMICALS</td>
			<td>3200-2</td>
			<td>Eosin (1% Eosin Y Solution)</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Cresyl violet (acetate)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C5042-10G</td>
			<td>Cresyl violet (acetate)</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Paraformaldehyde&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:344px;">P6148-1KG</td>
			<td>Paraformaldehyde&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Sucrose</td>
			<td>JUNSEI</td>
			<td>31365-0350 1KG</td>
			<td>Sucrose</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Optimum cutting temperature (OCT) compound</td>
			<td>Scigen</td>
			<td>4583</td>
			<td>Optimum cutting temperature (OCT) compound</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Disecting Knife</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>10055-12</td>
			<td>Disecting Knife</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">#4 Forcep</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11241-30</td>
			<td>#4 Forcep</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">#5 Forcep</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11254-20</td>
			<td>#5 Forcep</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">#6 Forcep</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11260-20</td>
			<td>#6 Forcep</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">#7 Fine Forcep</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11274-20</td>
			<td>#7 Fine Forcep</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Surgical Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14001-12</td>
			<td>Surgical Scissors</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Extra Fine Bonn Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14084-08</td>
			<td>Extra Fine Bonn Scissors</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Moria Pascheff-Wolff Spring Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15371-92</td>
			<td>Moria Pascheff-Wolff Spring Scissors</td>
		</tr>
		<tr height="31">
			<td height="31" style="height:31px;">Vessel Dilating Forcep</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>18153-11</td>
			<td>Vessel Dilating Forcep</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessing neuroprotective effects of glycyrrhizae radix et rhizoma extract using a transient middle cerebral artery occlusion mouse model

Isquemia seguida de reperfusión del flujo sanguíneo cerebral después de un derrame cerebral conduce a la muerte de las células nerviosas y la pérdida de tejido cerebral. El modelo animal más utilizado para el estudio de tiempos es el modelo de oclusión (MCAO) de la arteria cerebral media. Estudios anteriores han reportado tamaños diferentes infarto incluso cuando la misma especie animal experimental se utilizó en condiciones similares de MCAO. Por lo tanto, hemos desarrollado un método experimental mejorado para hacer frente a esta discrepancia. Ratones fueron sometidos a MCAO usando un filamento como el material de la obstrucción para imitar las condiciones de movimiento humano y grueso filamento fue optimizado para crear más volumen de infarto reproducible. Extracción de ratones tratados con un metanol de Glycyrrhizae Radix et rizoma (GRex) tras inducción de movimiento mostró un volumen de infarto total significativamente disminuida y aumento en el número de supervivientes de las células en relación con el grupo control no tratado. Esto modificó el protocolo experimental con éxito y reproducible había demostrado el efecto beneficioso de GRex en accidente cerebrovascular isquémico.

En el grupo normal operado simulado, infarto cerebral no se observa mientras que en el grupo control, se observó una gama relativamente amplia de áreas dañadas. En los ratones administrado GRex 300 mg/kg en el grupo de modelos MCAO, una reducción estadísticamente significativa en el área dañada se observa (figura 2).
Los cambios histológicos son investigados por tinción de secciones del cer...

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Assessing Neuroprotective Effects of Glycyrrhizae Radix et Rhizoma Extract Using a Transient Middle Cerebral Artery Occlusion Mouse Model

En este estudio, modificamos un método experimental existente para obtener resultados reproducibles más, mediante el establecimiento de un modelo de ratón de arteria cerebral media oclusión (MCAO). La administración oral de Glycyrrhizae Radix et Extracto de metanol de rizoma (GR) (GRex), tras la inducción de la carrera, redujo significativamente el volumen de infarto total en relación con el grupo control no tratado.

Evaluación de efectos neuroprotectores de Glycyrrhizae Radix et Rhizoma extraer mediante un modelo de ratón de oclusión transitoria de la arteria Cerebral Media

Ischemia followed by reperfusion of cerebral blood flow after a stroke leads to the death of nerve cells and loss of brain tissue. The most commonly used ...

Este método puede ayudar a responder preguntas clave en los campos de investigación de neurociencia y medicina oral tradicional sobre la detección de compuestos naturales neuroprotectores relevantes para el modelo. La principal ventaja de esta técnica es que la mayor producibilidad del volumen de infección está de acuerdo con la dosis de sincronización isquémica. La demostración visual de este método es crítica, ya que es típico insertar un implemento muy delgado en la arteria cerebelosa media original, utilizando un microscopio estéril.Demostrar el procedimiento será Se-Eun Lee, un estudiante de primaria que estudia en mi laboratorio. Para preparar el extracto de Glycyrrhizae Radix et Rhizome, o GRex, primero agregue 200 gramos de Glycyrrhizae Radix et Rhizome, o GR, a dos litros de metanol para una incubación de cinco días a temperatura ambiente. Al final de la incubación, colar la solución a través de papel de filtro de 0,26 milímetros de espesor con un tamaño de poro de cinco micrómetros.Agregue el residuo GR a un litro de metanol fresco y filtre la solución de nuevo. Combine los dos filtrados y colarlos a través de un nuevo pedazo de papel de filtro. A continuación, concentrar el extracto al vacío antes de secar por congelación para producir GRex.Para preparar el GRex para su administración, disolver el producto liofilario en dimetilsulfóxido, y diluir la mezcla con 0,9% de solución salina fisiológica. A continuación, filtre la solución a través de un filtro de jeringa de 0,45 micrómetros, y ajustar la concentración final de DMSO a menos de 5%Para configurar un modelo de oclusión de la arteria cerebral media del ratón, o MCAO, confirme una falta de respuesta al estímulo de cola en una manta de temperatura corporal anestesada de seis semanas de edad de 22 a 25 gramos macho C57BL/6, y coloque el ratón en una manta de temperatura corporal de 36,5 grados Celsius, conectada a un termómetro. Después de quitar todo el cabello del pecho y el cuello del ratón afeitando y depilatoriamente crema, coloque el ratón debajo de un estereomicroscopio y haga una incisión cutánea de dos centímetros en el centro del cuello.Aísle cuidadosamente la arteria carótida común izquierda, la arteria carótida externa y la rama de la arteria carótida interna de los tejidos conectivos circundantes, y utilice una sutura de seda de 4.0 para ligar la arteria carótida externa y la arteria carótida común con un nudo de medio enganche para bloquear temporalmente el flujo sanguíneo hacia la arteria carótida interna. Inserte una sutura de 0,1 a 0,12 milímetros de espesor de 11 milímetros de largo recubierto de silicona de 8,0 monofilamento 4,0 a través de la arteria carótida interna hasta el origen de la arteria cerebral media izquierda, y utilice un medidor de flujo Doppler láser para medir la disminución de la arteria de flujo sanguíneo cerebral relativo. Fije el filamento insertado en el vaso sanguíneo durante dos horas mientras la arteria cerebral está ocluida.Al final del período de oclusión, retire cuidadosamente el filamento para restaurar el flujo sanguíneo durante 22 horas de reperfusión. Y usa suturas de 3.0 de seda para suturar la piel en cinco lugares con dos nudos de medio enganche. A continuación, devuelva el ratón a su jaula para la recuperación anestésica.Una hora después del final de la reperfusión, administrar 300 miligramos por kilogramo de peso corporal GRex a los animales experimentales, sólo por gavage oral. 24 Horas después del inicio de MCAO, haga una incisión en la piel media de la cabeza de cada animal experimental, y rompa los huesos parietales con fórceps en ángulo, mientras se despeja la dura mater. Aísle cuidadosamente el cerebro del cráneo y use una matriz cerebral de ratón para cortar el tejido extirpado en secciones gruesas de un milímetro.Manche las secciones durante 17 minutos en una solución de 2%TTC, de acuerdo con los protocolos estándar. Y fije las secciones en 10% de formol durante al menos 2 horas antes de tomar imágenes de las muestras con una cámara digital. A continuación, analice y cuantifique el área de infarto cerebral de cada sección utilizando ImageJ.En el punto de tiempo experimental apropiado después de la MCAO, perfume cada animal experimental eutanasiado transcardialmente con 10 mililitros de PBS, seguido de 10 mililitros de 4%paraformaldehído. Después de aislar los cerebros como se acaba de demostrar, sumerja los órganos cosechados en 10 mililitros de 30% de sacarosa durante la noche. A la mañana siguiente, incrustar las muestras de tejido cerebral en el compuesto de temperatura de corte óptima.Y corta los tejidos coronalmente en secciones de 15 micrómetros de espesor sobre un cirostato. Montar las secciones en portaobjetos de vidrio y sumergir las secciones en 80%etanol durante 1 minuto. Para la tinción de H&E, etiquete las muestras con solución de Hematoxilina durante 5 minutos, seguida de dos caídas en alcohol ácido al 1%.A continuación, sumerja los portaobjetos en una solución de carbonato de litio saturado durante 30 segundos, seguido de un lavado de 30 segundos en agua del grifo y 30 segundos de contramancha con solución de Eosin. Retire el exceso de solución de Eosin con un lavado con agua del grifo, y deshidrate los portaobjetos con inmersiones ascendentes de un minuto en 95 y luego 100%etanol. A continuación, airee los portaobjetos, despeje en xileno durante al menos 10 minutos y monte los cubreobjetos con el medio de montaje.Para la tinción de color violeta cresil, coloque los portaobjetos tratados con 80% de etanol en un calentador de diapositivas durante al menos una hora, seguido de una inmersión en 50%etanol diluido con cloroformo durante la noche. A la mañana siguiente, tiñe los portaobjetos con 0,1% de crema violeta durante 10 minutos en un horno seco celsius de 40 grados, seguido de una deshidratación en 95% etanol durante 30 minutos, y dos inmersiones de cinco minutos al 100% de etanol. A continuación, despeje los portaobjetos dos inmersiones de xileno de cinco minutos, seguidos de secado al aire.A continuación, monte las diapositivas con un medio de montaje para su visualización mediante microscopía de luz. En los grupos normales operados por sham, no se observa infarto cerebral;mientras que en control, los animales MCAO no tratados, se observa una gama relativamente amplia de áreas dañadas. En ratones modelo tratados con GRex de 300 miligramos por kilogramo, se observa una reducción estadísticamente significativa del tejido dañado.El análisis histológico de las secciones de tejido teñido de violeta h&E y cresil proporciona un índice de supervivencia celular. De hecho, las intensidades de tinción de H&E y crema violeta disminuyen significativamente en el control, grupo MCAO no tratado en relación con el grupo normal operado por sham. Los animales tratados con GRex, por otro lado, exhiben una mayor integridad histológica, lo que implica menos muerte celular neuronal que los grupos de control, no tratados y operados por sham, lo que sugiere un potente efecto neuroprotector del extracto contra la lesión cerebral inducida por la reperfusión de isquemia.Al intentar este procedimiento, es importante recordar controlar el flujo sanguíneo cerebeloso relativo durante este período. Y los conductores de procesos con mucho cuidado para minimizar los daños a las capas endoteliales de la

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