Name: immunization of alpacas (lama pacos) with protein antigens and production of antigen-specific single domain antibodies
Uploaded: 2019-01-26T12:30:00
Duration: 5 min 27 s
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이 작품은 건강의 국가 학회 (P30GM103486)에 의해 지원 되었다.

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박사 Whiteheart와 허 켄터키의 대학에는 단일 도메인에 대 한 서비스 요금으로 알파 카에 항 체를 생산 하는 분자 의학 센터에서 핵심 운영.

앞에서 언급 했 듯이, 높은 선호도 안정성, 손쉬운 식와 결합 하 여 단일 도메인 항 체의 특이성 있도록 응용 프로그램에 대 한 이상적인 시 약, 생물 의학 연구에 중요 한 생 화 확 적인 시 약, 진단 도구로 또는 치료제18. 상용 응용을 위해 고려해 야 하는 몇 가지 문제 지적에 관련된 속성이 있다. 또한, 단일 도메인 항 체 특정 마커 또는 세포질 분석 실험 또는 진단에 기자로 사용할 수 있는 태그를 포함 하도록 설계 될 수 있다. 이러한 사용의 핵심 관심의 항 원에 대하여 특정 단일 도메인 항 체를 생산 하는 능력 이다. 메서드 설명 여기 alpacas를 사용 하 여 단일 도메인 항 체를 생산 하는 다양 한 단백질 항 원에 대 한 강력한 면역 반응을 생산 합니다. 동물 처리 및 규정 준수에 대 한 고려 사항은 설명 합니다. 이 프로세스의이 부분에서 성공 위한 핵심입니다.
예방 접종, 필요 하지 않지만 대신 선택 및 선호도19,20의 반복 최적화에 대 한 다른 시스템과 semisynthetic 라이브러리를 사용 하는 단일 도메인 항 체 생산을 위한 다른 전략 . 그러나, 면역된 동물에서 파생 된 라이브러리를 사용 하 여 장점은 안정적으로 높은 농축 하 고, 다양 한, 그리고 높은 선호도 단일 도메인 항 체를 분리 하는 기능입니다. 또한, 뿐만 아니라 중요 한 순서 변이 관찰 된다, 하지만 특정 단일 도메인 항 체 분리의 상당한 대다수 CDR3에 특히 독특한 삽입 및 삭제을 했다.
추가, 단일 도메인 항 체만 항 원, 그리고이 과정 후 작은 주사를 필요로 하는 간단한 과정을 통해 생성 될 수 있다, 동물 무리 반환 될 수 있습니다. 메모의, 동물 섬유 생산을 위해 자유롭게 사용 될 수 있습니다 하지만 단일 도메인 항 체 생산을 위한 테스트 항 및 비 FDA 승인 된 보조의 사용으로 인해 고기 (인간 먹이 사슬)으로 사용에서 제외 해야 합니다. 프로시저가 완료 되 면 동물 최종 수의 시험을 주어진 1 주 동안 모니터링 해야 고 수 수 중 그들의 가정 농장에 반환 또는 단일 도메인 항 체 생산의 또 다른 라운드 전에 6 개월 동안 휴식.

Alpacas, 그리고 camelid 가족의 다른 일원 생물 의학 연구1,2,3에 대 한 항 체를 생성 하기 위한 인기 있는 소스 되 고 있습니다. 그들은 모두 정상적인 항 체로 높은 특이성 및 높은 선호도 유지 하면서 훨씬 더 작은 단일 도메인 항 체의 생산을 허용 하는 무거운 체인 유일한 항 체 생산에 Camelids 독특한 면역 체계가 있다. 따라서, camelid 항 체 다양 한 용도로 유용 하 게 다재 다능 한 시 약을 제공합니다. 알파 카 면역 단백질 항 원의 다양 한 단일 도메인 항 체를 생성 하는 방법 여기 설명 되어 있습니다. 이 항 체만 대상 단백질 (항 원)과 혈액 그리기4의 작은 주사를 통해 예방접종을 필요로 하는 비교적 간단한 과정을 통해 camelids에 생산 수 있습니다. 그 후, 도서관 건설, M13 살 균 소 전시5 , 재조합 형 항 원6 대 팬 분리 하 고 원하는 특성을 가진 단일 도메인 항 체를 생산 사용 됩니다. 프로세스 페이지 디스플레이 기술의 힘을 이용 하기 때문에, 5 개 이상의 항 원 동물 당 동시에 이용 될 수 있다, 사용 하 고 비용을 관련 된 동물의 수를 줄입니다.
전형적인 포유류 항 체 또는 면역 글로불린 체인 (2 무거운 사슬과 2 경 쇄), 이황화 결합을 통해 서로 연결 되어 있는 두 가지 유형의 구성 된 큰 분자 이다. 이러한 항 체는 비교적 큰 전시 ~ 140-190의 분자 무게 인간, 쥐, 염소, 토끼에서 더 풍부한 IgG 종 kDa. 그리고 때문에 그들의 여러 소 단위 구조, 높은 분자량, 이황화 결합, 면역 글로불린 대량, 높은 그들의 비용을 만들기에 오히려 도전 수 있습니다. 1990 년대에 camelids, 낙 타, 라마, alpacas를 포함 하 게, 전형적인 포유류 유형 면역 글로불린, 구조, 보유만 무거운 체인7에서 간단 하 게 면역 글로불린의 소설 형태 뿐만 아니라 발견 했다. 이러한 독특한 camelid 항 체 특히 높은 선호도와 외국 물질 바인딩할 같은 능력을 보유 하지만 이루어진 하나의 단백질 체인8. 또한, camelid 항 체도 작은 단위 VHH 조각, 단일 도메인 항 체9라고도 하 실험적으로 잘릴 수 있습니다. 그들의 작은 크기 때문에 단일 도메인 항 체 생물 의학 연구 응용 프로그램의 넓은 범위에 대 한 유용 하며 다양 한 학술 및 상업 소스1,10에서 사용할 수 있습니다. 예외 때문에 단일 도메인 항 체는 서쪽 오 점에 사용 되는 변성 조건에서 일반적으로 잃 었 나 란 종속 epitopes에 대 한 감독 더 자주 부 럽 것 처럼 보인다.
그들은 하나의 polypeptide 사슬 구성 되어, 이후 특정 단일 도메인 항 체 선정 고 쉽게 세균에 재조합 단백질 대량에서 생산 수 있습니다. 단일 도메인 항 체 특정 마커 또는 질병11진단에 대 한 "기자 그룹"으로 사용할 수 있는 태그를 포함 하도록 유전자 설계 수 있다 또한. 사용의 그들의 유연성과 함께 조작의이 용이성이 연구자와 다른 대학에 대 한 중요 한 자원을 단일 도메인 항 체 게.
건강의 국가 학회의 부분 코어 지원, 기존의 방법 alpacas3,4에서 단일 도메인 항 체 생산에 적응 되었습니다. Alpacas는 큰 camelid 가족 구성원 뿐만 아니라, 내게 필요한 옵션을 기준으로 처리의 두 용이성에 상당한 이점이 있다. Alpacas는 널리 섬유 및 고기 고 따라서에서 얻어질 수 있다 지역 로컬 알파 카 농부, 누가 자신의 웹사이트를 통해 또는 상태 종 축 협회를 통해 확인 될 수 있다. Alpacas의 두 유형이 사용할 수 있습니다, Huacaya 및 수리. Huacaya는 더 일반적이 고이 프로토콜에 대 한 사용 했다 하지만 프로토콜은 일반적으로 어느 품종에 적용 하 고 또한 더 널리 다른 camelids에 적용.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:932px;" width="932">
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:299px;">GERBU FAMA adjuvant</td>
			<td style="width:123px;">Biotechnik, Heidelberg, Germany&#160;</td>
			<td style="width:344px;">3003,6001</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Serum collection tube</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>367983</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Blood collection tube</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>366643</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Vacutainer blood collection set</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>368652</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Maxisorp Immuno plates</td>
			<td>Nunc</td>
			<td>439454</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">BSA</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A7906</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">HRP-conjugated goat anti-llama IgG antibody&#160;</td>
			<td>Bethyl Labs</td>
			<td>A160-100P</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">TMB reagent chromogenic peroxidase substrate&#160;</td>
			<td>KPL</td>
			<td>50-76-03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Plate Reader</td>
			<td>Spectramax</td>
			<td>M5</td>
			<td>Any UV/VIS capable reader is acceptable</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Uni-SepMAXI+ lyphocyte separation tube</td>
			<td>Novamed</td>
			<td>U-17</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">RNeasy Mini Kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>74104</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">QIAshredder column</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>79654</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Superscript IV reverse transcriptase&#160;&#160;</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>18064014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">AEBSF solution</td>
			<td>Biosynth</td>
			<td>A-5440</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">TG1 phage display competent cells</td>
			<td>Lucigen</td>
			<td>60502</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

immunization of alpacas (lama pacos) with protein antigens and production of antigen-specific single domain antibodies

이 원고에 알파 카의 예방접종 및 항 원 특정 단일 도메인 항 체를 생산 하는 분자 생물학 방법의 사용에 대 한 메서드는 설명 하 고 시연. Camelids, 라마, alpacas 등 되고있다 생물 의학 연구를 위한 귀중 한 자원 때문에 그들은 새로운 유형의 단일 도메인 항 체를 생산 하는 데 사용할 수 있는 무거운 체인 전용 항 체 생산. 면역 체계는 매우 유연 하기 때문에 단일 도메인 항 체 특이성의 매우 높은 학위를 가진 많은 다른 단백질 항 원, 항 원, 심지어 다른 conformations를 만들 수 있습니다. 이러한 기능을, 생물 의학 연구를 위한 귀중 한 도구 단일 도메인 항 체를 확인합니다. Alpacas에서 단일 도메인 항 체의 생산에 대 한 방법을 보고 됩니다. 예방 접종, 혈액 수집, 및 B-세포 격리 프로토콜 설명 되어 있습니다. B 세포 면역된 라이브러리, 패닝 통해 특정 단일 도메인 항 체의 선택에 사용 되는의 건설에 사용 됩니다. 풀-다운, 패닝 통해 얻은 putative 특정 단일 도메인 항 체 확인 ELISA, 또는 젤 교대 분석 실험. 결과 단일 도메인 항 체 직접 또는 설계 시 약의 일부로 사용할 수 있습니다. 단일 도메인 항 체와 단일 도메인 항 체 기반 regents의 사용 구조, 생화학, 세포, vivo에서, 및 치료 응용 프로그램을 포함합니다. 간결한 식 시스템에 있는 재조합 형 단백질 순화, 직접 사용 또는 특정 마커 또는 세포 연구 또는 기자로 사용할 수 있는 태그를 포함 하도록 설계 될 수 있다 단일 도메인 항 체 대량에서 생산 될 수 있습니다. 진단 프로그램입니다.

여기에 제시 된 프로토콜은 다양 한 단백질 항 원에 대 한 단일 도메인 항 체를 생성 하기 위해 이용 되었다. 5 항 알파 카 당 활용 했다. 면역 감시 표시 대부분의 항 원 3 주 (그림 1)에서 시작 하는 강력한 응답을 보였다. 생산 물림 및 도서관 건설 후 약 6 주 제공 동물에 대 한 최고의 균형을 여러 항 원을 주입 있다. 이동 하는 2 라운드 각 항 원에 대 한 수행 되었고 고립 된 식민지 상영 (그림 2). 긍정적인 식민지의 시퀀싱 다른 항 원에 대 한 다양 한 단일 도메인 항 체 시퀀스를 식별합니다. 예를 들면, 3 개의 독특한 클론 참조 항 원 맥 아당 의무적인 단백질 (MBP) (그림 3A)에 격리 했다. 자주 관찰 단일 도메인 항 체에는 중요 한 순서 성과 높은 변수 CDR3 길이 (그림 3) 포함 되어 있습니다. 이러한 기능은 단일 도메인 기준 단일 도메인 항 체/CX3CL1 복잡 한17 (그림 3B)에서 본 항 체/항 원 상호 작용에 특히 중요 하다.
전체 길이 단일 도메인 항 체 시퀀스의 대부분 표현 하 고 1-10 mg/l의 문화 (그림 4A) 정화 수 있습니다. CDR3 길이에 다양성 때문에 서로 다른 단일 도메인 항 체 분자량에 약간의 변화를 보여줍니다. 직접 바인딩 및 응용 프로그램 특정 성능 확인이 중요 합니다. 예를 들어 2 라운드 후 항 원 B에 대 한 선택의, 단일 도메인 항 체 되었다 위원 확인 (그림 2). 여러 개의 동일한 시퀀스 확인 되었다, 그리고 단일 도메인 항 체 생성 하 고 정화 되었다. 다음 항 원 친화성 수 지 다운 직접 풀을 통해 테스트 되었고 강력한 복용량 의존 바인딩 (그림 4B)를 보였다. 중요 한 것은, 단일 도메인 항 체 수 지 제어에 대 한 바인딩을 보였다. 이러한 데이터는 직접 바인딩 상호 작용, 그리고 선호도 캡처 풀 다운 및 ELISA 기반 형식에 적합 한 보여 줍니다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58471/58471fig1.jpg"> 그림 1 : 두 가지 항 원 같은 동물에 별개의 항 원에 중요 한 특정 면역 응답을 보여주는 대표적인 면역 모니터링. 많은 항 원 면역, 6 주 후 최대한 응답을 보여주는 대부분 개시 후 3 주 일찍 강력한 응답을 표시 합니다. 6 주 또한 친 화력 성숙 가능 하며 생산 도련 및 B 세포 격리에 대 한 권장된 시간 이다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58471/58471fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58471/58471fig2.jpg"> 그림 2 : 긍정적인 클론의 PCR 기반 확인. 뇌관 스팬 pMES4 벡터의 MCS 및 긍정적인 nanobody 복제 생산 하는 amplicon ~ 500의 bp (으로 표시 된 *). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58471/58471fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58471/58471fig3.jpg"> 그림 3 : 알파 카 단일 도메인 항 체 다양성을 강조 하는 항 원 특정 시퀀스. (A) 참조 단일 도메인 항 체 4XT1, 프레임 워크와 complementarity 결정 영역 (Kabat) 아래 강조 MBP 격리 선택 단일 도메인 항 체 시퀀스의 맞춤입니다. (B) 구조 알파 카 단일 도메인 항 체 4XT1의 CX3CL1에 바인딩된 (PDB 4XT1), 특정 항 원 바인딩에서 루프 변수 CDR의 중요 한 역할을 강조. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58471/58471fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58471/58471fig4.jpg"> 그림 4 : 정화 및 단일 도메인 항 체의 유효성 검사. (A) SDS-페이지 아이맥 정화 단일 도메인 항 체의 다양 한 단일 도메인 항 체 비교. 다른 분자 무게는 주로 CDR3 루프의 다양 한 길이 되어야 한다. 단일 도메인 항 체 순화 된 단백질의 불 쌍 한 수확량을 보여주는의 소수 식의 다른 레벨도 관찰 된다. (B) 항 원 선호도 풀 다운 메뉴를 사용 하 여 직접 바인딩의 확인. 강력한 복용량 의존 단일 도메인 항 체 바인딩은 항 원 결합 수 지만 수 지 제어 하지 관찰 됩니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58471/58471fig4large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Immunization of Alpacas Lama pacos with Protein Antigens and Production of Antigen-specific Single Domain Antibodies at JoVE.com

Immunization of Alpacas Lama pacos with Protein Antigens and Production of Antigen-specific Single Domain Antibodies

Alpacas (라마 pacos) 단백질 항 원 및 항 원 특정 단일 도메인 항 체의 생산의 면역

Alpacas에서 단일 도메인 항 체의 생산을 위한 방법, 예방 접종, 혈액, B-세포 절연 및 선택을 포함 한 설명 이다.

In this manuscript, a method for the immunization of alpaca and the use of molecular biology methods to produce antigen-specific single domain antibodies ...

우리가 여기에서 설명하는 방법은 연구원이 알파카에 있는 단 하나 도메인 항체를 생성하는 것을 돕기 위하여 켄터키 단백질 코어 시설의 대학 후원한 우리의 NIH COBRE에 의해 채택되었습니다. 단일 도메인 항체는 생물 의학 연구에서 주요 질문에 대답하는 데 사용되는 중요한 도구입니다. 우리가 보여주는 기술의 주요 장점은 단일 알파카에서 최대 5개의 뚜렷한 단백질까지 단일 도메인 항체의 생산을 허용한다는 것입니다.이 기술의 의미는 이 단 하나 도메인 항체가 치료로, 백신으로, 및 진단으로 사용될 수 있기 때문에 인간 건강 및 질병 처리로 확장됩니다. 대부분의 확립 된 생물 의학 조사자에게 가장 중요한 장애물은 알파카와 같은 큰 동물을 처리하는 것입니다. 알파카를 처리하는 시각적 데모, 항원 의 주입 및 혈액 수집은 이러한 낙타에서 단일 도메인 항체의 성공적인 생산에 매우 중요합니다.절차를 시연하는 것은 닥터 제프 스마일리, 대학 수의사, Ms.Kathy Boaz, 수의학 기술자 및 실험실 동물 기술자인 에린 존스(Erin Jones) 씨가 될 것입니다. 혈액의 처리는 닥터 마틴 차오, 연구 동료에 의해 입증될 것입니다. 이 작품의 진짜 이야기는 블루 아이즈, 빅 보이, 또는 고릴라로 애정으로 알려진, 프레디, 우리의 켄터키 알파카입니다.먼저 동물을 홀터로 제지하고 납으로 보호합니다. 그런 다음 알파카의 머리카락을 어깨에서 어깨까지 목 의 베이스를 따라 초승달 패턴의 전기 클리퍼로 다듬습니다. 머리와 목에 의해 알파카를 조심스럽게 잡고, 활 림프절 근처, 목의 베이스를 따라 22 게이지 바늘로 항원을 천천히 주입한다.약의 5 개의 주사를 수행 200 마이크로 리터 각, 약 5 센티미터 떨어져. 그 후, 아나필락시스의 징후는 약 20분 동안 동물을 모니터링한다. 매주 주사 부위에서 국소화된 염증에 대한 주사 부위를 검사합니다.혈액을 뽑기 위해 알파카의 머리카락을 잘라내고 수집 부위를 알코올 면봉으로 소독합니다. 알파카를 부드럽게 억제하여 목이 똑바로 세워지도록 합니다. 척추의 횡방향 과정의 복부 투영을 랜드마크로 사용하여 복부 공정에 내측 압력을 가하여 정맥을 폐색합니다.다음으로 바늘을 45도 각도로 삽입하고, 돌출에 약간 내다보고, 목의 중심을 향해 한다. 혈액이 흐를 때까지 바늘을 조작합니다. 첫째, PBS의 5 밀리리터와 수집 된 혈액의 15 밀리리터를 희석.그런 다음, 파이펫 혈액을 림프구 분리 튜브로 분리하여 밀도 그라데이션 원심분리를 통해 말초 혈액 림프구 또는 PBL을 분리합니다. 상단 플라즈마 층을 부드럽게 제거하여 별도의 튜브에 저장합니다. 그런 다음 PBL 층을 부드럽게 제거하고 멸균 50 밀리리터 튜브로 옮김합니다.45밀리리터의 미리 차가운 PBS를 PBL에 넣고 800회 G, 섭씨 4도에서 20분 동안 튜브를 회전시합니다. 파이펫으로 상체를 제거하고 림프구가 들어있는 펠릿을 남깁니다. 미리 냉각된 PBS 5밀리리터로 펠릿을 2회 더 세척하여 RNA 절연을 위한 PBL을 준비합니다.이 프로토콜을 사용하여, 단하나 도메인 항체는 단백질 항원의 범위에 대하여 생성되었다. 면역 모니터링은 항원의 대다수가 3 주에서 시작하여 강력한 반응을 보였으며 혈액을 얻는 최적의 시간은 6 주임을 나타냅니다. 양성 식민지를 염시퀀싱하여 상이한 항원용 다양한 단일 도메인 항체 서열을 확인했습니다.예를 들어, 3개의 독특한 콜로니는 기준 항원 말토제 결합 단백질에 격리되었다. 일반적으로, 단일 도메인 항체는 항원 결합 루프의 상당한 서열 다양성 및 매우 가변적인 길이를 포함했다. 이러한 특징은 단일 도메인 항체 항원 상호 작용에서 특히 중요합니다.이 절차는 동물 당 최대 5 개의 항원에 대한 단일 도메인 항체의 생산을 허용합니다. 단일 혈액 수집 및 도서관 구조는 각 동물에 대해 활용됩니다. 항원 특이적 단일 체인 항체를 식별하기 위해 파지 디스플레이 기반 선택으로 활용.항원 주사와 혈액 샘플링을하는 동안, 그(것)들을 진정시키는 단에 있는 알파카를 유지하는 것이 중요합니다. 이 작업은 홀터와 리드를 사용하여 수행할 수 있으며 절차 중에 가까운 곳에 묶을 수 있습니다.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Immunization of Alpacas (Lama pacos) with Protein Antigens and Production of Antigen-specific Single Domain Antibodies

Directed Protein Packaging within Outer Membrane Vesicles from Escherichia coli: Design, Production and Purification

Directed Protein Packaging within Outer Membrane Vesicles from Escherichia coli: Design, Production and Purification

에서 외부 막 소포 내에서 감독 단백질 포장<em&gt; 대장균</em&gt; : 디자인, 생산 및 정제

An increasing interest in applying synthetic biology techniques to program outer membrane vesicles (OMV) are leading to some very interesting and unique ...

연구

생화학

Force Spectroscopy of Single Protein Molecules Using an Atomic Force Microscope

원자 힘 현미경을 사용 하 여 단일 단백질 분자 힘 분광학

The determination of the folding process of proteins from their amino acid sequence to their native 3D structure is an important problem in biology. ...

Method for Efficient Refolding and Purification of Chemoreceptor Ligand Binding Domain

효율적인 Refolding 및 Chemoreceptor Ligand 바인딩 도메인의 정화 방법

Identification of natural ligands of chemoreceptors and structural studies aimed at elucidation of the molecular basis of the ligand specificity can be ...

Covalent Immobilization of Proteins for the Single Molecule Force Spectroscopy

단일 분자 힘 분광학에 대 한 단백질의 화학식 동원 정지

In recent years, atomic force microscopy (AFM) based single molecule force spectroscopy (SMFS) extended our understanding of molecular properties and ...

Crystal Structure of the N-terminal Domain of Ryanodine Receptor from Plutella xylostella

Crystal Structure of the N-terminal Domain of Ryanodine Receptor from Plutella xylostella

N 맨끝 도메인의 Ryanodine 수용 체 이용한 배 xylostella 에서 결정 구조

Development of potent and efficient insecticides targeting insect ryanodine receptors (RyRs) has been of great interest in the area of agricultural pest ...

Analysis of Protein Folding, Transport, and Degradation in Living Cells by Radioactive Pulse Chase

단백질 폴딩, 전송, 및 방사성 펄스 체이스 하 여 살아있는 세포의 저하의 분석

Radioactive pulse-chase labeling is a powerful tool for studying the conformational maturation, the transport to their functional cellular location, and ...

Expression, Purification, Crystallization, and Enzyme Assays of Fumarylacetoacetate Hydrolase Domain-Containing Proteins

Fumarylacetotate 하이드로 아세테이트 도메인 함유 단백질의 발현, 정제, 결정화 및 효소 어세포

Fumarylacetoacetate hydrolase (FAH) domain-containing proteins (FAHD) are identified members of the FAH superfamily in eukaryotes. Enzymes of this ...

Production, Crystallization, and Structure Determination of the IKK-binding Domain of NEMO

NEMO의 IKK 결합 도메인의 생산, 결정화 및 구조 결정

NEMO is a scaffolding protein which plays an essential role in the NF-&#954;B pathway by assembling the IKK-complex with the kinases IKK&#945; and ...

Production of Dynein and Kinesin Motor Ensembles on DNA Origami Nanostructures for Single Molecule Observation

단일 분자 관찰을 위한 DNA 종이 접기 나노 구조에 다인 및 키네신 모터 앙상블 생산

Cytoskeletal motors are responsible for a wide variety of functions in eukaryotic cells, including mitosis, cargo transport, cellular motility, and ...