Name: microdialysis of excitatory amino acids during eeg recordings in freely moving rats
Uploaded: 2018-11-08T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Microdialysis of Excitatory Amino Acids During EEG Recordings in Freely Moving Rats at JoVE.com

המחברים רוצים להודות אנה Binaschi, פאולו Roncon והוא אלאונורה פלמה על תרומתם כתבי יד לאור הקדימויות.

כל ההליכים ניסיוני אושרו על ידי אוניברסיטת פרארה אכפת חיה מוסדיים והוועדה שימוש ועל ידי משרד הבריאות האיטלקי (הרשאה: במס ההכנסה ובמשרד 246/2012-B) בהתאם להנחיות המפורטות בקהילות אירופה הוראת המועצה של 24 בנובמבר 1986 (86/609/EEC). פרוטוקול זה מכוון במיוחד עבור קביעת גלוטמט, אספרטט עכברוש המוח dialysates שה?...

בעבודה זו, אנו מראים כיצד ניתן לבצע הקלטות וידאו EEG רציף בשילוב עם microdialysis במודל ניסיוני של TLE. טכניקות הקלטה וידאו EEG משמשים כדי לאבחן כראוי את השלבים השונים של התקדמות המחלה בבעלי חיים, הטכניקה microdialysis משמש לתיאור השינויים במהדורה גלוטמט המתרחשות בזמן (אין שינויים מעולם לא נמצא אספרטט ב מח?...

כדי לספק תובנות תיפקודי של גלוטמט בתיווך שליחים של GABAergic עצבית מעכבות וכתוצאה מכך להתקפים ספונטנית אפילפסיה של האונה הרקתית (TLE), אנחנו באופן שיטתי פיקוח ריכוזי חוץ-תאית גאבא1 ו מאוחר יותר הרמות של גלוטמט אספרטט2 באמצעות microdialysis בהיפוקמפוס הגחון של חולדות בנקודות שונות בזמן-של המחלה הטבעית כמובן, קרי, במהלך פיתוח והתקדמות של אפילפסיה. לקחנו יתרון של TLE פילוקרפין דגם בחולדות, אשר מחקה את המחלה באופן מדויק מבחינת שינויים התנהגותיים, אלקטרופיזיולוגיות, histopathological3,4 , אנחנו בקורלציה dialysate ריכוז אמינו חומצות כדי שלה שלבים שונים: השלב חריפה לאחר העלבון epileptogenic, שלב החביון, זמנם של ההתקף הראשון ספונטנית ו6,5,7phass כרונית. מסגור את שלבי המחלה היה מופעל על ידי ניטור וידאו EEG לטווח ארוך, EEG מדויק, איפיון קליני של התקפים ספונטנית. היישום של השיטה microdialysis המשויכת לטווח ארוך ניטור וידאו EEG מאפשרת לנו להציע השערות מכניסטית TLE neuropathology. לסיכום, בטכניקה המתוארת בכתב יד זה מאפשר הזיווג של שינויים עצבית בתוך אזור המוח מוגדר עם פיתוח, התקדמות של אפילפסיה במודל חיה.
התקנים לזווג, המורכב של אלקטרודה עומק juxtaposed כדי בצינורית microdialysis, מועסקים לעיתים קרובות בלימודי מחקר אפילפסיה שבו שינויים עצביים, שלהם מטבוליטים או אנרגיה מצעים צריכים להיות בקורלציה פעילות. עצבית. ברוב המכריע של המקרים, זה נמצא בשימוש בחיות מתנהגות באופן חופשי, אך זה יכול להתבצע גם בצורה דומה בבני אדם, למשל, בקרב חולי אפילפסיה טוהר הפרמה קופ עמידים לעומק החקירה אלקטרודה לפני הניתוח8. EEG הקלטה וגם אוסף dialysate יכול להתבצע בנפרד (למשל, השתלת האלקטרודה באונה אחת, את microdialysis בדיקה ההמיספרה השנייה או אפילו ביצוע את microdialysis בקבוצה אחת של בעלי חיים בעת ביצוע הבלעדית EEG בקבוצה אחרת של בעלי חיים). עם זאת, צימוד האלקטרודות כדי הגששים ייתכן יתרונות מרובים: זה מפשט את ניתוח stereotaxic, מגביל את רקמת נזק באונה אחת בלבד (תוך השארת האחר, ללא פגע, כפקד ללימודי היסטולוגית), ו homogenizes את תוצאות כמו אלה מתקבלים באותו האזור במוח, אותה חיה.
מצד שני, הכנת המכשיר בדיקה-אלקטרודה microdialysis בשילוב דורש מיומנויות זמן אם זה תוצרת בית. אחד לבזבז סכומי כסף גבוהים יחסית אם רכשת מהשוק. יתר על כן, כאשר microdialysis רגשים (בדיקה טיפים הם בדרך כלל 200-400 מיקרומטר קוטר ו 7-12 מ מ אורך)9ו אלקטרודות EEG (אלקטרודה טיפים בדרך כלל של 300-500 מיקרומטר בקוטר, מספיק זמן כדי להגיע את מבנה המוח של ריבית10)? יחד, המכשיר הנטען מייצגת אובייקט מגושם וכבד יחסית בצד אחד של הראש, וזה בעייתי לבעלי ונוטים להיות איבדה במיוחד כאשר הוא מחובר המשאבה דיאליזה ומערכת הקלטה EEG קווית. היבט זה רלוונטי יותר בבעלי אפילפטי קשה לטפל, פחות גמישים לפגישות microdialysis. טכניקות ניתוחיות נכונה וטיפול לאחר הניתוח המתאים יכול לגרום השתלים לאורך זמן לגרום אי נוחות מינימלית בעלי חיים, צריך להיות נרדף עבור ניסויים combinatory microdialysis EEG10,11, 12.
היתרונות ואת המגבלות של הטכניקה microdialysis נבדקו בפירוט בידי מדעני מוח רבים. היתרון העיקרי שלו על פני ויוו זלוף טכניקות אחרות (למשל, זרימה מהירה מו-דו או גביע קורטיקלית זלוף) היא בקוטר קטן של המכשיר אשר משתרע על שטח יחסית מדויק של עניין13,14, 15. שנית, קרום microdialysis יוצר מכשול פיסי בין הרקמות של perfusate; לכן, משקל מולקולרי גבוה חומרים לא לחצות, אל תתערבו עם ניתוח ה-16,17. יתר על כן, הרקמה מוגן מפני הזרם מערבולות perfusate18. יתרון חשוב נוסף הוא האפשרות לשנות את זרימת perfusate עבור למקסם את ריכוז analyte perfusate (קרי, התהליך של microdialysis יכולות ובכן להגדיר באופן מתמטי, ניתן לשנות להניב תשואה גבוהה ריכוזי analyte המדגם)19. לבסוף, ניתן להשתמש בטכניקה כדי להשרות את תרופות או חומרים פעילים פרמקולוגית לתוך הרקמה עניין וכדי לקבוע את ההשפעה שלהם באתר של התערבות20. מצד שני, microdialysis יש זמן מוגבל רזולוציה (בדרך כלל יותר מ 1 דקות בשל הזמן הנדרש לאיסוף דגימות) בהשוואה חיישנים ביולוגיים או אלקטרוכימי; זו טכניקה פולשנית הגורמת נזק לרקמות; זה פוגע את האיזון עצבית בתוך המרחב סביב הקרום עקב מעבר הצבע ריכוז רציפה של כל חומרים מסיסים אשר מזין את perfusate יחד עם analyte עניין. לבסוף, הטכניקה microdialysis מאוד מושפע ממגבלות שיטות אנליטיות מועסק כימות של חומרים perfusate9,21,22,23 . כרומטוגרפיה נוזלית ביצועים גבוהים (HPLC) לאחר derivatization עם orthophthaldialdehyde עבור ניתוח גלוטמט אספרטט בדגימות ביולוגיות טוב המאומת24,25,26 , 27 ו שלה דיון נרחב מתוך הטווח של כתב יד זה, אך הנתונים הופק באמצעות שיטה זו יתוארו בפרוטרוט.
כאשר מבוצעת כראוי וללא שינויים של ההרכב perfusate, microdialysis יכול לספק מידע אמין על רמות הבסיס של שחרור נוירוטרנסמיטר. החלק הגדול ביותר של רמות הבסיס הוא כנראה התוצאה של העודפים המשדר הסינפסות9. כי במקרים רבים דגימה פשוטה של הנוירוטרנסמיטר בחלל תוספת סינפטית אינה מספיקה לרדוף אחר המטרות של חקירה, הטכניקה microdialysis יכול להיות גם מועסק כדי לעורר את הנוירונים או כדי לשלול מהם חשוב יונים פיזיולוגיים כגון K+ או Ca2 +, על מנת לעורר או למנוע את שחרור הנוירוטרנסמיטר.
גירוי K+ גבוהה משמש לעיתים קרובות מצאו כדי לעורר פעילות. עצבית לא רק בבעלי חיים ערה, אלא גם בתרבויות ראשי ו organotypic. החשיפה של מערכת העצבים המרכזית בריאה לפתרונות עם ריכוזים גבוהים של K+ (40-100 מ מ) מעורר את בזרימת של נוירוטרנסמיטורים28. יכולת זו של נוירונים לספק שחרור נוסף בתגובה גבוהה K+ אולי התגלה באפילפטיים חיות1 וב -29,אחרים מחלות ניווניות30. באופן דומה, ה-Ca2 + מניעת (מתקבל על ידי פרפוזיה Ca2 + פתרונות חינם) משמש ליצירת סידן תלוית שחרור של מרבית הנוירוטרנסמיטרים נמדדת microdialysis. בדרך כלל הוא האמין כי Ca2 + התלויים שחרור הוא ממוצא עצביים, ואילו Ca2 + עצמאית שחרור מקורו עכשיו, דונלד, אך מחקרים רבים העלו מחלוקת על המשמעות של Ca2 +-מדידות רגיש למשל גלוטמט או GABA9: לפיכך, במידת האפשר, רצוי לתמוך microdialysis מחקרים עם לימודי microsensor, כמו אלה האחרונים יש רזולוציה מרחבית גבוהה יותר ומאפשר האלקטרודות כדי להתקרב הסינפסות31.
בנוגע microdialysis מחקרים בבעלי חיים אפילפטי, חשוב להדגיש כי הנתונים המתקבלים רובם להסתמך על וידאו או וידאו EEG ניטור של התקפים, קרי, ההתרחשות ארעית של סימנים או תסמינים בשל חריגה סינכרוני או יתר פעילות. עצבית את המוח32. יש קצת פרטים של התקפים electrographic בבעלי פילוקרפין מטופלים אשר יש לקחת בחשבון בעת הכנת הניסוי. התקפים ספונטנית ולאחריו פעילות מדוכא עם EEG תכופים קוצים interictal3 , מתרחשים באשכולות33,34. חיות-אפילפטי המופעלים המזויפים עשוי להפגין הפציינט35 ולכן הפרמטרים להערכה הקלטות EEG צריך להיות מתוקנן36 ו, במידת האפשר, התזמון של הפעלות microdialysis צריכה להיות מוגדרת היטב. לבסוף, אנו ממליצים בחום בעקבות עקרונות ותקנים מתודולוגי עבור ניטור וידאו EEG בחולדות למבוגרים שליטה המתוארים על ידי מומחים של הליגה הבינלאומית נגד אפילפסיה, החברה האמריקאית אפילפסיה בדוחות שלהם לאחרונה37 ,38.
כאן, אנו מתארים microdialysis ושל גלוטמט אספרטט במקביל הקלטות וידאו EEG לטווח ארוך בבעלי חיים אפילפטי וניתוח שלהם dialysate על ידי HPLC. יושם דגש על השלבים הקריטיים של פרוטוקול אחד צריך לדאוג לקבלת התוצאה הטובה ביותר.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>3-channel two-twisted electrode</td>
			<td>Invivo1, Plastic One, Roanoke, Virginia, USA</td>
			<td>MS333/3-B/SPC</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>guide cannula</td>
			<td>Agn Tho&#39;s, Lindig&#246;, Sweden</td>
			<td>MAB 4.15.IC</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Resin KK2 Plastik</td>
			<td>Elettra Sport, Lecco, Italy</td>
			<td>KK2</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Super Attack gel Loctite</td>
			<td>Henkel Italia Srl, Milano, Italy</td>
			<td>2047420_71941</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imalgene-Ketamine</td>
			<td>Merial, Toulouse, France</td>
			<td>221300288 (AIC)</td>
			<td>Solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine</td>
			<td>Sigma, Milano, Italy</td>
			<td>X1251</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane-Vet</td>
			<td>Merial, Toulouse, France</td>
			<td>103120022 (AIC)</td>
			<td>Solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Altadol 50 mg/ ml - tramadol</td>
			<td>Formevet, Milano, Italy</td>
			<td>103703017 (AIC)</td>
			<td>Solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gentalyn 0.1% crm - gentamycine</td>
			<td>MSD Italia, Roma, Italy</td>
			<td>20891077 (AIC)</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>simplex rapid dental cement</td>
			<td>Kemdent, Associated Dental Products Ltd, Swindon, United Kingdom</td>
			<td>ACR811</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GlasIonomer CX-Plus Cement</td>
			<td>Shofu, Kyoto, Japan</td>
			<td>PN1167</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>probe clip holder</td>
			<td>Agn Tho&#39;s, Lindig&#246;, Sweden</td>
			<td>p/n 100 5001</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histoacryl&#174; Blue Topical Skin Adhesive</td>
			<td>TissueSeal, Ann Arbor, Michigan, USA</td>
			<td>TS1050044FP</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Valium 10 mg/2 ml - diazepam</td>
			<td>Roche, Monza, Italy</td>
			<td>019995063 (AIC)</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 mL syringe with 25G needle</td>
			<td>Vetrotecnica, Padova, Italy</td>
			<td>11.3500.05</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rat flexible feeding needle 17G</td>
			<td>Agn Tho&#39;s, Lindig&#246; Sweden</td>
			<td>7206</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Grass Technology apparatus</td>
			<td>Grass Technologies, Natus Neurology Incorporated, Pleasanton, California, USA</td>
			<td>M665G08</td>
			<td>Equipment (AS40 amplifier, head box, interconnecting cables, telefactor model RPSA S40)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>modular data acquisition and&#160;analysis system MP150</td>
			<td>Biopac, Goleta, California, USA</td>
			<td>MP150WSW</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>digital video surveillance system</td>
			<td>AverMedia Technologies, Fremont, California, USA</td>
			<td>V4.7.0041FD</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microdialysis probe</td>
			<td>Agn Tho&#39;s, Lindig&#246; Sweden</td>
			<td>MAB 4.15.1.Cu</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microdialysis probe</td>
			<td>Synaptech, Colorado Springs, Colorado, USA</td>
			<td>S-8010</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>block heater</td>
			<td>Grant Instruments, Cambridge, England</td>
			<td>QBD2</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stirrer</td>
			<td>Cecchinato A, Aparecchi Scientifici, Mestre, Italy</td>
			<td>711</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>infusion pump</td>
			<td>Univentor, Zejtun, Malta</td>
			<td>864</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>fine bore polythene tubing</td>
			<td>Smiths Medical International Ltd., Keene, New Hampshire, USA</td>
			<td>800/100/100/100</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>blue tubing adapters</td>
			<td>Agn Tho&#39;s, Lindig&#246; Sweden</td>
			<td>1002</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>red tubing adapters</td>
			<td>Agn Tho&#39;s, Lindig&#246; Sweden</td>
			<td>1003</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2.5 mL syringe with 22G needle</td>
			<td>Chemil, Padova, Italy</td>
			<td>S02G22</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>vial cap</td>
			<td>Cronus, Labicom, Olomouc, Czech Republic</td>
			<td>VCA-1004TB-100</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>septum</td>
			<td>Thermo Scientific, Rockwoood, Tennessee, USA</td>
			<td>National C4013-60 8 mm TEF/SIL septum</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>glass insert with bottom spring</td>
			<td>Supelco, Sigma, Milano, Italy</td>
			<td>27400-U</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>autosampler vial</td>
			<td>National Scientific, Thermo Fisher Scientific, Monza, Italy</td>
			<td>C4013-2</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Smartline manager 5000 system controller and degasser unit</td>
			<td>Knauer, Berlin, Germany</td>
			<td>V7602</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Smartline 1000 quaternary gradient pump</td>
			<td>Knauer, Berlin, Germany</td>
			<td>V7603</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>spectrofluorometric detector</td>
			<td>Shimadzu, Kyoto, Japan</td>
			<td>RF-551</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>chromatogrphic column</td>
			<td>Knauer, Berlin, Germany</td>
			<td>25EK181EBJ</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>chromatogrphic pre-column</td>
			<td>Knauer, Berlin, Germany</td>
			<td>P5DK181EBJ</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mobile phase solution A</td>
			<td>0.1 M sodium phosphate buffer, pH 6.0</td>
			<td></td>
			<td>Solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mobile phase solution B</td>
			<td>40% 0.1 M sodium phosphate buffer, 30% methanol, 30% acetonitrile, pH 6.5</td>
			<td></td>
			<td>Solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ringer solution</td>
			<td>composition in mM: MgCl2 0.85, KCl 2.7, NaCl 148, CaCl2 1.2, 0.3% BSA</td>
			<td></td>
			<td>Solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>modified Ringer solution</td>
			<td>composition in mM: MgCl2 0.85, KCl 100, NaCl 50.7, CaCl2 1.2, 0.3% BSA</td>
			<td></td>
			<td>Solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>saline</td>
			<td>0.9% NaCl, ph adjusted to 7.0</td>
			<td></td>
			<td>Solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sucrose solution</td>
			<td>10% sucrose in distilled water</td>
			<td></td>
			<td>Solution</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

microdialysis of excitatory amino acids during eeg recordings in freely moving rats

Microdialysis היא טכניקה neuroscience ומבוססת זה לא מופיע את השינויים של חומרים פעילים נוירולוגית לשדר לחלל המוח אינטרסטיציאליות עם ההתנהגות ו/או עם תוצאה מסוימת של פתולוגיה (למשל, התקפים על אפילפסיה). כשלומדים אפילפסיה, הטכניקה microdialysis משולב לעתים קרובות עם לטווח קצר או לטווח ארוך אפילו וידאו-אלקטרואנצפלוגרם (EEG) ניטור להעריך בתדירות ההתקפים ספונטנית, חומרתה, התקדמות, קיבוץ באשכולות. Microdialysis-EEG המשולב מבוסס על השימוש של מספר שיטות וכלים. כאן, אנחנו הופיעה ויוו microdialysis רציף וידאו EEG הקלטה יצוא גלוטמט, אספרטט צג לאורך זמן, בשלבים שונים של ההיסטוריה הטבעית של אפילפסיה במודל של עכברים. גישה משולבת זו מאפשרת הזיווג של שינויים שחרור נוירוטרנסמיטר עם שלבים מסוימים של מחלת התפתחות, התקדמות. ריכוז חומצת אמינו ב dialysate נקבע ע י כרומטוגרפיה נוזלית. כאן, אנו מתארים את השיטות ואת החלוקה לרמות ראשי אחד אמצעי זהירות לנקוט במהלך ויוו microdialysis-EEG, עם תשומת לב מיוחדת בניתוח stereotaxic, אשלגן הבזליים וגבוה המרצה במהלך microdialysis, עומק אלקטרודות EEG הקלטה וניתוח ביצועים גבוהים כרומטוגרפיה נוזלית של אספרטט גלוטמט dialysate. גישה זו עשוי להיות מותאם כדי לבחון מגוון רחב של סמים או מחלה הנגרמת שינויים של פיזיולוגיים ריכוזי אספרטט גלוטמט במוח. בהתאם לזמינות assay אנליטי המתאים, זה עשוי להיות עוד יותר משמש לבדיקת מולקולות שונות מסיסים בעת העסקת EEG הקלטה בו זמנית.

בדיקה שחזור
ההתאוששות רשע (קרי, חומצת אמינו רשע בתוכן perfusate כאחוז של התוכן אמצעי שווה של הפתרון המבחנה) היה ± 15.49 0.42% בקצב הזרימה של μL 2/min ו- ± 6.32 0.64 ב μL 3/דקה על גלוטמט ו ± 14.89 0.36% בקצב הזרימה של 2 ΜL/min ו- ± 10.13 0.51 ב μL/דקה 3 עבור אספרטט בעת שימוש ...

Watch this Scientific Journal Video about Microdialysis of Excitatory Amino Acids During EEG Recordings in Freely Moving Rats at JoVE.com

Microdialysis of Excitatory Amino Acids During EEG Recordings in Freely Moving Rats

כאן, אנו מתארים שיטה ויוו microdialysis לניתוח שחרור אספרטט ולא גלוטמט בהיפוקמפוס הגחון של חולדות אפילפסיה ואפילפטי, בשילוב עם הקלטות EEG. חוץ-תאית ריכוזי אספרטט גלוטמט יכול להיות בקורלציה עם השלבים השונים של המחלה.

Microdialysis של חומצות אמינו מעוררות במהלך ההקלטות EEG בחופשיות העברת חולדות

Microdialysis is a well-established neuroscience technique that correlates the changes of neurologically active substances diffusing into the brain ...

שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח במדעי המוח כגון שינויים בנוירוכימיה במהלך ההיסטוריה הטבעית של מחלות נוירולוגיות. היתרון העיקרי של טכניקת EEG microdialysis המוצע הוא כי גישה משולבת כזו מאפשרת זיווג של שינויים בשחרור הנוירוטרנסמיטר בתוך שלבים ספציפיים של התפתחות המחלה והתקדמות. התחל על ידי מיתוג המגבר ממוקם מחוץ לכלוב פאראדיי.פתח את תוכנת EEG והתחל את רכישת EEG וצפה באות EEG המיוצר על-ידי כבלים לא מחוברים. לאחר מכן, חבר את החיה למערכת ההקלטה EEG קשור על ידי החזקת ראשו של החיה בין שתי אצבעות מתוחות של יד אחת לדפוק את המחברים אל מעמד האלקטרודה באמצעות היד החופשית השנייה. הגדר גורם הגברה על כל ערוץ של המגבר על פי אות האלקטרודה של חיה אחת כך אות EEG הוא בקנה מידה.ואז לתת לחיה לחקור את הכלוב החדש לפחות שעה אחת תחת התבוננות ישירה של החוקר. כווננו את הכבל לפי הסחורה של החיה, והבטיחו שהכבלים לא יפריעו לתנועות החיה ולתנואם השקרים. לבסוף, בדוק אם יש את מסגור התמונה הנכון במצלמות הווידאו ולאחר מכן הפעל את הקלטת הווידאו EEG.התחל על ידי הכנת בדיקות microdialysis לשימוש הראשון על פי המדריך של המשתמש היצרן ולמלא אותם עם הפתרון של רינגר. לאחר מכן, לחתוך 10 ס"מ חתיכות ארוכות של צינורות FEP ולחבר אותם לתוך ושקע cannulas של החללית באמצעות מתאמי צינורות בצבעים שונים. ודא שצנרת נוגעת במתאמים ללא שטח פנוי בכל החיבורים.הסר את cannula הבובה מהמדריך שלה באמצעות פינצטה על ידי החזקת ראשו של החיה בחוזקה. הכנס את בדיקה microdialysis לתוך המדריך cannula ולהשתמש חימר דוגמנות כדי לחבר עוד יותר את cannula. לאחר מכן, חבר את החיה למערכת ההקלטה של EEG.ואז לשים את החיה לתוך גליל פלקסיגלס ולתת לו לחקור את הסביבה החדשה. עקבו אחר תנועות העכברושים הערים והמזיזות בחופשיות. לאחר מכן, לחבר את התוך של החללית למזרק 2.5 מיליליטר עם מחט קהה 22 מד המכיל פתרון של רינגר באמצעות מתאמי צינורות.לדחוף מיליליטר אחד של הפתרון של רינגר לתוך החללית ב 10 שניות על ידי דחיפת הבוכנה של מזרק 2.5 מיליליטר ברציפות. בדוק את טיפת הנוזל המופיע בשקע כדי לסמן מתי החללית מוכנה לשימוש. לבסוף, מלא את המזרקים 2.5 מיליליטר מחובר צינורות FEP על ידי צינורות מתאמים עם הפתרון של רינגר ולהעלות אותם על משאבת עירוי.הפעל את המשאבה בשני microliters לדקה ולתת לו לרוץ לילה. לאחר אימות באמצעות הקלטות וידאו EEG היעדר התקפים בשלוש השעות שקדמו לאיסוף הדגימה, לעצור את המשאבה נושאת צינורות FEP מזרקים cannulated מלא עם הפתרון של רינגר. הר קבוצה נוספת של מזרקים 2.5 מיליליטר מחובר צינורות FEP עם מתאמי צינורות מלא עם פתרון צלצול שונה המכיל 100 פתרון אשלגן מילימולר.הפעל את המשאבה בשני microliters לדקה ולתת לו לרוץ. בדוק את היעדר בועות האוויר במערכת וודא כי הצינור נוגע במתאמים ללא שטח מת בכל החיבורים. לאחר מכן, בדוק את טיפת הנוזל המופיע על השקע כדי לסמן מתי החללית מוכנה לשימוש.לאחר מכן, חבר את צינורות FEP של מזרקים מלאים עם הפתרון של רינגר לתוך הצינורית של החללית בכל חיה ולחכות להופעת טיפת הנוזל על קצה השקע. חבר את שקע הגשוש לצינור FEP שמוביל לאיסוף במבחנה. הכנס את צינורות FEP לתוך מבחנה סגורה 0.2 מיליליטר עם כובע מחורר ולהבטיח כי הצינור נשאר במקום על ידי תיקון זה עם פיסת חימר דוגמנות.לאחר הפעלת המשאבה בשני מיקרוליטרים לדקה במשך 60 דקות מבלי לאסוף דגימות כדי לצייד את המערכת, לאסוף חמש דגימות דיאליזה רצופות של 30 דקות בתנאי בסיס, ולאחסן דגימות על קרח. לאחר 10 דקות, לעבור את הצינורות מן המזרקים המכילים 100 מילימולר אשלגן רינג'ר פתרון רגיל של רינגר ולתת את המשאבה לרוץ. לאחר איסוף הדיאליזה החמישית שלאחר שיווי המשקל, אספו 20 שברי דיאליסט מיקרוליטר כל 10 דקות למשך שעה.לאחר מכן לאסוף שלוש דגימות דיאליזה נוספות 30 דקות ולעצור את המשאבה. לבסוף, לאחסן את הדגימות במינוס 80 מעלות צלזיוס לאחר הניסוי עד ניתוח HPLC. לאחר השלמת הניסוי, יש לשטוף את בדיקות המיקרו-דיאליזה המשמשות במים מזוקקים ולאחסן אותן בבקבוקון מלא במים מזוקקים נקיים עד לשימוש הבא.לבסוף, לשטוף את ההתקנה microdialysis כולו עם מים מזוקקים ואחריו 70 אחוז אתנול. החלף אתנול באוויר ואחסן את ההתקנה בסביבה סטרילית. אלה הם עקבות EEG נציג נרשם מן ההיפוקמפוס של שליטה חולדות אפילפטיות במהלך השלב הכרוני של המחלה.לא נצפתה שינוי EEG בחולדות בקרה, ואילו פעילות אפילפטיפורם פרוקסימלי מסונכרנת נצפתה כ -500 אלפיות שנייה לפני ובמהלך ההתקפים ההתנהגותיים בחולדות אפילפטיות. ריכוז הגלוטמט הבסיסי שנמצא בחולדות אפילפטיות כרוניות היה גבוה משמעותית מאשר בבעלי חיים שולטים. אשלגן גבוה עורר שחרור נוסף של גלוטמט במשך כ -30 דקות בחולדות בקרה ובמשך כ -60 דקות בחולדות אפילפטיות כרוניות.בעת ניסיון הליך זה, חשוב לזכור כי בעלי חיים המושתלים עם המכשיר נוטים לאבד אותו במהלך ניסוי ממושך, ולכן להשתמש סט ראש אור כבלים ארוכים מספיק כדי למנוע הפרעה לניידות בעלי חיים. בהתאם לזמינות של חיבור אנליטי מתאים, השיטה עשויה לשמש עוד יותר כדי לבדוק מולקולות מסיסים שונים במוח בעת שימוש הקלטת EEG באותו זמן. לאחר התפתחותה, טכניקה זו אפשרה לחוקרים בתחום האפילפטולוגיה לספק תובנה לשינויים בנוירוטרנסמיסציה בעירור במקרה של אפילפסיה של האונה הרקתית.לאחר צפייה בסרטון זה, אנו סומכים עליך תהיה הבנה טובה יותר של איך לבצע microdialysis vivo יחד עם הקלטת EEG אלקטרודה עומק בחולדה אפילפטית נעה בחופשיות.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

High-density EEG Recordings of the Freely Moving Mice using Polyimide-based Microelectrode

בצפיפות גבוהה הקלטות EEG של העכברים לנוע בחופשיות באמצעות polyimide מבוססי microelectrode

Electroencephalogram (EEG) indicates the averaged electrical activity of the neuronal populations on a large-scale level. It is widely utilized as a ...

Hippocampal Insulin Microinjection and In vivo Microdialysis During Spatial Memory Testing

Hippocampal Insulin Microinjection and In vivo Microdialysis During Spatial Memory Testing

Microinjection האינסולין היפוקמפוס ו<em&gt; בחי</em&gt; Microdialysis במהלך בדיקת זיכרון המרחבי

Glucose metabolism is a useful marker for local neural activity, forming the basis of methods such as 2-deoxyglucose and functional magnetic resonance ...

Recording EEG in Freely Moving Neonatal Rats Using a Novel Method

הקלטה EEG בחופשיות העברת חולדות neonatal בשיטת רומן

EEG is a useful method to detect electrical activity in the brain. Moreover, it is a widely used diagnostic tool for various neurological conditions, such ...

Simultaneous Recordings of Cortical Local Field Potentials, Electrocardiogram, Electromyogram, and Breathing Rhythm from a Freely Moving Rat

הקלטות סימולטני של פוטנציאל קורטיקלית שדה מקומי, רל, Electromyogram נושם קצב מעכברוש נעה בחופשיות

Monitoring the physiological dynamics of the brain and peripheral tissues is necessary for addressing a number of questions about how the brain controls ...

Noninvasive EEG Recordings from Freely Moving Piglets

EEG לא פולשנית הקלטות לנוע בחופשיות חזירונים

The method allows the recording of high-quality electroencephalograms (EEGs) from freely moving piglets directly in the pigpen. We use a one-channel ...

Multi-Fiber Photometry to Record Neural Activity in Freely-Moving Animals

מולטי-סיב פונסה להקליט פעילות עצבית בבעלי חיים הנעים באופן חופשי

Recording the activity of a group of neurons in a freely-moving animal is a challenging undertaking. Moreover, as the brain is dissected into smaller and ...

Intracerebroventricular Delivery of Gut-Derived Microbial Metabolites in Freely Moving Mice

העברה תוך-מוחית של מטבוליטים מיקרוביאליים שמקורם במעיים בעכברים הנעים בחופשיות

The impact of gut microbiota and their metabolites on host physiology and behavior has been extensively investigated in this decade. Numerous studies have ...

Extracellular Electrophysiological Recording in the Motor Cortex of Mice

Multichannel Extracellular Recording in Freely Moving Mice

Advancements in Multichannel Extracellular Recording for Studying Neuronal Activity in Freely Moving Mice (Video) | JoVE

הקלטה חוץ-תאית רב-ערוצית בעכברים הנעים בחופשיות

The protocol aims to uncover the properties of neuronal firing and network local field potentials (LFPs) in behaving mice carrying out specific tasks by ...

Cerebrospinal Fluid and Blood Withdrawal from Rats with Concurrent EEG Recording

Sampling Cerebrospinal Fluid and Blood from Lateral Tail Vein in Rats During EEG Recordings

Obtaining High-Quality CSF and Blood Samples for Epilepsy Biomarker Discovery (Video) | JoVE

דגימת נוזל מוחי ודם מווריד זנב לטרלי בחולדות במהלך רישומי EEG

Because the composition of body fluids reflects many physiological and pathological dynamics, biological liquid samples are commonly obtained in many ...

Multilayer Imaging with Microprism in Head-Fixed and Freely Moving Animals

Long-Term Imaging of Identified Neural Populations using Microprisms in Freely Moving and Head-Fixed Animals

Author Spotlight: Comparative Imaging of Neural Activity in Awake and Freely Moving States

הדמיה ארוכת טווח של אוכלוסיות עצביות מזוהות באמצעות מיקרופריזמות בבעלי חיים הנעים בחופשיות ומקובעים לראש

With the advancement of multi-photon microscopy and molecular technologies, fluorescence imaging is rapidly growing to become a powerful approach for ...