Name: real-time imaging and quantification of fungal biofilm development using a two-phase recirculating flow system
Uploaded: 2018-10-18T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Real-time Imaging and Quantification of Fungal Biofilm Development Using a Two-Phase Recirculating Flow System at JoVE.com

Forfatterne ønsker å erkjenne Dr. Wade Sigurdson for å gi verdifulle innspill i utformingen av flyt apparatet.

1. samle flyt apparatet
<ol><li>Konfigurere deler oppført i Tabell av materialer i henhold til skjemaet i figur 1 med hensyn beskrives nedenfor. Merk: For bekvemmelighet flyten apparat er delt inn i to sider, den grønne siden (alt oppover på lysbildet til media flasker) og oransje side (alt nedstrøms lysbildet til media flasker).<ol>
<li>Kontroller at alle flyt apparatet er lufttett å hindre lekkasjer, med unntak av media flasker (figur 1</stro...

<ol>
	<li>Pankhurst, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Candidiasis+(oropharyngeal).">Candidiasis (oropharyngeal).</a> BMJ clinical evidence. 2012, 1304 (2012).</li><li>Ramage, G., Vandewalle, K., Wickes, B. L., L&#243;pez-Ribot, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characteristics+of+biofilm+formation+by+Candida+albicans.">Characteristics of biofilm formation by Candida albicans.</a> Revista iberoamericana de micolog&#237;a. 18 (4), 163-170 (2001).</li><li>Nobile, C. J., Mitchell, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+cell-surface+genes+and+biofilm+formation+by+the+C.+albicans+transcription+factor+Bcr1p.">Regulation of cell-surface genes and biofilm formation by the C. albicans transcription factor Bcr1p.</a> Current biology: CB. 15 (12), 1150-1155 (2005).</li><li>Blankenship, J. R., Mitchell, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+to+build+a+biofilm:+a+fungal+perspective.">How to build a biofilm: a fungal perspective.</a> Current opinion in microbiology. 9 (6), 588-594 (2006).</li><li>Ara&#250;jo, D., Henriques, M., Silva, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Portrait+of+Candida+Species+Biofilm+Regulatory+Network+Genes.">Portrait of Candida Species Biofilm Regulatory Network Genes.</a> Trends in microbiology. 25 (1), 62-75 (2017).</li><li>Lane, W. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parallel-plate+flow+chamber+and+continuous+flow+circuit+to+evaluate+endothelial+progenitor+cells+under+laminar+flow+shear+stress.">Parallel-plate flow chamber and continuous flow circuit to evaluate endothelial progenitor cells under laminar flow shear stress.</a> Journal of visualized experiments. (59), e3349 (2012).</li><li>Bakker, D. P., van der Plaats, A., Verkerke, G. J., Busscher, H. J., van der Mei, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+velocity+profiles+for+different+flow+chamber+designs+used+in+studies+of+microbial+adhesion+to+surfaces.">Comparison of velocity profiles for different flow chamber designs used in studies of microbial adhesion to surfaces.</a> Applied and environmental microbiology. 69 (10), 6280-6287 (2003).</li><li>Zhang, W., Sileika, T. S., Chen, C., Liu, Y., Lee, J., Packman, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+planar+flow+cell+for+studies+of+biofilm+heterogeneity+and+flow-biofilm+interactions.">A novel planar flow cell for studies of biofilm heterogeneity and flow-biofilm interactions.</a> Biotechnology and bioengineering. 108 (11), 2571-2582 (2011).</li><li>Uppuluri, P., Lopez-Ribot, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+easy+and+economical+in+vitro+method+for+the+formation+of+Candida+albicans+biofilms+under+continuous+conditions+of+flow.">An easy and economical in vitro method for the formation of Candida albicans biofilms under continuous conditions of flow.</a> Virulence. 1 (6), 483-487 (2010).</li><li>Diaz, P. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synergistic+interaction+between+Candida+albicans+and+commensal+oral+streptococci+in+a+novel+in+vitro+mucosal+model.">Synergistic interaction between Candida albicans and commensal oral streptococci in a novel in vitro mucosal model.</a> Infection and immunity. 80 (2), 620-632 (2012).</li><li>McCall, A., Edgerton, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-Time+Approach+to+Flow+Cell+Imaging+of+Candida+albicans+Biofilm+Development.">Real-Time Approach to Flow Cell Imaging of Candida albicans Biofilm Development.</a> Journal of fungi. 3 (1), 13 (2017).</li><li>Zhang, B., Zerubia, J., Olivo-Marin, J. -. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gaussian+approximations+of+fluorescence+microscope+point-spread+function+models.">Gaussian approximations of fluorescence microscope point-spread function models.</a> Applied optics. 46 (10), 1819-1829 (2007).</li><li>Tati, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Candida+glabrata+Binding+to+Candida+albicans+Hyphae+Enables+Its+Development+in+Oropharyngeal+Candidiasis.">Candida glabrata Binding to Candida albicans Hyphae Enables Its Development in Oropharyngeal Candidiasis.</a> PLoS pathogens. 12 (3), 1005522 (2016).</li></ol>

Ved hjelp av flyt systemet tillater som beskrevet ovenfor generering av kvantitative time-lapse videoer av sopp biofilm vekst og utvikling. Slik at sammenligninger mellom eksperimenter er det av kritisk betydning for å sikre at parameterne tenkelig forblir de samme. Dette inkluderer å sikre at mikroskopet er konfigurert for Köhler belysning for hvert eksperiment (mange guider er tilgjengelig online for denne prosessen). Bortsett fra imaging parametere, er det noen viktige trinn du bør huske på når du arbeider med f...

Candida albicans (C. albicans) er en opportunistisk fungal patogen mennesker som kan infisere mange vev typer, inkludert muntlige mucosal flater, forårsaker orofaryngeal candidiasis og resulterer i en lavere livskvalitet for berørte personer1. Biofilm formasjon er et viktig karakteristisk for patogenesen av C. albicansog flere studier er gjort på dannelsen og funksjon av C. albicans biofilm2,3,4, 5, hvorav mange har blitt utført ved hjelp av statisk (ingen flyt) i vitro modeller. C. albicans må imidlertid følge og vokse i nærvær av salivary flyt i munnhulen. Mange strøm systemer er utviklet for å gi live-celle tenkelig6,7,8,9,10. Disse forskjellige strømnings systemene er designet for ulike formål, og derfor har systemet forskjellige styrker og svakheter. Vi fant at mange av systemene passer for C. albicans var dyrt, nødvendige komplekse fabrikert deler, eller kunne ikke fotografert under flyt og måtte stoppes før bildebehandling. Derfor utviklet vi en roman flyt apparater å studere C. albicans biofilm formasjon under flyt11. Under utformingen av vår flyt apparater fulgte vi disse store betraktninger. Først ønsket vi å kunne kvantifisere flere aspekter av biofilm vekst og utvikling i sanntid uten å bruke fluorescerende celler (tillater oss å studere mutant stammer og uforandret kliniske isolater lett). Andre vi ønsket alle deler å bli kommersielt anvendelig med liten eller ingen modifikasjoner (dvs., ingen egendefinerte fabrikasjon), slik at andre mer enkelt gjenopprette systemet og muliggjør enkle reparasjoner. Tredje vi ønsket også å tillate for utvidet imaging tid rimelig høy flow priser. Til slutt, vi ville, etter en periode av celler vedlegges underlaget under flyt, kunne overvåke biofilm vekst over lengre tid uten å innføre nye celler.
Disse betraktningene førte oss til å utvikle to-kolbe resirkulerende flyt systemet illustrert i figur 1. De to flasker tillate oss å dele eksperimentet i to faser, en vedlegg-fase som trekker fra celle-seeded vedlegg kolbe og en vekstfase som bruker celle-frie medier for å fortsette biofilm veksten uten tilsetning av nye celler. Dette systemet er utviklet for å fungere med en inkubasjon kammer til mikroskopet, med lysbildet og slangen før (2 til 5, figur 1) å være plassert inne inkubator, og alle andre komponenter plassert i en stor sekundære container utenfor det mikroskop. I tillegg brukes en kokeplate rørestang med en vedlagt temperatur probe til å vedlikeholde fungal cellene i vedlegg flasken på 37 ° C. Som det er resirkulering, dette systemet er i stand til kontinuerlig imaging under flyt (kan være over 36 h avhengig forhold), og kan brukes på de fleste standard mikroskoper, inkludert stående eller omvendt Borstemmaskin mikroskop. Her diskuterer vi forsamlingen, drift, og rengjøring av flyt apparater, samt som gir noen grunnleggende ImageJ kvantitative algoritmer å analysere videoene etter et eksperiment.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:635px;" width="635">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Pump</td>
			<td style="width:71px;">Cole Parmer</td>
			<td style="width:119px;">07522-20</td>
			<td style="width:229px;">6</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Pump head</td>
			<td style="width:71px;">Cole Parmer</td>
			<td style="width:119px;">77200-60</td>
			<td>6</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Tubing</td>
			<td style="width:71px;">Cole Parmer</td>
			<td style="width:119px;">96410-14</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Bubble trap adapter</td>
			<td style="width:71px;">Cole Parmer</td>
			<td style="width:119px;">30704-84</td>
			<td>3</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Bubble trap vacuum adapter for 1/4&#8221; ID vacuum line</td>
			<td style="width:71px;">Cole Parmer</td>
			<td style="width:119px;">31500-55</td>
			<td>3</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">In-line filter adapter (4 needed)</td>
			<td style="width:71px;">Cole Parmer</td>
			<td style="width:119px;">31209-40</td>
			<td>8,9</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Orange-side Y</td>
			<td style="width:71px;">Cole Parmer</td>
			<td style="width:119px;">31209-55</td>
			<td>7</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Green-side Y</td>
			<td style="width:71px;">ibidi</td>
			<td style="width:119px;">10827</td>
			<td>2</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">* Slides</td>
			<td style="width:71px;">ibidi</td>
			<td style="width:119px;">80196</td>
			<td>4</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">* Slide luers</td>
			<td style="width:71px;">ibidi</td>
			<td style="width:119px;">10802</td>
			<td>4</td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:216px;">Vacuum assisted Bubble trap</td>
			<td style="width:71px;">Elveflow/Darwin microfluidics</td>
			<td style="width:119px;">KBTLarge - Microfluidic Bubble Trap Kit</td>
			<td>3</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Media flasks</td>
			<td style="width:71px;">Corning</td>
			<td style="width:119px;">4980-500</td>
			<td>1</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">0.2 &#181;m air filter</td>
			<td style="width:71px;">Corning</td>
			<td style="width:119px;">431229</td>
			<td>1</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Threaded glass bottle for PD and filter flask (2 needed)</td>
			<td style="width:71px;">Corning</td>
			<td style="width:119px;">1395-100</td>
			<td>5,10</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Ported Screw cap for PD and filter flask (2 needed)</td>
			<td style="width:71px;">Wheaton</td>
			<td style="width:119px;">1129750</td>
			<td>5,10</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Screwcap tubing connector</td>
			<td style="width:71px;">Wheaton</td>
			<td style="width:119px;">1129814</td>
			<td>5,10</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Tubing connector beveled washer</td>
			<td style="width:71px;">Danco</td>
			<td style="width:119px;">88579</td>
			<td>5,10</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Tubing connector flat washer</td>
			<td style="width:71px;">Danco</td>
			<td style="width:119px;">88569</td>
			<td>5,10</td>
		</tr>
		<tr height="105">
			<td height="105" style="height:105px;width:216px;">Clamps for in-line filters and downstream Y (7 needed)</td>
			<td style="width:71px;">Oetiker/MSC Industrial Supply Company</td>
			<td style="width:119px;">15100002-100</td>
			<td>7,8,9</td>
		</tr>
		<tr height="105">
			<td height="105" style="height:105px;width:216px;">Clamp tool</td>
			<td style="width:71px;">Oetiker/MSC Industrial Supply Company</td>
			<td style="width:119px;">14100386</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:216px;">20 micron in-line media filter</td>
			<td style="width:71px;">Analytical Scientific Instruments</td>
			<td style="width:119px;">850-1331</td>
			<td>8</td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:216px;">10 micron in-line media filter</td>
			<td style="width:71px;">Analytical Scientific Instruments</td>
			<td style="width:119px;">850-1333</td>
			<td>9</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">2 micron inlet media filter</td>
			<td style="width:71px;">Supelco/Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">58267</td>
			<td>10</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">* 0.22 &#181;m media filter</td>
			<td style="width:71px;">Millipore</td>
			<td style="width:119px;">SVGV010RS</td>
			<td>11</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">* 0.22 &#181;m media filter &#8220;adapter&#8221;</td>
			<td style="width:71px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:119px;">329654</td>
			<td>11</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Rubber stopper</td>
			<td style="width:71px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">14-131E</td>
			<td>1</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Hotplate stirrer with external probe port</td>
			<td style="width:71px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">88880006</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Temperature probe</td>
			<td style="width:71px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">88880147</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

real-time imaging and quantification of fungal biofilm development using a two-phase recirculating flow system

I orofaryngeal candidiasis, må medlemmer av slekten Candida overholde og vokse på muntlig slimhinnen mens under effekter av salivary flyt. Mens modeller for vekst under flyt er utviklet, mange av disse systemene er dyre, eller tillater ikke tenkelig mens cellene er under flyt. Vi har utviklet en roman apparater som tillater oss å image vekst og utvikling av Candida albicans celler under flyt og i sanntid. Her detalj vi protokollen for samling og bruk av flyt apparatet og kvantifiseringen som genereres. Vi er kunne kvantifisere priser som cellene koble til og koble fra lysbildet, samt å finne et mål av biomasse på lysbildet over tid. Dette systemet er både økonomisk og allsidig, arbeider med mange typer lys mikroskoper, inkludert rimelige Borstemmaskin mikroskoper, og er i stand til forlenget imaging ganger sammenlignet med andre flyt systemer. Samlet er dette en lav gjennomstrømming system som kan gi svært detaljert sanntidsinformasjon om biofilm veksten av sopp arter under flyt.

Representant bilder av en normal overnatting time-lapse eksperiment ved hjelp av vill-type C. albicans cellene på 37 ° C kan ses i figur 2A og supplerende Video 1. Bildene har vært kontrast forbedret for å forbedre sikten. Kvantifisering av informasjonen ble utført, og representant grafer kan ses i figur 2B. For å generere disse grafer, data var først normalisert ...

Watch this Scientific Journal Video about Real-time Imaging and Quantification of Fungal Biofilm Development Using a Two-Phase Recirculating Flow System at JoVE.com

Real-time Imaging and Quantification of Fungal Biofilm Development Using a Two-Phase Recirculating Flow System

Vi beskriver forsamlingen, drift, og rengjøring av en flyt apparater utformet bilde fungal biofilm formasjonen i sanntid under flyt. Vi gir og diskutere kvantitative algoritmer som skal brukes på ervervet bildene.

Sanntid bildebehandling og kvantifisering av sopp Biofilm utvikling bruker en tofaset resirkulerende med System

In oropharyngeal candidiasis, members of the genus Candida must adhere to and grow on the oral mucosal surface while under the effects of salivary flow. ...

Denne metoden kan bidra til å svare på viktige spørsmål innen mikrobiologifeltet, for eksempel hvordan væskestrømmen endrer soppbiofilmvekst og utvikling. Den største fordelen med denne teknikken er at det tillater oss å kvantitativt vurdere effekten av flyt på biofilmvekst og utvikling i sanntid. Begynn dette eksperimentet med montering av strømningsapparatet, som beskrevet i tekstprotokollen.Dagen for eksperimentet, fest boblefellen, temperatursonden og alle engangskomponenter. For å montere filteret, fjern stempelet fra en en-milliliter sprøyte for å gjøre det til en adapter. Tving slangen fra filterflasken inn i denne enden og fest et 2 mikronfilter til slangen som fører til vekstkolben.Påfør silikonvakuumfett rundt barb på skyveadapteren før du kobler den til, da dette bidrar til å forhindre luftlekkasjer inn i systemet. Fyll festekolben med 100 milliliter YPD, og fyll vekstkolben med 200 milliliter YPD. Sørg for at den grønne sideslangen når mediet i hver kolbe.Kontroller at alle ventilene er åpne. Fest boblefellen til et vakuum, og koble pumpen til den grønne sideslangen nedstrøms av boblefellen. Pump væsken med en strømningshastighet på 3,3 milliliter per minutt for å fylle den grønne siden helt.Deretter dispenserer og kaster omtrent en til to milliliter av media, fordi de første par milliliter ofte inneholder døde celler eller tilfeldig rusk. Sørg for at den grønne siden av slangen er fylt med media og har ingen bobler nedstrøms av boblefellen før du fortsetter. Fyll kanallysbildet og reservoaret med YPD, og ta vare på å ikke introdusere bobler.Koble skyvet til strømningsapparatet. Pump deretter mer væske for å skape en buffer på ca 5 meter på den oransje siden. Dette er for å hindre utilsiktet fangst av luft i lysbildet i tilfelle tilbakestrømning.Nå, forberede strømningsapparatet for transport til mikroskopet ved først å plante innløpet og utløpet av boblefellen lukket. Klem deretter de grønne og oransje sidefesteflaskeventilene lukket. Pass på at skruehettene for pulseringsdemperen og filterflasken er stramme, da de kan løsne under autoplating.Koble pumpen fra slangen for å gjøre transporten enklere. Flytt deretter alle komponenter, inkludert varmeplaterøreren, inn i en sekundær beholder i nærheten av mikroskopet. Fest temperaturproben til varmeplaterøreren, og begynn å varme opp festeflasken til 37 grader Celsius.Rør media ved 300 RPM, og opprettholde dette for hele eksperimentet. Monter lysbildet på mikroskopet, og bruk tape om nødvendig for å feste det godt. Fest deretter boblefellen til et vakuum.Koble pumpen til strømningsapparatet. Start pumpen med en strømningshastighet på 3,3 milliliter per minutt, og la den kjøre i omtrent fem til 10 sekunder. Deretter fjerner du boblefellen i la-out lokk klanen.La pumpen fortsette å gå mens festeflasken varmes opp. Når vedleggskolben og inkubasjonskammeret er begge på 37 grader Celsius, legg til nok over natten kultur av soppcellene til vedleggkolben for å nå en million celler per milliliter. Vent 15 minutter for å la cellene akklimatisere seg.Åpne både grønne og oransje sidevedleggsflaskeventiler mens du lukker begge vekstflaskeventilene for å starte strømmen av celler. Vent i omtrent fem minutter for å la cellene nå lysbildet. I løpet av denne tiden fokuserer du mikroskopet og justerer det til de samme bildeparametrene som brukes i tidligere eksperimenter.Start bildeanskaffelse for vedleggsfasen. Kom tilbake etter ca. fem og ti minutter for å sikre at fokuset er opprettholdt. Hvis ikke, forsøk å justere fokus umiddelbart etter at neste bilde er anskaffet.Umiddelbart etter at vedleggsfasen er ferdig, lagrer du filen. Deretter åpner du både grønne og oransje sidevekstflaskeventiler mens du lukker begge festeflaskeventilene. Vær forsiktig så du ikke støter på scenen hvis noen ventiler er inne i inkubasjonskammeret.Trekk ut termometersonden, og skift ut festekolben med vekstkolben. Nå konfigurerer du programvaren til å skaffe et bilde hvert 15. Når vekstfasen oppkjøpet er ferdig og filen er lagret, åpne de grønne og oransje side vedlegg kolbe ventiler, som kan gjøre en støy som trykket utgivelser på den oransje siden.Trekk opp på den grønne sideslangen som kommer fra begge mediekolbe, til de er minst flere centimeter over media. Deretter kjører pumpen i høy hastighet for å fjerne alle medier fra slangen, noe som gjør rengjøring mye enklere. Til slutt kvantifiserer du videoene som beskrevet i tekstprotokollen.Denne gangen forfalle mørkt felt mikroskopi video viser vedlegg av vill type Candida albican celler til substrat underløp underløp under vedleggsfasen, etterfulgt av den påfølgende vekst og utvikling i vekstfasen fører til biofilmdannelse. Dataene fra disse videoene kan analyseres for frekvensen av cellevedlegg og løsrivelse og biomasse over tid, vist her er den totale biomassen i bildeområdet som bestemmes av densitometrianalyse. Den kumulative frekvensen av cellevedlegg og prosent biomasseavløsning over tid vises også.Mens du prøver denne prosedyren, er det viktig å huske å bruke de samme bildeforholdene på tvers av alle eksperimenter, da dette gjør det mulig å gjøre kvantitative sammenligninger mellom dem.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Real-time Imaging of Leukotriene B4 Mediated Cell Migration and BLT1 Interactions with &beta;-arrestin

Real-time Imaging of Leukotriene B4 Mediated Cell Migration and BLT1 Interactions with ÃƒÅ½Ã‚Â²-arrestin

G-protein coupled receptors (GPCRs) belong to the seven transmembrane protein family and mediate the transduction of extracellular signals to ...

Pseudomonas aeruginosa and Saccharomyces cerevisiae Biofilm in Flow Cells

Pseudomonas aeruginosa and Saccharomyces cerevisiae Biofilm in Flow Cells

Many microbial cells have the ability to form sessile microbial communities defined as biofilms that have altered physiological and pathological ...

Development of a Negative Selectable Marker for Entamoeba histolytica

Development of a Negative Selectable Marker for Entamoeba histolytica

Entamoeba histolytica is the causative agent of amebiasis and infects up to 10% of the world's population. The molecular techniques that have enabled the ...

Quantification of Fungal Colonization, Sporogenesis, and Production of Mycotoxins Using Kernel Bioassays

Kvantifisering av Fungal Colonization, Sporogenesis, og produksjon av mykotoksiner Bruk Kernel bioassay

The rotting of grains by seed-infecting fungi poses one of the greatest economic challenges to cereal production worldwide, not to mention serious risks ...

A TIRF Microscopy Technique for Real-time, Simultaneous Imaging of the TCR and its Associated Signaling Proteins

En TIRF Mikroskopi Teknikk for Real-time, samtidig avbildning av TCR og tilhørende signalveier Proteiner

Signaling is initiated through the T Cell Receptor (TCR) when it is engaged by antigenic peptide fragments bound by Major Histocompatibility Complex ...

Real-time Live Imaging of T-cell Signaling Complex Formation

Real-time Live Imaging av T-celle signalisering Complex Formation

Protection against infectious diseases is mediated by the immune system 1,2. T lymphocytes are the master coordinators of the immune system, regulating ...

Real-time Imaging of Endothelial Cell-cell Junctions During Neutrophil Transmigration Under Physiological Flow

Real-time Imaging av endotelceller-celle Junctions Under Neutrophil Sjele under fysiologiske Flow

During inflammation, leukocytes leave the circulation and cross the endothelium to fight invading pathogens in underlying tissues. This process is known ...

Imaging Neutrophils and Monocytes in Mesenteric Veins by Intravital Microscopy on Anaesthetized Mice in Real Time

Imaging Neutrofiler og monocytter i mesenterisk Veins av intraMikros på bedøvet Mus i sanntid

Efficient immune response is dependent on rapid mobilization of blood leukocytes to the site of infection or injury. Investigating leukocyte migration in ...

Visualizing the Effects of Sputum on Biofilm Development Using a Chambered Coverglass Model

Visualisere effekten av Sputum på Biofilm Development Ved hjelp av en Chambered dekkglass Model

Biofilms consist of groups of bacteria encased in a self-secreted matrix. They play an important role in industrial contamination as well as in the ...

Qualitative and Quantitative Analysis of the Immune Synapse in the Human System Using Imaging Flow Cytometry

Kvalitativ og kvantitativ analyse av immun Synapse i menneskelige systemet ved hjelp av Imaging flowcytometri

The immune synapse is the area of communication between T cells and antigen-presenting cells (APCs). T cells polarize surface receptors and proteins ...