Name: assessing neuroprotective effects of glycyrrhizae radix et rhizoma extract using a transient middle cerebral artery occlusion mouse model
Uploaded: 2018-12-09T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Assessing Neuroprotective Effects of Glycyrrhizae Radix et Rhizoma Extract Using a Transient Middle Cerebral Artery Occlusion Mouse Model at JoVE.com

Ej tillämpligt.

Alla förfaranden som involverar djur godkändes av den etiska kommittén i Pusan National University (godkännandenummer, PNU-2016-1087). En grafisk översikt över denna studie visas i figur 1.
1. beredning och administrering av GRex
Obs: Den GR som används i denna studie köptes från kommersiella läkemedelsföretag.
<ol><li>200 g GR i 2 000 mL metanol och odla i rumstemperatur (25 ° C) i 5 dagar.</li>
	<li>Filtrera blandningen ...

<ol>
	<li>Bejot, Y., Delpont, B., Giroud, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rising+stroke+incidence+in+young+adults:+more+epidemiological+evidence,+more+questions+to+be+answered.">Rising stroke incidence in young adults: more epidemiological evidence, more questions to be answered.</a> Journal of the American Heart Association. 11 (5), (2016).</li><li>Hadadha, M., Vakili, A., Bandegi, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+the+inhibition+of+hydrogen+sulfide+synthesis+on+ischemic+injury+and+oxidative+stress+biomarkers+in+a+transient+model+of+focal+cerebral+ischemia+in+rats.">Effect of the inhibition of hydrogen sulfide synthesis on ischemic injury and oxidative stress biomarkers in a transient model of focal cerebral ischemia in rats.</a> Journal of Stroke and Cerebrovascular Diseases. 24 (12), 2676-2684 (2015).</li><li>Durukan, A., Tatlisumak, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+ischemic+stroke.">Animal models of ischemic stroke.</a> Article in Handbook of Clinical Neurology. 92, 43-66 (2009).</li><li>Kim, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+Models+of+Stroke.">Animal Models of Stroke.</a> Brain and Neurorehabilitation. 4 (1), 1-11 (2011).</li><li>Rizzato, G., Scalabrin, E., Radaelli, M., Capodaglio, G., Piccolo, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+exploration+of+licorice+metabolome.">A new exploration of licorice metabolome.</a> Food Chemistry. 221, 959-968 (2017).</li><li>Zhu, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+determination+of+flavonoids+in+licorice+and+comparison+of+three+licorice+species.">Rapid determination of flavonoids in licorice and comparison of three licorice species.</a> Journal of Separation Science. 39 (3), 473-482 (2016).</li><li>Ota, M., Mikage, M., Cai, S. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Herbological+study+on+the+medicinal+effects+of+roasted+licorice+and+honey-roasted+licorice.">Herbological study on the medicinal effects of roasted licorice and honey-roasted licorice.</a> Yakushigaku Zasshi. 50 (1), 38-45 (2015).</li><li>Lim, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Licorice+pretreatment+protects+against+brain+damage+induced+by+middle+cerebral+artery+occlusion+in+mice.">Licorice pretreatment protects against brain damage induced by middle cerebral artery occlusion in mice.</a> Journal of Medicinal Food. 21 (5), 474-480 (2018).</li><li>Koizumi, J. Y., Nakazawa, T., Ooneda, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+studies+of+ischemic+brain+edema.">Experimental studies of ischemic brain edema.</a> Nosotchu. 8 (1), 1-8 (1986).</li><li>Fischer, A. H., Jacobson, K. A., Rose, J., Zeller, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hematoxylin+and+eosin+staining+of+tissue+and+cell+sections.">Hematoxylin and eosin staining of tissue and cell sections.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2008, (2008).</li><li>Zhu, Y., Liu, F., Zou, X., Torbey, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+unbiased+estimation+of+neuronal+number+in+the+rat+hippocampus+with+different+staining+methods.">Comparison of unbiased estimation of neuronal number in the rat hippocampus with different staining methods.</a> Journal of Neuroscience Methods. 254, 73-79 (2005).</li><li>Alberts, M. J., Ovbiagele, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+strategies+for+ischemic+stroke+prevention:+role+of+multimodal+combination+therapies.">Current strategies for ischemic stroke prevention: role of multimodal combination therapies.</a> Journal of Neurology. 254 (10), 1414-1426 (2007).</li><li>Pinto, A., Tuttolomondo, A., Di Raimondo, D., Fernandez, P., Licata, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebrovascular+risk+factors+and+clinical+classification+of+strokes.">Cerebrovascular risk factors and clinical classification of strokes.</a> Seminars in Vascular Medicine. 4 (3), 287-303 (2004).</li><li>Barlow, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identifying+the+brain+regions+associated+with+acute+spasticity+in+patients+diagnosed+with+an+ischemic+stroke.">Identifying the brain regions associated with acute spasticity in patients diagnosed with an ischemic stroke.</a> Somatosensory and Motor Research. 33 (2), 1-8 (2016).</li><li>Roth, S., Liesz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stroke+research+at+the+crossroads+-+where+are+we+heading.">Stroke research at the crossroads - where are we heading.</a> Swiss Medical Weekly. 146, 14329 (2016).</li><li>Feuerstein, G. Z., Wang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+stroke.">Animal models of stroke.</a> Molecular Medicine Today. 6 (3), 133-135 (2000).</li><li>Herson, P. S., Traystman, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+stroke:+translational+potential+at+present+and+in+2050.">Animal models of stroke: translational potential at present and in 2050.</a> Future Neurology. 9 (5), 541-551 (2014).</li><li>Kumar, A., Gupta Aakriti, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+on+animal+models+of+stroke:+an+update.">A review on animal models of stroke: an update.</a> Brain Research Bulletin. 122, 35-44 (2016).</li><li>O'Collins, V. E., Donnan, G. A., Howells, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=History+of+animal+models+of+stroke.">History of animal models of stroke.</a> International Journal of Stroke. 6 (1), 77-78 (2011).</li><li>Ji, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioactive+constituents+of+Glycyrrhiza+uralensis+(licorice):+discovery+of+the+effective+components+of+a+traditional+herbal+medicine.">Bioactive constituents of Glycyrrhiza uralensis (licorice): discovery of the effective components of a traditional herbal medicine.</a> Journal of Natural Products. 79 (2), 281-292 (2016).</li><li>Yang, R., Wang, L. Q., Yuan, B. C., Liu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+pharmacological+activities+of+licorice.">The pharmacological activities of licorice.</a> Planta Medica. 81 (18), 1654-1669 (2015).</li><li>Yang, R., Yuan, B. C., Ma, Y. S., Zhou, S., Liu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+anti-inflammatory+activity+of+licorice,+a+widely+used+Chinese+herb.">The anti-inflammatory activity of licorice, a widely used Chinese herb.</a> Pharmaceutical Biology. 55 (1), 5-18 (2017).</li></ol>

Med den ökande förekomsten av metabola sjukdomar som kronisk hypertoni, diabetes och hyperlipidemi, som är stora riskfaktorer för stroke, har stroke prevention och behandling blivit ett viktigt område för medicinsk forskning12, 13. underskott i språk och rörelse efter en stroke är starkt korrelerade med graden av skador på hjärnans vävnad14 och resultera i en dålig livskvalitet för patienter och deras familjer<sup class="xref...

Hjärnskador som orsakas av ischemi och reperfusion av cerebralt blodflöde leder till död av nervceller och förlust av hjärnvävnad. Denna typ av hjärnskada fortsätter att öka med den ökande förekomsten av cerebrovaskulära sjukdomar på grund av spridningen av metabola sjukdomar som fetma, hypertoni och diabetes mellitus1,2. Det absoluta antalet äldre patienter med stroke har ökat dramatiskt över hela världen, och kostnaden för sjukvård för dessa patienter, som är ofta kvar med långsiktig funktionshinder, är en stor samhälleliga börda. Sekundära funktionshinder bör därför minskas så mycket som möjligt att minska den ekonomiska börda1,2.
Den vanligaste gnagare modellen av cerebral infarkt är den mellersta cerebral artär (MCA) ocklusion (MCAO) modellen, där MCA är ockluderas med en silicon-belagd kirurgiska suturering glödtråden att blockera blodflödet, orsakar ischemisk stroke3, 4. med en glödtråd som ocklusion materialet tillåter kontroll av ocklusion tid och varaktighet genom att manipulera varaktigheten av intra-luminala glödtråden insättningspunkten.
Tidigare studier har visat att även när samma gnagare MCAO modell används, varierar den totala volymen av hjärninfarkt mellan experiment, orsakar låg reproducerbarhet av studierna. För att förbättra reproducerbarhet, optimerat vi tjockleken på Myntverket i glödtråden som används i experimentet. Resultatet av en förstudie av cerebral ischemisk period och inducerad hjärtinfarkt visade att en ischemisk period som är längre än 60 min tillåtna volymetriska regionen skadad hjärnvävnaden att observeras och kvantifieras.
Glycyrrhizae Radix et Rhizoma (GR), även känd som lakrits, består av torkade rötter och jordstammar av Glycyrrhiza uralensis och G. glabra. Det har använts i kinesiska och koreanska traditionell medicin för olika syften inklusive som livsmedelstillsats och medicinskt5,6,7.
I en tidigare studie8, förbehandling med GR metanol extrakt (GRex) visade ett anti-apoptotiska effekt i MCAO möss, inklusive betydande förebyggande av minskningen av proteinuttryck för B-cellslymfom 2 (Bcl-2) och Bcl extrastor (Bcl-xL). Denna studie genomfördes för att förbättra reproducerbarheten av konventionella MCAO musmodellen genom att utvärdera dess effektivitet för att avgöra om efter infarkt behandling med GRex effektivt minska infarct volymen i MCAO-inducerad cerebral skada.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1416px;" width="1417">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:383px;">Glycyrrhizae Radix et Rhizoma</td>
			<td style="width:307px;">Gwangmyoung Pharmaceuticals Co., Korea</td>
			<td style="width:344px;"></td>
			<td style="width:383px;">Glycyrrhizae Radix et Rhizoma</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Qualitative filter paper</td>
			<td>Advantec</td>
			<td style="width:344px;">Filter paper No. 2</td>
			<td>Qualitative filter paper</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D8418-250ML</td>
			<td>Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Syringe filter (0.45 &#181;m)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>CLS431220</td>
			<td>Syringe filter (0.45 &#181;m)</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Stereo Microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>M50</td>
			<td>Stereo Microscope</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Stereo Microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>SMZ745</td>
			<td>Stereo Microscope</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Laser Doppler</td>
			<td>Moor Instrument</td>
			<td>moorVMS-LDF</td>
			<td>Laser Doppler</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Anesthesia Tabletop Bracket with N2O&#38;O2 Flowmeter System</td>
			<td>Harvard Appratus</td>
			<td>34-1352</td>
			<td>Anesthesia Tabletop Bracket with N2O&#38;O2 Flowmeter System</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Homeothermic Monitoring System</td>
			<td>Harvard Appratus</td>
			<td>55-7020</td>
			<td>Homeothermic Monitoring System</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Digital Camera</td>
			<td>Canon</td>
			<td>Eos-M2</td>
			<td>Digital Camera</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Cryostat</td>
			<td>Leica</td>
			<td>CM3050S</td>
			<td>Cryostat</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Microscope</td>
			<td>Carl Zeiss</td>
			<td>Zeiss Axio</td>
			<td>Microscope</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Data Analysis</td>
			<td>Systat Software Inc.</td>
			<td>SigmaPlot version 12</td>
			<td>Data Analysis</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Data Analysis</td>
			<td>NIH Image</td>
			<td>ImageJ</td>
			<td>Data Analysis</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Mouse diet</td>
			<td>Doo Yeol Biotech</td>
			<td>Standard rodent chow</td>
			<td>Mouse diet</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Isoflurane</td>
			<td>JOONGWAE</td>
			<td>A02104781</td>
			<td>Isoflurane</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Isoflurane</td>
			<td>TROIKAA</td>
			<td>ISOTROY 100</td>
			<td>Isoflurane</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Silk suture (4-0 Black silk)&#160;</td>
			<td>AILEE</td>
			<td>SK47510</td>
			<td>Silk suture (4-0 Black silk)&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Silk suture (3-0 White silk)&#160;</td>
			<td>Baekjae</td>
			<td>57</td>
			<td>Silk suture (3-0 White silk)&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Nylon suture (8-0 monofilament)&#160;</td>
			<td>AILEE</td>
			<td>NB825</td>
			<td>Nylon suture (8-0 monofilament)&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T8877-25G</td>
			<td>2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC)</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Formalin (Formaldehyde solution)</td>
			<td>JUNSEI</td>
			<td>69360-1263 20KG</td>
			<td>Formalin (Formaldehyde solution)</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Hematoxylin (Harris Hematoxylin)</td>
			<td>YD Diagnostics</td>
			<td>EasyStain</td>
			<td>Hematoxylin (Harris Hematoxylin)</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Eosin (1% Eosin Y Solution)</td>
			<td>MUTO PURE CHEMICALS</td>
			<td>3200-2</td>
			<td>Eosin (1% Eosin Y Solution)</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Cresyl violet (acetate)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C5042-10G</td>
			<td>Cresyl violet (acetate)</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Paraformaldehyde&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:344px;">P6148-1KG</td>
			<td>Paraformaldehyde&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Sucrose</td>
			<td>JUNSEI</td>
			<td>31365-0350 1KG</td>
			<td>Sucrose</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Optimum cutting temperature (OCT) compound</td>
			<td>Scigen</td>
			<td>4583</td>
			<td>Optimum cutting temperature (OCT) compound</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Disecting Knife</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>10055-12</td>
			<td>Disecting Knife</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">#4 Forcep</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11241-30</td>
			<td>#4 Forcep</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">#5 Forcep</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11254-20</td>
			<td>#5 Forcep</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">#6 Forcep</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11260-20</td>
			<td>#6 Forcep</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">#7 Fine Forcep</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11274-20</td>
			<td>#7 Fine Forcep</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Surgical Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14001-12</td>
			<td>Surgical Scissors</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Extra Fine Bonn Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14084-08</td>
			<td>Extra Fine Bonn Scissors</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Moria Pascheff-Wolff Spring Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15371-92</td>
			<td>Moria Pascheff-Wolff Spring Scissors</td>
		</tr>
		<tr height="31">
			<td height="31" style="height:31px;">Vessel Dilating Forcep</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>18153-11</td>
			<td>Vessel Dilating Forcep</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessing neuroprotective effects of glycyrrhizae radix et rhizoma extract using a transient middle cerebral artery occlusion mouse model

Ischemi som följt av reperfusion av cerebralt blodflöde efter en stroke leder till död av nervceller och förlust av hjärnvävnad. Den vanligaste djurmodell för att studera stroke är den mellersta cerebral artär ocklusion (MCAO) modellen. Tidigare studier har rapporterat olika infarct storlekar även när de samma experimentella djurarter användes under liknande MCAO förhållanden. Därför utvecklade vi en förbättrad experimentell metod för att hantera denna diskrepans. Möss utsattes för MCAO med en glödtråd som ocklusion materialet för att efterlikna mänskliga stroke villkor och glödtråden tjocklek var optimerad för att upprätta mer reproducerbar infarkt volym. Möss som behandlats med en metanol extrakt av Glycyrrhizae Radix et rhizom (GRex) efter stroke induktion visade en signifikant minskade totala infarkt volym och ökat antal överlevande celler i förhållande till obehandlade kontrollgruppen. Detta modifierade experimentellt protokoll framgångsrikt och visat reproducibly den positiva effekten av GRex på ischemisk stroke.

I simulerade manövrerade normala gruppen observeras ingen cerebral infarkt medan kontrollgruppen, ett relativt stort antal skadade områden följs. Hos mössen observeras administrerade 300 mg/kg GRex i gruppen MCAO modell, en statistiskt signifikant minskning av skadade området (figur 2).
De histologiska förändringarna utreds av färgning ischemisk hjärna sektioner med H & E eller tolyloxi vio...

Watch this Scientific Journal Video about Assessing Neuroprotective Effects of Glycyrrhizae Radix et Rhizoma Extract Using a Transient Middle Cerebral Artery Occlusion Mouse Model at JoVE.com

Assessing Neuroprotective Effects of Glycyrrhizae Radix et Rhizoma Extract Using a Transient Middle Cerebral Artery Occlusion Mouse Model

I denna studie ändra vi en befintlig experimentell metod för att få fler reproducerbara resultat, genom att upprätta en mitten cerebral artär ocklusion (MCAO) musmodell. Oral administrering av Glycyrrhizae Radix et rhizom (GR) metanol extrakt (GRex), efter stroke induktion, minskade signifikant total infarkt volym i förhållande till obehandlade kontrollgruppen.

Bedömningen av neuroprotektiva effekter av Glycyrrhizae Radix et Rhizoma extraktet med hjälp av en övergående mellersta Cerebral artär ocklusion musmodell

Ischemia followed by reperfusion of cerebral blood flow after a stroke leads to the death of nerve cells and loss of brain tissue. The most commonly used ...

Denna metod kan hjälpa till att besvara viktiga frågor inom neurovetenskap och traditionell oral medicin forskning fält om screening för neuroprotektiva naturliga föreningar som är relevanta för modellen. Den största fördelen med denna teknik är att infektionsvolymens högre producibility är i enlighet med ischemisk timingdos. Visuell demonstration av denna metod är kritisk eftersom det är typiskt att sätta in ett mycket tunt redskap i originalet, den mellersta cerebellarartären med hjälp av ett sterilt mikroskop.Demonstrera förfarandet kommer att Se-Eun Lee, en klass en skolelev som studerar i mitt laboratorium. För att förbereda Glycyrrhizae Radix et Rhizome extrakt, eller GRex, först lägga 200-gram Glycyrrhizae Radix et Rhizom, eller GR, till två-liter metanol för en fem dagars inkubation vid rumstemperatur. I slutet av inkubationen, sila lösningen genom 0,26-millimeters tjockt filterpapper med en fem-mikrometer porstorlek.Tillsätt GR-resten till en-liters färsk metanol, och filtrera lösningen igen. Kombinera de två filtraterna, och sila dem genom en ny bit av filterpapper. Koncentrera sedan extraktet under vakuum före frystorkning för att producera GRex.För att förbereda GRex för administrering, lös den frystorkade produkten i dimetylsulfoxid, och späd blandningen med 0,9%fysiologisk saltlösning. Filtrera sedan lösningen genom ett 0,45-mikrometersprutfilter, och justera den slutliga koncentrationen av DMSO till mindre än 5%För att ställa in en mus mellersta cerebral artär ocklusion modell, eller MCAO, bekräfta en brist på lyhörd för svans stimulans i en sövd sex veckor gammal 22 till 25-gram hane C57BL/6 mus, och placera musen på en 36,5-graders Celsius kroppstemperatur hålla filt, ansluten till en termometer. Efter att ha tagit bort allt hår från bröstet och halsen av musen genom rakning och depilatory grädde, placera musen under en stereomikroskop och göra en två centimeter hud snitt i mitten av halsen.Försiktigt isolera den vänstra gemensamma halspulsådern, externa halspulsådern, och grenen av den inre halspulsådern från de omgivande bindväv, och använda en 4,0-silke sutur till ligate den yttre halspulsådern och den gemensamma halspulsådern med en halv-hitch knut att tillfälligt blockera blodflödet i den inre halspulsådern. Sätt in en 0,1 till 0,12-millimeters tjock 11-millimeters lång silikon-belagda 8,0-monofilament 4,0-silke sutur genom den inre halspulsådern till ursprunget till vänster mellersta cerebral artär, och använda en laser Doppler flödesmätare för att mäta minskningen av relativa cerebral blodflöde artär. Fixera den insatta glödtråden till blodkärlet i två timmar medan hjärnartären är ockluderad.Vid slutet av ocklusionsperioden, dra försiktigt tillbaka glödtråden för att återställa blodflödet i 22 timmars reperfusion. Och använd 3,0-siden suturer för att suturera huden på fem ställen med två halv hitches knop. Sedan tillbaka musen till sin bur för bedövningsmedel återhämtning.En timme efter slutet av reperfusion, administrera 300-milligram per kilo kroppsvikt GRex till försöksdjur, endast genom oral sondmatning. 24 Timmar efter debuten av MCAO, gör ett snitt i mitten huden på huvudet av varje försöksdjur, och bryta parietalbenen med vinklade tlysp, medan avskalning av dura mater. Isolera försiktigt hjärnan från skallen, och använd en mus hjärnmatris för att skära den strukna vävnaden i en millimeter tjocka sektioner.Fläcka sektionerna i 17 minuter i 2%TTC-lösning, enligt standardprotokoll. Och fixa avsnitten i 10%formalin i minst 2 timmar innan bildframtagning proverna med en digitalkamera. Analysera sedan och kvantifiera cerebral infarct området i varje avsnitt med hjälp av ImageJ.Vid lämplig experimentell tidpunkt efter MCAO, genomsyra varje avlivas försöksdjur transcardially med 10-milliliter pbs, följt av 10-milliliter av 4%paraformaldehyd. Efter att ha isolerat hjärnorna som just visat, fördjupa de skördade organen i 10-milliliter av 30%sackaros över natten. Nästa morgon, bädda in hjärnvävnadsprover i optimal skärtemperatur förening.Och skiva vävnaderna koronlly i 15-mikrometer tjocka sektioner på en cyrostat. Montera sektionerna på glasglas och dränka sektionerna i 80%etanol i 1 minut. För H&E-färgning, märk proverna med Hematoxylinlösning i 5 minuter, följt av två dips i 1%syraalkohol.Därefter sänk du ned glidbanorna i mättad Litiumkarbonatlösning i 30 sekunder, följt av en 30-sekunders tvätt i kranvatten och 30 sekunders motfärgning med Eosin-lösning. Ta bort den överflödiga Eosin-lösningen med en kranvattentvätt, och torka av objektglasen med en minuts stigande nedsänkningar i 95 och sedan 100%etanol. Därefter luftdry bilderna, rensa dem i xylen i minst 10 minuter, och montera täckskydd med montering medium.För krylviolettfärgning, placera de 80%-etanolbehandlade objektglasen på en glidvärmare i minst en timme, följt av nedsänkning i 50%etanol utspädd med kloroform över natten. Nästa morgon, färga bilderna med 0,1%kresylviolett i 10 minuter i en 40-graders Celsius torr ugn, följt av en uttorkning i 95%etanol i 30 minuter, och två fem minuters 100%etanol nedsänkning. Därefter rensa bilderna två fem minuters xylen nedsänkning, följt av lufttorkning.Montera sedan objektglasen med monteringsmedium för visualisering genom lätt mikroskopi. I skendrivna normala grupper observeras ingen cerebral infarkt;medan det i kontroll, obehandlade MCAO-djur observeras ett relativt brett spektrum av skadade områden. I 300-milligram per kilogram GRex-behandlade modellmöss observeras en statistiskt signifikant minskning av skadad vävnad.Histologisk analys av H&E och cresylviolett-färgade vävnadssektionerna ger ett index över cellernas överlevnad. Faktum är att H&E och cresylvioletta färgningsintensiteter minskar signifikant i kontrollen, obehandlad MCAO-grupp i förhållande till den skendrivna normala gruppen. De GRex-behandlade djuren uppvisar däremot en större histologisk integritet, vilket innebär mindre neuronal celldöd än både kontroll, obehandlade och skendrivna grupper, vilket tyder på en potent nervskyddande effekt av extraktet mot ischemireperfusion-inducerad hjärnskada.Medan du försöker detta förfarande, Det är viktigt att komma ihåg att övervaka den relativa cerebellar blodflödet under denna period. Och ledare av processer mycket noggrant för att minimera skador till endotelskikten i

Research

JoVE Journal

Medicine

Modeling Stroke in Mice - Middle Cerebral Artery Occlusion with the Filament Model

Modellering stroke hos möss - Middle Cerebral artärocklusion med glödlamporna modell

Stroke is among the most frequent causes of death and adult disability, especially in highly developed countries. However, treatment options to date are ...

Mouse Model of Middle Cerebral Artery Occlusion

Musmodell av Middle Cerebral artärocklusion

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the ...

Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Mice

Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Mice

Intraluminal Middle Cerebral artärocklusion (kortex) Modell för ischemisk stroke med Laser Doppler Flowmetry Vägledning hos möss

Stroke is the third leading cause of death and the leading cause of disability in the world, with an estimated cost of near $70 billion 
in the United ...

The Application Of Permanent Middle Cerebral Artery Ligation in the Mouse

Tillämpningen av permanenta Mellanöstern Cerebral Artery Ligation i musen

Focal cerebral ischemia is among the most common type of stroke seen in patients. Due to the clinical significance there has been a prolonged effort to ...

Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Rat

Endotelin-1 inducerad Middle cerebral artärocklusion modell för ischemisk stroke med laser Doppler Flowmetry Vägledning i råtta

Stroke is the number one cause of disability and third leading cause of death in the world, costing an estimated $70 billion in the United States in ...

Utilizing a Cranial Window to Visualize the Middle Cerebral Artery During Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion

Använda en Kranial fönster för att visualisera den mellersta cerebrala artären under Endotelin-1 inducerad Middle cerebral artärocklusion

Creation of a cranial window is a method that allows direct visualization of structures on the cortical surface of the brain1-3. This technique can be ...

Optimized System for Cerebral Perfusion Monitoring in the Rat Stroke Model of Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion

Optimerat system för cerebral perfusion övervakning i råtta Stroke Modell av Intraluminal Middle cerebral artärocklusion

The translational potential of pre-clinical stroke research depends on the accuracy of experimental modeling. Cerebral perfusion monitoring in animal ...

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

Emboli Middle Cerebral artärocklusion (kortex) för ischemisk stroke med Homologa Blodproppar i råttor

Clinically, thrombolytic therapy with use of recombinant tissue plasminogen activator (tPA) remains the most effective treatment for acute ischemic ...

Quantification of Neurovascular Protection Following Repetitive Hypoxic Preconditioning and Transient Middle Cerebral Artery Occlusion in Mice

Kvantifiering av neurovaskulär skydd Efter Repetitiva Hypoxisk Förkonditionering och Transient Middle Cerebral artärocklusion hos möss

Experimental animal models of stroke are invaluable tools for understanding stroke pathology and developing more effective treatment strategies. A 2 week ...

Performing Permanent Distal Middle Cerebral with Common Carotid Artery Occlusion in Aged Rats to Study Cortical Ischemia with Sustained Disability

Utföra ständiga Distal Middle Cerebral med gemensamma hals artärocklusion i åldrade råttor för att studera kortikal ischemi med fördröjd funktionshinder

Stroke typically occurs in elderly people with a range of comorbidities including carotid (or other arterial) atherosclerosis, high blood pressure, ...