Name: an in vivo method for evaluating the gut-blood barrier and liver metabolism of microbiota products
Uploaded: 2018-10-20T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about An In Vivo Method for Evaluating the Gut-Blood Barrier and Liver Metabolism of Microbiota Products at JoVE.com

O trabalho é apoiado pelo Ministério da ciência e ensino superior, República da Polónia, diamante conceder n: DI2017 009247.

Os experimentos foram realizados em ratos machos Wistar Kyoto, de acordo com a Directiva 2010/63 da UE em matéria de protecção dos animais utilizados para fins científicos e foram aprovados pelo I Comitê de Bioética Local em Varsóvia.
1. inserção da linha para administração Intraintestinal
Nota: Aqui propomos intracolonic administração de um marcador usando um cateter. Pode ser modificado por administração oral ou gavagem em vários ní...

<ol>
	<li>Camilleri, M., Madsen, K., Spiller, R., Greenwood-Van Meerveld, B., Verne, G. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intestinal+barrier+function+in+health+and+gastrointestinal+disease.">Intestinal barrier function in health and gastrointestinal disease.</a> Neurogastroenterology and Motility: The Official Journal of the European Gastrointestinal Motility Society. 24 (6), 503-512 (2012).</li><li>Keita, A. V., Soderholm, J. 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K., Astrup, A., Larsen, L. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Is+butyrate+the+link+between+diet,+intestinal+microbiota+and+obesity-related+metabolic+diseases?.">Is butyrate the link between diet, intestinal microbiota and obesity-related metabolic diseases?.</a> Obesity Reviews: An Official Journal of the International Association for the Study of Obesity. 14 (12), 950-959 (2013).</li><li>Ufnal, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trimethylamine-N-oxide:+a+carnitine-derived+metabolite+that+prolongs+the+hypertensive+effect+of+angiotensin+II+in+rats.">Trimethylamine-N-oxide: a carnitine-derived metabolite that prolongs the hypertensive effect of angiotensin II in rats.</a> The Canadian Journal of Cardiology. 30 (12), 1700-1705 (2014).</li><li>Huc, T., Nowinski, A., Drapala, A., Konopelski, P., Ufnal, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Indole+and+indoxyl+sulfate,+gut+bacteria+metabolites+of+tryptophan,+change+arterial+blood+pressure+via+peripheral+and+central+mechanisms+in+rats.">Indole and indoxyl sulfate, gut bacteria metabolites of tryptophan, change arterial blood pressure via peripheral and central mechanisms in rats.</a> Pharmacological Research. 130, 172-179 (2018).</li><li>Ufnal, M., Pham, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+gut-blood+barrier+permeability+-+A+new+marker+in+cardiovascular+and+metabolic+diseases?.">The gut-blood barrier permeability - A new marker in cardiovascular and metabolic diseases?.</a> Medical Hypotheses. 98, 35-37 (2017).</li><li>Le Ferrec, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+models+of+the+intestinal+barrier.+The+report+and+recommendations+of+ECVAM+Workshop+46.+European+Centre+for+the+Validation+of+Alternative+methods.">In vitro models of the intestinal barrier. The report and recommendations of ECVAM Workshop 46. European Centre for the Validation of Alternative methods.</a> Alternatives to Laboratory Animals: ATLA. 29 (6), 649-668 (2001).</li><li>Bohets, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strategies+for+absorption+screening+in+drug+discovery+and+development.">Strategies for absorption screening in drug discovery and development.</a> Current Topics in Medicinal Chemistry. 1 (5), 367-383 (2001).</li><li>Grootjans, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-invasive+assessment+of+barrier+integrity+and+function+of+the+human+gut.">Non-invasive assessment of barrier integrity and function of the human gut.</a> World Journal of Gastrointestinal Surgery. 2 (3), 61-69 (2010).</li><li>Bielinska, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+salt+intake+increases+plasma+trimethylamine+N-oxide+(TMAO)+concentration+and+produces+gut+dysbiosis+in+rats.">High salt intake increases plasma trimethylamine N-oxide (TMAO) concentration and produces gut dysbiosis in rats.</a> Nutrition. 54, 33-39 (2018).</li><li>Clarke, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+guide+to+Ussing+chamber+studies+of+mouse+intestine.">A guide to Ussing chamber studies of mouse intestine.</a> American journal of physiology. Gastrointestinal and Liver Physiology. 296 (6), G1151-G1166 (2009).</li><li>Denno, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+the+lactulose+to+mannitol+ratio+to+evaluate+childhood+environmental+enteric+dysfunction:+a+systematic+review.">Use of the lactulose to mannitol ratio to evaluate childhood environmental enteric dysfunction: a systematic review.</a> Clinical Infectious Diseases: An Official Publication of the Infectious Diseases Society of America. 59 Suppl 4, S213-S219 (2014).</li><li>Lugea, A., Salas, A., Casalot, J., Guarner, F., Malagelada, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surface+hydrophobicity+of+the+rat+colonic+mucosa+is+a+defensive+barrier+against+macromolecules+and+toxins.">Surface hydrophobicity of the rat colonic mucosa is a defensive barrier against macromolecules and toxins.</a> Gut. 46 (4), 515-521 (2000).</li><li>Bloemen, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Short+chain+fatty+acids+exchange+across+the+gut+and+liver+in+humans+measured+at+surgery.">Short chain fatty acids exchange across the gut and liver in humans measured at surgery.</a> Clinical Nutrition. 28 (6), 657-661 (2009).</li><li>Huc, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colonic+hydrogen+sulfide+produces+portal+hypertension+and+systemic+hypotension+in+rats.">Colonic hydrogen sulfide produces portal hypertension and systemic hypotension in rats.</a> Experimental Biology and Medicine. 243 (1), 96-106 (2018).</li></ol>

O descrito direto, na vivo, método para medir a permeabilidade GBB mantém condições de closetophysiological no sistema gastrointestinal (preserva o fluxo sanguíneo intestinal) e praticamente não é influenciada pela função de fígado e rim.
O passo fundamental desta técnica é a inserção do cateter de portal. Isso deve ser feito delicadamente e decisivamente ao mesmo tempo. Um sangramento leve, curto pode ocorrer a partir da corretamente realizada punção da veia portal; n...

A barreira de sangue do intestino (GBB), também conhecida como a barreira intestinal, é um complexo sistema de multicamadas que separa o lúmen do intestino pela corrente sanguínea a fim de limitar a passagem de compostos nocivos, permitindo a absorção de nutrientes1. Consiste de três camadas principais: a camada de muco, epitélio e lâmina própria.
Inúmeros fatores podem afetar o GBB integridade e função2. Ficou demonstrado que a GBB é perturbado em doenças gastrointestinais e extra-intestinais, incluindo doenças cardiovasculares e metabólicas3, que pode levar a uma maior passagem de metabólitos bacterianos intestino para a corrente sanguínea4. Um aumento da penetração de metabólitos bacterianos intestino pode afetar o funcionamento de todo o organismo. Por exemplo, estudos recentes mostram um impacto significativo de metabólitos bacterianos, tais como indóis, H2S, ácidos graxos de cadeia curta (CCPA) e trimetilamina N-óxido, no sistema circulatório funções5,6,7 ,8,9. Finalmente, foi proposto que um aumento da permeabilidade GBB pode servir como um marcador de doenças cardiovasculares e metabólicas, que são associados com alterações morfológicas e funcionais no intestino10. Portanto, rastreamento via intestino-portal sangue sangue-fígado-sistêmica dos metabolitos bacterianas pode ser de interesse para as ciências básicas e clínicas.
Comumente utilizados métodos experimentais para a avaliação da permeabilidade GBB são realizados em vitro usando segmentos intestinais ressecados, fragmentos de mucosa, ou membranas artificiais11,12. A precisão desses métodos é comprometida pelo fato de que o bom funcionamento do GBB requer fluxo sanguíneo intestinal constante. Por outro lado, os métodos disponíveis na vivo baseiam-se na avaliação de urina ou sangue periférico concentrações de marcadores exógenos13. No entanto, concentração periférica de sangue e urina de compostos exógenos é influenciada pela função renal, ou seja, a taxa de filtração glomerular e excreção tubular, bem como pelo metabolismo do fígado, ou seja, primeiro passar o metabolismo. Ambos os parâmetros podem diferir significativamente entre sujeitos do estudo independentemente da função GBB.
Este paper descreve uma medida direta da permeabilidade em ratos usando amostragem do sangue portal GBB. Esse método na vivo preserva o fluxo sanguíneo intestinal e praticamente não é influenciado pela função de fígado e rim. A abordagem descrita não é comumente usada, possivelmente por causa de algumas dificuldades metodológicas. Descrevemos em detalhe a cateterização da veia porta e veia cava inferior logo acima da confluência da veia hepática. Colheita de sangue da veia porta e veia cava inferior permite a avaliação da folga GBB permeabilidade e fígado, bem como acompanhamento do percurso de sangue sangue-fígado-sistêmica de intestino-portal de moléculas de interesse, tais como metabólitos bacterianos de intestino ou medicamentos. Apresentamos também várias aplicações do método que foram testadas em nosso laboratório. Estes incluem a avaliação da permeabilidade do cólon para TMA, um metabólito bacterianos de intestino, avaliação do fígado de apuramento de TMA e avaliação de um caminho de sangue sangue-fígado-sistêmica de intestino-portal de CCPA.
Para avaliar a permeabilidade da barreira hemato-intestino, devem ser seguidas as seguintes etapas de protocolo, em ordem: 1 (inserção da linha para as administrações intraintestinal), 3 (cateterização da veia porta), 4 (veia porta de amostra de sangue ), 6 (administração de um marcador de permeabilidade do intestino), 4.
Para avaliar a liberação hepática e um caminho de sangue sangue-fígado-sistêmica de intestino-portal, devem ser seguidas as seguintes etapas de protocolo, em ordem: 1 (inserção da linha para as administrações intraintestinal), 2 (veia cava inferior cateterismo), 3 (cateterização da veia porta), 4 (amostra de sangue da veia porta), 5 (amostra de sangue da veia cava inferior), 6 (administração de um marcador de permeabilidade do intestino), 4, 5, 7 ( cálculo de apuramento de fígado).

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1131px;" width="1131">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:568px;">Needle OD: 9 mm</td>
			<td style="width:259px;">Becton Dickinson&#160; S.A.</td>
			<td style="width:119px;">301300</td>
			<td style="width:185px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:568px;">Polyethylene catheter ID: 0.025&#34;, OD: 0.040&#34;&#160;</td>
			<td>Scientific Commodities, Inc.</td>
			<td>#BB520-40</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:568px;">Polyethylene catheter ID: 0.012&#34;, OD: 0.025&#34;&#160;</td>
			<td>Scientific Commodities, Inc.</td>
			<td>#BB520-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">C-Flex Tubing,Opaque White 1/50&#34;ID x 1/12 &#34; OD&#160;&#160;</td>
			<td>Cole-Parmer Instrument Co.</td>
			<td>06424-59</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pediatric Foley catheter (size 10F or 8F)&#160;</td>
			<td>Sigmed</td>
			<td>0000 80305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:568px;">Surgical ligatures 3/0</td>
			<td>Yavo Sp. Z o.o.&#160;</td>
			<td>P48JE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Absorbable surgical sutures - Polyglactine 910 4/0</td>
			<td>KRUUSE Polska Sp. Zo.o.</td>
			<td>152336</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:568px;">Tissue glue - Loctite 454Cyanoacrylate Adhesive</td>
			<td>Loctite&#160;</td>
			<td>1370127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Povidone iodine</td>
			<td>EGIS Pharmaceuticals PLC</td>
			<td>4449 11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:568px;">Heparin - Heparinium WZF&#160;</td>
			<td>WZF Polfa S.A.</td>
			<td>02BK0417</td>
			<td>Dilute 10 times with physiological saline</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:568px;">Glycerin 86%</td>
			<td>Laboratorium Farmaceutyczne Avena</td>
			<td>5.90999E+12</td>
			<td>Serves as a lubricant in colon catheterization</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:568px;">Xylocaine 2%</td>
			<td>AstraZenca&#160;</td>
			<td>9941342</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:568px;">Urethane</td>
			<td>Sigma-Aldrich (Merck)&#160;</td>
			<td>U2500-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:568px;">Trimethylamine solution 45%</td>
			<td>Sigma-Aldrich (Merck)&#160;</td>
			<td>92262-1L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:568px;">Syringes 2 mL</td>
			<td>B.Braun Melsungen AG</td>
			<td>4606027V</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:568px;">Saline 250 mL</td>
			<td>Fraesenius Kabi Polska Sp. Z o.o.</td>
			<td>15LL707WL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Surgical scissors, straight, length 115 mm, 4 1/2 &#34;blunt ends</td>
			<td>Braun</td>
			<td>NS-010-115-PKM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Artery forceps type Micro-Adson bent, length 140 mm 5 1/2 &#34;</td>
			<td>Braun</td>
			<td>KN-008-140-ZMK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Anatomic forceps, lenght 95 mm, 3 3/4&#34; sharp 0.7x0.55</td>
			<td>Braun</td>
			<td>PO-001-007-ZMK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Micro Scissors type Vannas,&#160; straight, lenght 85 mm, 3 3/8 &#34; the length of the blades 6 mm</td>
			<td>Braun&#160;</td>
			<td>NO-010-085-PMK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Towel clamps type Backhouse, lenght 130 mm, 5 1/8&#34;&#160;</td>
			<td>Braun</td>
			<td>HO-128-130-PMK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Needle holders, lenght 150 mm, 6&#34; t=0.4 1/2&#160;</td>
			<td>Braun&#160;</td>
			<td colspan="2">IM-927-150-PZMK</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Delicate Scissors, lenght 110 mm , straight, 4 3/8&#8221; sharp&#160;</td>
			<td>Braun</td>
			<td>NO-052-110-PMK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Anatomic forceps, lenght 95 mm, 3 3/4&#34; sharp</td>
			<td>Braun</td>
			<td>PO-022-001-PMK</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an in vivo method for evaluating the gut-blood barrier and liver metabolism of microbiota products

A barreira de sangue do intestino (GBB) controla a passagem de nutrientes, metabólitos bacterianos e drogas do lúmen intestinal para a corrente sanguínea. A integridade do GBB é perturbada em doenças gastrointestinais, cardiovasculares e metabólicas, que podem resultar em facilitar o acesso de compostos biologicamente ativos, tais como metabólitos bacteriano do intestino, para a corrente sanguínea. Assim, a permeabilidade do GBB pode ser um marcador de doenças intestinais e extra-intestinais. Além disso, o aumento da penetração dos metabolitos bacterianos pode afetar o funcionamento de todo o organismo.
Métodos comumente usados para estudar a permeabilidade GBB são realizados ex vivo. A precisão desses métodos é limitada, porque o funcionamento do GBB depende do fluxo sanguíneo intestinal. Por outro lado, métodos comumente usados na vivo podem ser tendenciosa pelo fígado e rim, como esses métodos baseiam-se na avaliação da urina ou / e as concentrações no sangue periférico de marcadores exógenos. Aqui, apresentamos uma medida direta da permeabilidade GBB em ratos utilizando um método na vivo baseado no sangue portal de amostragem, que preserva o fluxo sanguíneo intestinal e praticamente não é afetada pela função hepática e renal.
Cateteres de poliuretano são inseridos a veia porta e veia cava inferior logo acima o hepático veias confluência. Sangue é amostrado na linha de base e após a administração de um marcador selecionado em uma parte desejada do tracto gastrointestinal. Aqui, apresentamos várias aplicações do método incluindo (1) avaliação da permeabilidade do cólon para TMA, um metabólito bacterianos de intestino, (2) avaliação do fígado de apuramento de TMA e (3) avaliação de um caminho de sangue de sangue-fígado-periférico de intestino-portal do intestino bactérias-derivado curta cadeia de ácidos graxos. Além disso, o protocolo também pode ser usado para controlar a absorção intestinal e o metabolismo do fígado de drogas ou para medições de pressão portal.

Medimos com êxito o GBB permeabilidade e fígado apuramento das TMA em ratos. Temos demonstrado que ratos hipertensos têm uma permeabilidade aumentada do cólon para TMA em comparação com ratos normotensos (Figura 2)4. Em outro estudo, encontramos que essa alta ingestão de sal não afeta o afastamento de permeabilidade e fígado GBB de TMA (Figura 3)14.
<p class="jove_conte...

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An In Vivo Method for Evaluating the Gut-Blood Barrier and Liver Metabolism of Microbiota Products

O acesso de nutrientes, metabólitos da microbiota e medicamentos para a circulação é controlado pela barreira sangue-intestino (GBB). Nós descrevemos um método direto para medir a GBB permeabilidade na vivo, que, em contraste com comumente usados métodos indirectos, praticamente não é afetado pelas funções de fígado e rim.

Um método In Vivo para avaliar a barreira de sangue do intestino e metabolismo hepático da Microbiota produtos

The gut-blood barrier (GBB) controls the passage of nutrients, bacterial metabolites and drugs from intestinal lumen to the bloodstream. The GBB integrity ...

A barreira intestinal-sangue é um sistema multicamadas que controla a passagem de nutrientes, metabólitos bacterianos, drogas e outros compostos exógenos do lúmen intestinal para a corrente sanguínea. Como sabemos, a integridade da barreira pode ser prejudicada no gastrointestinal, bem como em doenças cardiovasculares e metabólicas que podem resultar em acesso mais fácil de compostos biologicamente ativos, como metabólitos bacterianos intestinais à corrente sanguínea e podem afetar o funcionamento de todo o organismo. Portanto, a permeabilidade da barreira intestinal-sanguínea pode ser um marcador de doenças intestinais e extraintestinal.Neste vídeo, apresentamos uma medição direta da permeabilidade da barreira intestinal-sangue em ratos usando amostragem de sangue portal após a administração de uma substância de teste para o trato digestivo. Descrevemos em detalhes a categorização da veia portal e da veia inferior cava logo acima da confluência venosa hepática. A amostragem sanguínea da veia portal e da veia inferior cava permite avaliar não apenas a permeabilidade da barreira intestinal-sangue, mas também uma via de liberação hepática e absorção de moléculas de interesse, como metabólitos de bactérias intestinais ou medicamentos.Este método praticamente não é influenciado pela função hepática e renal e preserva o fluxo sanguíneo intestinal que é uma forte vantagem sobre métodos in vivo e in vitro comumente usados. Os animais devem jejuar durante a noite antes do procedimento. Realizar todos os procedimentos durante a anestesia geral.Animais são eutanizados após o experimento. Nosso procedimento começa com a inserção da linha para administração intraintestinal. Aqui propomos a administração intracolônica do marcador.Talvez seja modificado pela administração em vários níveis de trato digestivo. Por exemplo, estômago ou duodeno. No entanto, leve em conta a velocidade variável da peristalse e possíveis interações com enzimas e ácidos gástricos enquanto administra um marcador em partes superiores do trato gastrointestinal.Use cateter foley pediátrico tamanho 10 F ou 8 F como cateter colonico. Marque o cateter para indicar a parte que será inserida no cólon de aproximadamente oito centímetros. Verifique a região anal e a contagem das fezes no reto antes de inserir o cateter no cólon.Se as fezes estiverem presentes, esvazie o reto massageando a área retal. Coloque um lubrificante ao longo do cateter. Em seguida, umedeça o ânus e seus arredores com um lubrificante.Insira o cateter com um fio-guia através do esfíncter anal externo. Faça movimentos lentos para frente, para trás e circulares. Continue verificando a localização do cateter por palpação abdominal enquanto insere o cateter.O próximo passo é o cateterismo inferior da veia cava. Você pode pular este procedimento em estudos de permeabilidade intestinal. Tente sentir o pulso na artéria femoral e corte a pele longitudinalmente pelo comprimento de cerca de dois centímetros no lugar onde o pulso é palpável.Disseca a fáscia e os músculos para visualizar o feixe neurovascular. Em seguida, disseque a veia femoral do feixe neurovascular. Primeiro os nervos, depois a artéria femoral e depois a veia.Tenha cuidado durante a dissecação do feixe, pois vários ramos minúsculos da veia femoral podem ser facilmente danificados. Em seguida, coloque duas ligaduras na veia femoral. Não amarre os nós ainda.Pegue as extremidades da ligadura proximal com um suporte de agulha. Em seguida, puxe cuidadosamente as extremidades da ligadura com o suporte para cima para fechar a parte proximal da veia. Espere até que a veia esteja cheia de sangue e amarre o nó distal.Em seguida, faça uma pequena incisão na veia entre o nó e a ligadura proximal usando tesoura microcirúrgica. Em seguida, insira o cateter usando pinças ou uma agulha com uma extremidade curva como fazemos no vídeo. Fure a veia e use a ponta dobrada da agulha como guia para o cateter.Solte a ligadura proximal ao inserir o cateter. Insira o cateter por aproximadamente seis a sete centímetros, dependendo do tamanho de um animal para colocar a ponta proximal do cateter na veia cava inferior logo acima da confluência venosa hepática. A colocação adequada do cateter deve ser confirmada após o experimento.Fixar o cateter na veia femoral com dois nós cirúrgicos únicos. Amarre a ligadura proximal também. Verifique a patência do cateter tentando tirar sangue com uma seringa.Enxágüe o cateter com 0,3 mililitros do soro fisiológico heparinizado. Feche a ferida cirúrgica com duas camadas de pontos simples. Agora vamos para o cateterismo venoso portal.Prepare o cateter portal. Consiste em uma agulha, cateter de poliuretano flexível, ponta flexível de polietileno do cateter, plugue e ligadura. A primeira etapa do procedimento é realizar uma laparotomia midline.Depois de preparar o campo de operação, corte a pele longitudinalmente do xiphoide do esterno até o umbigo. Corte os músculos da parede abdominal ao longo da linha branca. Em seguida, expanda o corte rostrally na forma y para que a cartilagem xifoide esteja entre dois cortes.O próximo passo é a dissecação da veia portal. Primeiro, umedeça os cotonetes com soro fisiológico. E então exteriorizar o ceco, cólon ascendente e transversal, e laço intestino delgado.Coloque os intestinos do lado esquerdo para expor a raiz da mesenteria. Cubra os intestinos com gaze umedecida com um soro fisiológico para protegê-los da secagem. Para expor a veia do portal mova cuidadosamente os lóbulos hepáticos para os lados ou para cima em direção ao diafragma com os cotonetes umedecidos.Aqui podemos ver a veia portal e a veia mesentérica superior. Localize a parte da veia portal que não está coberta com o mesentery e passe a ligadura sob a veia portal. Para proteger os tecidos de danos, umedeça a ligadura com uma solução fisiológica salina.Aperte com fórceps as extremidades da ligadura e aperte-a suavemente para estabilizar o vaso. Passe a parte mais longa da ligadura do cateter sob a parte livre da veia do portal e puxe-a para que o cateter esteja localizado ao lado da veia portal. Insira a agulha na veia mesentérica superior três milímetros abaixo da junção da veia mesentérica superior e da veia portal.Segure a agulha em um ângulo de 30 graus e depois de entrar na veia reduza o ângulo e avance a agulha quase horizontalmente em paralelo à veia portal por um comprimento de aproximadamente seis a sete milímetros. Aplique uma ou duas gotas de cola tecidual no local onde a agulha está inserida. Remova os cotonetes que cobriram o fígado.Depois, coloque os intestinos de volta à cavidade abdominal. Umedeça os intestinos com uma solução salina aquecida e cubra-o com uma gaze estéril umedecida. Verifique a patency do cateter e enxágue o cateter com soro fisiológico heparinizado.Sangue venoso espontaneamente recua no cateter. Depois de cinco minutos verifique a cor dos intestinos e os movimentos peristálticos para garantir que o fluxo sanguíneo mesenérico adequado seja mantido. No final, feche a cavidade abdominal com três camadas de pontos exteriorizando a parte distal do cateter ao redor do umbigo.Para coletar sangue da veia portal, abra o plugue do cateter portal e deixe o sangue fluir livremente. Use uma seringa e uma agulha cega e colete não mais do que 0,7 mililitros de sangue. Enxágüe o cateter com soro fisiológico heparinizado e feche o plugue do cateter.Aqui apresentamos protocolos exemplares de amostragem de sangue portal para avaliação de permeabilidade intestinal. Amostras de sangue da veia cava inferior são necessárias para estudos de liberação hepática e absorção. Para coletar sangue da veia cava inferior proceda exatamente como ao tirar sangue da veia portal.Aqui apresentamos um protocolo de amostragem de sangue exemplar para medição de desembaraço hepático e para o rastreamento da via sanguínea-hepática-sistêmica do portal intestinal de compostos selecionados. Em nossos estudos usamos um metabólito bacteriano, trimetilamina como marcador de permeabilidade. No entanto, muitas outras substâncias, incluindo marcadores de permeabilidade de classe, também podem ser usadas.Várias bactérias e metabólitos e tratos também podem ser usados para tratar a via de absorção ou a liberação hepática. Remova o fio-guia e infle o balão usando volume adequado de água estéril geralmente um mililitro, mas verifique realmente o tamanho do balão antes da inserção. O diâmetro do balão não deve exceder um centímetro.Coloque a cabeça do rato para baixo para minimizar o risco de saída da solução administrada a partir do cólon. Administre lentamente a substância testada usando porta de drenagem e cateter colonic. Utilizamos trimetilamina em uma dose de 100 miligramas por quilograma de peso corporal dissolvido em 0,7 mililitros de soro fisiológico.Depois de 10 minutos esvaziar o balão do cateter. O despejo hepático compreendido como uma extração hepática pode ser expresso pela diferença entre concentração sanguínea portal e concentração sanguínea de vena cava inferior ou pela razão de veia cava inferior e concentração sanguínea portal. Medimos com sucesso a permeabilidade da barreira intestinal e o despejo hepático da trimetilamina em ratos.Aqui estão os resultados representativos que demonstram que os ratos hipertensos aumentaram a permeabilidade do cólon ao TMA em comparação com ratos normotensos. Em outra pesquisa, estudamos se a alta ingestão de sal afeta a permeabilidade da barreira intestinal e o despejo hepático da trimetilamina. A administração intracolônica da trimetilamina produziu um aumento significativo na concentração de TMA sanguíneo portal.O tamanho do aumento e a liberação hepática foram semelhantes entre os grupos. Também rastreamos a via de absorção de ácidos graxos de cadeia curta. Medimos a concentração em fezes, sangue portal e sangue periférico.Neste vídeo, descrevemos um protocolo abrangente que inclui a medição direta da permeabilidade da barreira intestinal-sangue in vivo que, ao contrário dos métodos comumente utilizados, não é afetada por funções hepáticas e renais, medição de liberação hepática e, terceiro, avaliação da via de absorção de compostos exógenos. A técnica apresentada pode ser ajustada a outros fins experimentais. Por exemplo, aferição de pressão arterial do portal ou administração de medicamentos diretamente para a veia portal.

Research

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