Name: immunization of alpacas (lama pacos) with protein antigens and production of antigen-specific single domain antibodies
Uploaded: 2019-01-26T12:30:00
Duration: 5 min 27 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Immunization of Alpacas Lama pacos with Protein Antigens and Production of Antigen-specific Single Domain Antibodies at JoVE.com

Este trabajo fue financiado por los institutos nacionales de salud (P30GM103486).

<ol>
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Los doctores Whiteheart y Hersh en la Universidad de Kentucky y funcionan un núcleo en el centro de Medicina Molecular que produce anticuerpos de dominio único en alpaca como un cargo por servicio.

Como se señaló, la alta afinidad y especificidad de anticuerpos de dominio único, combinado con su fácil expresión y estabilidad, hacen reactivos ideal para las aplicaciones en la investigación biomédica, como reactivos bioquímicos críticos, herramientas de diagnóstico, o agentes terapéuticos18. Para aplicaciones comerciales, hay alguna propiedad intelectual relacionados con las cuestiones que debe considerarse. Además, anticuerpos de dominio único pueden ser diseñados para contener marcadores específicos o etiquetas que pueden usarse como reporteros en ensayos celulares o en el diagnóstico. La clave para estos usos es la capacidad de producir anticuerpos de dominio único específicos contra los antígenos de interés. Un método se describe aquí para producir anticuerpos de dominio único con alpacas, que produce una respuesta inmune robusta contra una amplia variedad de antígenos de la proteína. Se describen las consideraciones para el manejo de animales y el cumplimiento. Estas son clave para el éxito en esta parte del proceso.
Hay otras estrategias para la producción de anticuerpos de dominio único que no requieren la vacuna, pero en su lugar, utilice las bibliotecas semisintéticas con diferentes sistemas para la selección y optimización iterativo de afinidades19,20 . Sin embargo, la ventaja de usar bibliotecas derivadas animales vacunados es la capacidad de aislar confiablemente anticuerpos de dominio único altamente enriquecido, diversa y alta afinidad. Además, no sólo se observan variaciones de secuencia significativa, pero una mayoría significativa de anticuerpos de dominio único específico aislado tenía únicas inserciones y canceladuras, particularmente en CDR3.
Dominio adicional, solo los anticuerpos se pueden producir mediante un proceso sencillo que sólo requiere pequeñas inyecciones del antígeno y después de este proceso, los animales pueden devolverse a la manada. De nota, el animal puede utilizar libremente para la producción de fibra, pero debe excluirse del uso como carne (cadena de alimento humana) debido al uso de la prueba de antígenos y adyuvantes aprobados FDA no para la producción de anticuerpos de dominio único. Cuando haya completado el procedimiento, los animales deben ser supervisados para una semana, dado un examen veterinario y luego pueden ser regresó a su hogar granja o descansados durante seis meses antes de otra ronda de producción de anticuerpos de dominio único.

Alpacas y otros miembros de la familia de los camélidos, se han convertido en una fuente popular para generar anticuerpos para investigación biomédica1,2,3. Camélidos tienen un sistema inmunológico único que producen anticuerpos normales así como de la pesado-cadena sólo los anticuerpos que permiten la producción de anticuerpos de dominio único mucho más pequeños, manteniendo alta especificidad y alta afinidad. Anticuerpos de camélidos ofrecen un reactivo versátil útil para una variedad de propósitos. Aquí se describe un método para inmunizar alpaca y producir anticuerpos de dominio único a una variedad de antígenos de la proteína. Estos anticuerpos se pueden producir en camélidos a través de un proceso relativamente sencillo que sólo requiere la inmunización a través de pequeñas inyecciones de la proteína diana (antígeno) y un drenaje de sangre4. Posteriormente, construcción de biblioteca, M13 phage display5 y panorámica frente el antígeno recombinante6 se utiliza para aislar y producir anticuerpos de dominio único con las características deseadas. Porque el proceso toma ventaja del poder de la tecnología de visualización de fagos, cinco o más antígenos se pueden utilizar simultáneamente por animal, reduciendo el número de animales utilizados y los costes asociados.
Típico mamíferos anticuerpos o inmunoglobulinas son moléculas grandes que consisten en dos tipos de cadenas (2 cadenas pesadas y 2 cadenas ligeras), que se unen por enlaces disulfuro. Estos anticuerpos son relativamente grandes, que los pesos moleculares de ~ 140-190 kDa para la especie más abundante de IgG de los seres humanos, ratones, cabras y conejos. Debido a su estructura de multi-subunidades, alto peso molecular y enlaces disulfuro, las inmunoglobulinas pueden ser algo difíciles de producir en grandes cantidades, haciendo su costo alto. En la década de 1990, se descubrió que hacen camélidos, que incluyen camellos, llamas y alpacas, además de la inmunoglobulina de tipo mamífero típico, una forma nueva de la inmunoglobulina que es más simple en estructura, que poseen cadenas pesadas solamente7. Estos anticuerpos únicos camélidos poseen la misma capacidad para atar específicamente sustancias extrañas con alta afinidad, pero sólo se componen de una proteína de cadena8. Además, camélidos anticuerpos pueden truncarse experimentalmente a un fragmento de unidad la VHH aún más pequeño, que también se llama un dominio único anticuerpo9. Debido a su pequeño tamaño, anticuerpos de dominio único son útiles para una amplia gama de aplicaciones de la investigación biomédica y están disponibles en una variedad de fuentes académicas y comerciales1,10. Una excepción parece ser el borrar occidental ya que anticuerpos de dominio único más a menudo dirigidos contra epitopos dependiente de conformación, que generalmente se pierden en las condiciones de desnaturalización en manchas blancas /negras occidentales.
Puesto que se componen de una cadena polipeptídica única, anticuerpos de dominio único específico pueden ser seleccionados y producidos fácilmente en cantidades grandes como proteínas recombinantes en bacterias. Anticuerpos de dominio único también pueden ser genéticamente modificados para contener marcadores específicos o etiquetas que pueden ser utilizadas como "grupos de reportero" para diagnosticar enfermedades11. Esta facilidad de manipulación junto con su flexibilidad de uso hace anticuerpos de dominio único un recurso importante para los investigadores en universidades y otros lugares.
Como parte de un Instituto Nacional de salud base, los métodos existentes se han adaptado a producir anticuerpos de dominio único de alpacas3,4. Alpacas tienen ventajas significativas en tanto facilidad de manejo en relación con los más grandes miembros de la familia camélidos así como accesibilidad. Alpacas se crían extensamente para la fibra y carne y así pueden obtenerse regionalmente de los agricultores locales de alpaca, que pueden ser identificados a través de sus sitios web o a través de asociaciones de criadores de estado. Existen dos razas de alpacas Suri y Huacaya. Huacaya son más comunes y utilizados para este protocolo, pero el protocolo es generalmente aplicable a cualquiera de los dos razas y también más ampliamente aplicable a otros camélidos.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:932px;" width="932">
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:299px;">GERBU FAMA adjuvant</td>
			<td style="width:123px;">Biotechnik, Heidelberg, Germany&#160;</td>
			<td style="width:344px;">3003,6001</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Serum collection tube</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>367983</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Blood collection tube</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>366643</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Vacutainer blood collection set</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>368652</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Maxisorp Immuno plates</td>
			<td>Nunc</td>
			<td>439454</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">BSA</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A7906</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">HRP-conjugated goat anti-llama IgG antibody&#160;</td>
			<td>Bethyl Labs</td>
			<td>A160-100P</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">TMB reagent chromogenic peroxidase substrate&#160;</td>
			<td>KPL</td>
			<td>50-76-03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Plate Reader</td>
			<td>Spectramax</td>
			<td>M5</td>
			<td>Any UV/VIS capable reader is acceptable</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Uni-SepMAXI+ lyphocyte separation tube</td>
			<td>Novamed</td>
			<td>U-17</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">RNeasy Mini Kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>74104</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">QIAshredder column</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>79654</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Superscript IV reverse transcriptase&#160;&#160;</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>18064014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">AEBSF solution</td>
			<td>Biosynth</td>
			<td>A-5440</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">TG1 phage display competent cells</td>
			<td>Lucigen</td>
			<td>60502</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

immunization of alpacas (lama pacos) with protein antigens and production of antigen-specific single domain antibodies

En este manuscrito, un método para la inmunización de alpaca y el uso de métodos de biología molecular para producir anticuerpos de dominio único antígeno-específica es descrito y demostrado. Camélidos, alpacas y llamas, se han convertido en un recurso valioso para la investigación biomédica ya que producen un nuevo tipo de anticuerpo sólo cadena pesado que puede utilizarse para producir anticuerpos de dominio único. Porque el sistema inmune es altamente flexible, anticuerpos de dominio único se pueden hacer a muchos antígenos proteicos diferentes y hasta diferentes conformaciones del antígeno, con un alto grado de especificidad. Estas características, entre otros, hacen anticuerpos de dominio único una herramienta invaluable para la investigación biomédica. Se divulga un método para la producción de anticuerpos de dominio único de alpacas. Se describe un protocolo para la vacunación, recolección de sangre y aislamiento de células B. Las células de B se utilizan para la construcción de una biblioteca inmunizada, que se utiliza en la selección de anticuerpos de dominio único específico vía panorámica. Anticuerpos de dominio único específico supuesto obtenidos vía panorámica son confirmados por pull-down, ELISA y ensayos de cambio de gel. Los anticuerpos de dominio único que pueden utilizarse directamente o como parte de un reactivo de ingeniería. El uso de anticuerpos de dominio único y regentes basados en anticuerpos de dominio único incluye aplicaciones estructurales, bioquímicas, celulares, en vivo y terapéuticas. Anticuerpos de dominio único se pueden producir en grandes cantidades como proteínas recombinantes en sistemas de expresión procariotas, purificados y utilizados directamente o pueden ser diseñados para contener marcadores específicos o etiquetas que pueden usarse como reporteros en estudios celulares o en diagnóstico.

El protocolo presentado aquí fue utilizado para generar anticuerpos de dominio único contra una variedad de antígenos de la proteína. Se utilizaron cinco antígenos por alpaca. Vigilancia inmune indica que la mayoría de los antígenos demostraron principio respuesta robusta en tres semanas (figura 1). Sangrados de la producción y la construcción de la biblioteca después de aproximadamente seis semanas da el mejor balance para los animales tienen múltiples antígenos inyectados. Dos rondas de bateo fueron realizadas para cada antígeno y aisladas colonias proyectadas (figura 2). La secuencia de las colonias positivas había identificado diversos dominio único anticuerpo secuencias para los antígenos diferentes. Por ejemplo, tres únicos clones fueron aislados para el antígeno de referencia maltosa vinculante proteínas (MBP) (Figura 3A). Como se observa con frecuencia, los anticuerpos de dominio único contienen diversidad de secuencia significativa o altamente variable CDR3 longitud (figura 3). Estas características son especialmente importantes en las interacciones antígeno anticuerpo de dominio solo como se ve en la referencia solo dominio anticuerpo/CX3CL1 complejo17 (figura 3B).
La mayoría de las secuencias de anticuerpos de dominio único larga duración puede ser expresada y purificada en 1-10 mg/L de cultivo (Figura 4A). Debido a la diversidad de longitud CDR3, anticuerpos de dominio único diferentes muestran ligera variación en peso molecular. Confirmación de enlace directo y performance específico de las aplicaciones es fundamental. Por ejemplo, después de dos rondas de selección contra el antígeno B, un panel de dominio solo anticuerpos fueron identificados (figura 2). Se identificaron varias secuencias idénticas, y los anticuerpos de dominio único fue producido y purificado. Luego fue había probado mediante extracción directa hacia abajo con la resina de afinidad antígeno y mostró robusto enlace dependiente de la dosis (Figura 4B). Lo importante, los anticuerpos de dominio único no demostraron vinculante para el control de la resina. Estos datos demuestran una interacción directa de la Unión y que está bien adaptado para la captura de afinidad en formato desplegable y basada en ELISA.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58471/58471fig1.jpg"> Figura 1 : Vigilancia inmune representativas de dos antígenos diferentes que muestran la significativa respuesta inmune específica a antígenos distintos en el mismo animal. Muchos antígenos muestran una robusta respuesta tan pronto como tres semanas después de comenzar la inmunización, con la mayoría que muestran respuesta máxima después de seis semanas. Seis semanas también permite la maduración de la afinidad y es el tiempo recomendado para la purga de la producción y el aislamiento de células B. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58471/58471fig1large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58471/58471fig2.jpg"> Figura 2 : Confirmación basada polimerización en cadena de los clones positivos. Imprimaciones abarcan el MCS del vector pMES4, y un clon nanobody positiva produce un amplicón de ~ 500 bp (marcados con *). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58471/58471fig2large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58471/58471fig3.jpg"> Figura 3 : Secuencias específica de antígeno destacan diversidad de anticuerpos de dominio único alpaca. (A) alineación de seleccionar dominio único anticuerpo secuencias aisladas a MBP con un solo dominio referencia anticuerpo 4XT1, con marco y regiones determinantes de complementariedad (Kabat) destacadas a continuación. (B) estructura de alpaca 4XT1 de anticuerpos de dominio único limitado a CX3CL1 (PDB 4XT1), destacando el papel fundamental de CDR variable bucles en el atascamiento del antígeno específico. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58471/58471fig3large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58471/58471fig4.jpg"> Figura 4 : Purificación y validación de anticuerpos de dominio único. (A) SDS-PAGE de anticuerpos de dominio único IMAC purificada, comparación de anticuerpos de dominio único diversos. Distintos pesos moleculares son principalmente debido a la diversa duración del bucle CDR3. También se observan diferentes niveles de expresión, con una minoría de anticuerpos de dominio único con bajos rendimientos de proteína purificada. (B) verificación de enlace directo con afinidad antígeno hacia abajo. Unión de anticuerpos robusto dominio único dependiente de la dosis se observa con la resina de acoplamiento antígeno pero no con resina de control. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58471/58471fig4large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>

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Immunization of Alpacas Lama pacos with Protein Antigens and Production of Antigen-specific Single Domain Antibodies

Inmunización de Alpacas (Lama pacos) con antígenos de la proteína y la producción de anticuerpos de dominio único antígeno específico

Un método para la producción de anticuerpos de dominio único de alpacas, incluyendo vacunación, recolección de sangre, células B aislamiento y selección se describe.

In this manuscript, a method for the immunization of alpaca and the use of molecular biology methods to produce antigen-specific single domain antibodies ...

Los métodos que describimos aquí fueron adoptados por nuestro NIH COBRE patrocinado, University of Kentucky Protein Core Facility para ayudar a los investigadores a producir anticuerpos de un solo dominio en alpacas. Los anticuerpos de un solo dominio son una herramienta importante que se utiliza para responder a preguntas clave en la investigación biomédica. La principal ventaja de las técnicas que demostramos es que permite la producción de anticuerpos de un solo dominio a hasta cinco proteínas distintas en una sola alpaca.Las implicaciones de esta técnica se extienden a la salud humana y al tratamiento de enfermedades, ya que estos anticuerpos de un solo dominio pueden utilizarse como terapias, como vacunas y como diagnósticos. El obstáculo más significativo para la mayoría de los investigadores biomédicos establecidos es el manejo de animales grandes, como la alpaca. La demostración visual del manejo de una alpaca, la inyección de antígenos y la acumulación de sangre son fundamentales para la producción exitosa de anticuerpos de un solo dominio en estos camélidos.Demostrando el procedimiento estarán el Doctor Jeff Smiley, Veterinario De la Universidad, la Sra. Kathy Boaz, Técnico Veterinario, y la Sra. Erin Jones, Técnico de Animales de Laboratorio. El manejo de la sangre será demostrado por el Doctor Martin Chao, Investigador Asociado. Las historias reales de esta producción son Blue Eyes, Big Boy, o cariñosamente conocido como el Gorila, y Freddie, nuestras alpacas de Kentucky.Para empezar, sujeta al animal con un halter y plomo. Luego recorta el cabello de la alpaca con cortadoras eléctricas en un patrón lunar creciente a lo largo de la base de su cuello, de hombro a hombro. Sostenga cuidadosamente la alpaca por la cabeza y el cuello, e inyecte lentamente los antígenos por vía subcutánea con una aguja de calibre 22 a lo largo de la base del cuello, cerca de los ganglios linfáticos del arco.Realizar cinco inyecciones de aproximadamente 200 microlitros cada uno, a unos cinco centímetros de distancia. Después de esto, monitoree al animal durante unos 20 minutos en busca de signos de anafilaxia. Inspeccione el lugar de inyección en busca de inflamación localizada en los lugares de inyección semanalmente.Para extraer sangre, corta el cabello de la alpaca y desinfecta el sitio de recolección con hisopos de alcohol. Sujeta la alpaca suavemente, asegurándote de que el cuello esté erguido y recto. Usando las proyecciones ventrales del proceso transversal de las vértebras como un punto de referencia, ocluir la vena aplicando presión sólo medial al proceso ventral.A continuación, inserte la aguja en un ángulo de 45 grados, ligeramente medial a la proyección, hacia el centro del cuello. Manipule la aguja hasta que fluya la sangre. Primero, diluir 15 mililitros de sangre recolectada con cinco mililitros de PBS.Luego, pipetea sangre en un tubo de separación de linfocitos para aislar linfocitos sanguíneos periféricos, o PBL, a través de la centrifugación de gradiente de densidad. Retire suavemente la capa plasmática superior, guardándola en un tubo separado. A continuación, retire suavemente la capa PBL y transfiérala a un tubo estéril de 50 mililitros.Agregue 45 mililitros de PBS preenfriados a los PBL y gire el tubo durante 20 minutos a 800 veces G y cuatro grados Centígrados. Retire el sobrenadante con una pipeta, dejando el pellet que contiene los linfocitos. Lave el pellet dos veces más con cinco mililitros de PBS pre-refrigerados para preparar los PBL para el aislamiento de ARN.Con este protocolo, se generaron anticuerpos de un solo dominio contra una gama de antígenos proteicos. El monitoreo inmune indicó que la mayoría de los antígenos mostraron una respuesta robusta a partir de las tres semanas, y que el momento óptimo para obtener sangre es en seis semanas. La secuenciación de las colonias positivas identificó diversas secuencias de anticuerpos de un solo dominio para diferentes antígenos.Por ejemplo, tres colonias únicas se aislaron a la proteína de unión a la maltosa del antígeno de referencia. Generalmente, los anticuerpos de un solo dominio contenían una diversidad de secuencia significativa y una longitud muy variable de bucles de unión a antígenos. Estas características son particularmente importantes en las interacciones de antígenos de anticuerpos de un solo dominio.Este procedimiento permite la producción de anticuerpos de un solo dominio para hasta cinco antígenos por animal. Una sola colección de sangre, y la construcción de la biblioteca, se utiliza para cada animal. Con la selección basada en la pantalla del fago utilizada para identificar anticuerpos de cadena única específicos del antígeno.Mientras se hacen las inyecciones de antígeno y el muestreo de sangre, es importante mantener las alpacas en un grupo, lo que los mantiene más tranquilos. Esto se puede hacer usando halters y leads, y atando en las proximidades durante los procedimientos.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Immunization of Alpacas (Lama pacos) with Protein Antigens and Production of Antigen-specific Single Domain Antibodies

Directed Protein Packaging within Outer Membrane Vesicles from Escherichia coli: Design, Production and Purification

Directed Protein Packaging within Outer Membrane Vesicles from Escherichia coli: Design, Production and Purification

Dirigida Packaging de proteínas dentro de la membrana externa de vesículas de<em&gt; Escherichia coli</em&gt;: Diseño, Producción y Purificación

An increasing interest in applying synthetic biology techniques to program outer membrane vesicles (OMV) are leading to some very interesting and unique ...

Investigación

Bioquímica

Force Spectroscopy of Single Protein Molecules Using an Atomic Force Microscope

Espectroscopia de la fuerza de las moléculas de proteína sola utilizando un microscopio de fuerza atómica

The determination of the folding process of proteins from their amino acid sequence to their native 3D structure is an important problem in biology. ...

Method for Efficient Refolding and Purification of Chemoreceptor Ligand Binding Domain

Método para Refolding eficiente y la purificación del quimioreceptor ligando vinculante dominio

Identification of natural ligands of chemoreceptors and structural studies aimed at elucidation of the molecular basis of the ligand specificity can be ...

Covalent Immobilization of Proteins for the Single Molecule Force Spectroscopy

Inmovilización covalente de las proteínas para la espectroscopia de fuerza sola molécula

In recent years, atomic force microscopy (AFM) based single molecule force spectroscopy (SMFS) extended our understanding of molecular properties and ...

Crystal Structure of the N-terminal Domain of Ryanodine Receptor from Plutella xylostella

Crystal Structure of the N-terminal Domain of Ryanodine Receptor from Plutella xylostella

Estructura cristalina del dominio N-terminal del Receptor de rianodina de Plutella xylostella

Development of potent and efficient insecticides targeting insect ryanodine receptors (RyRs) has been of great interest in the area of agricultural pest ...

Analysis of Protein Folding, Transport, and Degradation in Living Cells by Radioactive Pulse Chase

Análisis del plegamiento de la proteína, el transporte y degradación en las células vivas por pulso radiactivo Chase

Radioactive pulse-chase labeling is a powerful tool for studying the conformational maturation, the transport to their functional cellular location, and ...

Expression, Purification, Crystallization, and Enzyme Assays of Fumarylacetoacetate Hydrolase Domain-Containing Proteins

Expresión, purificación, cristalización y ensayos enzimáticos de proteínas que contienen el dominio de la hidrolasa fumarilacetoacetato

Fumarylacetoacetate hydrolase (FAH) domain-containing proteins (FAHD) are identified members of the FAH superfamily in eukaryotes. Enzymes of this ...

Production, Crystallization, and Structure Determination of the IKK-binding Domain of NEMO

Producción, cristalización y determinación de la estructura del dominio vinculante iKK de NEMO

NEMO is a scaffolding protein which plays an essential role in the NF-&#954;B pathway by assembling the IKK-complex with the kinases IKK&#945; and ...

Production of Dynein and Kinesin Motor Ensembles on DNA Origami Nanostructures for Single Molecule Observation

Producción de Conjuntos de Motores de Dynein y Kinesin en Nanoestructuras de Origami de ADN para Observación de MoléculaS Simples

Cytoskeletal motors are responsible for a wide variety of functions in eukaryotic cells, including mitosis, cargo transport, cellular motility, and ...

Creating Highly Specific Chemically Induced Protein Dimerization Systems by Stepwise Phage Selection of a Combinatorial Single-Domain Antibody Library

Creación de sistemas de dimerización de proteínas altamente específicos inducidos químicamente por la selección de fagos escalonados de una biblioteca combinatoria de anticuerpos de un solo dominio