Name: immunization of alpacas (lama pacos) with protein antigens and production of antigen-specific single domain antibodies
Uploaded: 2019-01-26T12:30:00
Duration: 5 min 27 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Immunization of Alpacas Lama pacos with Protein Antigens and Production of Antigen-specific Single Domain Antibodies at JoVE.com

Ce travail a été soutenu par le National Institutes of Health (P30GM103486).

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DRS Whiteheart et Hersh sont à l’Université du Kentucky et exploiter un noyau au centre de médecine moléculaire qui produit des anticorps à domaine unique en alpaca comme un paiement à l’acte.

Tel que mentionné, la haute affinité et la spécificité des anticorps à domaine unique, combinée à leur expression facile et leur stabilité, rendent réactifs idéales pour les applications dans la recherche biomédicale, comme critiques réactifs biochimiques, outils de diagnostic, ou agents thérapeutiques18. Pour les applications commerciales, il y a certaines questions de propriété intellectuelle qui doit être considérée. En outre, anticorps à domaine unique peuvent être conçues pour contenir des marqueurs spécifiques ou des balises qui peuvent être utilisés comme reporters en essais cellulaires ou diagnostics. La clé de ces usages est la capacité à produire des anticorps contre les antigènes d’intérêt spécifique de domaine unique. Une méthode est décrite ici pour produire des anticorps à domaine unique à l’aide d’alpagas, qui produit une réponse immunitaire contre une grande variété d’antigènes protéiques. Considérations relatives à l’animal de manutention et de la conformité réglementaire sont décrits. Voici les clés du succès dans cette partie du processus.
Il existe des autres stratégies de production d’anticorps à domaine unique qui ne nécessitent pas la vaccination, mais plutôt utilisent des bibliothèques semi-synthétiques avec différents systèmes pour la sélection et l’optimisation itérative des affinités19,20 . Toutefois, l’avantage d’utiliser des bibliothèques provenant d’animaux vaccinés est la capacité d’isoler avec fiabilité les anticorps hautement enrichi, diversifié et de haute affinité de domaine unique. En outre, non seulement sont des variations de séquence significative observées, mais une majorité significative d’anticorps spécifiques seul domaine isolé avait uniques insertions et suppressions, particulièrement en CDR3.
En outre, seul domaine des anticorps peuvent être produits par un processus très simple qui ne nécessite que petites injections de l’antigène et après ce processus, les animaux peuvent être retournés dans le troupeau. À noter, l’animal peut être librement utilisé pour la production de fibres, mais doit être exclus de servir de viande (chaîne alimentaire humaine) en raison de l’utilisation des antigènes de test et non FDA approuvé adjuvant pour la production d’anticorps de domaine unique. Une fois la procédure terminée, les animaux doivent être surveillés pendant une semaine, un examen vétérinaire final, puis peuvent être retournés à leur ferme ou reposés pendant six mois avant un nouveau cycle de production d’anticorps de domaine unique.

Alpagas et autres membres de la famille des camélidés, sont devenus une source populaire pour la production d’anticorps pour la recherche biomédicale1,2,3. Camélidés ont un système immunitaire unique en ce qu’ils produisent les anticorps normaux ainsi que lourde chaîne anticorps seuls qui permettent la production d’anticorps de domaine unique beaucoup plus petites, tout en conservant une spécificité élevée et haute affinité. Ainsi, camélidés anticorps fournissent un réactif polyvalent utile pour une variété d’usages. Une méthode pour immuniser alpaga et de produire des anticorps à domaine unique à une variété d’antigènes protéiques est décrite ici. Ces anticorps peuvent être produites en camélidés grâce à un procédé relativement simple qui ne nécessite que la vaccination par l’intermédiaire de petites injections de la protéine cible (antigène) et un tirage au sort de sang4. Par la suite, construction de la bibliothèque, M13 phage display5 et panoramique contre l' antigène recombinant6 sert à isoler et à produire des anticorps à domaine unique avec les caractéristiques souhaitées. Parce que le processus tire parti de la puissance de la technologie d’affichage bactériophage, cinq ou plusieurs antigènes peuvent être utilisés simultanément par animal, réduisant ainsi le nombre d’animaux utilisés et des coûts connexes.
Typiques chez les mammifères anticorps ou immunoglobulines sont de grosses molécules consistant en deux types de chaînes (2 chaînes légères et 2 chaînes lourdes), qui sont reliés entre eux par l’intermédiaire de liaisons disulfide. Ces anticorps sont relativement grandes, présentant des poids moléculaires de ~ 140-190 kDa pour IgG le plus abondant de l’homme, souris, chèvres et lapins. En raison de leurs multiples sous-unités, poids moléculaire élevé et ponts disulfures, immunoglobulines peuvent être assez difficiles à produire en grandes quantités, rendant leur coût élevé. Dans les années 1990, on a découvert que les camélidés, qui comprend des chameaux, lamas et alpagas font, en plus de l’immunoglobuline de type mammifère typique, une nouvelle forme d’immunoglobuline qui est plus simple en structure, possédant des chaînes lourdes seulement7. Ces anticorps camelid uniques possèdent la même capacité de lier spécifiquement avec une haute affinité des substances étrangères mais sont seulement composés d’une protéine chaîne8. En outre, camélidés anticorps peuvent être expérimentalement tronqués à un fragment d’unité la VHH encore plus petit, également appelé un domaine unique anticorps9. En raison de leur petite taille, anticorps à domaine unique sont utiles pour un large éventail d’applications de la recherche biomédicale et sont disponibles à partir d’une variété de sources académiques et commerciaux1,10. Une exception semble être éponger occidental car seul domaine anticorps sont plus souvent dirigés contre les épitopes dépendant de conformation, qui sont généralement perdues dans les conditions de dénaturation utilisées dans les transferts Western.
Puisqu’ils sont constitués d’une seule chaîne polypeptidique, anticorps spécifique de domaine unique peuvent être sélectionnés et facilement produites en grandes quantités sous forme de protéines recombinantes dans les bactéries. Anticorps à domaine unique peuvent également être génétiquement modifiées afin qu’il contienne des marqueurs spécifiques ou l’étiquette peut être utilisé comme « groupes de journaliste » pour le diagnostic des maladies,11. Cette facilité de manipulation couplée à leur souplesse d’utilisation rend anticorps à domaine unique une ressource importante pour les chercheurs dans les universités et ailleurs.
Comme partie d’un National Institutes of Health prise en charge de base, les méthodes existantes ont été adaptés pour produire des anticorps à domaine unique des alpagas3,4. Les alpagas ont des avantages significatifs dans les deux facilité de manipulation par rapport à plus grands camélidés membres de la famille ainsi que l’accessibilité. Les alpagas sont largement élevés pour la viande et les fibres et ainsi peuvent être obtenus au niveau régional auprès des agriculteurs locaux alpaga, qui peuvent être identifiées par le biais de leurs sites Web ou associations éleveur Etat. Il existe deux races d’alpagas, Suri et Huacaya. Huacaya sont plus fréquente et ont été utilisées pour ce protocole, mais le protocole est généralement applicable aux deux races et aussi plus largement applicables aux autres camélidés.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:932px;" width="932">
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:299px;">GERBU FAMA adjuvant</td>
			<td style="width:123px;">Biotechnik, Heidelberg, Germany&#160;</td>
			<td style="width:344px;">3003,6001</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Serum collection tube</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>367983</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Blood collection tube</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>366643</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Vacutainer blood collection set</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>368652</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Maxisorp Immuno plates</td>
			<td>Nunc</td>
			<td>439454</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">BSA</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A7906</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">HRP-conjugated goat anti-llama IgG antibody&#160;</td>
			<td>Bethyl Labs</td>
			<td>A160-100P</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">TMB reagent chromogenic peroxidase substrate&#160;</td>
			<td>KPL</td>
			<td>50-76-03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Plate Reader</td>
			<td>Spectramax</td>
			<td>M5</td>
			<td>Any UV/VIS capable reader is acceptable</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Uni-SepMAXI+ lyphocyte separation tube</td>
			<td>Novamed</td>
			<td>U-17</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">RNeasy Mini Kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>74104</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">QIAshredder column</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>79654</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Superscript IV reverse transcriptase&#160;&#160;</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>18064014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">AEBSF solution</td>
			<td>Biosynth</td>
			<td>A-5440</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">TG1 phage display competent cells</td>
			<td>Lucigen</td>
			<td>60502</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

immunization of alpacas (lama pacos) with protein antigens and production of antigen-specific single domain antibodies

Dans ce manuscrit, une méthode pour la vaccination d’alpaca et de l’utilisation de méthodes de biologie moléculaire à produire des anticorps spécifiques de l’antigène unique domaine est décrit et a démontré. Camélidés, tels que les alpagas et de lamas, sont devenus une ressource précieuse pour la recherche biomédicale car ils produisent un nouveau type d’anticorps seule chaîne lourde, qui peut être utilisé pour produire des anticorps à domaine unique. Parce que le système immunitaire est très flexible, anticorps à domaine unique est possible à de nombreux antigènes protéiques différentes et même différentes conformations de l’antigène, avec un très haut degré de spécificité. Ces fonctionnalités, entre autres, faire des anticorps à domaine unique un outil précieux pour la recherche biomédicale. Une méthode pour la production d’anticorps à domaine unique d’alpagas est rapportée. Un protocole de vaccination, prélèvement sanguin et l’isolement de cellules B est décrite. Les lymphocytes B sont utilisés pour la construction d’une bibliothèque immunisée, qui sert à la sélection des anticorps à domaine unique spécifique via panoramique. Anticorps putatif spécifique domaine unique obtenus via panoramique sont confirmées par le menu déroulant, ELISA, ou gel-décalage. Les anticorps de domaine unique qui en résulte permet alors soit directement, soit dans le cadre d’un réactif machiné. Les utilisations de l’anticorps à domaine unique et de domaine unique axée sur les anticorps Régents incluent des applications structurelles, biochimiques, cellulaires, in vivo et thérapeutiques. Anticorps à domaine unique peuvent être produits en grande quantité, comme des protéines recombinantes dans des systèmes d’expression procaryote, purifié et utilisés directement ou peut être conçue pour contenir des marqueurs spécifiques ou l’étiquette peut être utilisé comme reporters dans les études cellulaires ou diagnostics.

Le protocole présenté ici a été utilisé pour générer des anticorps à domaine unique contre une gamme des antigènes protéiques. Cinq antigènes ont été utilisés par l’alpaga. La surveillance immunitaire a indiqué que la plupart des antigènes début de réponse robuste à trois semaines (Figure 1). Les saignements de production et de la construction de la bibliothèque après environ six semaines donne le meilleur équilibre pour les animaux qui ont plusieurs antigènes injectés. Deux séries de panoramique a eu lieu pour chaque antigène et isolés colonies criblées (Figure 2). Séquençage des colonies positives identifiées séquences anticorps divers domaine unique pour les différents antigènes. Pour obtenir des exemples, trois clones uniques ont été isolées à l’antigène de référence Maltose Binding Protein (MBP) (Figure 3 a). Comme on l’observe fréquemment, l’anticorps seul domaine contiennent la diversité des séquences significatives et longueur très variable CDR3 (Figure 3). Ces fonctionnalités sont particulièrement importantes dans les interactions anticorps/antigène domaine unique comme le montre la référence unique domaine anticorps/CX3CL1 complexe17 (Figure 3 b).
La majorité des séquences d’anticorps pleine longueur domaine unique peut être exprimée et purifiée au 1-10 mg/L de culture (Figure 4 a). En raison de la diversité en longueur CDR3, anticorps différents domaine unique montrent légère variation de poids moléculaire. Confirmation de la liaison directe et les performances des applications spécifiques est critique. Par exemple, après deux tours de sélection contre l’antigène B, un groupe de domaine unique, les anticorps ont été identifiés (Figure 2). Plusieurs séquences identiques ont été identifiées, et les anticorps à domaine unique a été produit et purifié. Il était ensuite testé par traction directe vers le bas avec de la résine d’affinité antigène et robuste liaison dose-dépendante (Figure 4 b). Ce qui est important, l’anticorps seul domaine a montré aucune liaison pour contrôler la résine. Ces résultats démontrent une interaction de liaison directe et qui est bien adapté pour la capture d’affinité en modes déroulant et par ELISA.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58471/58471fig1.jpg"> Figure 1 : Surveillance immunitaire représentatifs des deux antigènes distincts montrant la réponse immunitaire spécifique significative aux antigènes distincts chez le même animal. De nombreux antigènes montrent robuste réponse aussi tôt que trois semaines après la vaccination, en commençant par la majorité montrant la réponse maximale après six semaines. Six semaines également permettant la maturation d’affinité et est la durée recommandée pour la purge de la production et l’isolement de cellules B. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58471/58471fig1large.jpg" target="_blank">S’il vous plaît cliquez ici pour visionner une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58471/58471fig2.jpg"> Figure 2 : Confirmation basées sur la PCR clones positifs. Amorces enjambent le MCS du vecteur pMES4, et un clone de nanobody positif produit un amplicon de ~ 500 bp (marqués avec *). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58471/58471fig2large.jpg" target="_blank">S’il vous plaît cliquez ici pour visionner une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58471/58471fig3.jpg"> Figure 3 : Séquences spécifiques d’un antigène mettre en évidence la diversité des anticorps seul domaine de l’alpaga. (A) alignement de domaine unique sélectionnez anticorps séquences isolées pour MBP avec une référence unique domaine anticorps 4XT1, cadre et régions déterminant la complémentarité (Kabat) a mis en évidence ci-dessous. (B) Structure d’alpaga domaine unique anticorps 4XT1 lié à CX3CL1 (APB 4XT1), soulignant le rôle essentiel des CDR variable effectue une boucle dans la liaison de l’antigène spécifique. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58471/58471fig3large.jpg" target="_blank">S’il vous plaît cliquez ici pour visionner une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58471/58471fig4.jpg"> Figure 4 : Purification et validation des anticorps seul domaine. (A) SDS-PAGE des anticorps à domaine unique IMAC purifiée, comparant les anticorps divers domaine unique. Différents poids moléculaires sont principalement en raison de la longueur variable de la boucle CDR3. Différents niveaux d’expression sont également observées, avec une minorité d’anticorps à domaine unique montrant les piètres rendements de protéine purifiée. (B) vérification de liaison directe à l’aide d’une affinité antigène déroulants. Liaison d’anticorps robuste domaine unique dose-dépendante est observée avec résine couplé à l’antigène, mais pas avec de la résine de contrôle. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58471/58471fig4large.jpg" target="_blank">S’il vous plaît cliquez ici pour visionner une version agrandie de cette figure.</a>

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Immunization of Alpacas Lama pacos with Protein Antigens and Production of Antigen-specific Single Domain Antibodies

Immunisation des alpaga (Lama pacos) avec les antigènes protéiques et de la Production d’anticorps spécifiques de l’antigène unique

Une méthode pour la production d’anticorps à domaine unique d’alpagas, vaccination, prélèvement sanguin, isolement de cellules B, et sélection est décrite.

In this manuscript, a method for the immunization of alpaca and the use of molecular biology methods to produce antigen-specific single domain antibodies ...

Les méthodes que nous décrivons ici ont été adoptées par notre nih COBRE parrainé, University of Kentucky Protein Core Facility pour aider les chercheurs à produire des anticorps à domaine unique dans les alpagas. Les anticorps à domaine unique sont un outil important utilisé pour répondre aux questions clés de la recherche biomédicale. Le principal avantage des techniques que nous démontrons est qu’il permet la production d’anticorps à domaine unique jusqu’à cinq protéines distinctes dans un seul alpaga.Les implications de cette technique s’étendent à la santé humaine et au traitement de la maladie puisque ces anticorps à domaine unique peuvent être utilisés comme thérapeutiques, comme vaccins et comme diagnostics. L’obstacle le plus important pour la plupart des chercheurs biomédicaux établis est la manipulation de gros animaux, comme l’alpaga. La démonstration visuelle de la manipulation d’un alpaga, l’injection d’antigènes, et la collecte de sang, sont critiques pour la production réussie d’anticorps à domaine unique chez ces camélidés.Le Docteur Jeff Smiley, vétérinaire de l’Université, Mme Kathy Boaz, technicienne vétérinaire, et Mme Erin Jones, technicienne en animaux de laboratoire, feront la démonstration de l’intervention. La manipulation du sang sera démontrée par le Docteur Martin Chao, Associé de Recherche. Les vraies histoires de cette production sont Blue Eyes, Big Boy, ou affectueusement connu comme le gorille, et Freddie, nos alpagas du Kentucky.Pour commencer, retenez l’animal avec un licol et du plomb. Ensuite, coupez les cheveux de l’alpaga avec des tondeuses électriques dans un motif croissant de lune le long de la base de son cou, de l’épaule à l’épaule. Maintenez soigneusement l’alpaga par la tête et le cou, et injectez lentement les antigènes sous-cutanéement avec une aiguille de calibre 22 le long de la base du cou, près des ganglions lymphatiques avant.Effectuez cinq injections d’environ 200 microlitres chacune, à environ cinq centimètres l’une de l’autre. Après cela, surveillez l’animal pendant environ 20 minutes pour les signes d’anaphylaxie. Inspecter le site d’injection pour déce faire une inflammation localisée aux sites d’injection chaque semaine.Pour préséner le sang, couper les cheveux de l’alpaga et désinfecter le site de collecte avec des écouvillons d’alcool. Retenez doucement l’alpaga, en veillant à ce que le cou soit tenu droit et droit. En utilisant les projections ventrales du processus transversaux des vertèbres comme point de repère, occlusez la veine en appliquant une pression juste médiale au processus ventral.Ensuite, insérez l’aiguille à un angle de 45 degrés, légèrement médial à la projection, vers le centre du cou. Manipuler l’aiguille jusqu’à ce que le sang coule. Tout d’abord, diluer 15 millilitres du sang recueilli avec cinq millilitres de PBS.Ensuite, pipette sang dans un tube de séparation des lymphocytes pour isoler les lymphocytes sanguins périphériques, ou PBLs, par centrifugation gradient de densité. Retirez délicatement la couche plasma supérieure, en la sauvant dans un tube séparé. Ensuite, retirez doucement la couche PBL et transférez-la dans un tube stérile de 50 millilitres.Ajouter 45 millilitres de PBS pré-refroidi aux PBLs et faire tourner le tube pendant 20 minutes à 800 fois G, et quatre degrés Celsius. Retirer le supernatant à l’avec une pipette, en laissant la pastille contenant les lymphocytes. Lavez la pastille deux fois de plus avec cinq millilitres de PBS pré-refroidi pour préparer les PBLs pour l’isolement de l’ARN.En utilisant ce protocole, des anticorps à domaine unique ont été générés contre une gamme d’antigènes protéiques. La surveillance immunitaire a indiqué que la majorité des antigènes ont montré la réponse robuste commençant à trois semaines, et que le moment optimal pour obtenir le sang est à six semaines. Le séquençage des colonies positives a permis d’identifier diverses séquences d’anticorps à domaine unique pour différents antigènes.Par exemple, trois colonies uniques ont été isolées à la protéine de référence antigène liant la maltose. En général, les anticorps à domaine unique contenaient une grande diversité de séquences et une longueur très variable de boucles liant les antigènes. Ces caractéristiques sont particulièrement importantes dans les interactions anticorps anticorps à domaine unique.Cette procédure permet la production d’anticorps à domaine unique pour un jusqu’à cinq antigènes par animal. Une seule collecte de sang, et la construction de la bibliothèque, est utilisée pour chaque animal. Avec la sélection basée sur l’affichage des phages utilisée pour identifier les anticorps à chaîne unique spécifiques aux antigènes.Tout en faisant les injections d’antigène et l’échantillonnage du sang, il est important de garder les alpagas dans un groupe, ce qui les maintient plus calmes. Cela peut être fait à l’aide de licols et de fils, et de les léchage à proximité pendant les procédures.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Immunization of Alpacas (Lama pacos) with Protein Antigens and Production of Antigen-specific Single Domain Antibodies

Directed Protein Packaging within Outer Membrane Vesicles from Escherichia coli: Design, Production and Purification

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Réalisé Conditionnement des protéines dans la membrane externe de vésicules<em&gt; Escherichia coli</em&gt;: Conception, production et purification

An increasing interest in applying synthetic biology techniques to program outer membrane vesicles (OMV) are leading to some very interesting and unique ...

Recherche

Biochimie

Force Spectroscopy of Single Protein Molecules Using an Atomic Force Microscope

Spectroscopie de force unique de molécules de protéines à l’aide d’un Microscope à Force atomique

The determination of the folding process of proteins from their amino acid sequence to their native 3D structure is an important problem in biology. ...

Method for Efficient Refolding and Purification of Chemoreceptor Ligand Binding Domain

Procédé de repliement efficace et la Purification des chémorécepteurs Ligand Binding Domain

Identification of natural ligands of chemoreceptors and structural studies aimed at elucidation of the molecular basis of the ligand specificity can be ...

Covalent Immobilization of Proteins for the Single Molecule Force Spectroscopy

Immobilisation covalente de protéines pour la spectroscopie de Force seule molécule

In recent years, atomic force microscopy (AFM) based single molecule force spectroscopy (SMFS) extended our understanding of molecular properties and ...

Crystal Structure of the N-terminal Domain of Ryanodine Receptor from Plutella xylostella

Crystal Structure of the N-terminal Domain of Ryanodine Receptor from Plutella xylostella

Structure cristalline du domaine N-terminal du récepteur à la Ryanodine de Plutella xylostella

Development of potent and efficient insecticides targeting insect ryanodine receptors (RyRs) has been of great interest in the area of agricultural pest ...

Analysis of Protein Folding, Transport, and Degradation in Living Cells by Radioactive Pulse Chase

Analyse de repliement des protéines, des transports et dégradation dans les cellules vivantes par radioactifs Pulse Chase

Radioactive pulse-chase labeling is a powerful tool for studying the conformational maturation, the transport to their functional cellular location, and ...

Expression, Purification, Crystallization, and Enzyme Assays of Fumarylacetoacetate Hydrolase Domain-Containing Proteins

Expression, Purification, Cristallisation et Essais enzymatiques des protéines contenant du domaine de l'hydrolase fumarylacetoacetate

Fumarylacetoacetate hydrolase (FAH) domain-containing proteins (FAHD) are identified members of the FAH superfamily in eukaryotes. Enzymes of this ...

Production, Crystallization, and Structure Determination of the IKK-binding Domain of NEMO

Détermination de la production, de la cristallisation et de la structure du domaine iKK-contraignant de NEMO

NEMO is a scaffolding protein which plays an essential role in the NF-&#954;B pathway by assembling the IKK-complex with the kinases IKK&#945; and ...

Production of Dynein and Kinesin Motor Ensembles on DNA Origami Nanostructures for Single Molecule Observation

Production d'ensembles moteurs d'adn et de kinésine sur des nanostructures d'origami d'ADN pour l'observation d'une seule molécule

Cytoskeletal motors are responsible for a wide variety of functions in eukaryotic cells, including mitosis, cargo transport, cellular motility, and ...

Creating Highly Specific Chemically Induced Protein Dimerization Systems by Stepwise Phage Selection of a Combinatorial Single-Domain Antibody Library

Création de systèmes de dimerisation des protéines hautement spécifiques induits par des produits chimiques par stepwise Phage Selection of a Combinatorial Single-Domain Un-Domain Un-Domain Un-Domain Body Library