Name: an in vivo method for evaluating the gut-blood barrier and liver metabolism of microbiota products
Uploaded: 2018-10-20T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about An In Vivo Method for Evaluating the Gut-Blood Barrier and Liver Metabolism of Microbiota Products at JoVE.com

Работа поддерживается Министерством науки и высшего образования Республики Польша, Diamond Грант без: DI2017 009247.

Эксперименты проведены на крысах Wistar Киото согласно директиве 2010/63 ЕС о защите животных, используемых для научных целей и были одобрены я местный Комитет биоэтики в Варшаве.
1. вставки линии для Intraintestinal управления
Примечание: Здесь мы предлагаем intr...

<ol>
	<li>Camilleri, M., Madsen, K., Spiller, R., Greenwood-Van Meerveld, B., Verne, G. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intestinal+barrier+function+in+health+and+gastrointestinal+disease.">Intestinal barrier function in health and gastrointestinal disease.</a> Neurogastroenterology and Motility: The Official Journal of the European Gastrointestinal Motility Society. 24 (6), 503-512 (2012).</li><li>Keita, A. V., Soderholm, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+intestinal+barrier+and+its+regulation+by+neuroimmune+factors.">The intestinal barrier and its regulation by neuroimmune factors.</a> Neurogastroenterology and Motility: The Official Journal of the European Gastrointestinal Motility Society. 22 (7), 718-733 (2010).</li><li>Farhadi, A., Banan, A., Fields, J., Keshavarzian, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intestinal+barrier:+an+interface+between+health+and+disease.">Intestinal barrier: an interface between health and disease.</a> Journal of Gastroenterology and Hepatology. 18 (5), 479-497 (2003).</li><li>Jaworska, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypertension+in+rats+is+associated+with+an+increased+permeability+of+the+colon+to+TMA,+a+gut+bacteria+metabolite.">Hypertension in rats is associated with an increased permeability of the colon to TMA, a gut bacteria metabolite.</a> PloS one. 12 (12), e0189310 (2017).</li><li>Fujii, H., Nakai, K., Fukagawa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+oxidative+stress+and+indoxyl+sulfate+in+progression+of+cardiovascular+disease+in+chronic+kidney+disease.">Role of oxidative stress and indoxyl sulfate in progression of cardiovascular disease in chronic kidney disease.</a> Therapeutic Apheresis and Dialysis: Official Peer-Reviewed Journal of the International Society for Apheresis, the Japanese Society for Apheresis, the Japanese Society for Dialysis Therapy. 15 (2), 125-128 (2011).</li><li>Tomasova, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracolonic+hydrogen+sulfide+lowers+blood+pressure+in+rats.">Intracolonic hydrogen sulfide lowers blood pressure in rats.</a> Nitric Oxide: Biology and Chemistry. 60, 50-58 (2016).</li><li>Brahe, L. K., Astrup, A., Larsen, L. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Is+butyrate+the+link+between+diet,+intestinal+microbiota+and+obesity-related+metabolic+diseases?.">Is butyrate the link between diet, intestinal microbiota and obesity-related metabolic diseases?.</a> Obesity Reviews: An Official Journal of the International Association for the Study of Obesity. 14 (12), 950-959 (2013).</li><li>Ufnal, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trimethylamine-N-oxide:+a+carnitine-derived+metabolite+that+prolongs+the+hypertensive+effect+of+angiotensin+II+in+rats.">Trimethylamine-N-oxide: a carnitine-derived metabolite that prolongs the hypertensive effect of angiotensin II in rats.</a> The Canadian Journal of Cardiology. 30 (12), 1700-1705 (2014).</li><li>Huc, T., Nowinski, A., Drapala, A., Konopelski, P., Ufnal, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Indole+and+indoxyl+sulfate,+gut+bacteria+metabolites+of+tryptophan,+change+arterial+blood+pressure+via+peripheral+and+central+mechanisms+in+rats.">Indole and indoxyl sulfate, gut bacteria metabolites of tryptophan, change arterial blood pressure via peripheral and central mechanisms in rats.</a> Pharmacological Research. 130, 172-179 (2018).</li><li>Ufnal, M., Pham, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+gut-blood+barrier+permeability+-+A+new+marker+in+cardiovascular+and+metabolic+diseases?.">The gut-blood barrier permeability - A new marker in cardiovascular and metabolic diseases?.</a> Medical Hypotheses. 98, 35-37 (2017).</li><li>Le Ferrec, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+models+of+the+intestinal+barrier.+The+report+and+recommendations+of+ECVAM+Workshop+46.+European+Centre+for+the+Validation+of+Alternative+methods.">In vitro models of the intestinal barrier. The report and recommendations of ECVAM Workshop 46. European Centre for the Validation of Alternative methods.</a> Alternatives to Laboratory Animals: ATLA. 29 (6), 649-668 (2001).</li><li>Bohets, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strategies+for+absorption+screening+in+drug+discovery+and+development.">Strategies for absorption screening in drug discovery and development.</a> Current Topics in Medicinal Chemistry. 1 (5), 367-383 (2001).</li><li>Grootjans, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-invasive+assessment+of+barrier+integrity+and+function+of+the+human+gut.">Non-invasive assessment of barrier integrity and function of the human gut.</a> World Journal of Gastrointestinal Surgery. 2 (3), 61-69 (2010).</li><li>Bielinska, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+salt+intake+increases+plasma+trimethylamine+N-oxide+(TMAO)+concentration+and+produces+gut+dysbiosis+in+rats.">High salt intake increases plasma trimethylamine N-oxide (TMAO) concentration and produces gut dysbiosis in rats.</a> Nutrition. 54, 33-39 (2018).</li><li>Clarke, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+guide+to+Ussing+chamber+studies+of+mouse+intestine.">A guide to Ussing chamber studies of mouse intestine.</a> American journal of physiology. Gastrointestinal and Liver Physiology. 296 (6), G1151-G1166 (2009).</li><li>Denno, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+the+lactulose+to+mannitol+ratio+to+evaluate+childhood+environmental+enteric+dysfunction:+a+systematic+review.">Use of the lactulose to mannitol ratio to evaluate childhood environmental enteric dysfunction: a systematic review.</a> Clinical Infectious Diseases: An Official Publication of the Infectious Diseases Society of America. 59 Suppl 4, S213-S219 (2014).</li><li>Lugea, A., Salas, A., Casalot, J., Guarner, F., Malagelada, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surface+hydrophobicity+of+the+rat+colonic+mucosa+is+a+defensive+barrier+against+macromolecules+and+toxins.">Surface hydrophobicity of the rat colonic mucosa is a defensive barrier against macromolecules and toxins.</a> Gut. 46 (4), 515-521 (2000).</li><li>Bloemen, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Short+chain+fatty+acids+exchange+across+the+gut+and+liver+in+humans+measured+at+surgery.">Short chain fatty acids exchange across the gut and liver in humans measured at surgery.</a> Clinical Nutrition. 28 (6), 657-661 (2009).</li><li>Huc, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colonic+hydrogen+sulfide+produces+portal+hypertension+and+systemic+hypotension+in+rats.">Colonic hydrogen sulfide produces portal hypertension and systemic hypotension in rats.</a> Experimental Biology and Medicine. 243 (1), 96-106 (2018).</li></ol>

Описывается прямой, в естественных условиях, метод измерения проницаемости GBB поддерживает closetophysiological условий в системе желудочно-кишечного тракта (сохраняет поток крови кишечника) и практически не влияет на функции печени и почек.
Важнейшим шагом этой техники явл?...

Гут крови барьер (GBB), также известный как кишечный барьер, является сложная многослойная система, которая отделяет просвета кишки от крови с целью ограничить проход вредных соединений обеспечивая поглощение питательных веществ1. Он состоит из трех основных слоев: слой слизи, эпителия и lamina propria.
Многочисленные факторы могут повлиять на целостность и функции GBB2. Было показано, что GBB нарушается в ЖКТ и extraintestinal заболеваний, включая заболевания сердечно-сосудистой и метаболической3, которые могут привести к повышенной проход кишечника бактериальной метаболитов в крови4. Увеличение проникновения бактериальной метаболитов кишки может повлиять на функционирование всего организма. Например недавние исследования показывают значительное влияние бактериальных метаболитов, таких как индолов, H2S, короткими цепочками жирных кислот (SCFA) и триметиламин N-оксида, системы кровообращения функции5,6,7 ,8,9. Наконец было предложено, что повышение проницаемости GBB может служить в качестве маркера метаболических и сердечно-сосудистых заболеваний, которые связаны с морфологических и функциональных изменений в кишечнике10. Таким образом отслеживание кишки портал крови и крови печень системный путь бактериальных метаболитов могут представлять интерес для фундаментальных и клинических наук.
Широко использованы экспериментальные методы для оценки GBB проницаемости, выполненных в пробирке с помощью резекции кишечника сегментов, фрагменты слизистой оболочки, или искусственных оболочек11,12. Тот факт, что надлежащее функционирование GBB требует постоянной кишечных кровотока нарушается точность этих методов. С другой стороны имеющиеся в vivo методы основаны на оценке мочи или периферической крови концентраций экзогенного маркеры13. Однако периферической крови и моче концентрации экзогенных соединений является влияние на функцию почек, т.е. скорости клубочковой фильтрации и трубчатых выведения, а также печени метаболизм, т.е., сначала пройти метаболизма. Оба параметра могут значительно различаться между субъектами исследования независимо от функции GBB.
Этот документ описывает прямого измерения проницаемости GBB у крыс с помощью портала крови. Этот метод в vivo сохраняет поток крови кишечника и практически не влияет на функции печени и почек. Описанный подход обычно не используется, возможно из-за некоторые методологические трудности. Мы подробно описать катетеризации портальной вены и нижней полой вены чуть выше впадения печеночной вены. Забор крови из воротной вены и нижней полой вены позволяет оценку Распродажа GBB проницаемость и печени, а также отслеживания кишки портал крови и крови печень системный путь молекул интереса, таких как кишечника бактериальной метаболитов или лекарства. Мы также присутствует несколько применения метода, которые были протестированы в нашей лаборатории. К ним относятся оценка проницаемости кишечника ТМА, кишечника бактериальной метаболит, оценки печени Распродажа ТМА и оценки кишка портал крови и крови печень системный путь SCFA.
Для оценки барьер крови гут проницаемости, следующие протокола следует выполнить шаги, в порядке: 1 (вставки линии для intraintestinal администраций), 3 (катетеризации портальной вены), 4 (забор крови воротной вены ), 6 (администрация маркера проницаемость кишечника), 4.
Чтобы оценить Распродажа печени и кишечнике портал крови и крови печень системный путь, следующие протокола следует выполнить шаги, в порядке: 1 (вставки линии для intraintestinal администраций), 2 (нижней полой вены катетеризация), 3 (катетеризации портальной вены), 4 (забор крови воротной вены), 5 (забор крови нижней полой вены), 6 (администрация маркера проницаемость кишечника), 4, 5, 7 ( расчет печени Распродажа).

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1131px;" width="1131">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:568px;">Needle OD: 9 mm</td>
			<td style="width:259px;">Becton Dickinson&#160; S.A.</td>
			<td style="width:119px;">301300</td>
			<td style="width:185px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:568px;">Polyethylene catheter ID: 0.025&#34;, OD: 0.040&#34;&#160;</td>
			<td>Scientific Commodities, Inc.</td>
			<td>#BB520-40</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:568px;">Polyethylene catheter ID: 0.012&#34;, OD: 0.025&#34;&#160;</td>
			<td>Scientific Commodities, Inc.</td>
			<td>#BB520-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">C-Flex Tubing,Opaque White 1/50&#34;ID x 1/12 &#34; OD&#160;&#160;</td>
			<td>Cole-Parmer Instrument Co.</td>
			<td>06424-59</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pediatric Foley catheter (size 10F or 8F)&#160;</td>
			<td>Sigmed</td>
			<td>0000 80305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:568px;">Surgical ligatures 3/0</td>
			<td>Yavo Sp. Z o.o.&#160;</td>
			<td>P48JE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Absorbable surgical sutures - Polyglactine 910 4/0</td>
			<td>KRUUSE Polska Sp. Zo.o.</td>
			<td>152336</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:568px;">Tissue glue - Loctite 454Cyanoacrylate Adhesive</td>
			<td>Loctite&#160;</td>
			<td>1370127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Povidone iodine</td>
			<td>EGIS Pharmaceuticals PLC</td>
			<td>4449 11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:568px;">Heparin - Heparinium WZF&#160;</td>
			<td>WZF Polfa S.A.</td>
			<td>02BK0417</td>
			<td>Dilute 10 times with physiological saline</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:568px;">Glycerin 86%</td>
			<td>Laboratorium Farmaceutyczne Avena</td>
			<td>5.90999E+12</td>
			<td>Serves as a lubricant in colon catheterization</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:568px;">Xylocaine 2%</td>
			<td>AstraZenca&#160;</td>
			<td>9941342</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:568px;">Urethane</td>
			<td>Sigma-Aldrich (Merck)&#160;</td>
			<td>U2500-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:568px;">Trimethylamine solution 45%</td>
			<td>Sigma-Aldrich (Merck)&#160;</td>
			<td>92262-1L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:568px;">Syringes 2 mL</td>
			<td>B.Braun Melsungen AG</td>
			<td>4606027V</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:568px;">Saline 250 mL</td>
			<td>Fraesenius Kabi Polska Sp. Z o.o.</td>
			<td>15LL707WL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Surgical scissors, straight, length 115 mm, 4 1/2 &#34;blunt ends</td>
			<td>Braun</td>
			<td>NS-010-115-PKM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Artery forceps type Micro-Adson bent, length 140 mm 5 1/2 &#34;</td>
			<td>Braun</td>
			<td>KN-008-140-ZMK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Anatomic forceps, lenght 95 mm, 3 3/4&#34; sharp 0.7x0.55</td>
			<td>Braun</td>
			<td>PO-001-007-ZMK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Micro Scissors type Vannas,&#160; straight, lenght 85 mm, 3 3/8 &#34; the length of the blades 6 mm</td>
			<td>Braun&#160;</td>
			<td>NO-010-085-PMK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Towel clamps type Backhouse, lenght 130 mm, 5 1/8&#34;&#160;</td>
			<td>Braun</td>
			<td>HO-128-130-PMK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Needle holders, lenght 150 mm, 6&#34; t=0.4 1/2&#160;</td>
			<td>Braun&#160;</td>
			<td colspan="2">IM-927-150-PZMK</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Delicate Scissors, lenght 110 mm , straight, 4 3/8&#8221; sharp&#160;</td>
			<td>Braun</td>
			<td>NO-052-110-PMK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Anatomic forceps, lenght 95 mm, 3 3/4&#34; sharp</td>
			<td>Braun</td>
			<td>PO-022-001-PMK</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an in vivo method for evaluating the gut-blood barrier and liver metabolism of microbiota products

Барьер крови Гут (GBB) контролирует прохождение питательных веществ, бактериальных метаболитов и наркотиков из просвета кишечника в кровь. В желудочно-кишечного тракта, сердечно-сосудистые и метаболические заболевания, которые могут привести к более легкий доступ биологически активных соединений, например кишечника бактериальной метаболитов, кровоток нарушается целостность GBB. Таким образом проницаемость GBB может быть маркер заболеваний кишечника и extraintestinal. Кроме того увеличение проникновения бактериальной метаболитов может повлиять на функционирование всего организма.
Часто используемые методы для изучения GBB проницаемости являются осуществляется ex vivo. Точность этих методов ограничено, потому что функционирование GBB зависит от кишечных кровотока. С другой стороны, часто используемых в vivo методов может быть предвзятым, печени и почек производительности, как эти методы основаны на оценке мочи или / и периферической крови концентраций экзогенного маркеров. Здесь мы представляем прямого измерения проницаемости GBB у крыс с помощью метода в естественных условиях на основе портала крови выборки, который сохраняет кишечных кровотока и практически не влияет на функцию печени и почек.
Полиуретановые катетеры вставляются в воротной вены и нижней полой вены чуть выше печеночные Вены слияния. Крови является пробы на базовом и после отправления выбранный маркер в нужную часть желудочно-кишечного тракта. Здесь мы представляем несколько применения метода, включая (1) Оценка проницаемости кишечника ТМА, кишечника бактериальной метаболит, (2) Оценка печени Распродажа ТМА и (3) оценки кишка портал крови печень периферической крови путь кишки бактерии производные короткими цепочками жирных кислот. Кроме того протокол может также использоваться для отслеживания кишечного поглощения и метаболизма печени наркотиков или для измерения портала артериального давления.

Мы успешно измеряется GBB проницаемость и печени разминирование ТМА крыс. Мы продемонстрировали, что гипертензивные крысы имеют расширение толстой кишки проницаемость для TMA по сравнению с нормотензивных крыс (рис. 2)4. В другом исследовании...

Watch this Scientific Journal Video about An In Vivo Method for Evaluating the Gut-Blood Barrier and Liver Metabolism of Microbiota Products at JoVE.com

An In Vivo Method for Evaluating the Gut-Blood Barrier and Liver Metabolism of Microbiota Products

Доступ питательных веществ, Микробиота метаболитов и лекарственных средств в оборот контролируется барьер крови Гут (GBB). Мы описываем прямой метод измерения GBB проницаемости в vivo, который, в отличие от широко используемых косвенные методы, практически не влияет на функции печени и почек.

В естественных условиях метод для оценки барьер крови кишки и печени метаболизм микробиоты продукции

The gut-blood barrier (GBB) controls the passage of nutrients, bacterial metabolites and drugs from intestinal lumen to the bloodstream. The GBB integrity ...

Кишечно-кровавый барьер является многослойной системой, которая контролирует прохождение питательных веществ, бактериальных метаболитов, лекарств и других экзогенных соединений из кишечного люмена в кровоток. Как известно, целостность барьера может быть нарушена как в желудочно-кишечном тракте, так и при сердечно-сосудистых и некоторых метаболических заболеваниях, которые могут привести к облегчению доступа биологически активных соединений, таких как кишечные бактериальные метаболиты, к кровотоку и могут повлиять на функционирование всего организма. Поэтому проницаемость кишечно-кровавого барьера может быть маркером как кишечных, так и экстра кишечных заболеваний.В этом видео мы представляем прямое измерение проницаемости кишечно-кровавого барьера у крыс с помощью портативной выборки крови после введения испытательного вещества в пищеварительный тракт. Мы подробно описываем категоризацию вены портала и нижней вены кавы чуть выше слияния печеночными венами. Анализ крови из портвейна вены и нижней вены cava позволяет оценить не только проницаемость гемато-гематоцита, но и печеночную очистку и поглощение молекул, представляющих интерес, таких как метаболиты кишечных бактерий или лекарства.Этот метод практически не зависит от функции печени и почек и сохраняет кишечный кровоток, который является сильным преимуществом по сравнению с широко используемыми in vivo и in vitro методами. Перед процедурой животных следует поститься всю ночь. Выполняем все процедуры во время общей анестезии.После эксперимента животных усыовызяются. Наша процедура начинается с вставки линии для внутрикишечного введения. Здесь мы предлагаем внутриколоничную администрацию маркера.Это может быть изменено администрацией на различных уровнях пищеварительного тракта. Например, желудок или двенадцатиперстная боль. Однако, принимать во внимание переменную скорость перистализа и возможные взаимодействия с ферментами и желудочными кислотами при введении маркера в верхние части желудочно-кишечного тракта.Используйте педиатрический катетер Фоли размером 10 F или 8 F в качестве катетера толстой кишки. Отметьте катетер, чтобы указать часть, которая будет вставлена в толстую кишку примерно восемь сантиметров. Проверьте анальный регион и количество стула в прямой кишке перед вставкой катетера в толстой кишке.Если стул присутствует, опорожните прямую кишку, массируя ректальной области. Положите смазку вдоль катетера. Затем смочить анус и его окрестности с помощью смазки.Вставьте катетер с направляющий провод через внешний анальный сфинктер. Сделайте медленно вперед, назад и круговыми движениями. Продолжайте проверять расположение катетера путем пальпации брюшной полости при вставке катетера.Следующим шагом является нижняя вена cava катетеризации. Вы можете пропустить эту процедуру в кишечнике проницаемости исследований. Попробуйте почувствовать пульс на бедренной артерии и вырезать кожу продольно на длину около двух сантиметров в месте, где пульс ощутим.Вскрыть фасции и мышц для визуализации нервно-сосудистых расслоение. Затем вскрыть бедренную вену из нервно-мышечной расслоения. Сначала нервы, потом бедренная артерия, а затем вена.Будьте осторожны во время вскрытия пучка, так как несколько крошечных ветвей бедренной вены могут быть легко повреждены. Затем положите две лигатуры на бедренную вену. Пока не завязывай узлы.Поймать концы проксимальной лигатуры с держателем иглы. Затем осторожно потяните лигатуру заканчивается держателем вверх, чтобы закрыть проксимальную часть вены. Подождите, пока вена не заполнится кровью и свяжут дистальный узел.Затем сделайте небольшой разрез на вену между узлом и проксимальной лигатурой с помощью микрохирургических ножниц. Затем вставьте катетер с помощью пинцета или иглы с изогнутым концом, как мы делаем в видео. Проколите вену и используйте изогнутый кончик иглы в качестве руководства для катетера.Ослабить проксимальную лигатуру при вставке катетера. Вставьте катетер примерно на шесть-семь сантиметров в зависимости от размера животного, чтобы поместить проксимальный кончик катетера в нижняя кава вены чуть выше слияния печеночными венами. Правильное размещение катетера должно быть подтверждено после эксперимента.Защитите катетер в бедренной вене двумя одиночными хирургическими узлами. Свяжите проксимальную лигатуру также. Проверьте проходимость катетера, пытаясь извлечь кровь шприцем.Промыть катетер с 0,3 миллилитров гепаринизированного солевого раствора. Закройте хирургическую рану двумя слоями одиночных швов. Теперь перейдем к катетеризации вен портала.Подготовь портал катетера. Состоит из иглы, гибкого полиуретанового катетера, гибкого полиэтиленового кончика катетера, вилки и лигатуры. Первым этапом процедуры является выполнение лапаротомии средней линии.После подготовки операционного поля, вырезать кожу продольно от xiphoid грудины до пупка. Вырезать мышцы брюшной стенки вдоль белой линии. Далее, расширить разрез rostrally в форме у так, что xiphoid хряща между двумя разрезами.Следующим шагом является портал вены вскрытия. Во-первых, смочить тампоны солевым раствором. А затем экстерьер cecum, восходящей и поперечной толстой кишки, и тонкой кишки петли.Положите кишечник на левую сторону, чтобы разоблачить корень мезентерии. Обложка кишечника с марлей увлажненной с физиологическим солевым раствором, чтобы защитить их от высыхания. Чтобы разоблачить портал вены двигаться осторожно печеночных долей в стороны или вверх к диафрагме с увлажненными тампонами.Здесь мы можем увидеть портал вены и верхней мезентерической вены. Локализируйте часть портала вены, которая не покрыта мезентерией, и передайте лигатуру под порталной вены. Чтобы защитить ткани от повреждений, смочить лигатуру физиологическим солевым раствором.Зажим с силами концы лигатуры и затянуть его осторожно, чтобы стабилизировать сосуд. Передавайте более длинную часть лигатуры катетера под свободной частью вены портала и потяните ее так, чтобы катетер располагался рядом с порталной веной. Вставьте иглу в верхнюю мезентерическую вену на три миллиметра ниже стыка верхней мезентерической вены и портной вены.Держите иглу под углом 30 градусов и после ввода в вену уменьшить угол и заранее иглы почти горизонтально параллельно портал вены длиной около шести до семи миллиметров. Нанесите одну или две капли ткани клея на месте, где игла вставляется. Удалите тампоны, которые покрывали печень.После этого положить кишечник обратно в брюшную полость. Смочить кишечник разогретым солевым раствором и накрыть его увлажненной стерильной марлей. Проверьте проходимость катетера и промойте катетер гепаринизированным солевым раствором.Венозная кровь спонтанно возвращается в катетер. Через пять минут проверьте цвет кишечника и перистальтические движения, чтобы убедиться, что надлежащий мезентерический кровоток поддерживается. В конце концов, закрыть брюшную полость с тремя слоями стежков экстерьеризации дистальной части катетера вокруг пупка.Чтобы собрать кровь из вены портала, откройте портал катетера штепсельной вилкой и дайте крови свободно течь. Используйте шприц и тупую иглу и соберите не более 0,7 миллилитров крови. Промыть катетер гепаринизированным солевым раствором и закрыть вилку катетера.Здесь мы представляем образцовые протоколы отбора проб крови портала для оценки проницаемости кишечника. Образцы крови из нижней кавы вены необходимы для печеночных исследований очистки и поглощения. Сбор крови из нижней вены кавы происходит точно так же, как при приеме крови из портвейна вены.Здесь мы представляем образцовый протокол отбора проб крови для измерения расчистки печени и для отслеживания кишки-портал крови печени системного пути крови отдельных соединений. В наших исследованиях мы использовали бактериальный метаболит, триметиламин в качестве маркера проницаемости. Однако многие другие вещества, включая маркеры проницаемости класса могут быть использованы также.Различные бактерии и метаболиты и трактаты могут быть также использованы для трактовки пути поглощения или печеночным клиренсом. Удалите направляющий провод и надуть воздушный шар, используя достаточный объем стерильной воды, как правило, один миллилитр, но проверить на самом деле размер шара перед вставкой. Диаметр воздушного шара не должен превышать одного сантиметра.Поместите голову крысы вниз, чтобы свести к минимуму риск оттока вводимого раствора из толстой кишки. Медленно ввестировать испытанное вещество с помощью дренажного порта и катетера толстой кишки. Мы использовали триметиламин в дозе 100 миллиграммов на килограмм массы тела, растворенного в 0,7 миллилитров солевого раствора.Через десять минут сдуть катетер воздушный шар. Печеночная клиренс, понятый как печеночная экстракция, может быть выражена разницей между концентрацией крови портала и низкой концентрацией вены в крови или соотношением низкой кавы и концентрации портала крови. Мы успешно измерили проницаемость гемко-кровавого барьера и очистку печени от триметиламина у крыс.Вот репрезентативные результаты, которые показывают, что гипертонической крысы увеличили проницаемость толстой кишки до TMA по сравнению с нормотензивными крысами. В другом исследовании мы изучали ли высокое потребление соли влияет на проницаемость китро-крови барьер и печени клиренс триметиламина. Внутриколоническое введения триметиламина произвело значительное увеличение концентрации тромбоцита крови ТМА.Размер увеличения и печеночная клиренс были схожи между группами. Мы также отслеживали путь поглощения короткой цепи жирных кислот. Мы измерили концентрацию в стуле, портвейном крови и периферической крови.В этом видео мы описали всеобъемлющий протокол, который включает в себя прямое измерение проницаемости гемато-кровавого барьера in vivo, который, в отличие от широко используемых методов, не зависит от функций печени и почек, измерения печеночной клиренс, и в-третьих, оценка пути поглощения экзогенных соединений. Представленная техника может быть скорректирована под другие экспериментальные цели. Например, портал измерения артериального давления или введения препарата непосредственно на портале вены.

Research

JoVE Journal

Medicine

An In Vivo Method for Evaluating the Gut-Blood Barrier and Liver Metabolism of Microbiota Products

Steps for the Autologous Ex vivo Perfused Porcine Liver-kidney Experiment

Steps for the Autologous Ex vivo Perfused Porcine Liver-kidney Experiment

The use of ex vivo perfused models can mimic the physiological conditions of the liver for short periods, but to maintain normal homeostasis for an ...

Technique of Subnormothermic Ex Vivo Liver Perfusion for the Storage, Assessment, and Repair of Marginal Liver Grafts

Technique of Subnormothermic Ex Vivo Liver Perfusion for the Storage, Assessment, and Repair of Marginal Liver Grafts

Методика Subnormothermic<em&gt; Экс Vivo</em&gt; Печень перфузии для хранения, оценки и Ремонт окраинных печени трансплантатов

The success of liver transplantation has resulted in a dramatic organ shortage. In most transplant regions 20-30% of patients on the waiting list for ...

Evaluating the Effectiveness of Cancer Drug Sensitization In Vitro and In Vivo

Evaluating the Effectiveness of Cancer Drug Sensitization In Vitro and In Vivo

Оценка эффективности снадобья рака сенсибилизации<em&gt; In Vitro</em&gt; И<em&gt; В Vivo</em

Due to the high level of heterogeneity and mutations inherent in human cancers, single agent therapies, or combination regimens which target the same ...

An Improved Method for Rapid Intubation of the Trachea in Mice

Усовершенствованный метод Rapid интубации трахеи у мышей

Despite some anatomical and physiological differences, mouse models continue to be an essential tool for studying human lung disease. Bleomycin toxicity ...

An Acute Retinal Model for Evaluating Blood Retinal Barrier Breach and Potential Drugs for Treatment

Острый сетчатке Модель для оценки крови сетчатке Барьерные нарушения и потенциальных лекарственных препаратов для лечения

A low-cost, easy-to-use and powerful model system is established to evaluate potential treatments that could ameliorate blood retinal barrier breach. An ...

Phosphorus-31 Magnetic Resonance Spectroscopy: A Tool for Measuring In Vivo Mitochondrial Oxidative Phosphorylation Capacity in Human Skeletal Muscle

Phosphorus-31 Magnetic Resonance Spectroscopy: A Tool for Measuring In Vivo Mitochondrial Oxidative Phosphorylation Capacity in Human Skeletal Muscle

Фосфор-31 спектроскопии магнитного резонанса: Прибор для измерения<em&gt; В Vivo</em&gt; Митохондриальной окислительное фосфорилирование потенциала в скелетных мышцах человека

Skeletal muscle mitochondrial oxidative phosphorylation (OXPHOS) capacity, which is critically important in health and disease, can be measured in vivo ...

Optimized Analysis of In Vivo and In Vitro Hepatic Steatosis

Optimized Analysis of In Vivo and In Vitro Hepatic Steatosis

Оптимизированный анализ<em&gt; В Vivo</em&gt; и<em&gt; In Vitro</em&gt; Стеатоз печени

Establishing a system of procedures to qualitatively and quantitatively characterize in vivo and in vitro hepatic steatosis is important for metabolic ...

An Anesthesia, Surgery, and Harvest Method for the Evaluation of Transpedicular Screws Using an In Vivo Porcine Lumbar Spine Model

An Anesthesia, Surgery, and Harvest Method for the Evaluation of Transpedicular Screws Using an In Vivo Porcine Lumbar Spine Model

Метод анестезии, хирургии и сбора урожая для оценки транспедикулярных винтов с использованием<em&gt; В Виво</em&gt; Модель поясничного позвонка свиньи

Pedicle screw fixation is the gold standard for the treatment of spinal diseases. However, many studies have reported the issue of loosening pedicle ...

Improved Method for the Establishment of an In Vitro Blood-Brain Barrier Model Based on Porcine Brain Endothelial Cells

Improved Method for the Establishment of an In Vitro Blood-Brain Barrier Model Based on Porcine Brain Endothelial Cells

Улучшен метод для создания в Vitro гематоэнцефалического барьера модель, основанная на эндотелиальных клеток свиного мозга

The aim of this protocol presents an optimized procedure for the purification and cultivation of pBECs and to establish in vitro blood-brain barrier (BBB) ...

Re-Arterialized Rat Partial Liver Transplantation with an in vivo Vessel-Oriented 70% Hepatectomy

Re-Arterialized Rat Partial Liver Transplantation with an in vivo Vessel-Oriented 70% Hepatectomy

Повторно Arterialized крысы частично трансплантации печени в естественных условиях судно-ориентированный 70% гепатектомии

Split liver transplantation and living liver donor liver transplantation were developed in the clinic to utilize liver organs in a more efficient manner. ...