Name: microdialysis of excitatory amino acids during eeg recordings in freely moving rats
Uploaded: 2018-11-08T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Microdialysis of Excitatory Amino Acids During EEG Recordings in Freely Moving Rats at JoVE.com

Yazarlar Anna Binaschi, Paolo Roncon ve Eleonora Palma öncelik sırasında yayınlanan el yazmaları katkılarından dolayı teşekkür etmek istiyorum.

Tüm deneysel prosedürler Ferrara kurumsal hayvan bakım ve kullanım Komitesi Üniversitesi ve İtalyan Sağlık Bakanlığı tarafından onaylanmış olan (yetkilendirme: DM 246/2012-B) Avrupa toplumlarında özetlenen yönergelere uygun olarak Konsey Yönergesi 24 Kasım 1986 (86/609/EEC). Bu iletişim kuralı özellikle sıçan beyin dialysates microdialysis oturumlarının epileptik ve epileptik olmayan sıçanlarda EEG denetimi altında elde glutamat ve aspartat tayini için ayarlanır. Burada açıklanan malzemel...

Bu çalışmada, gösterdiğimiz microdialysis ile birleştiğinde sürekli video-EEG kaydı TLE deneysel bir model içinde nasıl gerçekleştirilebilir. Video-EEG kayıt teknikleri farklı aşamalarında hayvanlarda hastalık progresyon doğru olarak tanınabilmesi için kullanılır ve microdialysis tekniği (herhangi bir değişiklik için bulunmuştur sürede oluşan değişiklikleri glutamat sürümdeki açıklamak için kullanılır aspartat daha önce yayımlanmış çalışma2). Bunları ...

Biz sistematik olarak ekstrasellüler konsantrasyonları işlev bozukluğu glutamat aracılı eksitatör ve inhibitör neurotransmission temporal lob epilepsi (TLE) içinde spontan nöbetler sonuçlanan GABAergic içgörü sağlamak için izlenen GABA1 ve daha sonra glutamat ve aspartat2 fareler çeşitli noktalarda zaman-doğal hastalığının ventral hippocampus microdialysis tarafından düzeyde tabii ki, yani, gelişme ve ilerleme epilepsi sırasında. Biz çok doğru davranış, elektrofizyolojik ve histopatolojik değişiklikleri3,4 açısından hastalığı taklit eden TLE pilokarpin modeli içinde rats, avantaj aldı ve biz amino diyalizat konsantrasyonu korelasyon onun farklı aşamalarında asitler: akut faz epileptogenic hakaret, gecikme süresi faz, ilk spontan nöbet ve kronik phass5,6,7saat sonra. Hastalık aşama çerçeveleme uzun süreli video-EEG izleme ve hassas EEG ve spontan nöbetler klinik karakterizasyonu tarafından etkinleştirildi. Microdialysis teknik uygulama uzun süreli video-EEG bize TLE nevropatoloji için mekanik hipotezler evlenme izin izleme ile ilgili. Özet olarak, bu el yazması açıklanan teknik gelişme ve ilerleme hayvan modelinde epilepsi ile tanımlanmış beyin alanı içinde nörokimyasal değişiklikler eşleştirme sağlar.
Eþleþtirilmiþ cihazlar, microdialysis kanül için bitişik bir derinlik elektrot oluşan kez nerede nörotransmiterler, metabolitleri veya enerji yüzeylerde değişiklikleri için nöronal aktivite ilişkili olması epilepsi araştırma çalışmaları ve istihdam edilmektedir. Vakaların büyük çoğunluğu, serbestçe hayvanlar davranmak kullanılır ama benzer bir şekilde insanlar için Örneğin, derinlik elektrot soruşturma cerrahi8önce uygulanan pharmaco dayanıklı epileptik hastalarda da yapılabilir. EEG kaydı hem diyalizat toplama yapılabilir ayrı ayrı (bir yarımküre ve microdialysis elektrot yerleştirilmesiÖrneğin, yoklama diğer Yarımküre veya bile microdialysis yerine getirirken hayvanların bir grupta gerçekleştirme tek EEG hayvanların başka bir grupta). Ancak, elektrotlar probları için kaplin birden çok avantajları olabilir: stereotaksik cerrahi basitleştirir, doku hasarı sadece bir yarımküre için sınırlar (diğer bırakarak sağlam, histolojik araştırmalar denetimi olarak) ve bu sonuçları homogenizes aynı beyin bölgesi ve aynı hayvan--dan elde edilir.
Öte yandan, ev yapımı ise eşleşmiş microdialysis sonda-elektrot aygıt hazırlanması beceri ve zaman gerektirir. Bir piyasadan satın aldıysanız nispeten yüksek miktarlarda para harcayabilirsiniz. Ayrıca, ne zaman probları microdialysis (sonda ipuçları vardır genellikle 200-400 µm çapı ve 7-12 mm uzunluğunda)9ve EEG elektrotlar (elektrot ipuçları vardır genellikle faiz10beyin yapısını ulaşmak için 300-500 µm çapı ve yeterince uzun) birleştiğinde, takılı aygıt hayvanlar için zahmetli ve özellikle ne zaman o diyaliz pompa ve zor telli EEG kayıt sistemi ile bağlantılı olan kayıp olacak açıktır başın bir tarafında nispeten ağır ve hantal bir nesne temsil eder. Bu yönü daha zordur ve daha az microdialysis oturumları edinilmiş epileptik hayvanlarda alakalı. Uygun cerrahi teknik ve uygun ameliyat sonrası bakım birleşimsel microdialysis-EEG10,11, deneyleri için takip edilmelidir ve çok az hayvan rahatsızlık neden uzun süreli komponentlerde neden olur 12.
Avantajları ve microdialysis teknik sınırlamaları ayrıntılı olarak birçok nörologlar tarafından gözden geçirildi. Asıl avantaj diğer vivo içinde perfüzyon teknikleri (Örneğin, hızlı akış itme-çekme veya kortikal Kupası perfüzyon) üzerinden faiz13,14nispeten kesin bir alanı kapsayan sonda küçük çaplı olduğunu, 15. İkinci olarak, microdialysis membran doku ve perfusate arasında fiziksel bir bariyer oluşturur; Bu nedenle, yüksek moleküler ağırlık maddelerin değil çapraz ve analiz16,17ile müdahale değil. Ayrıca, doku perfusate18türbülanslı akış korunmaktadır. Başka bir önemli avantaj analit konsantrasyon perfusate maksimize etmek için perfusate akışını değiştirmek için olasılık var (yani, microdialysis süreci matematiksel olarak tanımlanabilir ve yüksek verim için değiştirilebilir örnekteki analit konsantrasyonları)19. Son olarak, teknik uyuşturucu veya farmakolojik aktif maddeler faiz dokusu içine demleyin ve müdahale20yerinde etkilerini belirlemek için kullanılabilir. Öte yandan, microdialysis elektrokimyasal veya biyolojik sensörleri ile karşılaştırıldığında sınırlı çözünürlük vakit (genellikle daha fazla zaman örnekleri toplamak için gerekli nedeniyle 1 dk) vardır; doku hasarına neden olan invaziv bir tekniktir; sürekli konsantrasyon gradyanı nedeniyle membran perfusate faiz analit ile birlikte girer boşluk tüm çözünür maddelerin içinde nörokimyasal dengesini ödün vermez. Son olarak, microdialysis teknik son derece perfusate9,21,22,23 maddelerin miktar için istihdam analitik teknikler sınırlarını etkilenir . Yüksek performanslı sıvı kromatografi (derivatization orthophthaldialdehyde biyolojik örnekler glutamat ve aspartat analizi ile de doğrulanmış24,25,26 edildikten sonra HPLC) , 27 ve onun kapsamlı tartışma bu yazının kapsamı dışında ancak bu yöntem kullanılarak üretilen veri ayrıntılı olarak açıklanacaktır.
Düzgün ve perfusate bileşimi değişiklik yapmadan gerçekleştirildiğinde microdialysis nörotransmitter yayın bazal düzeyleri hakkında güvenilir bilgi sağlar. Bazal düzeyleri en büyük bölümünü büyük olasılıkla verici yayılma sinapslarda9sonucudur. Birçok durumda ekstra sinaptik alanda nörotransmitter basit örnekleme bir soruşturma hedefleri takip için yeterli olmadığı için microdialysis tekniği de sinir hücreleri uyarmak için ya da onları önemli mahrum için istihdam edilebilir fizyolojik iyonları K+ veya Ca2 +, uyandırmak veya nörotransmitter sürümü önlemek için gibi.
Yüksek K+ stimülasyon kez Nörobiyoloji nöronal aktivite uyanık hayvanlarda hem de birincil ve organotypic kültürlerde uyarmak için kullanılır. Sağlıklı bir merkezi sinir sistemi K+ (40-100 mM) yüksek konsantrasyonları ile pozlama çözümlere nörotransmitter28sızma çağrıştırır. Yanıt-e doğru yüksek K+ ek bir sürümde sağlama yeteneği bu nöronların epileptik hayvanlar1 ve diğer nörodejeneratif hastalıkları29,30tehlikeye olabilir. Benzer şekilde, Ca (Ca2 + ücretsiz çözümleri ventriküler tarafından elde edilen)2 + yoksunluğu kalsiyum-bağımlı kurmak için kullanılan çoğu nörotransmitter microdialysis tarafından ölçülen piyasaya. Bu genellikle Ca2 + bağımlı yayın nöronal kökeni ise Ca2 + bağımsız yayın kaynaklanan glia ama birçok çalışma tartışmalara Ca2 +anlamı üzerinde yükseltilmiş olduğunu inanılıyor-hassas ölçümleri Örneğin glutamat veya GABA9: böylece, olanak varsa, bu ikinci yüksek uzaysal çözünürlük ve elektrotlar sağlar sinapslarda31olarak yakın almak için microsensor çalışmalar, microdialysis çalışmaları desteklemek için tavsiye edilir.
Epileptik hayvanlarda Microdialysis çalışmaları ile ilgili çoğu elde edilen veriler video veya video-EEG nöbetler, yani, işaretler ve/veya belirtiler nedeniyle anormal geçici oluşumunun izleme üzerine itimat stres önemlidir aşırı büyük ve zaman uyumlu nöronal faaliyette beyin32. Deneme hazırlarken dikkate alınması gereken tedavi pilokarpin hayvanlarda electrographic vakalarının bazı özellikleri vardır. Spontan nöbetler sık EEG interictal sivri3 depresyonda etkinlik tarafından takip edilmektedir ve kümeleri33,34oluşur. Sahte işletilen epileptik olmayan hayvanlar nöbet benzeri aktivite35 sergileyebilirler ve bu nedenle EEG kayıtları değerlendirme için parametreler standart36 olmalı ve, eğer olanaklı, microdialysis oturumları zamanlaması iyi tanımlanmış olmalıdır. Son olarak, çok son raporlarında37 Uluslararası lig karşı epilepsi ve Amerikan epilepsi Derneği uzmanları tarafından özetlenen ilkeleri ve video-EEG denetim yetişkin kemirgen izlemek için metodolojik standartları takip önerilir ,38.
Burada, microdialysis glutamat ve aspartat epileptik hayvanlarda uzun süreli video-EEG kayıtları ve HPLC göre diyalizat onların analizi ile paralel olarak açıklayın. Bir en iyi sonuç için halletmem protokol kritik adımları vurgulamak olacaktır.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>3-channel two-twisted electrode</td>
			<td>Invivo1, Plastic One, Roanoke, Virginia, USA</td>
			<td>MS333/3-B/SPC</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>guide cannula</td>
			<td>Agn Tho&#39;s, Lindig&#246;, Sweden</td>
			<td>MAB 4.15.IC</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Resin KK2 Plastik</td>
			<td>Elettra Sport, Lecco, Italy</td>
			<td>KK2</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Super Attack gel Loctite</td>
			<td>Henkel Italia Srl, Milano, Italy</td>
			<td>2047420_71941</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imalgene-Ketamine</td>
			<td>Merial, Toulouse, France</td>
			<td>221300288 (AIC)</td>
			<td>Solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine</td>
			<td>Sigma, Milano, Italy</td>
			<td>X1251</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane-Vet</td>
			<td>Merial, Toulouse, France</td>
			<td>103120022 (AIC)</td>
			<td>Solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Altadol 50 mg/ ml - tramadol</td>
			<td>Formevet, Milano, Italy</td>
			<td>103703017 (AIC)</td>
			<td>Solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gentalyn 0.1% crm - gentamycine</td>
			<td>MSD Italia, Roma, Italy</td>
			<td>20891077 (AIC)</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>simplex rapid dental cement</td>
			<td>Kemdent, Associated Dental Products Ltd, Swindon, United Kingdom</td>
			<td>ACR811</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GlasIonomer CX-Plus Cement</td>
			<td>Shofu, Kyoto, Japan</td>
			<td>PN1167</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>probe clip holder</td>
			<td>Agn Tho&#39;s, Lindig&#246;, Sweden</td>
			<td>p/n 100 5001</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histoacryl&#174; Blue Topical Skin Adhesive</td>
			<td>TissueSeal, Ann Arbor, Michigan, USA</td>
			<td>TS1050044FP</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Valium 10 mg/2 ml - diazepam</td>
			<td>Roche, Monza, Italy</td>
			<td>019995063 (AIC)</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 mL syringe with 25G needle</td>
			<td>Vetrotecnica, Padova, Italy</td>
			<td>11.3500.05</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rat flexible feeding needle 17G</td>
			<td>Agn Tho&#39;s, Lindig&#246; Sweden</td>
			<td>7206</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Grass Technology apparatus</td>
			<td>Grass Technologies, Natus Neurology Incorporated, Pleasanton, California, USA</td>
			<td>M665G08</td>
			<td>Equipment (AS40 amplifier, head box, interconnecting cables, telefactor model RPSA S40)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>modular data acquisition and&#160;analysis system MP150</td>
			<td>Biopac, Goleta, California, USA</td>
			<td>MP150WSW</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>digital video surveillance system</td>
			<td>AverMedia Technologies, Fremont, California, USA</td>
			<td>V4.7.0041FD</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microdialysis probe</td>
			<td>Agn Tho&#39;s, Lindig&#246; Sweden</td>
			<td>MAB 4.15.1.Cu</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microdialysis probe</td>
			<td>Synaptech, Colorado Springs, Colorado, USA</td>
			<td>S-8010</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>block heater</td>
			<td>Grant Instruments, Cambridge, England</td>
			<td>QBD2</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stirrer</td>
			<td>Cecchinato A, Aparecchi Scientifici, Mestre, Italy</td>
			<td>711</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>infusion pump</td>
			<td>Univentor, Zejtun, Malta</td>
			<td>864</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>fine bore polythene tubing</td>
			<td>Smiths Medical International Ltd., Keene, New Hampshire, USA</td>
			<td>800/100/100/100</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>blue tubing adapters</td>
			<td>Agn Tho&#39;s, Lindig&#246; Sweden</td>
			<td>1002</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>red tubing adapters</td>
			<td>Agn Tho&#39;s, Lindig&#246; Sweden</td>
			<td>1003</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2.5 mL syringe with 22G needle</td>
			<td>Chemil, Padova, Italy</td>
			<td>S02G22</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>vial cap</td>
			<td>Cronus, Labicom, Olomouc, Czech Republic</td>
			<td>VCA-1004TB-100</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>septum</td>
			<td>Thermo Scientific, Rockwoood, Tennessee, USA</td>
			<td>National C4013-60 8 mm TEF/SIL septum</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>glass insert with bottom spring</td>
			<td>Supelco, Sigma, Milano, Italy</td>
			<td>27400-U</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>autosampler vial</td>
			<td>National Scientific, Thermo Fisher Scientific, Monza, Italy</td>
			<td>C4013-2</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Smartline manager 5000 system controller and degasser unit</td>
			<td>Knauer, Berlin, Germany</td>
			<td>V7602</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Smartline 1000 quaternary gradient pump</td>
			<td>Knauer, Berlin, Germany</td>
			<td>V7603</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>spectrofluorometric detector</td>
			<td>Shimadzu, Kyoto, Japan</td>
			<td>RF-551</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>chromatogrphic column</td>
			<td>Knauer, Berlin, Germany</td>
			<td>25EK181EBJ</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>chromatogrphic pre-column</td>
			<td>Knauer, Berlin, Germany</td>
			<td>P5DK181EBJ</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mobile phase solution A</td>
			<td>0.1 M sodium phosphate buffer, pH 6.0</td>
			<td></td>
			<td>Solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mobile phase solution B</td>
			<td>40% 0.1 M sodium phosphate buffer, 30% methanol, 30% acetonitrile, pH 6.5</td>
			<td></td>
			<td>Solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ringer solution</td>
			<td>composition in mM: MgCl2 0.85, KCl 2.7, NaCl 148, CaCl2 1.2, 0.3% BSA</td>
			<td></td>
			<td>Solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>modified Ringer solution</td>
			<td>composition in mM: MgCl2 0.85, KCl 100, NaCl 50.7, CaCl2 1.2, 0.3% BSA</td>
			<td></td>
			<td>Solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>saline</td>
			<td>0.9% NaCl, ph adjusted to 7.0</td>
			<td></td>
			<td>Solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sucrose solution</td>
			<td>10% sucrose in distilled water</td>
			<td></td>
			<td>Solution</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

microdialysis of excitatory amino acids during eeg recordings in freely moving rats

Microdialysis nörolojik aktif maddeler içine belgili tanımlık beyin interstisyel yer davranışı ile ve/veya belirli bir patoloji (Örneğin, nöbetler sonucu ile difüzyon değişiklikler ilişkili olan bir iyi kurulmuş nörolojik tekniktir Epilepsi için). Epilepsi okurken, microdialysis teknik genellikle kısa vadeli veya uzun vadeli bile video-spontan nöbet sıklığını, önem, ilerleme ve kümeleme değerlendirmek için izleme elektroansefalografi ile (EEG) birleştirilir. Kombine microdialysis EEG birkaç yöntem ve araçları kullanımına dayanır. Burada, vivo içinde microdialysis ve sürekli video-EEG zaman içinde epilepsi bir sıçan modelinde Doğal Tarih, farklı aşamalarını monitör glutamat ve aspartat çıkış için kayıt yapılır. Bu kombine yaklaşım nörotransmitter sürümde değişiklikler eşleştirme belirli aşamaları hastalığı gelişme ve ilerleme sağlar. Amino asit konsantrasyon diyalizat sıvı kromatografi tarafından tespit edilmiştir. Burada, asıl önlem bir in vivo microdialysis sırasında almalı anahat ve yöntemleri açıklayan-EEG, stereotaksik cerrahi özellikle dikkat edin, Bazal ve yüksek potasyum uyarı sırasında microdialysis, derinliği ile Elektrot EEG kaydı ve yüksek performanslı sıvı kromatografi Analizi içinde diyalizat glutamat ve aspartat. Bu yaklaşım adapte olabilir uyuşturucu ya da hastalık çeşitli test etmek için değişiklikleri, aspartat ve glutamat beyin fizyolojik konsantrasyonları indüklenen. Uygun bir analitik tahlil durumu bağlı olarak, daha fazla istihdam EEG kaydı aynı anda farklı çözünen molekülleri test etmek için kullanılabilir.

Sonda kurtarma
(Yani, eşit bir şişe çözüm hacmi içeriğinde yüzdesi olarak perfusate ortalama amino asit içeriği) ortalama kurtarma 15.49 ± %0,42 2 μL/dk ve glutamat için 3 μL/dk 6,32 ± 0.64 akış hızında ve bir akış hızında 2 %0,36 14.89 ± oldu μl/dak ve 10.13 ± 0,51 3 μL/dk cuprophane membran sonda kullanırken aspartat için. Poliakrilonitril membran prob kullanılıyorsa, kötü kurtarma 13.6...

Watch this Scientific Journal Video about Microdialysis of Excitatory Amino Acids During EEG Recordings in Freely Moving Rats at JoVE.com

Microdialysis of Excitatory Amino Acids During EEG Recordings in Freely Moving Rats

Burada, in vivo microdialysis EEG kayıtları ile birlikte epileptik ve sigara-epileptik sıçan ventral hipokampus glutamat ve aspartat sürümde analiz etmek için bir yöntem açıklanmaktadır. Ekstraselüler glutamat ve aspartat konsantrasyonu hastalık farklı aşamalarında ile ilişkili.

Microdialysis fareler serbestçe hareket EEG kayıtları sırasında eksitatör Amino asit

Microdialysis is a well-established neuroscience technique that correlates the changes of neurologically active substances diffusing into the brain ...

Bu yöntem nörolojik hastalıkların doğal tarihi sırasında nörokimya değişiklikleri gibi nörolojik bilimlerde anahtar sorulara cevap yardımcı olabilir. Önerilen mikrodiyaliz EEG tekniğinin en büyük avantajı, bu tür kombine yaklaşımın, hastalığın gelişimi ve ilerlemesinin belirli aşamalarında nörotransmitter salınımındaki değişikliklerin eşleşmesine olanak sağlamasıdır. Faraday Kafesi'nin dışına yerleştirilmiş amplifikatörün açılarak başlayın.EEG yazılımını açın ve EEG edinimini başlatın ve bağlantısız kablolar tarafından üretilen EEG sinyalini gözlemleyin. Daha sonra, hayvanı bir elin iki gerilmiş parmağı arasında tutarak ve diğer serbest elini kullanarak konektörleri elektrot kaidesine vidalayarak gergin EEG kayıt sistemine bağlayın. EEG sinyali ölçekte olacak şekilde, amplifikatörün her kanalında tek bir hayvanın elektrot sinyaline göre bir amplifikasyon faktörü ayarlayın.Sonra hayvan araştırmacının doğrudan gözlem altında en az bir saat için yeni kafes keşfetmek sağlar. Kabloyu hayvanın malına göre ayarlayın ve kabloların hayvanın hareketlerini ve yalan duruşunu etkilemediğinden emin olun. Son olarak, video kameralar üzerinde çerçeveleme doğru görüntü kontrol edin ve sonra video EEG kaydı nı başlatın.Mikrodiyaliz problarını üretici kullanıcı kılavuzuna göre ilk kullanım için hazırlayarak başlayın ve Ringer's Solution ile doldurun. Daha sonra, FEP Boru 10 santimetre uzunluğunda parçalar kesilmiş ve farklı renklerde boru adaptörleri kullanarak prob giriş ve çıkış kanülleri bağlayın. Borunun tüm bağlantılarda ölü alan olmadan adaptörlere dokunduğundan emin olun.Hayvanın kafasını sıkıca tutarak cımbızkullanarak kukla kanülünü kılavuzundan çıkarın. Mikrodiyaliz probu kılavuzukana yerleştirin ve kanülü daha da sağlamlamak için modelleme kil kullanın. Daha sonra, hayvanbağlı EEG kayıt sistemine bağlayın.Sonra pleksiglas silindir içine hayvan koymak ve yeni bir ortam keşfetmek sağlar. Uyanık ve serbestçe hareket eden fare hareketlerini takip edin. Daha sonra, sondanın girişini boru adaptörlerini kullanarak Ringer's Solution içeren açıkptif 22 gauge iğneile 2,5 mililitrelik şırınga bağlayın.2,5 mililitrelik şırınganın pistonuna sürekli iterek bir mililitre Ringer's Solution'ı 10 saniye içinde proba itin. Prob kullanıma hazır olduğunda belirtmek için prizde görünen sıvının damlasını kontrol edin. Son olarak, FEP boruya bağlı 2,5 mililitrelik şırıngaları Ringer's Solution ile bağdaştırıcılarla tüpleyerek doldurun ve infüzyon pompasına monte edin.Pompayı dakikada iki mikrolitreden başlatın ve bir gecede çalıştırın. Video EEG kayıtları ile doğruladıktan sonra numune toplamadan önceki üç saat içinde nöbet lerin olmamasını, Ringer's Solution ile doldurulmuş FEP tüp konserveşleri taşıyan pompayı durdurun. 100 milimolar potasyum çözeltisi içeren değiştirilmiş bir Ringer's Solution ile doldurulmuş tüp adaptörleri ile FEP borubağlı 2,5 mililitrelik şırıngalar başka bir dizi monte.Pompayı dakikada iki mikrolitreden başlatın ve çalıştırın. Sistemde hava kabarcıkları yokluğunu kontrol edin ve borunun tüm bağlantılarda ölü alan olmadan adaptörlere dokunduğundan emin olun. Daha sonra, prob kullanıma hazır olduğunda belirtmek için çıkışta görünen sıvının damlasını kontrol edin.Daha sonra, Ringer's Solution ile doldurulmuş şırıngaların FEP borularını her hayvandaki sondanın giriş kanülüne bağlayın ve çıkış ın ucundaki sıvı damlasının görünümünü bekleyin. Sondanın çıkışını, test tüpünde toplanmasına yol açan FEP tüpüne bağlayın. FEP boruyu delikli bir kapakla kapalı 0,2 mililitrelik test tüpüne takın ve bir parça modelleme kilile sabitleyerek tüpün yerinde kalmasını sağlayın.Pompayı sistemi dengelemek için numune toplamadan dakikada iki mikrolitrede 60 dakika çalıştırdıktan sonra, temel koşullar altında art arda beş tane 30 dakikalık diyaliz numunesi toplayın ve numuneleri buz üzerinde saklayın. 10 dakika sonra, 100 milimolar potasyum Ringer's Solution içeren şırıngalardan tüpü normal Ringer's Solution'a geçirin ve pompanın çalışmasına izin verin. Beşinci post-equilibration diyaliz toplandıktan sonra, bir saat boyunca her 10 dakikada 20 mikrolitre dialysate fraksiyonları toplamak.Sonra üç ek 30 dakika dialysate örnekleri toplamak ve pompa durdurmak. Son olarak, deneyden sonra hplc analizine kadar numuneleri eksi 80 santigrat derecede saklayın. Deney tamamlandıktan sonra, kullanılan mikrodiyaliz sondalarını distile suyla durulayın ve bir sonraki kullanıma kadar temiz distile su yla dolu bir şişede saklayın.Son olarak, distile su ile tüm mikrodiyaliz kurulum durulayın ardından yüzde 70 etanol. Etanol'ü havayla değiştirin ve kurulumu steril bir ortamda saklayın. Bunlar hastalığın kronik evresinde kontrol ve epileptik sıçanların hipokampusundan kaydedilen temsili EEG izleridir.Kontrol sıçanlarında EEG değişikliği gözlenmezken, epileptik sıçanlarda davranışsal nöbetlerden yaklaşık 500 milisaniye önce ve sırasında senkronize paroksismal epileptiform aktivite gözlendi. Kronik epileptik sıçanlarda bulunan bazal glutamat konsantrasyonu kontrol hayvanlarına göre anlamlı olarak yüksekti. Yüksek potasyum kontrol sıçanlarda yaklaşık 30 dakika ve kronik epileptik sıçanlarda yaklaşık 60 dakika glutamat ek bir salınım uyandırdı.Bu prosedürü denerken, cihazla implante edilen hayvanların uzun süreli bir deney boyunca onu kaybetmeye meyilli olduklarını hatırlamak önemlidir, bu nedenle hayvan hareketliliğine müdahale etmekten kaçınmak için hafif bir kafa seti ve yeterince uzun kablolar kullanın. Uygun bir analitik denemenin kullanılabilirliğine bağlı olarak, yöntem aynı anda EEG kaydı nı kullanırken beyindeki farklı çözünür molekülleri test etmek için daha fazla kullanılabilir. Gelişiminden sonra, bu teknik epileptoloji alanında araştırmacılar bir temporal lob epilepsi durumunda uyarıcı nörotransmisyon değişiklikleri içine bir fikir sağlamak için izin verdi.Bu videoyu izledikten sonra, serbestçe hareket eden bir epileptik sıçanda derinlik elektrot EEG kaydı ile birlikte in vivo mikrodiyaliz nasıl daha iyi bir anlayışa sahip olacak güveniyoruz.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

High-density EEG Recordings of the Freely Moving Mice using Polyimide-based Microelectrode

Poliimid-temelli Mikroelektrod kullanarak Serbestçe Hareketli Fare Yüksek yoğunluklu EEG Kayıtlar

Electroencephalogram (EEG) indicates the averaged electrical activity of the neuronal populations on a large-scale level. It is widely utilized as a ...

Hippocampal Insulin Microinjection and In vivo Microdialysis During Spatial Memory Testing

Hippocampal Insulin Microinjection and In vivo Microdialysis During Spatial Memory Testing

Hipokampal İnsülin Mikroenjeksiyon ve<em&gt; In vivo</emMekansal Bellek Test sırasında&gt; mikrodivaliz

Glucose metabolism is a useful marker for local neural activity, forming the basis of methods such as 2-deoxyglucose and functional magnetic resonance ...

Recording EEG in Freely Moving Neonatal Rats Using a Novel Method

Yeni Bir Yöntemi Kullanarak Serbest Dolaşan Yenidoğan Sıçanlarında EEG Kaydı

EEG is a useful method to detect electrical activity in the brain. Moreover, it is a widely used diagnostic tool for various neurological conditions, such ...

Simultaneous Recordings of Cortical Local Field Potentials, Electrocardiogram, Electromyogram, and Breathing Rhythm from a Freely Moving Rat

Kortikal yerel alan potansiyelleri, Elektrokardiyogram, Electromyogram ve ritim serbestçe hareket bir sıçan gelen nefes eşzamanlı kayıt

Monitoring the physiological dynamics of the brain and peripheral tissues is necessary for addressing a number of questions about how the brain controls ...

Noninvasive EEG Recordings from Freely Moving Piglets

Domuz yavruları serbestçe hareket noninvaziv EEG kayıtları

The method allows the recording of high-quality electroencephalograms (EEGs) from freely moving piglets directly in the pigpen. We use a one-channel ...

Multi-Fiber Photometry to Record Neural Activity in Freely-Moving Animals

SerbestÇe Hareket Eden Hayvanlarda Nöral AktiviteYi Kaydetmek Için Çoklu Fiber Fotometri

Recording the activity of a group of neurons in a freely-moving animal is a challenging undertaking. Moreover, as the brain is dissected into smaller and ...

Intracerebroventricular Delivery of Gut-Derived Microbial Metabolites in Freely Moving Mice

Serbestçe Hareket Eden Farelerde Bağırsak Kaynaklı Mikrobiyal Metabolitlerin İntraserebroventriküler Verilmesi

The impact of gut microbiota and their metabolites on host physiology and behavior has been extensively investigated in this decade. Numerous studies have ...

Extracellular Electrophysiological Recording in the Motor Cortex of Mice

Multichannel Extracellular Recording in Freely Moving Mice

Advancements in Multichannel Extracellular Recording for Studying Neuronal Activity in Freely Moving Mice (Video) | JoVE

Serbestçe hareket eden farelerde çok kanallı hücre dışı kayıt

The protocol aims to uncover the properties of neuronal firing and network local field potentials (LFPs) in behaving mice carrying out specific tasks by ...

Cerebrospinal Fluid and Blood Withdrawal from Rats with Concurrent EEG Recording

Sampling Cerebrospinal Fluid and Blood from Lateral Tail Vein in Rats During EEG Recordings

Obtaining High-Quality CSF and Blood Samples for Epilepsy Biomarker Discovery (Video) | JoVE

EEG Kayıtları Sırasında Sıçanlarda Lateral Kuyruk Veninden Beyin Omurilik Sıvısı ve Kan Örneği Alınması

Because the composition of body fluids reflects many physiological and pathological dynamics, biological liquid samples are commonly obtained in many ...

Multilayer Imaging with Microprism in Head-Fixed and Freely Moving Animals

Long-Term Imaging of Identified Neural Populations using Microprisms in Freely Moving and Head-Fixed Animals

Author Spotlight: Comparative Imaging of Neural Activity in Awake and Freely Moving States

Serbest Hareket Eden ve Kafası Sabit Hayvanlarda Mikroprizmalar Kullanılarak Tanımlanmış Nöral Popülasyonların Uzun Süreli Görüntülenmesi

With the advancement of multi-photon microscopy and molecular technologies, fluorescence imaging is rapidly growing to become a powerful approach for ...