Name: microdialysis of excitatory amino acids during eeg recordings in freely moving rats
Uploaded: 2018-11-08T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Microdialysis of Excitatory Amino Acids During EEG Recordings in Freely Moving Rats at JoVE.com

الكتاب أود أن أشكر Anna بيناشي وباولو رونكون وايليونورا بالما لمساهمتها في المخطوطات المنشورة في الأسبقية.

عليها جميع الإجراءات التجريبية بجامعة فيرارا رعاية الحيوان المؤسسية واستخدام اللجنة ووزارة الصحة الإيطالية (إذن: مارك 246/2012-ب) وفقا للمبادئ التوجيهية الواردة في "المجتمعات الأوروبية" مجلس التوجيه من 24 نوفمبر 1986 (86/609/EEC). ويعدل هذا البروتوكول على وجه التحديد لتصميم غلوتامات واسبارتاتي في دي...

نحن في هذا العمل، يظهر كيف يمكن أن يتم تسجيل الفيديو-EEG مستمر مقرونا ميكرودياليسيس في نموذج تجريبي ل TLE. وتستخدم تقنيات تسجيل الفيديو-EEG لتشخيص المراحل المختلفة لتطور المرض في الحيوانات بشكل صحيح ويتم استخدام تقنية ميكرودياليسيس لوصف التغييرات في الإصدار الغلوتامات التي تحدث في الوقت الم?...

إلى التبصير بضعف وظيفي لوساطة غلوتامات ضادات وجابايرجيك كبيرة المثبطة أسفر عن المضبوطات عفوية في صرع الفص الصدغي (TLE)، نحن بانتظام رصد تركيزات خارج الخلية GABA1 وبعد ذلك طبعا مستويات الغلوتامات والاسبارتيت2 من ميكرودياليسيس في الحصين البطني من الفئران في نقاط زمنية مختلفة من هذا المرض الطبيعية، أيخلال التنمية والتقدم للصرع. ونحن استغل الطراز pilocarpine TLE في الفئران، الذي يحاكي هذا المرض بشكل دقيق جداً من حيث التغيرات السلوكية والكهربية ونسيجية3،4 ونحن يرتبط تركيز dialysate الأمينية الأحماض بمراحلها المختلفة: المرحلة الحادة بعد الإهانة ابيليبتوجينيك، في مرحلة الكمون، وقت الاستيلاء العفوية الأولى و6،75،فاس المزمنة. تأطير مراحل المرض كان مكن رصد EEG الفيديو الطويلة الأجل ودقة التخطيط الدماغي والسريرية توصيف المضبوطات عفوية. تطبيق تقنية ميكرودياليسيس المرتبطة برصد EEG الفيديو طويل الأجل يسمح لنا باقتراح فرضيات آليا لأمراض الأعصاب TLE. وباختصار، يتيح الأسلوب الموصوفة في هذه المخطوطة الاقتران من التعديلات الكيميائية العصبية داخل منطقة محددة بالدماغ مع التنمية والتقدم للصرع في نموذج حيوان.
الأجهزة المزدوجة، تتكون من عمق القطب محاذياً قنية ميكرودياليسيس، كثيرا ما تستخدم في الدراسات البحثية الصرع حيث ينبغي أن ترتبط التغيرات في الناقلات العصبية، ونواتج الأيض، أو ركائز الطاقة لنشاط الخلايا العصبية. في الغالبية العظمى من الحالات، وهو يستخدم في التصرف بحرية الحيوانات، ولكن يمكن أن تجري أيضا بطريقة مماثلة في البشر، مثلاً، في دراسة معمقة من العقاقير المقاومة مرضى الصرع تمر بعمق مسرى التحقيق قبل الجراحة8. يمكن تنفيذ تسجيل EEG، وجمع دياليساتي على حدة (مثلاً، زرع مسرى في واحد في نصف الكرة وميكرودياليسيس التحقيق في نصف الكرة الغربي الأخرى أو حتى أداء في ميكرودياليسيس في مجموعة واحدة من الحيوانات أثناء أداء التخطيط الدماغي الوحيد في مجموعة أخرى من الحيوانات). على الرغم من ذلك، اقتران أقطاب كهربائية إلى تحقيقات قد مزايا متعددة: أنه يبسط عملية جراحية ستيريوتاكسيك، ويحد من تلف الأنسجة إلى واحد فقط في نصف الكرة (بينما تترك الأخرى، سليمة، كعنصر تحكم لدراسات نسيجية)، وهوموجينيزيس نتائج هذه تم الحصول عليها من نفس المنطقة الدماغ والحيوان نفسه.
من ناحية أخرى، يتطلب إعداد الجهاز قطب كهربائي مسبار ميكرودياليسيس إلى جانب الوقت والمهارات إذا كان الصنع. واحد يمكن أن تنفق مبالغ مالية مرتفعة نسبيا إذا تم شراؤها من السوق. وعلاوة على ذلك، عندما يسبر ميكرودياليسيس (نصائح المسبار هي عادة 200-400 ميكرون في القطر و 7-12 ملم طويلة)9، واقطاب EEG (نصائح القطب عادة من 300-500 ميكرون في القطر، وطويل بما يكفي للوصول إلى هيكل الدماغ لفائدة10) بالإضافة إلى، يمثل الجهاز المحمل كائن ضخمة وثقيلة نسبيا على جانب واحد من الرأس، والتي مزعجة للحيوانات وعرضه لأن تضيع خاصة عندما كان متصلاً بمضخة غسيل الكلي ونظام تسجيل EEG الثابت من الأسلاك. هذا الجانب أكثر صلة بالصرع الحيوانات التي يصعب التعامل معها والتكيف أقل لدورات ميكرودياليسيس. التقنيات الجراحية المناسبة والرعاية اللاحقة للعمليات الجراحية المناسبة يمكن أن ينتج يزرع طويلة الأمد التي تسبب أدنى إزعاج الحيوان وينبغي اتباعها لتجارب EEG ميكرودياليسيس كومبيناتوري، ،من1011 12.
مزايا وقيود تقنية ميكرودياليسيس قد استعرضت بالتفصيل العديد من علماء الأعصاب. ميزته الأساسية خلال في فيفو نضح تقنيات أخرى (مثلاً، دفع وجذب تدفق سريع أو نضح كأس القشرية) هو قطره صغيرة من التحقيق الذي يغطي منطقة دقيقة نسبيا لفائدة13،14، 15. ثانيا، يقوم الغشاء ميكرودياليسيس حاجز مادي بين الأنسجة وبيرفوساتي؛ ولذلك، المواد الوزن الجزيئي العالية لا عبور ولا تتداخل مع تحليل16،17. وعلاوة على ذلك، حماية الأنسجة من تدفق المضطرب بيرفوساتي18. ميزة هامة أخرى هي إمكانية تعديل تدفق بيرفوساتي لتحقيق أقصى قدر من التركيز أكثر في بيرفوساتي (أيعملية ميكرودياليسيس ويمكن أيضا تعريف رياضيا ويمكن تعديلها تسفر عن ارتفاع 19من تركيزات أكثر في العينة). وأخيراً، قد تستعمل التقنية ضخ الأدوية أو المواد عقاقيري النشط في الأنسجة للفائدة وتحديد أثرها في موقع تدخل20. من ناحية أخرى، قد ميكرودياليسيس وقت قرار محدودة (عادة أكثر من 1 دقيقة بسبب الوقت اللازم لجمع العينات) بالمقارنة مع أجهزة الاستشعار الكهروكيميائية أو البيولوجية؛ هو أسلوب الغازية التي تسبب تلف الأنسجة؛ أنه يعرض للخطر التوازن الكيميائية العصبية داخل الفضاء حول الغشاء بسبب الانحدار تركيز مستمر لجميع المواد القابلة للذوبان الذي يدخل بيرفوساتي جنبا إلى جنب مع أكثر الفائدة. وأخيراً، تقنية ميكرودياليسيس يتأثر عالية بحدود التقنيات التحليلية المستخدمة للتقدير الكمي للمواد في بيرفوساتي9،،من2122،23 . كروماتوغرافيا سائلة عالية الأداء ([هبلك]) بعد derivatization مع أورثوفثالديالديهيدي لتحليل العينات البيولوجية غلوتامات واسبارتاتي قد تم التحقق من صحتها جيدا24،،من2526 , 27 ومناقشة واسعة النطاق خارج نطاق هذه المخطوطة، ولكن سيتم وصف البيانات المنتجة باستخدام هذه الطريقة بالتفصيل.
عند القيام بشكل سليم ودون إدخال تعديلات على تكوين بيرفوساتي، ميكرودياليسيس يمكن أن توفر معلومات موثوقة حول المستويات القاعدية لإطلاق سراح العصبي. الجزء الأكبر من المستويات القاعدية ومن المرجح نتيجة لامتداد الإرسال من نهايات9. لأنه في كثير من الأحيان عينات بسيطة من العصبي في مساحة إضافية متشابك لا يكفي لتحقيق الأهداف المتمثلة في التحقيق، تقنية ميكرودياليسيس يمكن أن تستخدم أيضا لتحفيز الخلايا العصبية أو لحرمانهم من الأهمية أيونات الفسيولوجية مثل ك+ Ca2 +، أو من أجل استحضار أو منع الإفراج عن العصبي.
غالباً ما يستخدم عالية ك+ التحفيز في بيولوجيا الأعصاب لتحفيز نشاط الخلايا العصبية ليس فقط في الحيوانات مستيقظا ولكن أيضا في الثقافات الابتدائية وأورجانوتيبيك. تعرض نظام صحي العصبي المركزي للحلول مع تركيزات عالية من ك+ (40-100 ملم) تثير افلوكس من العصبية28. يمكن أن يتعرض هذا قدرة الخلايا العصبية على توفير إصدار إضافية استجابة لارتفاع ك+ في الحيوانات الصرع1 في29،أمراض الأعصاب الأخرى30. وبالمثل، Ca2 + الحرمان (التي تم الحصول عليها من بيرفوسينج Ca2 + الحلول مجاناً) يستخدم لوضع الكالسيوم تعتمد على إطلاق سراح معظم أجهزة الإرسال العصبية التي تقاس ميكرودياليسيس. ويعتقد عموما أن Ca2 + تعتمد الإصدار منشأ الخلايا العصبية، بينما تنشأ Ca2 + الإصدار المستقل من إطلاق، ولكن العديد من الدراسات أثارت الجدل حول معنى Ca2 +-قياسات حساسة مثل غلوتامات أو GABA9: وهكذا، إذا كان ذلك ممكناً، فمن المستحسن أن دعم الدراسات ميكرودياليسيس بالدراسات ميكروسينسور، وهذه الأخيرة أعلى القرار المكانية والأقطاب يسمح للحصول على أقرب إلى نهايات31.
فيما يتعلق بالدراسات ميكرودياليسيس في الحيوانات الصرع، من المهم التأكيد على أن البيانات التي تم الحصول عليها من معظم هذه تعتمد على رصد الفيديو أو الفيديو-EEG للمضبوطات، أيحدوث عابرة من علامات أو أعراض غير طبيعية بسبب المفرطة أو متزامن مع نشاط الخلايا العصبية في الدماغ32. وهناك بعض التفاصيل من مضبوطات اليكتروجرافيك في التعامل مع pilocarpine الحيوانات التي ينبغي النظر فيها عند إعداد التجربة. مضبوطات عفوية يتبعها كساد النشاط مع كثرة التخطيط الدماغي المسامير إينتيريكتال3 وتحدث في مجموعات،من3334. شام يشغلها غير صرع الحيوانات قد يحمل نشاط مثل الاستيلاء على35 ولذلك ينبغي أن تكون معايير التقييم تسجيلات التخطيط الدماغي موحدة36 ، وإذا كان ذلك ممكناً، ينبغي أن يكون توقيت الدورات ميكرودياليسيس محددة تحديداً جيدا. وأخيراً، ونحن نوصي بشدة وفقا للمبادئ والمعايير المنهجية لرصد EEG الفيديو في مكافحة القوارض الكبار حددها خبراء الجامعة الدولية ضد الصرع وجمعية الصرع الأمريكية في تقاريرها الأخيرة جداً37 ،38.
وهنا يصف لنا ميكرودياليسيس الغلوتامات واسبارتاتي جنبا إلى جنب مع تسجيلات الفيديو-EEG طويلة الأجل في الحيوانات الصرع وتحليلها في دياليساتي واسطة [هبلك]. وسوف نؤكد على الخطوات الحاسمة من البروتوكول أن المرء يجب العناية لنتيجة أفضل.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>3-channel two-twisted electrode</td>
			<td>Invivo1, Plastic One, Roanoke, Virginia, USA</td>
			<td>MS333/3-B/SPC</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>guide cannula</td>
			<td>Agn Tho&#39;s, Lindig&#246;, Sweden</td>
			<td>MAB 4.15.IC</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Resin KK2 Plastik</td>
			<td>Elettra Sport, Lecco, Italy</td>
			<td>KK2</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Super Attack gel Loctite</td>
			<td>Henkel Italia Srl, Milano, Italy</td>
			<td>2047420_71941</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imalgene-Ketamine</td>
			<td>Merial, Toulouse, France</td>
			<td>221300288 (AIC)</td>
			<td>Solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine</td>
			<td>Sigma, Milano, Italy</td>
			<td>X1251</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane-Vet</td>
			<td>Merial, Toulouse, France</td>
			<td>103120022 (AIC)</td>
			<td>Solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Altadol 50 mg/ ml - tramadol</td>
			<td>Formevet, Milano, Italy</td>
			<td>103703017 (AIC)</td>
			<td>Solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gentalyn 0.1% crm - gentamycine</td>
			<td>MSD Italia, Roma, Italy</td>
			<td>20891077 (AIC)</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>simplex rapid dental cement</td>
			<td>Kemdent, Associated Dental Products Ltd, Swindon, United Kingdom</td>
			<td>ACR811</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GlasIonomer CX-Plus Cement</td>
			<td>Shofu, Kyoto, Japan</td>
			<td>PN1167</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>probe clip holder</td>
			<td>Agn Tho&#39;s, Lindig&#246;, Sweden</td>
			<td>p/n 100 5001</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histoacryl&#174; Blue Topical Skin Adhesive</td>
			<td>TissueSeal, Ann Arbor, Michigan, USA</td>
			<td>TS1050044FP</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Valium 10 mg/2 ml - diazepam</td>
			<td>Roche, Monza, Italy</td>
			<td>019995063 (AIC)</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 mL syringe with 25G needle</td>
			<td>Vetrotecnica, Padova, Italy</td>
			<td>11.3500.05</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rat flexible feeding needle 17G</td>
			<td>Agn Tho&#39;s, Lindig&#246; Sweden</td>
			<td>7206</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Grass Technology apparatus</td>
			<td>Grass Technologies, Natus Neurology Incorporated, Pleasanton, California, USA</td>
			<td>M665G08</td>
			<td>Equipment (AS40 amplifier, head box, interconnecting cables, telefactor model RPSA S40)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>modular data acquisition and&#160;analysis system MP150</td>
			<td>Biopac, Goleta, California, USA</td>
			<td>MP150WSW</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>digital video surveillance system</td>
			<td>AverMedia Technologies, Fremont, California, USA</td>
			<td>V4.7.0041FD</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microdialysis probe</td>
			<td>Agn Tho&#39;s, Lindig&#246; Sweden</td>
			<td>MAB 4.15.1.Cu</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microdialysis probe</td>
			<td>Synaptech, Colorado Springs, Colorado, USA</td>
			<td>S-8010</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>block heater</td>
			<td>Grant Instruments, Cambridge, England</td>
			<td>QBD2</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stirrer</td>
			<td>Cecchinato A, Aparecchi Scientifici, Mestre, Italy</td>
			<td>711</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>infusion pump</td>
			<td>Univentor, Zejtun, Malta</td>
			<td>864</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>fine bore polythene tubing</td>
			<td>Smiths Medical International Ltd., Keene, New Hampshire, USA</td>
			<td>800/100/100/100</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>blue tubing adapters</td>
			<td>Agn Tho&#39;s, Lindig&#246; Sweden</td>
			<td>1002</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>red tubing adapters</td>
			<td>Agn Tho&#39;s, Lindig&#246; Sweden</td>
			<td>1003</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2.5 mL syringe with 22G needle</td>
			<td>Chemil, Padova, Italy</td>
			<td>S02G22</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>vial cap</td>
			<td>Cronus, Labicom, Olomouc, Czech Republic</td>
			<td>VCA-1004TB-100</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>septum</td>
			<td>Thermo Scientific, Rockwoood, Tennessee, USA</td>
			<td>National C4013-60 8 mm TEF/SIL septum</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>glass insert with bottom spring</td>
			<td>Supelco, Sigma, Milano, Italy</td>
			<td>27400-U</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>autosampler vial</td>
			<td>National Scientific, Thermo Fisher Scientific, Monza, Italy</td>
			<td>C4013-2</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Smartline manager 5000 system controller and degasser unit</td>
			<td>Knauer, Berlin, Germany</td>
			<td>V7602</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Smartline 1000 quaternary gradient pump</td>
			<td>Knauer, Berlin, Germany</td>
			<td>V7603</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>spectrofluorometric detector</td>
			<td>Shimadzu, Kyoto, Japan</td>
			<td>RF-551</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>chromatogrphic column</td>
			<td>Knauer, Berlin, Germany</td>
			<td>25EK181EBJ</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>chromatogrphic pre-column</td>
			<td>Knauer, Berlin, Germany</td>
			<td>P5DK181EBJ</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mobile phase solution A</td>
			<td>0.1 M sodium phosphate buffer, pH 6.0</td>
			<td></td>
			<td>Solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mobile phase solution B</td>
			<td>40% 0.1 M sodium phosphate buffer, 30% methanol, 30% acetonitrile, pH 6.5</td>
			<td></td>
			<td>Solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ringer solution</td>
			<td>composition in mM: MgCl2 0.85, KCl 2.7, NaCl 148, CaCl2 1.2, 0.3% BSA</td>
			<td></td>
			<td>Solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>modified Ringer solution</td>
			<td>composition in mM: MgCl2 0.85, KCl 100, NaCl 50.7, CaCl2 1.2, 0.3% BSA</td>
			<td></td>
			<td>Solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>saline</td>
			<td>0.9% NaCl, ph adjusted to 7.0</td>
			<td></td>
			<td>Solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sucrose solution</td>
			<td>10% sucrose in distilled water</td>
			<td></td>
			<td>Solution</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

microdialysis of excitatory amino acids during eeg recordings in freely moving rats

ميكرودياليسيس هو تقنية راسخة في علم الأعصاب التي ترتبط تغييرات المواد الفعالة عصبيا نشرها في الفضاء المخ المتداخلة مع السلوك و/أو نتائج محددة لعلم الأمراض (مثل المضبوطات للصرع). عند دراسة الصرع، غالباً ما يقترن تقنية ميكرودياليسيس مع قصيرة الأجل أو طويلة الأجل حتى الفيديو-المخ (EEG) رصد لتقييم تواتر الاستيلاء عفوية وشدته، والتقدم وتجميع. ميكرودياليسيس-التخطيط الدماغي مجتمعة يرتكز على استخدام عدة أساليب وأدوات. وهنا، أجرينا في فيفو ميكرودياليسيس والفيديو المستمر-EEG تسجيل لمراقبة تدفق غلوتامات واسبارتاتي على مر الزمن، في مراحل مختلفة من التاريخ الطبيعي للصرع في نموذج الفئران. ويسمح هذا النهج الموحد الاقتران من التغييرات في الإصدار العصبي بمراحل معينة من تطور المرض والتقدم. أن تركيز الأحماض الأمينية في دياليساتي تحددها اللوني السائل. هنا، يمكننا وصف الأساليب والخطوط العريضة التي ينبغي أن تتخذ التدابير الوقائية الرئيسية واحد خلال في فيفو ميكرودياليسيس-EEG، مع إيلاء اهتمام خاص لعملية جراحية ستيريوتاكسيك، وحفز البوتاسيوم القاعدية وعالية أثناء ميكرودياليسيس، عمق الكهربائي EEG تسجيل وتحليل عالية الأداء اللوني السائل اسبارتاتي والغلوتامات في دياليساتي. وهذا النهج قد تكون مناسبة لاختبار مجموعة متنوعة من المخدرات أو الأمراض الناجمة عن تغيرات التركيزات الفسيولوجية اسبارتاتي والغلوتامات في الدماغ. رهنا بتوافر المقايسة التحليلية المناسبة، قد زيادة استخدامه لاختبار مختلف الجزيئات القابلة للذوبان عند استخدام تسجيل EEG في نفس الوقت.

تحقيق الانتعاش
وكان الانتعاش يعني (أي محتوى الأحماض الأمينية يعني في بيرفوساتي كنسبة مئوية من المحتوى الموجود في وحدة تخزين متساوية من الحل القنينة) ± 15.49 0.42% بمعدل تدفق 2 ميكروليتر/min و ± 6.32 0.64 في 3 ميكروليتر/دقيقة الغلوتامات و 14.89 ± 0.36 ف?...

Watch this Scientific Journal Video about Microdialysis of Excitatory Amino Acids During EEG Recordings in Freely Moving Rats at JoVE.com

Microdialysis of Excitatory Amino Acids During EEG Recordings in Freely Moving Rats

وهنا يصف لنا أسلوب في فيفو ميكرودياليسيس لتحليل الإصدار اسبارتاتي والغلوتامات في الحصين البطني من الفئران الصرع وغير صرع، في تركيبة مع تسجيلات التخطيط الدماغي. قد ترتبط تركيزات خارج الخلية اسبارتاتي وغلوتامات مع المراحل المختلفة للمرض.

ميكرودياليسيس أحماض الأمينية ضادات خلال تسجيلات التخطيط الدماغي في الانتقال بحرية الفئران

Microdialysis is a well-established neuroscience technique that correlates the changes of neurologically active substances diffusing into the brain ...

يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في علم الأعصاب مثل التغيرات في الكيمياء العصبية خلال التاريخ الطبيعي للأمراض العصبية. الميزة الرئيسية لتقنية التحليل الدقيق المقترحة EEG هو أن مثل هذا النهج مجتمعة يسمح الاقتران من التغييرات في إطلاق الناقل العصبي ضمن مراحل محددة من تطور المرض والتقدم. تبدأ عن طريق التبديل على مكبر للصوت المتمركزة خارج قفص فاراداي.افتح برنامج تخطيط تخطيط الكهربى وابدأ عملية الاستحواذ على تخطيط تخطيط الكهربى ومراقبة إشارة تخطيط الكهربى والكهربى الناتجة عن الكابلات غير المتصلة. بعد ذلك ، قم بتوصيل الحيوان بنظام تسجيل EEG المربوط عن طريق حمل رأس الحيوان بين إصبعين ممدودين من يد واحدة و الشد أسفل الموصلات إلى اللبند القطب باستخدام اليد الحرة الأخرى. تعيين عامل تضخيم على كل قناة من مكبر للصوت وفقا لإشارة القطب لحيوان واحد حتى إشارة تخطيط الكهرباحي في الحجم.ثم دع الحيوان يستكشف القفص الجديد لمدة ساعة واحدة على الأقل تحت المراقبة المباشرة للباحث. ضبط الكابل وفقا بضاعة الحيوان، وضمان أن الكابلات لا تتداخل مع تحركات الحيوان ووضع الكذب. وأخيرا، تحقق من الصورة الصحيحة تأطير على كاميرات الفيديو ومن ثم بدء تسجيل الفيديو EEG.ابدأ من خلال إعداد مسابير التحليل المجهري لأول مرة وفقًا لدليل المستخدم المصنع وملئها بحل Ringer. ثم، وقطع 10 قطع سنتيمتر طويلة من أنابيب FEP وربطها إلى مدخل وقنية منفذ من المسبار باستخدام محولات أنابيب من ألوان مختلفة. تأكد من أن الأنابيب اللمسات المحولات مع عدم وجود مساحة في جميع الاتصالات.إزالة كانولا دمية من دليلها باستخدام الملاقط عن طريق عقد رأس الحيوان بحزم. إدراج مسبار غسيل المجهر في cannula دليل واستخدام الطين النمذجة لمزيد من شركة حتى قنية. بعد ذلك، قم بتوصيل الحيوان بنظام تسجيل EEG المربوط.ثم وضع الحيوان في اسطوانة زجاج شبكي والسماح لها استكشاف البيئة الجديدة. اتبع حركات الفئران المستيقظة والمتحركة بحرية. ثم، قم بتوصيل مدخل المسبار بحقنة 2.5 ملليلتر مع إبرة قياس حادة 22 تحتوي على حل رينجر باستخدام محولات الأنابيب.ادفع ملليلتر واحد من حل رينجر في المسبار في 10 ثوانٍ عن طريق دفع المكبس في حقنة 2.5 ملليلتر بشكل مستمر. تحقق من قطرة السائل التي تظهر على مأخذ للدلالة على متى يكون المسبار جاهزًا للاستخدام. وأخيرا، قم بملء المحاقن 2.5 ملليلتر متصلة أنابيب FEP بواسطة أنابيب محولات مع الحل Ringer وتركيبها على مضخة التسريب.بدء المضخة في اثنين microliters في الدقيقة الواحدة والسماح لها تشغيل بين عشية وضحاها. بعد التحقق عن طريق الفيديو تسجيلات EEG عدم وجود المضبوطات في الساعات الثلاث السابقة لجمع العينات، ووقف المضخة التي تحمل أنابيب FEP معبّق الحقن المملوءة بحل رينجر. جبل مجموعة أخرى من 2.5 ملليلتر الحقن متصلة أنابيب FEP مع محولات الأنابيب مليئة حل رينجر المعدلة التي تحتوي على محلول البوتاسيوم 100 ملليمولار.بدء المضخة في اثنين microliters في الدقيقة الواحدة والسماح لها تشغيل. تحقق من عدم وجود فقاعات الهواء في النظام والتأكد من أن الأنابيب تلامس المحولات مع عدم وجود مساحة ميتة في جميع الاتصالات. ثم تحقق من قطرة السائل التي تظهر على منفذ للدلالة على متى المسبار جاهز للاستخدام.المقبل، وربط أنابيب FEP من المحاقن مليئة الحل رينجر إلى القنية مدخل من التحقيق في كل وانتظر ظهور قطرة السائل على غيض من منفذ. توصيل منفذ المسبار إلى أنابيب FEP الذي يؤدي إلى جمع في أنبوب الاختبار. أدخل أنابيب FEP في أنبوب اختبار 0.2 ملليلتر مغلق مع غطاء مثقبة وتأكد من أن الأنبوب يبقى في مكانه عن طريق إصلاحه بقطعة من طين النمذجة.بعد تشغيل المضخة في اثنين microliters في الدقيقة لمدة 60 دقيقة دون جمع عينات لتكدير النظام، وجمع خمس عينات متتالية 30 دقيقة dialysate في ظل ظروف خط الأساس، وتخزين العينات على الجليد. بعد 10 دقائق، قم بتبديل الأنابيب من المحاقن التي تحتوي على محلول رينغر البوتاسيوم 100 ملليمولر إلى حل رينجر العادي والسماح بتشغيل المضخة. بعد جمع من الخامس بعد الإكوازاء الطلب، جمع 20 microliter dialysate الكسور كل 10 دقيقة لمدة ساعة واحدة.ثم جمع ثلاث عينات إضافية 30 دقيقة dialysate ووقف المضخة. وأخيراً، قم بتخزين العينات عند درجة حرارة سالبة 80 درجة مئوية بعد التجربة حتى تحليل HPLC. بعد اكتمال التجربة، شطف مسابير التحليل الدقيق المستخدمة بالماء المقطر وتخزينها في قارورة مليئة بالماء المقطر النظيف حتى الاستخدام التالي.وأخيراً، شطف كامل إعداد التحليل الدقيق بالماء المقطر تليها 70 في المائة الإيثانول. استبدال الإيثانول مع الهواء، وتخزين الإعداد في بيئة معقمة. هذه هي آثار EEG التمثيلية المسجلة من قرن آمون السيطرة والجرذان الصرع خلال المرحلة المزمنة من المرض.لم يلاحظ أي تغيير في تخطيط الكهربية في الفئران المسيطرة ، في حين لوحظ نشاط متزامنة لـ epiysmal عن طريق الصرع حوالي 500 مللي ثانية قبل وأثناء النوبات السلوكية في الفئران الصرعية. وكان تركيز الغلوتامات القاعدية الموجود في فئران الصرع المزمنة أعلى بكثير مما هو عليه في الحيوانات التي تتحكم فيها. أثار ارتفاع البوتاسيوم إطلاقًا إضافيًا من الغلوتامات لمدة 30 دقيقة في الفئران المسيطرة و لمدة 60 دقيقة في الفئران الصرعية المزمنة.أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم أن نتذكر أن الحيوانات المزروعة مع الجهاز عرضة لفقدانه على مدار فترة من التجربة المطولة ، لذلك استخدم مجموعة رأس خفيفة وكابلات طويلة بما يكفي لتجنب التدخل في حركة الحيوان. اعتمادا على توافر مقال تحليلي مناسب، يمكن استخدام الطريقة لاختبار الجزيئات القابلة للذوبان مختلفة في الدماغ عند استخدام تسجيل EEG في نفس الوقت. بعد تطورها ، سمحت هذه التقنية للباحثين في مجال علم الصرع بتقديم نظرة ثاقبة حول التعديلات في الإرسال العصبي الإثارة في حالة صرع الفص الصدغي.بعد مشاهدة هذا الفيديو، ونحن على ثقة من أنك سوف يكون أفضل فهم كيفية أداء في التحليل الدقيق في الجسم الحي جنبا إلى جنب مع عمق القطب EEG تسجيل في الفئران الصرع تتحرك بحرية.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

High-density EEG Recordings of the Freely Moving Mice using Polyimide-based Microelectrode

عالية الكثافة تسجيلات EEG من الفئران تتحرك بحرية باستخدام بوليميد المستندة Microelectrode

Electroencephalogram (EEG) indicates the averaged electrical activity of the neuronal populations on a large-scale level. It is widely utilized as a ...

Hippocampal Insulin Microinjection and In vivo Microdialysis During Spatial Memory Testing

Hippocampal Insulin Microinjection and In vivo Microdialysis During Spatial Memory Testing

الحصين حقن مكروي الأنسولين و<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; Microdialysis أثناء اختبار الذاكرة المكانية

Glucose metabolism is a useful marker for local neural activity, forming the basis of methods such as 2-deoxyglucose and functional magnetic resonance ...

Recording EEG in Freely Moving Neonatal Rats Using a Novel Method

تسجيل إيغ في التحرك بحرية الفئران حديثي الولادة باستخدام طريقة رواية

EEG is a useful method to detect electrical activity in the brain. Moreover, it is a widely used diagnostic tool for various neurological conditions, such ...

Simultaneous Recordings of Cortical Local Field Potentials, Electrocardiogram, Electromyogram, and Breathing Rhythm from a Freely Moving Rat

التسجيلات المتزامنة الإمكانات الميدانية المحلية القشرية، ورسم القلب، اليكتروميوجرام وإيقاع من الفئران تتحرك بحرية في التنفس

Monitoring the physiological dynamics of the brain and peripheral tissues is necessary for addressing a number of questions about how the brain controls ...

Noninvasive EEG Recordings from Freely Moving Piglets

تسجيلات التخطيط الدماغي موسع من الانتقال بحرية الخنازير

The method allows the recording of high-quality electroencephalograms (EEGs) from freely moving piglets directly in the pigpen. We use a one-channel ...

Multi-Fiber Photometry to Record Neural Activity in Freely-Moving Animals

القياس الضوئي متعدد ألياف لتسجيل النشاط العصبي في الكائنات المتحركة بحريه

Recording the activity of a group of neurons in a freely-moving animal is a challenging undertaking. Moreover, as the brain is dissected into smaller and ...

Intracerebroventricular Delivery of Gut-Derived Microbial Metabolites in Freely Moving Mice

التسليم داخل البطين للمستقلبات الميكروبية المشتقة من الأمعاء في الفئران التي تتحرك بحرية

The impact of gut microbiota and their metabolites on host physiology and behavior has been extensively investigated in this decade. Numerous studies have ...

Extracellular Electrophysiological Recording in the Motor Cortex of Mice

Multichannel Extracellular Recording in Freely Moving Mice

Advancements in Multichannel Extracellular Recording for Studying Neuronal Activity in Freely Moving Mice (Video) | JoVE

تسجيل متعدد القنوات خارج الخلية في الفئران المتحركة بحرية

The protocol aims to uncover the properties of neuronal firing and network local field potentials (LFPs) in behaving mice carrying out specific tasks by ...

Cerebrospinal Fluid and Blood Withdrawal from Rats with Concurrent EEG Recording

Sampling Cerebrospinal Fluid and Blood from Lateral Tail Vein in Rats During EEG Recordings

Obtaining High-Quality CSF and Blood Samples for Epilepsy Biomarker Discovery (Video) | JoVE

أخذ عينات من السائل الدماغي الشوكي والدم من الوريد الذيل الجانبي في الفئران أثناء تسجيلات EEG

Because the composition of body fluids reflects many physiological and pathological dynamics, biological liquid samples are commonly obtained in many ...

Multilayer Imaging with Microprism in Head-Fixed and Freely Moving Animals

Long-Term Imaging of Identified Neural Populations using Microprisms in Freely Moving and Head-Fixed Animals

Author Spotlight: Comparative Imaging of Neural Activity in Awake and Freely Moving States

تصوير طويل المدى للمجموعات العصبية المحددة باستخدام المنشورات الدقيقة في التي تتحرك بحرية وثابتة الرأس

With the advancement of multi-photon microscopy and molecular technologies, fluorescence imaging is rapidly growing to become a powerful approach for ...