Name: microdialysis of excitatory amino acids during eeg recordings in freely moving rats
Uploaded: 2018-11-08T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Microdialysis of Excitatory Amino Acids During EEG Recordings in Freely Moving Rats at JoVE.com

Авторы хотели бы поблагодарить Анна Binaschi, Паоло Roncon и Элеонора Пальма за их вклад в рукописи, опубликованных в приоритет.

Все экспериментальные процедуры были одобрены Университетом Феррара институциональный уход животных и использование Комитета и итальянским министерством здравоохранения (авторизация: д.м. 246/2012-B) в соответствии с руководящими принципами, изложенными в европейских сообществ Директи?...

В этой работе мы покажем, как непрерывной записи видео ЭЭГ, в сочетании с микродиализом может быть выполнена в экспериментальной модели TLE. Для правильно диагностировать различные этапы прогрессирования заболевания у животных, используются методы записи видео-ЭЭГ и микродиализом техн...

Чтобы обеспечить понимание функциональных обесценение глутамат опосредованной возбуждающих и ГАМК ингибирующее синапсах, что приводит к спонтанной изъятий в височной эпилепсии (TLE), мы систематически контролироваться внеклеточной концентрации ГАМК1 и позже уровнях глутамата и аспартат2 микродиализом брюшной гиппокампа крысы в различное время естественной болезни курса, т.е., во время развития и прогрессирования эпилепсии. Мы воспользовались TLE пилокарпин модели крыс, которая имитирует болезни очень точно с точки зрения поведения, электрофизиологических и гистопатологические изменения3,4 и мы коррелированных диализате концентрацию аминокислот кислоты на его различных этапах: острой фазы после эпилептогенных оскорбление, задержка фазы, время первой спонтанной захват и хронический phass5,6,7. Обрамление фазы заболевания был включен в долгосрочный видео ЭЭГ-мониторинг и точные ЭЭГ и клиническая характеристика спонтанные судороги. Применение методики микродиализом, связанные с долгосрочной видео ЭЭГ-мониторинг позволил нам предложить механистический гипотезы для TLE невропатологии. Таким образом метод, описанный в этой рукописи позволяет сопряжения нейрохимических изменений в области определенных мозга с развития и прогрессирования эпилепсии в животной модели.
Спаренных устройств, состоящий из глубины электрода, сопоставленные к микродиализом канюлю, часто используются в научных исследований эпилепсии, где изменения нейротрансмиттеров, их метаболитов или энергетических субстратов должна быть соотнесена активности нейронов. В подавляющем большинстве случаев он используется в свободно поведение животных, но он может также проводиться в Аналогичным образом людьми, например, в Фармако стойкие эпилептические больных, перенесших глубина электрода расследование до хирургии8. Как запись ЭЭГ, так и диализате коллекция может быть выполнена отдельно (например, имплантировать электроды в одном полушарии и микродиализом зонда в другом полушарии или даже выполнение микродиализом в одной группе животных во время выполнения единственной ЭЭГ в другой группе животных). Однако, сцепка электроды зондов может иметь несколько преимуществ: Это упрощает стереотаксической хирургии, ограничивает повреждения тканей только одно полушарие (с другой стороны, оставляя нетронутыми, как элемент управления для гистологического исследования) и homogenizes результаты как эти получены из того же региона мозга и то же самое животное.
С другой стороны подготовка спаренных микродиализом зонд электрод устройства требует навыков и время если это домашнее. Один может потратить относительно большие суммы денег, если приобретен на рынке. Кроме того, когда микродиализом зонды (пробники, как правило 200-400 мкм в диаметре и длиной 7-12 мм)9и ЭЭГ электродов (электродов советы, как правило, 300-500 мкм в диаметре и достаточно долго, чтобы достичь структуры мозга интерес10) в сочетании, навесные устройства представляет объект относительно тяжелые и громоздкие на одной стороне головы, которая является неприятной для животных и склонны быть потеряно, особенно когда он подключен к диализа насос и система записи ЭЭГ-проволоки. Этот аспект является более актуальным в эпилептические животных, которые трудно справиться и менее адаптивный микродиализом сессий. Надлежащих хирургических методов и соответствующих послеоперационный уход может привести длительное имплантатов, которые вызывают минимальный дискомфорт животных и должно осуществляться для комбинаторной микродиализом ЭЭГ экспериментов10,11, 12.
В деталях были рассмотрены преимущества и ограничения метода микродиализом многие неврологи. Его основное преимущество над другими в vivo перфузии методов (например, быстрый поток двухтактный или корковые Кубок перфузии) является небольшой диаметр зонда, которая охватывает относительно точной области интереса13,14, 15. Во-вторых микродиализом мембрана создает физический барьер между ткани и perfusate; Таким образом высокомолекулярный вес вещества не пересекаются и не мешают анализу16,17. Кроме того ткань защищен от турбулентного потока perfusate18. Другим важным преимуществом является возможность изменить поток perfusate для максимальной концентрации аналита в perfusate (т.е., процесс микродиализом может быть также определена математически и может быть изменен приносить высоко концентрации аналита в образце)19. Наконец метод может использоваться на настаиваться наркотиков или фармакологически активных веществ в ткани интерес и определить их воздействие на сайте вмешательства20. С другой стороны микродиализом имеет ограниченное разрешение время (обычно более 1 мин из-за времени, необходимого для сбора проб) по сравнению с электрохимическими или биологические датчики; это инвазивный метод, который вызывает повреждение тканей; это компрометирует нейрохимических баланс в пространстве вокруг мембраны из-за непрерывного градиент концентрации всех растворимых веществ который входит perfusate вместе с аналита интерес. Наконец метод микродиализом во многом зависит от ограничений аналитических методов, используемых для количественной оценки веществ в perfusate9,21,22,23 . Высокая производительность жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) после деривации с orthophthaldialdehyde для анализа глутамата и аспартат в биологических образцах был хорошо проверенных24,25,26 , 27 и его широкое обсуждение выходит за рамки этой рукописи, однако данные, полученные с помощью этого метода будут описаны подробно.
При выполнении должным образом и без изменений состава perfusate, микродиализом может обеспечить надежную информацию о базальный уровень нейромедиатора релиз. Самая большая часть базальных уровней скорее всего является результатом распространения передатчика от синапсы9. Потому, что во многих случаях простой выборки нейромедиатора в загородный синаптического пространства не является достаточным для достижения целей расследования, метод микродиализом также могут быть использованы для стимулирования нейронов или лишить их важных физиологические ионов K+ или Ca2 +, для того чтобы вызвать или предотвратить освобождение нейромедиатора.
Высокий K+ стимуляция часто используется в нейробиологии стимулировать активность нейронов не только спать животных, но и в начальных и organotypic культур. Экспозиции здоровой центральной нервной системы для решения с высокой концентрацией K+ (40-100 мм) вызывает измеряем нейротрансмиттеров28. Эта способность нейронов для предоставления дополнительного выпуска в ответ на высокий K+ может быть нарушена в эпилептические животных1 и в других нейродегенеративных заболеваний29,30. Аналогично Ca2 + лишения (получено perfusing Ca2 + бесплатные решения) используется для установления кальций зависимых выпуск большинства нейротрансмиттеров, измеряется микродиализом. Считается, что Ca2 + зависимых релиз является нейрональных происхождения, тогда как Ca2 + независимого релиза исходит от глии, но многие исследования подняли споры над смыслью Ca2 +-чувствительных измерения например глутамата или ГАМК9: таким образом, если это возможно, рекомендуется для поддержки микродиализом исследования с микропроцессоров исследований, поскольку эти последние имеют более высоким пространственным разрешением и электродов позволяет получить ближе к синапсы31.
Что касается микродиализом исследований в эпилептические животных важно подчеркнуть, что данные, полученные от большинства из них полагаются на видео или видео ЭЭГ мониторинг судорог, то есть, переходных вхождения признаки или симптомы из-за ненормального чрезмерное или синхронной активность нейронов в мозге32. Есть некоторые особенности электрографические изъятий в пилокарпин лечить животных, которые следует учитывать при подготовке эксперимента. Спонтанные судороги следуют депрессии активности с частыми ЭЭГ межприступная шипы3 и происходят в кластеры33,34. Шам эксплуатируемых животных не эпилептическими припадками, могут демонстрировать захват как деятельность35 и поэтому параметры для записи ЭЭГ оценки должны быть стандартные36 , и, если возможно, должны быть четко определены сроки проведения сессий микродиализом. Наконец мы настоятельно рекомендуем следующие принципы и методологических стандартов для видео ЭЭГ-мониторинг управления взрослых грызунов изложенные экспертами Международная лига против эпилепсии и американского общества эпилепсии в своих последних докладах37 ,38.
Здесь мы описываем микродиализом глутамата и аспартат параллельно с долгосрочной записи видео ЭЭГ в эпилептические животных и их анализ в диализате ВЭЖХ. Мы будем делать упор критические шаги протокола, один должен заботиться о для наилучшего результата.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>3-channel two-twisted electrode</td>
			<td>Invivo1, Plastic One, Roanoke, Virginia, USA</td>
			<td>MS333/3-B/SPC</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>guide cannula</td>
			<td>Agn Tho&#39;s, Lindig&#246;, Sweden</td>
			<td>MAB 4.15.IC</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Resin KK2 Plastik</td>
			<td>Elettra Sport, Lecco, Italy</td>
			<td>KK2</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Super Attack gel Loctite</td>
			<td>Henkel Italia Srl, Milano, Italy</td>
			<td>2047420_71941</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imalgene-Ketamine</td>
			<td>Merial, Toulouse, France</td>
			<td>221300288 (AIC)</td>
			<td>Solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine</td>
			<td>Sigma, Milano, Italy</td>
			<td>X1251</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane-Vet</td>
			<td>Merial, Toulouse, France</td>
			<td>103120022 (AIC)</td>
			<td>Solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Altadol 50 mg/ ml - tramadol</td>
			<td>Formevet, Milano, Italy</td>
			<td>103703017 (AIC)</td>
			<td>Solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gentalyn 0.1% crm - gentamycine</td>
			<td>MSD Italia, Roma, Italy</td>
			<td>20891077 (AIC)</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>simplex rapid dental cement</td>
			<td>Kemdent, Associated Dental Products Ltd, Swindon, United Kingdom</td>
			<td>ACR811</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GlasIonomer CX-Plus Cement</td>
			<td>Shofu, Kyoto, Japan</td>
			<td>PN1167</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>probe clip holder</td>
			<td>Agn Tho&#39;s, Lindig&#246;, Sweden</td>
			<td>p/n 100 5001</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histoacryl&#174; Blue Topical Skin Adhesive</td>
			<td>TissueSeal, Ann Arbor, Michigan, USA</td>
			<td>TS1050044FP</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Valium 10 mg/2 ml - diazepam</td>
			<td>Roche, Monza, Italy</td>
			<td>019995063 (AIC)</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 mL syringe with 25G needle</td>
			<td>Vetrotecnica, Padova, Italy</td>
			<td>11.3500.05</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rat flexible feeding needle 17G</td>
			<td>Agn Tho&#39;s, Lindig&#246; Sweden</td>
			<td>7206</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Grass Technology apparatus</td>
			<td>Grass Technologies, Natus Neurology Incorporated, Pleasanton, California, USA</td>
			<td>M665G08</td>
			<td>Equipment (AS40 amplifier, head box, interconnecting cables, telefactor model RPSA S40)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>modular data acquisition and&#160;analysis system MP150</td>
			<td>Biopac, Goleta, California, USA</td>
			<td>MP150WSW</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>digital video surveillance system</td>
			<td>AverMedia Technologies, Fremont, California, USA</td>
			<td>V4.7.0041FD</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microdialysis probe</td>
			<td>Agn Tho&#39;s, Lindig&#246; Sweden</td>
			<td>MAB 4.15.1.Cu</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microdialysis probe</td>
			<td>Synaptech, Colorado Springs, Colorado, USA</td>
			<td>S-8010</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>block heater</td>
			<td>Grant Instruments, Cambridge, England</td>
			<td>QBD2</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stirrer</td>
			<td>Cecchinato A, Aparecchi Scientifici, Mestre, Italy</td>
			<td>711</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>infusion pump</td>
			<td>Univentor, Zejtun, Malta</td>
			<td>864</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>fine bore polythene tubing</td>
			<td>Smiths Medical International Ltd., Keene, New Hampshire, USA</td>
			<td>800/100/100/100</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>blue tubing adapters</td>
			<td>Agn Tho&#39;s, Lindig&#246; Sweden</td>
			<td>1002</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>red tubing adapters</td>
			<td>Agn Tho&#39;s, Lindig&#246; Sweden</td>
			<td>1003</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2.5 mL syringe with 22G needle</td>
			<td>Chemil, Padova, Italy</td>
			<td>S02G22</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>vial cap</td>
			<td>Cronus, Labicom, Olomouc, Czech Republic</td>
			<td>VCA-1004TB-100</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>septum</td>
			<td>Thermo Scientific, Rockwoood, Tennessee, USA</td>
			<td>National C4013-60 8 mm TEF/SIL septum</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>glass insert with bottom spring</td>
			<td>Supelco, Sigma, Milano, Italy</td>
			<td>27400-U</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>autosampler vial</td>
			<td>National Scientific, Thermo Fisher Scientific, Monza, Italy</td>
			<td>C4013-2</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Smartline manager 5000 system controller and degasser unit</td>
			<td>Knauer, Berlin, Germany</td>
			<td>V7602</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Smartline 1000 quaternary gradient pump</td>
			<td>Knauer, Berlin, Germany</td>
			<td>V7603</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>spectrofluorometric detector</td>
			<td>Shimadzu, Kyoto, Japan</td>
			<td>RF-551</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>chromatogrphic column</td>
			<td>Knauer, Berlin, Germany</td>
			<td>25EK181EBJ</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>chromatogrphic pre-column</td>
			<td>Knauer, Berlin, Germany</td>
			<td>P5DK181EBJ</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mobile phase solution A</td>
			<td>0.1 M sodium phosphate buffer, pH 6.0</td>
			<td></td>
			<td>Solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mobile phase solution B</td>
			<td>40% 0.1 M sodium phosphate buffer, 30% methanol, 30% acetonitrile, pH 6.5</td>
			<td></td>
			<td>Solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ringer solution</td>
			<td>composition in mM: MgCl2 0.85, KCl 2.7, NaCl 148, CaCl2 1.2, 0.3% BSA</td>
			<td></td>
			<td>Solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>modified Ringer solution</td>
			<td>composition in mM: MgCl2 0.85, KCl 100, NaCl 50.7, CaCl2 1.2, 0.3% BSA</td>
			<td></td>
			<td>Solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>saline</td>
			<td>0.9% NaCl, ph adjusted to 7.0</td>
			<td></td>
			<td>Solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sucrose solution</td>
			<td>10% sucrose in distilled water</td>
			<td></td>
			<td>Solution</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

microdialysis of excitatory amino acids during eeg recordings in freely moving rats

Микродиализом представляет собой метод устоявшихся нейробиологии, который коррелирует с изменениями неврологически активных веществ, распространение в мозг интерстициального пространства с поведением или с конкретным результатом патологии (например, изъятия для лечения эпилепсии). При изучении эпилепсии, микродиализом техника часто сочетается с краткосрочной или даже долгосрочные видео электроэнцефалография (ЭЭГ мониторинг оценить спонтанное захват частоты, тяжести, прогрессирование и кластеризации). Комбинированные микродиализом ЭЭГ основана на использовании нескольких методов и инструментов. Здесь мы провели в vivo микродиализом и непрерывной видео ЭЭГ запись монитора глутамата и аспартат отток со временем, на различных этапах естественной истории эпилепсии в мышиной модели. Этот комбинированный подход позволяет сопряжения изменения в версии нейромедиатора с конкретными этапами развития болезни и прогрессии. Амино кислоты концентрации в диализате определяется жидкостной хроматографии. Здесь мы описываем методы и структура, основные меры предосторожности один следует принимать во время микродиализом в vivo -ЭЭГ, особое внимание стереотаксической хирургии, базальную и высокой калия стимуляции во время микродиализом, глубина запись электрода ЭЭГ и высокой производительности жидкостной хроматографии анализ аспартата и глутамата в диализате. Этот подход может быть адаптирована для тестирования различных болезней или наркотиков индуцированной изменения физиологической концентрации аспартата и глутамата в головном мозге. В зависимости от наличия соответствующих аналитических assay он может далее использоваться для тестирования различных растворимых молекул при найме запись ЭЭГ в то же время.

Зонд восстановления
Среднее восстановление (т.е., среднее аминокислоты содержание в perfusate как процент содержания в равный объем раствора во флаконе) было 15.49 ± 0,42% при скорости потока 2 мкл/мин и 6.32 ± 0,64 3 мкл/мин для глутамата и 14.89 ± 0,36% ...

Watch this Scientific Journal Video about Microdialysis of Excitatory Amino Acids During EEG Recordings in Freely Moving Rats at JoVE.com

Microdialysis of Excitatory Amino Acids During EEG Recordings in Freely Moving Rats

Здесь мы описываем метод для в vivo микродиализом для анализа аспартата и глутамата релиз в вентральной гиппокампе эпилептические и не эпилептический крыс, в сочетании с записи ЭЭГ. Внеклеточной концентрации и глутамата, аспартата могут быть соотнесены с различных стадиях болезни.

Микродиализом возбуждающих аминокислот во время записи ЭЭГ в свободно перемещающихся крысы

Microdialysis is a well-established neuroscience technique that correlates the changes of neurologically active substances diffusing into the brain ...

Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в неврологии, такие как изменения в нейрохимии во время естественной истории неврологических заболеваний. Основным преимуществом предлагаемой методики ЭЭГ микродиализа является то, что такой комбинированный подход позволяет сопряжение изменений в высвобождении нейромедиатора на определенных стадиях развития и прогрессирования заболевания. Начните с переключения усилителя, расположенного за пределами клетки Фарадея.Откройте программное обеспечение ЭЭГ и начните приобретение ЭЭГ и соблюдайте сигнал ЭЭГ, производимый неподключенными кабелями. Затем соедините животное с привязанной системой записи ЭЭГ, удерживая голову животного между двумя протянутыми пальцами одной руки и привинчивая разъемы к пьедесталу электрода другой свободной рукой. Установите коэффициент усиления на каждом канале усилителя в соответствии с электродом сигнала одного животного, чтобы сигнал ЭЭГ был в масштабе.Тогда пусть животное исследовать новую клетку, по крайней мере один час под прямым наблюдением исследователя. Отрегулируйте кабель в соответствии с товаром животного и убедитесь, что кабели не мешают движениям животного и лежащей позе. Наконец, проверьте правильное обрамление изображения на видеокамерах, а затем запустите видеозапись ЭЭГ.Начните с подготовки микродиализа зондов для первого использования в соответствии с руководством пользователя производителя и заполнить их с Ringer's Solution. Затем вырежьте 10-сантиметровые кусочки FEP Tubing и соедините их с канюлями входов и выходов зонда с помощью трубчатых адаптеров разных цветов. Убедитесь, что трубки касаются адаптеров без мертвого пространства во всех соединениях.Удалите манекен канюли из руководства с помощью пинцета, крепко держа голову животного. Вставьте зонд microdialysis в канюлю направляющий выступ и используйте модельируя глину для того чтобы более далее затять вверх по cannula. Затем подключите животное к привязанной системе записи ЭЭГ.Затем поместите животное в плексигласовый цилиндр и дайте ему исследовать новую среду. Следуйте бодрствующим и свободно перемещающимся движениям крыс. Затем подключите вход зонда к 2,5 миллилитровому шприцу с притупленной иглой 22 калибра, содержащей решение Ringer's Solution с помощью трубчатых адаптеров.Нажмите один миллилитр ringer's Solution в зонд за 10 секунд, непрерывно толкая поршень 2,5 миллилитрового шприца. Проверьте падение жидкости, появляющиеся на выходе, чтобы обозначить, когда зонд готов к использованию. Наконец, заполните 2,5 миллилитровые шприцы, подключенные к трубкам FEP, трубя адаптеры с ringer's Solution и смонтировать их на инфузионный насос.Запустите насос в два микролитров в минуту, и пусть он работает на ночь. После проверки с помощью видеозаписи ЭЭГ записи отсутствия изъятий в течение трех часов, предшествующих сбору образцов, остановить насос проведения FEP трубки каннулированные шприцы заполнены Ringer's Solution. Установите еще один набор из 2,5 миллилитров шприцев, подключенных к трубкам FEP с трубчатыми адаптерами, заполненными модифицированным решением Ringer's Solution, содержащим 100 миллимолейный калийный раствор.Запустите насос в два микролитера в минуту и дайте ему работать. Проверьте наличие пузырьков воздуха в системе и убедитесь, что трубки касаются адаптеров без мертвого пространства во всех соединениях. Затем проверьте падение жидкости, появившейся на выходе, чтобы обозначить, когда зонд готов к использованию.Затем соедините трубки FEP шприцев, заполненных раствором Ringer's Solution, с внушевой канюлей зонда в каждом животном и дождийтесь появления жидкой капли на кончике розетки. Подключите розетку зонда к трубе FEP, что приводит к сбору в пробирке. Вставьте трубки FEP в закрытую пробирку 0,2 миллилитров с перфорированной крышкой и убедитесь, что трубка остается на месте, фиксируя ее куском глины для моделирования.После запуска насоса на двух микролитерах в минуту в течение 60 минут, не собирая образцы для эквивалентности системы, соберите пять последовательных 30-минутных образцов диализа в базовых условиях и храните образцы на льду. Через 10 минут переключите трубку со шприцев, содержащих 100 миллимолянный калий Ringer's Solution, на нормальное решение Ringer's Solution и дайте насосу работать. После сбора пятого после эквилибрации диализа, собирать 20 микролитер диализа фракций каждые 10 минут в течение одного часа.Затем соберите еще три 30-минутных образца диализа и остановите насос. Наконец, хранить образцы при температуре минус 80 градусов по Цельсию после эксперимента до анализа HPLC. После завершения эксперимента промыть использованные зонды микродиализа дистиллированной водой и хранить их во флаконе, наполненном чистой дистиллированной водой до следующего использования.Наконец, промыть всю установку микродиализа дистиллированной водой с последующим 70 процентов этанола. Замените этанол воздухом и храните установку в стерильной среде. Это репрезентативные следы ЭЭГ, зафиксированные из гиппокампа контрольных и эпилептических крыс во время хронической фазы заболевания.Никаких изменений ЭЭГ не наблюдалось у контрольных крыс, в то время как синхронизированная пароксизмальная эпилептическая активность наблюдалась около 500 миллисекунд до и во время поведенческих припадков у эпилептических крыс. Концентрация базального глутамата у хронических эпилептических крыс была значительно выше, чем у контрольных животных. Высокий калий вызвал дополнительный выброс глутамата в течение примерно 30 минут в борьбе крыс и около 60 минут в хронических эпилептических крыс.При попытке этой процедуры, важно помнить, что животные, имплантированные с устройством склонны потерять его в течение длительного эксперимента, так что используйте свет голову набор и достаточно длинные кабели, чтобы избежать вмешательства в мобильность животных. В зависимости от наличия соответствующего аналитического эссе, метод может быть дополнительно использован для тестирования различных растворимых молекул в головном мозге при использовании записи ЭЭГ в то же время. После его развития, этот метод позволил исследователям в области эпилептологии, чтобы обеспечить понимание изменений в возбуждающей нейротрансмиссии в случае эпилепсии височной доли.После просмотра этого видео, мы надеемся, вы будете иметь лучшее понимание того, как выполнить микродиализ in vivo вместе с глубиной электрода ЭЭГ записи в свободно движущихся эпилептических крыс.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

High-density EEG Recordings of the Freely Moving Mice using Polyimide-based Microelectrode

Высокая плотность ЭЭГ Записи свободно движущихся мышей использованием полиимида основе Микроэлектродные

Electroencephalogram (EEG) indicates the averaged electrical activity of the neuronal populations on a large-scale level. It is widely utilized as a ...

Hippocampal Insulin Microinjection and In vivo Microdialysis During Spatial Memory Testing

Hippocampal Insulin Microinjection and In vivo Microdialysis During Spatial Memory Testing

Гиппокампа Микроинъекция инсулина и<em&gt; В естественных условиях</em&gt; Микродиализ Во время тестирования пространственной памяти

Glucose metabolism is a useful marker for local neural activity, forming the basis of methods such as 2-deoxyglucose and functional magnetic resonance ...

Recording EEG in Freely Moving Neonatal Rats Using a Novel Method

Запись ЭЭГ в свободно перемещающихся крысах новорожденных с использованием нового метода

EEG is a useful method to detect electrical activity in the brain. Moreover, it is a widely used diagnostic tool for various neurological conditions, such ...

Simultaneous Recordings of Cortical Local Field Potentials, Electrocardiogram, Electromyogram, and Breathing Rhythm from a Freely Moving Rat

Одновременной записи корковых местных потенциалов поля, электрокардиограмма, электромиограммы и дыхательный ритм от свободно движущихся крыса

Monitoring the physiological dynamics of the brain and peripheral tissues is necessary for addressing a number of questions about how the brain controls ...

Noninvasive EEG Recordings from Freely Moving Piglets

Неинвазивный ЭЭГ записи от свободно перемещающихся поросят

The method allows the recording of high-quality electroencephalograms (EEGs) from freely moving piglets directly in the pigpen. We use a one-channel ...

Multi-Fiber Photometry to Record Neural Activity in Freely-Moving Animals

Мульти-Волокно Фотометрия для записи нейронной активности в свободно движущихся животных

Recording the activity of a group of neurons in a freely-moving animal is a challenging undertaking. Moreover, as the brain is dissected into smaller and ...

Intracerebroventricular Delivery of Gut-Derived Microbial Metabolites in Freely Moving Mice

Интрацеребровентрикулярная доставка кишечных микробных метаболитов у свободно движущихся мышей

The impact of gut microbiota and their metabolites on host physiology and behavior has been extensively investigated in this decade. Numerous studies have ...

Extracellular Electrophysiological Recording in the Motor Cortex of Mice

Multichannel Extracellular Recording in Freely Moving Mice

Advancements in Multichannel Extracellular Recording for Studying Neuronal Activity in Freely Moving Mice (Video) | JoVE

Многоканальная внеклеточная запись у свободно движущихся мышей

The protocol aims to uncover the properties of neuronal firing and network local field potentials (LFPs) in behaving mice carrying out specific tasks by ...

Cerebrospinal Fluid and Blood Withdrawal from Rats with Concurrent EEG Recording

Sampling Cerebrospinal Fluid and Blood from Lateral Tail Vein in Rats During EEG Recordings

Obtaining High-Quality CSF and Blood Samples for Epilepsy Biomarker Discovery (Video) | JoVE

Забор спинномозговой жидкости и крови из боковой хвостовой вены у крыс во время регистрации ЭЭГ

Because the composition of body fluids reflects many physiological and pathological dynamics, biological liquid samples are commonly obtained in many ...

Multilayer Imaging with Microprism in Head-Fixed and Freely Moving Animals

Long-Term Imaging of Identified Neural Populations using Microprisms in Freely Moving and Head-Fixed Animals

Author Spotlight: Comparative Imaging of Neural Activity in Awake and Freely Moving States

Долгосрочная визуализация идентифицированных нейронных популяций с использованием микропризм у свободно движущихся животных и животных с фиксированной головой

With the advancement of multi-photon microscopy and molecular technologies, fluorescence imaging is rapidly growing to become a powerful approach for ...