Name: an in vivo method for evaluating the gut-blood barrier and liver metabolism of microbiota products
Uploaded: 2018-10-20T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about An In Vivo Method for Evaluating the Gut-Blood Barrier and Liver Metabolism of Microbiota Products at JoVE.com

İş Bilim Bakanlığı ve Yükseköğretim RP tarafından desteklenmektedir, elmas vermek no: DI2017 009247.

Deneyler bilimsel amaçlarla kullanılan hayvanların korunması yönergesi 2010/63 AB göre erkek Wistar Kyoto fareler üzerinde gerçekleştirilen ve ben Varşova yerel Biyoetik Komitesi tarafından kabul edildi.
1. Intraintestinal yönetim için satır ekleme
Not: Burada bir kateter kullanarak bir işaretleyici İdaresi intracolonic teklif ediyorum. Sözlü yönetim veya sonda ile besleme sindirim sistemi Örneğin mide ve oniki parmak ba?...

<ol>
	<li>Camilleri, M., Madsen, K., Spiller, R., Greenwood-Van Meerveld, B., Verne, G. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intestinal+barrier+function+in+health+and+gastrointestinal+disease.">Intestinal barrier function in health and gastrointestinal disease.</a> Neurogastroenterology and Motility: The Official Journal of the European Gastrointestinal Motility Society. 24 (6), 503-512 (2012).</li><li>Keita, A. V., Soderholm, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+intestinal+barrier+and+its+regulation+by+neuroimmune+factors.">The intestinal barrier and its regulation by neuroimmune factors.</a> Neurogastroenterology and Motility: The Official Journal of the European Gastrointestinal Motility Society. 22 (7), 718-733 (2010).</li><li>Farhadi, A., Banan, A., Fields, J., Keshavarzian, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intestinal+barrier:+an+interface+between+health+and+disease.">Intestinal barrier: an interface between health and disease.</a> Journal of Gastroenterology and Hepatology. 18 (5), 479-497 (2003).</li><li>Jaworska, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypertension+in+rats+is+associated+with+an+increased+permeability+of+the+colon+to+TMA,+a+gut+bacteria+metabolite.">Hypertension in rats is associated with an increased permeability of the colon to TMA, a gut bacteria metabolite.</a> PloS one. 12 (12), e0189310 (2017).</li><li>Fujii, H., Nakai, K., Fukagawa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+oxidative+stress+and+indoxyl+sulfate+in+progression+of+cardiovascular+disease+in+chronic+kidney+disease.">Role of oxidative stress and indoxyl sulfate in progression of cardiovascular disease in chronic kidney disease.</a> Therapeutic Apheresis and Dialysis: Official Peer-Reviewed Journal of the International Society for Apheresis, the Japanese Society for Apheresis, the Japanese Society for Dialysis Therapy. 15 (2), 125-128 (2011).</li><li>Tomasova, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracolonic+hydrogen+sulfide+lowers+blood+pressure+in+rats.">Intracolonic hydrogen sulfide lowers blood pressure in rats.</a> Nitric Oxide: Biology and Chemistry. 60, 50-58 (2016).</li><li>Brahe, L. K., Astrup, A., Larsen, L. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Is+butyrate+the+link+between+diet,+intestinal+microbiota+and+obesity-related+metabolic+diseases?.">Is butyrate the link between diet, intestinal microbiota and obesity-related metabolic diseases?.</a> Obesity Reviews: An Official Journal of the International Association for the Study of Obesity. 14 (12), 950-959 (2013).</li><li>Ufnal, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trimethylamine-N-oxide:+a+carnitine-derived+metabolite+that+prolongs+the+hypertensive+effect+of+angiotensin+II+in+rats.">Trimethylamine-N-oxide: a carnitine-derived metabolite that prolongs the hypertensive effect of angiotensin II in rats.</a> The Canadian Journal of Cardiology. 30 (12), 1700-1705 (2014).</li><li>Huc, T., Nowinski, A., Drapala, A., Konopelski, P., Ufnal, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Indole+and+indoxyl+sulfate,+gut+bacteria+metabolites+of+tryptophan,+change+arterial+blood+pressure+via+peripheral+and+central+mechanisms+in+rats.">Indole and indoxyl sulfate, gut bacteria metabolites of tryptophan, change arterial blood pressure via peripheral and central mechanisms in rats.</a> Pharmacological Research. 130, 172-179 (2018).</li><li>Ufnal, M., Pham, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+gut-blood+barrier+permeability+-+A+new+marker+in+cardiovascular+and+metabolic+diseases?.">The gut-blood barrier permeability - A new marker in cardiovascular and metabolic diseases?.</a> Medical Hypotheses. 98, 35-37 (2017).</li><li>Le Ferrec, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+models+of+the+intestinal+barrier.+The+report+and+recommendations+of+ECVAM+Workshop+46.+European+Centre+for+the+Validation+of+Alternative+methods.">In vitro models of the intestinal barrier. The report and recommendations of ECVAM Workshop 46. European Centre for the Validation of Alternative methods.</a> Alternatives to Laboratory Animals: ATLA. 29 (6), 649-668 (2001).</li><li>Bohets, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strategies+for+absorption+screening+in+drug+discovery+and+development.">Strategies for absorption screening in drug discovery and development.</a> Current Topics in Medicinal Chemistry. 1 (5), 367-383 (2001).</li><li>Grootjans, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-invasive+assessment+of+barrier+integrity+and+function+of+the+human+gut.">Non-invasive assessment of barrier integrity and function of the human gut.</a> World Journal of Gastrointestinal Surgery. 2 (3), 61-69 (2010).</li><li>Bielinska, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+salt+intake+increases+plasma+trimethylamine+N-oxide+(TMAO)+concentration+and+produces+gut+dysbiosis+in+rats.">High salt intake increases plasma trimethylamine N-oxide (TMAO) concentration and produces gut dysbiosis in rats.</a> Nutrition. 54, 33-39 (2018).</li><li>Clarke, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+guide+to+Ussing+chamber+studies+of+mouse+intestine.">A guide to Ussing chamber studies of mouse intestine.</a> American journal of physiology. Gastrointestinal and Liver Physiology. 296 (6), G1151-G1166 (2009).</li><li>Denno, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+the+lactulose+to+mannitol+ratio+to+evaluate+childhood+environmental+enteric+dysfunction:+a+systematic+review.">Use of the lactulose to mannitol ratio to evaluate childhood environmental enteric dysfunction: a systematic review.</a> Clinical Infectious Diseases: An Official Publication of the Infectious Diseases Society of America. 59 Suppl 4, S213-S219 (2014).</li><li>Lugea, A., Salas, A., Casalot, J., Guarner, F., Malagelada, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surface+hydrophobicity+of+the+rat+colonic+mucosa+is+a+defensive+barrier+against+macromolecules+and+toxins.">Surface hydrophobicity of the rat colonic mucosa is a defensive barrier against macromolecules and toxins.</a> Gut. 46 (4), 515-521 (2000).</li><li>Bloemen, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Short+chain+fatty+acids+exchange+across+the+gut+and+liver+in+humans+measured+at+surgery.">Short chain fatty acids exchange across the gut and liver in humans measured at surgery.</a> Clinical Nutrition. 28 (6), 657-661 (2009).</li><li>Huc, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colonic+hydrogen+sulfide+produces+portal+hypertension+and+systemic+hypotension+in+rats.">Colonic hydrogen sulfide produces portal hypertension and systemic hypotension in rats.</a> Experimental Biology and Medicine. 243 (1), 96-106 (2018).</li></ol>

Açıklanan doğrudan, in vivo, GBB geçirgenliği ölçüm yöntemi closetophysiological koşulları (bağırsak kan akışını korur) gastrointestinal sistemde korur ve karaciğer ve böbrek işlev tarafından etkilenir hemen hemen değil.
Kritik bu tekniği portal Kateter yerleştirilmesi adımdır. Bu aynı zamanda yavaşça ve kararlı yapılmalıdır. Bir hafif, kısa kanama portal ven doğru gerçekleştirilen bir delik ortaya çıkabilir; Ancak, iğne damar eklenir durur. Sü...

Gut-kan bariyerini (GBB), bağırsak bariyer olarak da bilinir, besin1emilimini izin verirken zararlı bileşikler geçişini sınırlamak için kan dolaşımına bağırsak lümen ayıran karmaşık bir çok katmanlı sistemidir. Üç ana katmandan oluşur: mukus tabakası, epitel ve lamina propria.
Çok sayıda faktör GBB bütünlüğü ve fonksiyonu2etkileyebilir. GBB dahil kardiyovasküler ve metabolik hastalıklar3gut bakteri metabolitleri artan bir geçit kan dolaşımına4için yol açabilir, gastrointestinal ve extraintestinal hastalıklarında bozulmuştur gösterilmiştir. Gut bakteri metabolitleri artan bir penetrasyon tüm organizmanın çalışmasını etkileyebilir. Örneğin, son yıllarda yapılan çalışmalarda indoller, H2S, kısa zincirli yağ asitleri (SCFA) ve trimethylamine N-oksit, gibi bakteriyel metabolitleri önemli bir etkisi dolaşım sistemi işlevleri5,6,7 göster ,8,9. Son olarak, artan bir GBB geçirgenliği kardiyovasküler ve metabolik hastalıkların morfolojik ve fonksiyonel değişiklikler bağırsak10ile ilişkili olan bir işaretleyici olarak hizmet verebilir önerilmiştir. Bu nedenle, bakteriyel metabolitleri gut-portal kan karaciğer sistemik kan yol izleme için temel ve klinik Bilimleri ilgi olabilir.
Yaygın olarak kullanılan deneysel GBB geçirgenliği değerlendirilmesi için gerçekleştirilen vitro rezeke bağırsak kesimleri, mukoza veya yapay membran11,12parçaları kullanarak yöntemlerdir. Bu yöntemleri doğruluğunu GBB düzgün sürekli bağırsak kan akımı gerektirir Aslında tarafından güvenilir değil. Öte yandan, mevcut vivo Yöntemler idrar değerlendirilmesi veya periferik kan konsantrasyonları eksojen işaretleri13temel alan. Ancak, periferik kan ve idrar konsantrasyon eksojen bileşiklerin böbrek fonksiyonu, Yani, glomerular filtrasyon ve borulu atılımı yanı sıra karaciğer metabolizması tarafından etkilenir, Yani, önce metabolizma geçmem. Her iki parametre GBB işlev bağımsız olarak çalışma konuları arasında önemli ölçüde farklı olabilir.
Bu kağıt GBB geçirgenliği sıçanlarda portal kan örnekleme kullanarak doğrudan ölçümü açıklar. Vivo Buyöntem bağırsak kan akışını korur ve karaciğer ve böbrek işlev tarafından etkilenir hemen hemen değil. Açıklanan yaklaşım yaygın olarak, muhtemelen bazı yöntembilimsel zorluklar nedeniyle kullanılır. Biz ayrıntılı olarak tarif kateterizasyon portal ven ve inferior vena kava hepatik ven kesiştiği yerde hemen üstünde. Kan örnekleme portal ven ve inferior vena kava GBB geçirgenliği ve karaciğer Temizleme değerlendirilmesi yanı sıra ilgi gut bakteri metabolitleri veya ilaç gibi moleküllerin gut-portal kan karaciğer sistemik kan yolu izleme sağlar. Biz de bizim laboratuvar test edildi birkaç uygulama Yöntem mevcut. Bu iki nokta üstüste geçirgenliği TMA, gut bakteri metaboliti, TMA karaciğer Gümrükleme değerlendirilmesi ve SCFA bir gut-portal kan karaciğer sistemik kan yol değerlendirilmesi için değerlendirilmesi içerir.
Gut-kan bariyerini geçirgenliği değerlendirmek için protokolü aşağıdakileri, sırayla takip edilmelidir: 1 (intraintestinal idareler için satır ekleme), 3 (portal ven kateterizasyonu), 4 (portal ven kan örnekleme ), 6 (bağırsak geçirgenliği marker yönetim), 4.
Karaciğer temizlik ve gut-portal kan karaciğer sistemik kan yolu değerlendirmek için protokolü aşağıdakileri, sırayla takip edilmelidir: 1 (intraintestinal idareler için satır ekleme), 2 (inferior vena kava kateterizasyon), 3 (portal ven kateterizasyonu), 4 (portal ven kan örnekleme), 5 (inferior vena kava kan örnekleme), 6 (bağırsak geçirgenliği marker yönetim), 4, 5, 7 () karaciğer Temizleme hesaplanması).

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1131px;" width="1131">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:568px;">Needle OD: 9 mm</td>
			<td style="width:259px;">Becton Dickinson&#160; S.A.</td>
			<td style="width:119px;">301300</td>
			<td style="width:185px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:568px;">Polyethylene catheter ID: 0.025&#34;, OD: 0.040&#34;&#160;</td>
			<td>Scientific Commodities, Inc.</td>
			<td>#BB520-40</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:568px;">Polyethylene catheter ID: 0.012&#34;, OD: 0.025&#34;&#160;</td>
			<td>Scientific Commodities, Inc.</td>
			<td>#BB520-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">C-Flex Tubing,Opaque White 1/50&#34;ID x 1/12 &#34; OD&#160;&#160;</td>
			<td>Cole-Parmer Instrument Co.</td>
			<td>06424-59</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pediatric Foley catheter (size 10F or 8F)&#160;</td>
			<td>Sigmed</td>
			<td>0000 80305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:568px;">Surgical ligatures 3/0</td>
			<td>Yavo Sp. Z o.o.&#160;</td>
			<td>P48JE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Absorbable surgical sutures - Polyglactine 910 4/0</td>
			<td>KRUUSE Polska Sp. Zo.o.</td>
			<td>152336</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:568px;">Tissue glue - Loctite 454Cyanoacrylate Adhesive</td>
			<td>Loctite&#160;</td>
			<td>1370127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Povidone iodine</td>
			<td>EGIS Pharmaceuticals PLC</td>
			<td>4449 11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:568px;">Heparin - Heparinium WZF&#160;</td>
			<td>WZF Polfa S.A.</td>
			<td>02BK0417</td>
			<td>Dilute 10 times with physiological saline</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:568px;">Glycerin 86%</td>
			<td>Laboratorium Farmaceutyczne Avena</td>
			<td>5.90999E+12</td>
			<td>Serves as a lubricant in colon catheterization</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:568px;">Xylocaine 2%</td>
			<td>AstraZenca&#160;</td>
			<td>9941342</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:568px;">Urethane</td>
			<td>Sigma-Aldrich (Merck)&#160;</td>
			<td>U2500-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:568px;">Trimethylamine solution 45%</td>
			<td>Sigma-Aldrich (Merck)&#160;</td>
			<td>92262-1L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:568px;">Syringes 2 mL</td>
			<td>B.Braun Melsungen AG</td>
			<td>4606027V</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:568px;">Saline 250 mL</td>
			<td>Fraesenius Kabi Polska Sp. Z o.o.</td>
			<td>15LL707WL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Surgical scissors, straight, length 115 mm, 4 1/2 &#34;blunt ends</td>
			<td>Braun</td>
			<td>NS-010-115-PKM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Artery forceps type Micro-Adson bent, length 140 mm 5 1/2 &#34;</td>
			<td>Braun</td>
			<td>KN-008-140-ZMK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Anatomic forceps, lenght 95 mm, 3 3/4&#34; sharp 0.7x0.55</td>
			<td>Braun</td>
			<td>PO-001-007-ZMK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Micro Scissors type Vannas,&#160; straight, lenght 85 mm, 3 3/8 &#34; the length of the blades 6 mm</td>
			<td>Braun&#160;</td>
			<td>NO-010-085-PMK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Towel clamps type Backhouse, lenght 130 mm, 5 1/8&#34;&#160;</td>
			<td>Braun</td>
			<td>HO-128-130-PMK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Needle holders, lenght 150 mm, 6&#34; t=0.4 1/2&#160;</td>
			<td>Braun&#160;</td>
			<td colspan="2">IM-927-150-PZMK</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Delicate Scissors, lenght 110 mm , straight, 4 3/8&#8221; sharp&#160;</td>
			<td>Braun</td>
			<td>NO-052-110-PMK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Anatomic forceps, lenght 95 mm, 3 3/4&#34; sharp</td>
			<td>Braun</td>
			<td>PO-022-001-PMK</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an in vivo method for evaluating the gut-blood barrier and liver metabolism of microbiota products

Gut-kan bariyerini (GBB) ilaç besinler, bakteriyel metabolitleri ve oyundan pasaj intestinal lümen için kan dolaşımına denetler. GBB bütünlüğü gibi bağırsak bakteri metabolitleri, biyolojik olarak aktif bileşikler daha kolay erişim için kan neden olabilir gastrointestinal, kardiyovasküler ve metabolik hastalıklarda bozulmuştur. Böylece, GBB geçirgenliği extraintestinal ve bağırsak hastalıklarının bir işaret olabilir. Ayrıca, bakteriyel metabolitleri artan penetrasyon tüm organizmanın çalışmasını etkileyebilir.
GBB geçirgenliği türleri çalışmak için yaygın olarak kullanılan gerçekleştirilen ex vivoyöntemlerdir. GBB işleyişi bağırsak kan akımı üzerinde bağlı olduğundan bu yöntemleri doğruluğunu sınırlıdır. Bu yöntemleri üzerinde idrar değerlendirme dayalı olarak Öte yandan, yaygın olarak kullanılan in vivo Yöntemler karaciğer ve böbrek performans, önyargılı olabilir veya / ve periferik kan konsantrasyonları eksojen işaretleri. Burada, bağırsak kan akışını korur ve karaciğer ve böbrek işlev tarafından etkilenmez neredeyse GBB geçirgenliği sıçanlarda örnekleme, portal kan dayalı bir vivo içinde yöntemini kullanarak doğrudan ölçülmesi mevcut.
Poliüretan kateterler portal ven yerleştirilir ve inferior vena kava hemen üstünde hepatik izdiham damarlar. Kan temel ve seçili bir işaretleyici yönetim gastrointestinal sistem istenen bir parçası haline sonra örneklenir. Burada, yönteminin (1) iki nokta üstüste geçirgenliği TMA, gut bakteri metaboliti, TMA karaciğer Gümrükleme değerlendirmesi (2) ve (3) gut bir gut-portal kan-karaciğer-periferik kan yol değerlendirilmesi değerlendirilmesi de dahil olmak üzere çeşitli uygulamalar mevcut kısa zincirli yağ asitleri bakteri kaynaklı. Ayrıca, protokol bağırsak emilim ve ilaçların karaciğer metabolizması izlemek için veya portal kan basıncı ölçümleri için de kullanılabilir.

Başarıyla GBB geçirgenliği ve karaciğer Temizleme TMA sıçanlarda ölçülen var. Hipertansif fareler bir artan kolon geçirgenliği TMA için normotansif fareler (Şekil 2)4ile karşılaştırıldığında var göstermiştir. Başka bir çalışmada bulduk o yüksek Tuz tüketiminizi TMA (Şekil 3)14GBB geçirgenliği ve karaciğer geçiş izni etkilemez.
<p class="jove_c...

Watch this Scientific Journal Video about An In Vivo Method for Evaluating the Gut-Blood Barrier and Liver Metabolism of Microbiota Products at JoVE.com

An In Vivo Method for Evaluating the Gut-Blood Barrier and Liver Metabolism of Microbiota Products

Erişimi besinler, microbiota metabolitleri ve dolaşım için ilaçlar, gut-kan bariyerini (GBB) tarafından denetlenir. Biz hangi sık kullanılan dolaylı yöntemler aksine, karaciğer ve böbrek işlevleri tarafından etkilenmez neredeyse GBB geçirgenliği vivo içindeölçmek için doğrudan bir yöntem açıklanmaktadır.

Gut-kan bariyerini ve karaciğer metabolizması Microbiota ürünlerin değerlendirilmesi için In Vivo yöntemi

The gut-blood barrier (GBB) controls the passage of nutrients, bacterial metabolites and drugs from intestinal lumen to the bloodstream. The GBB integrity ...

Bağırsak-kan bariyeri, besinlerin, bakteri metabolitlerinin, ilaçların ve bağırsak lümeninden kan dolaşımına kadar diğer eksojen bileşiklerin geçişini kontrol eden çok katmanlı bir sistemdir. Bildiğimiz gibi, bariyerbütünlüğü gastrointestinal yanı sıra kardiyovasküler ve kan dolaşımına bağırsak bakteri metabolitleri gibi biyolojik olarak aktif bileşiklerin daha kolay erişim neden olabilir ve tüm organizmanın işleyişini etkileyebilir bazı metabolik hastalıklarda bozulmuş olabilir. Bu nedenle bağırsak-kan bariyerinin geçirgenliği hem intestinal hem de ekstraintestinal hastalıkların bir belirteci olabilir.Bu videoda, bir test maddesinin sindirim sistemine uygulanmasından sonra portal kan örneklemesi kullanan sıçanlarda bağırsak-kan bariyerinin geçirgenliğinin doğrudan bir ölçümlerini salıyoruz. Biz ayrıntılı olarak portal ven ve inferior vena kava sadece hepatik ven birleşimi yukarıda kategorize açıklar. Portal ven ve inferior vena kava dan kan örnekleme bağırsak-kan bariyergeçirgenliği değil, aynı zamanda bağırsak bakteri metabolitleri veya ilaçlar gibi ilgi moleküllerin bir hepatik açıklık ve emilim yolu sadece değerlendirmek için izin verir.Bu yöntem neredeyse karaciğer ve böbrek fonksiyonu etkilenmez ve yaygın in vivo ve in vitro yöntemleri kullanılan üzerinde güçlü bir avantajdır bağırsak kan akışını korur. Hayvanlar işlemden önce bir gecede oruç tutulmalıdır. Genel anestezi sırasında tüm işlemleri gerçekleştirin.Hayvanlar deneyden sonra ötenazi yedirilir. Prosedürümüz intraintestinal uygulama için hattın eklenmesi ile başlar. Burada marker intracolonic yönetimi öneriyoruz.Belki sindirim sisteminin çeşitli düzeylerde yönetim tarafından değiştirilebilir. Örneğin, mide veya duodenum. Ancak, gastrointestinal sistem üst kısımlarına bir belirteç verirken peristalsis in değişken hızını ve enzimler ve mide asitleri ile olası etkileşimleri dikkate alın.Kolon kateteri olarak pediatrik Foley kateter boyutu 10 F veya 8 F kullanın. Yaklaşık sekiz santimetre kolon içine takılacak kısmı belirtmek için kateteri işaretleyin. Anal bölgeyi ve kolon kateteri takmadan önce rektumdaki dışkı sayısını kontrol edin.Dışkı varsa, rektum alanı masaj tarafından rektum boşaltın. Kateter boyunca bir yağlayıcı koyun. Daha sonra, anüs ve çevresini bir yağlayıcı ile nemlendirin.Kateteri harici anal sfinkterden bir kılavuz tel ile takın. Yavaş ileri, geri ve dairesel hareketler yapın. Kateteri takarak karın palpasyonu ile kateterin yerini kontrol etmeye devam edin.Bir sonraki adım inferior vena cava kateterizasyon. Bağırsak geçirgenliği çalışmalarında bu işlemi atlayabilirsiniz. Femoral arter üzerinde nabız hissetmeye çalışın ve nabız hissedilir bir yerde yaklaşık iki santimetre uzunluğunda uzunlamasına deri kesti.Nörovasküler demet görselleştirmek için fasya ve kasları incelemek. Sonra, nörovasküler demet gelen femoral ven incelemek. Önce sinirler, sonra femoral arter ve sonra damar.Femoral venin birkaç küçük dalları kolayca zarar görebilir, çünkü paketin diseksiyon sırasında dikkatli olun. Sonra femoral vene iki ligatür koyun. Henüz düğümleri bağlama.Proksimal bağın uçlarını iğne tutucu ile yakalayın. Sonra dikkatlice bağ yıpranması damarın proksimal kısmını kapatmak için tutucu yu yukarı doğru doğru uçlar. Damar kanla dolana kadar bekle ve distal düğümü bağla.Daha sonra, mikrocerrahi makas kullanarak düğüm ve proksimal ligatür arasındaki damar üzerinde küçük bir kesi yapın. Daha sonra kateteri cımbız kullanarak veya videoda yaptığımız gibi kavisli uçlu bir iğne takın. Damarı delin ve iğnenin bükülmüş ucunu kateter için bir kılavuz olarak kullanın.Kateteri takarak proksimal ligatürü gevşetin. Kateteri, bir hayvanın büyüklüğüne bağlı olarak yaklaşık 6-7 santimetre takın ve kateterin proksimal ucunu hepatik ven birleşiminin hemen üzerine inferior vena kava yerleştirin. Deneyden sonra kateterin uygun yerleştirilmesi doğrulanmalıdır.Kateteri iki tek cerrahi düğümle femoral ven içinde sabitle. Proksimal ligatürü de bağlayın. Bir şırınga ile kan çekmeye çalışarak kateterin açıklığını kontrol edin.Kateteri 0,3 mililitre heparinize tuzlu ile durula. Cerrahi yarayı iki kat tek dikişle kapatın. Şimdi portal ven kateterizasyonuna geçiyoruz.Portal kateterini hazırlayın. İğne, esnek poliüretan kateter, kateterin esnek polietilen ucu, fiş ve ligatürden oluşur. İşlemin ilk adımı orta hat laparotomi yapmaktır.Çalışma alanını hazırladıktan sonra, sternumun kiftonundan göbek kadar uzunlamasına deri kesin. Beyaz çizgi boyunca karın duvarının kaslarını kesin. Daha sonra, ksifoid kıkırdak iki kesim arasında olacak şekilde y şeklinde kesilmiş rostrally genişletin.Bir sonraki adım portal ven diseksiyonu. İlk olarak, tuzlu su ile bezleri nemlendirin. Ve sonra çekum dışlaştırmak, artan ve enine kolon, ve ince bağırsak döngü.Mezenterin kökünü ortaya çıkarmak için bağırsakları sol tarafa koy. Kurumasını korumak için fizyolojik bir tuzlu ile nemlendirilmiş gazlı bez ile bağırsakları kapatın. Portal ven dikkatlice kenarlarına veya yukarı ya da yukarı ya da diyafram doğru nemli bezleri ile hepatik loblar hareket ortaya çıkarmak için.Burada portal ven ve üst mezenterik ven görebilirsiniz. Mezenter ile kaplı olmayan portal venin kısmını lokalize edin ve portal damarın altında bağı geçirin. Dokuları hasardan korumak için, fizyolojik bir tuzlu çözelti ile bağnemlendirin.Bağ ın uçlarını forceps ile kelepçeve yavaşça damar stabilize etmek için sıkın. Kateterin ligatunun uzun kısmını portal damarın serbest kısmının altına geçirin ve kateterin portal venin hemen yanında olması için çekin. Üst mezenterik ven ve portal ven kavşak altında üst mezenterik ven içine iğne yerleştirin.İğneyi 30 derecelik bir açıyla tutun ve damara girdikten sonra açıyı azaltın ve yaklaşık 6-7 milimetre uzunluğunda portal damara paralel olarak iğneyi neredeyse yatay olarak ilerletin. İğnenin takıldığı yere bir veya iki damla doku tutkalı uygulayın. Karaciğeri kaplayan bezleri çıkarın.Daha sonra bağırsakları karın boşluğuna geri koyun. Isınmış bir tuzlu çözelti ile bağırsakları nemlendirin ve nemlendirilmiş steril gazlı bez ile kaplayın. Kateterin açıklığını kontrol edin ve kateteri heparinize tuzlu ile durula.Venöz kan kendiliğinden kateter içinde geri akar. Beş dakika sonra uygun mezenterik kan akışının korunur emin olmak için bağırsak ve peristaltik hareketlerin rengini kontrol edin. Sonunda, göbek çevresindeki kateterdist kısmını dışa doğru dikiş üç kat ile karın boşluğu kapatın.Portal ven kan toplamak için, portal kateter fişi açın ve serbestçe kan akışını sağlar. Bir şırınga ve künt bir iğne kullanın ve en fazla 0,7 mililitre kan toplayın. Kateteri heparinize tuzlu suyla durulayıp kateter fişini kapatın.Burada bağırsak geçirgenlik değerlendirmesi için örnek portal kan örnekleme protokolleri salıyoruz. İnferiat vena kavadan alınan kan örnekleri hepatik klirens ve emilim çalışmaları için gereklidir. Inferior vena kava kan toplamak için portal ven kan alırken tam olarak devam edin.Burada karaciğer temizleme ölçümü ve seçilen bileşiklerin bağırsak portalkan-karaciğer-sistemik kan yolunu izlemek için örnek bir kan örnekleme protokolü salıyoruz. Çalışmalarımızda geçirgenliğin bir göstergesi olarak trimetilamin olan bakteriyel bir metaboliti kullandık. Ancak sınıf geçirgenlik belirteçleri de dahil olmak üzere diğer birçok madde de kullanılabilir.Çeşitli bakteri ve metabolitleri ve yolları da emme yolu veya hepatik açıklık yolu yolu için kullanılabilir. Kılavuz teli çıkarın ve steril su yeterli hacimli genellikle bir mililitre kullanarak balon şişirmek ama eklemeden önce aslında balon boyutunu kontrol edin. Balon çapı bir santimetreyi geçmemelidir.Kolon dan yönetilen çözeltinin çıkış riskini en aza indirmek için fare başını aşağı yerleştirin. Yavaş yavaş drenaj portu ve kolon kateter kullanarak test edilen madde uygulayın. Biz su salin 0.7 mililitre çözünmüş kilogram vücut ağırlığı başına 100 miligram bir dozda tritillamin kullanılır.On dakika sonra kateter balonu söndürün. Hepatik ekstraksiyon olarak anlaşılan hepatik açıklık portal kan konsantrasyonu ile inferior vena kava kan konsantrasyonu arasındaki fark veya inferior vena kava ve portal kan konsantrasyonu oranı ile ifade edilebilir. Biz başarıyla sıçanlarda trimethylamin bağırsak-kan bariyeri geçirgenlik ve karaciğer temizliği ölçtük.Burada hipertansif sıçanlar normotansif sıçanlara göre TMA kolon geçirgenliği arttığını gösteren temsili sonuçlar. Başka bir araştırmada biz yüksek tuz alımı trimethylamin bağırsak-kan bariyeri geçirgenliği ve karaciğer temizliği etkileyip etkilemediğini inceledik. Trimethylamin intracolonic uygulama portal kan TMA konsantrasyonu önemli bir artış üretti.Artış ve hepatik açıklık boyutu gruplar arasında benzerdi. Ayrıca kısa zincirli yağ asitlerinin emilim yolunu da takip ettik. Dışkı, portal kan ve periferik kandaki konsantrasyonu ölçtük.Bu videoda, yaygın olarak kullanılan yöntemlerin aksine, karaciğer ve böbrek fonksiyonları, hepatik açıklık ölçümü ve üçüncü, eksojen bileşiklerin emilim yolunun değerlendirilmesi etkilenmez, vivo bağırsak-kan bariyeri geçirgenlik doğrudan ölçüm içeren kapsamlı bir protokol açıklanmıştır. Sunulan teknik diğer deneysel amaçlara göre ayarlanabilir. Örneğin, portal kan basıncı ölçümü veya ilaç yönetimi doğrudan portal ven.

Research

JoVE Journal

Medicine

An In Vivo Method for Evaluating the Gut-Blood Barrier and Liver Metabolism of Microbiota Products

Steps for the Autologous Ex vivo Perfused Porcine Liver-kidney Experiment

Steps for the Autologous Ex vivo Perfused Porcine Liver-kidney Experiment

The use of ex vivo perfused models can mimic the physiological conditions of the liver for short periods, but to maintain normal homeostasis for an ...

Technique of Subnormothermic Ex Vivo Liver Perfusion for the Storage, Assessment, and Repair of Marginal Liver Grafts

Technique of Subnormothermic Ex Vivo Liver Perfusion for the Storage, Assessment, and Repair of Marginal Liver Grafts

Subnormothermic Tekniği<em&gt; Ex vivo</em&gt; Karaciğer Depolama, Değerlendirme Perfüzyon ve Marjinal Karaciğer Greft Onarımı

The success of liver transplantation has resulted in a dramatic organ shortage. In most transplant regions 20-30% of patients on the waiting list for ...

Evaluating the Effectiveness of Cancer Drug Sensitization In Vitro and In Vivo

Evaluating the Effectiveness of Cancer Drug Sensitization In Vitro and In Vivo

Kanser İlaç Duyarlılık Etkinliğinin Değerlendirilmesi<em&gt; İn Vitro</em&gt; Ve<em&gt; İn Vivo</em

Due to the high level of heterogeneity and mutations inherent in human cancers, single agent therapies, or combination regimens which target the same ...

An Improved Method for Rapid Intubation of the Trachea in Mice

Farelerde Trakea hızlı intübasyon için geliştirilmiş bir yöntem

Despite some anatomical and physiological differences, mouse models continue to be an essential tool for studying human lung disease. Bleomycin toxicity ...

An Acute Retinal Model for Evaluating Blood Retinal Barrier Breach and Potential Drugs for Treatment

Tedavi Kan Retina Bariyer ihlali ve Potansiyel İlaçlar değerlendirilmesi için bir Akut Retina Modeli

A low-cost, easy-to-use and powerful model system is established to evaluate potential treatments that could ameliorate blood retinal barrier breach. An ...

Phosphorus-31 Magnetic Resonance Spectroscopy: A Tool for Measuring In Vivo Mitochondrial Oxidative Phosphorylation Capacity in Human Skeletal Muscle

Phosphorus-31 Magnetic Resonance Spectroscopy: A Tool for Measuring In Vivo Mitochondrial Oxidative Phosphorylation Capacity in Human Skeletal Muscle

Fosfor-31 Manyetik Rezonans Spektroskopisi: Ölçme için Aracı<em&gt; İn Vivo</emİnsan İskelet Kası içinde&gt; Mitokondriyal Oksidatif Fosforilasyon Kapasitesi

Skeletal muscle mitochondrial oxidative phosphorylation (OXPHOS) capacity, which is critically important in health and disease, can be measured in vivo ...

Optimized Analysis of In Vivo and In Vitro Hepatic Steatosis

Optimized Analysis of In Vivo and In Vitro Hepatic Steatosis

Optimize Analizi<em&gt; İn Vivo</em&gt; ve<em&gt; İn Vitro</em&gt; Karaciğer Steatoz

Establishing a system of procedures to qualitatively and quantitatively characterize in vivo and in vitro hepatic steatosis is important for metabolic ...

An Anesthesia, Surgery, and Harvest Method for the Evaluation of Transpedicular Screws Using an In Vivo Porcine Lumbar Spine Model

An Anesthesia, Surgery, and Harvest Method for the Evaluation of Transpedicular Screws Using an In Vivo Porcine Lumbar Spine Model

Transpediküler Vidaların Değerlendirilmesinde Anestezi, Cerrahi ve Hasat Yöntemi<emIn vivo</em&gt; Domuz Kemik Omurgası Modeli

Pedicle screw fixation is the gold standard for the treatment of spinal diseases. However, many studies have reported the issue of loosening pedicle ...

Improved Method for the Establishment of an In Vitro Blood-Brain Barrier Model Based on Porcine Brain Endothelial Cells

Improved Method for the Establishment of an In Vitro Blood-Brain Barrier Model Based on Porcine Brain Endothelial Cells

Yöntem bir Vitro kan - beyin bariyerini modeli domuz beyin endotel hücreleri temel alan kurulması için geliştirilmiş

The aim of this protocol presents an optimized procedure for the purification and cultivation of pBECs and to establish in vitro blood-brain barrier (BBB) ...

Re-Arterialized Rat Partial Liver Transplantation with an in vivo Vessel-Oriented 70% Hepatectomy

Re-Arterialized Rat Partial Liver Transplantation with an in vivo Vessel-Oriented 70% Hepatectomy

Yeniden Arterialized sıçan kısmi karaciğer nakli bir vivo içinde gemi odaklı % 70 ile Hepatectomy

Split liver transplantation and living liver donor liver transplantation were developed in the clinic to utilize liver organs in a more efficient manner. ...