Name: an in vitro model of a parallel-plate perfusion system to study bacterial adherence to graft tissues
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00
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इस अध्ययन के एक अनुदान द्वारा प्रायोजित किया गया था अनुसंधान कोष कू Leuven (OT/14/097) आरएच को दी । TRV FWO रिसर्च फाउंडेशन के Postdoctoral फेलो थे-Flanders (बेल्जियम; अनुदान संख्या-12K0916N) और आरएच UZ Leuven के नैदानिक अनुसंधान कोष द्वारा समर्थित है ।

1. के लिए भ्रष्टाचार के ऊतकों की तैयारी इन विट्रो अध्ययन
नोट: तीन प्रकार के ऊतकों का उपयोग किया गया: गोजातीय पेरीकार्डियम पैच (बीपी), Cryopreserved Homograft (CH) और गोजातीय Jugular नस भ्रष्टाचार (BJV) । BJV नाली और CH के म...

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	<li>Que, Y. A., Moreillon, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infective+endocarditis.">Infective endocarditis.</a> Nature Reviews Cardiology. 8 (6), 322-336 (2011).</li><li>Werdan, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+infective+endocarditis:+pathogen-host+interaction+and+risk+states.">Mechanisms of infective endocarditis: pathogen-host interaction and risk states.</a> Nature Reviews Cardiology. 11 (1), 35-50 (2014).</li><li>Moreillon, P., Que, Y. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infective+endocarditis.">Infective endocarditis.</a> The Lancet. 363 (9403), 139-149 (2004).</li><li>Jalal, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+propensity+of+bovine+jugular+vein+material+to+bacterial+adhesions:+An+in+vitro+study.">Selective propensity of bovine jugular vein material to bacterial adhesions: An in vitro study.</a> International Journal of Cardiology. 198, 201-205 (2015).</li><li>Sharma, A., Cote, A. T., Hosking, M. C. K., Harris, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Systematic+Review+of+Infective+Endocarditis+in+Patients+With+Bovine+Jugular+Vein+Valves+Compared+With+Other+Valve+Types.">A Systematic Review of Infective Endocarditis in Patients With Bovine Jugular Vein Valves Compared With Other Valve Types.</a> JACC Cardiovascular Interventions. 10 (14), 1449-1458 (2017).</li><li>Malekzadeh-Milani, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incidence+and+predictors+of+Melody(R)+valve+endocarditis:+a+prospective+study.">Incidence and predictors of Melody(R) valve endocarditis: a prospective study.</a> Archives of Cardiovascular Diseases. 108 (2), 97-106 (2015).</li><li>Hill, E. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Management+of+prosthetic+valve+infective+endocarditis.">Management of prosthetic valve infective endocarditis.</a> American Journal of Cardiology. 101 (8), 1174-1178 (2008).</li><li>Claes, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clumping+factor+A,+von+Willebrand+factor-binding+protein+and+von+Willebrand+factor+anchor+Staphylococcus+aureus+to+the+vessel+wall.">Clumping factor A, von Willebrand factor-binding protein and von Willebrand factor anchor Staphylococcus aureus to the vessel wall.</a> Journal of Thrombosis and Haemostasis. 15 (5), 1009-1019 (2017).</li><li>Fowler, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+invasion+by+Staphylococcus+aureus+involves+a+fibronectin+bridge+between+the+bacterial+fibronectin-binding+MSCRAMMs+and+host+cell+beta1+integrins.">Cellular invasion by Staphylococcus aureus involves a fibronectin bridge between the bacterial fibronectin-binding MSCRAMMs and host cell beta1 integrins.</a> European Journal of Cell Biology. 79 (10), 672-679 (2000).</li><li>Patti, J. M., Hook, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbial+adhesins+recognizing+extracellular+matrix+macromolecules.">Microbial adhesins recognizing extracellular matrix macromolecules.</a> Current Opinion in Cell Biology. 6 (5), 752-758 (1994).</li><li>Massey, R. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibronectin-binding+protein+A+of+Staphylococcus+aureus+has+multiple,+substituting,+binding+regions+that+mediate+adherence+to+fibronectin+and+invasion+of+endothelial+cells.">Fibronectin-binding protein A of Staphylococcus aureus has multiple, substituting, binding regions that mediate adherence to fibronectin and invasion of endothelial cells.</a> Cellular Microbiology. 3 (12), 839-851 (2001).</li><li>Jashari, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Belgian+and+European+experience+with+the+European+Homograft+Bank+(EHB)+cryopreserved+allograft+valves--assessment+of+a+20+year+activity.">Belgian and European experience with the European Homograft Bank (EHB) cryopreserved allograft valves--assessment of a 20 year activity.</a> Acta Chirurgica Belgica. 110 (3), 280-290 (2010).</li><li>Cheatham, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+and+hemodynamic+outcomes+up+to+7+years+after+transcatheter+pulmonary+valve+replacement+in+the+US+melody+valve+investigational+device+exemption+trial.">Clinical and hemodynamic outcomes up to 7 years after transcatheter pulmonary valve replacement in the US melody valve investigational device exemption trial.</a> Circulation. 131 (22), 1960-1970 (2015).</li><li>Que, Y. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibrinogen+and+fibronectin+binding+cooperate+for+valve+infection+and+invasion+in+Staphylococcus+aureus+experimental+endocarditis.">Fibrinogen and fibronectin binding cooperate for valve infection and invasion in Staphylococcus aureus experimental endocarditis.</a> The Journal of Experimental Medicine. 201 (10), 1627-1635 (2005).</li><li>Veloso, T. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+adherence+to+graft+tissues+in+static+and+flow+conditions.">Bacterial adherence to graft tissues in static and flow conditions.</a> The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 155 (1), 325-332 (2018).</li><li>Liesenborghs, L., Verhamme, P., Vanassche, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Staphylococcus+aureus,+master+manipulator+of+the+human+hemostatic+system.">Staphylococcus aureus, master manipulator of the human hemostatic system.</a> Journal of Thrombosis and Haemostasis. 16 (3), 441-454 (2018).</li><li>Chiu, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shear+stress+increases+ICAM-1+and+decreases+VCAM-1+and+E-selectin+expressions+induced+by+tumor+necrosis+factor-[alpha]+in+endothelial+cells.">Shear stress increases ICAM-1 and decreases VCAM-1 and E-selectin expressions induced by tumor necrosis factor-[alpha] in endothelial cells.</a> Artheriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 24 (1), 73-79 (2004).</li><li>Jockenhoevel, S., Zund, G., Hoerstrup, S. P., Schnell, A., Turina, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiovascular+tissue+engineering:+a+new+laminar+flow+chamber+for+in+vitro+improvement+of+mechanical+tissue+properties.">Cardiovascular tissue engineering: a new laminar flow chamber for in vitro improvement of mechanical tissue properties.</a> ASAIO Journal. 48 (1), 8-11 (2002).</li><li>Veltrop, M. H. A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+Species-+and+Strain-Dependent+Induction+of+Tissue+Factor+in+Human+Vascular+Endothelial+Cells.">Bacterial Species- and Strain-Dependent Induction of Tissue Factor in Human Vascular Endothelial Cells.</a> Infection and Immunity. 67 (11), 6130-6138 (1999).</li></ol>

हाल ही में नैदानिक टिप्पणियों RVOT6,13के वाल्व प्रतिस्थापन आया रोगियों में एक जटिलता के रूप में IE के लिए विशेष जागरूकता दे । IE में प्रत्यारोपित वाल्व की शिथिलता अंतर्वाहिकी व्यापक भड?...

Staphylococcus aureus (एस aureus) डाह रणनीतियों की एक किस्म को रोजगार के लिए मेजबान प्रतिरक्षा रक्षा प्रणाली बस्तियां जैविक या गैर जैविक मानव संचलन में प्रत्यारोपित सतहों दरकिनार, जो गंभीर intravascular संक्रमण की ओर जाता है जैसे पूति और यानी1,2,3,4,5. IE एक महत्वपूर्ण कृत्रिम हृदय वाल्व के आरोपण के बाद रोगियों में जुड़े जटिलता उपचार जबकि व्यक्तिगत IEare की शुरुआत करने के लिए योगदान कारक अभी तक पूरी तरह से6,7समझ नहीं रहता है । प्रवाह की स्थिति के तहत, बैक्टीरिया कतरनी बलों, जो वे क्रम में जहाज की दीवार8का पालन करने के लिए दूर करने की जरूरत है मुठभेड़ । मॉडल है, जो बैक्टीरिया और कृत्रिम वाल्व ऊतक या प्रवाह के तहत endothelium के बीच एक साथ खेलने का अध्ययन करने की अनुमति, ब्याज के रूप में वे vivo स्थिति में और अधिक प्रतिबिंबित ।
कई विशिष्ट तंत्र endothelial कोशिकाओं को बैक्टीरियल पालन (ईसीएस) और उजागर subendothelial मैट्रिक्स को सुविधाजनक बनाने (ECM) ऊतक औपनिवेशीकरण और वनस्पति की परिपक्वता के लिए अग्रणी, IE9में आवश्यक जल्दी कदम जा रहा है । विभिंन स्ताफ्य्लोकोच्कल सतह प्रोटीन या MSCRAMMs (माइक्रोबियल सतह घटक चिपकने वाला मैट्रिक्स अणुओं को पहचानने) आसंजन के मध्यस्थों के रूप में वर्णित किया गया है कोशिकाओं की मेजबानी और fibronectin जैसे अणुओं के साथ बातचीत से प्रोटीन ECM करने के लिए, फाइब्रिनोजेन, कोलेजन और वॉन Willebrand फैक्टर (VWF)8,10,11। हालांकि, कुछ डाह कारकों के अंतर आणविक तह को ध्यान में रखते हुए, ज्यादातर स्थैतिक स्थितियों में अध्ययन किया, इन बातचीत के कई अंतर्वाहिकी संक्रमण में रक्त परिसंचारी में अलग प्रासंगिकता हो सकता है ।
इसलिए, हम एक इन इन विट्रो समानांतर प्लेट फ्लो चैंबर मॉडल है, जो ECM के विभिंन घटकों और ईसीएस ऊतक RVOT स्थिति में प्रत्यारोपित भ्रष्टाचार के संदर्भ में बैक्टीरियल पालन के आकलन की अनुमति देता में तैयार घर में मौजूद । इस काम में वर्णित विधि के समग्र प्रयोजन के लिए बैक्टीरिया और अंतर्निहित अंतर्वाहिकी ऊतकों के बीच बातचीत के तंत्र का अध्ययन करने के लिए है प्रवाह की स्थिति है, जो बारीकी से कर रहे हैं से संबंधित में vivo वातावरण के रूप में रक्त रोगजनकों एस. aureus. इस उपंयास दृष्टिकोण भ्रष्टाचार ऊतक की संवेदनशीलता पर ध्यान केंद्रित करने के जीवाणु पालन के लिए IE के विकास के लिए संभावित जोखिम कारकों की पहचान सतहों ।

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	<tbody>
		<tr>
			<td>Bovine Pericardium (BP) patch, Supple Peri-Guard Pericardium</td>
			<td>Synovis Surgical Innovations, USA</td>
			<td>PC-0404SN</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Jugular Vein conduits (BJV)</td>
			<td>Contegra conduit; Medtronic Inc, USA</td>
			<td>M333105D001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CH cryopreserved homograft</td>
			<td>European Homograft Bank (EHB)</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acu-Punch</td>
			<td>Acuderm Inc, USA</td>
			<td>P850 (8 mm); P1050 (10 mm)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>human Albumin</td>
			<td>Flexbumin; Baxter, Belgium</td>
			<td>BE171464 
			LOT:16G12C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tryptic soy broth (TSB)</td>
			<td>Fluka, Steinheim, Germany</td>
			<td>22092-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heart infusion broth (BHI)</td>
			<td>Fluka</td>
			<td>53286-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline (PBS).</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14190-094</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5(6)-Carboxyfluorescein N-hydroxysuccinimide ester (CF)</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Germany</td>
			<td>21878-100MG-F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peristaltic pump (MODEL ISM444B)</td>
			<td>Ismatec BVP-Z Standard; Cole Parmer, Wertheim, Germany</td>
			<td>631942-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sonication bath</td>
			<td>VWR Ultrasonic Cleaner; VWR, Radnor, Pa</td>
			<td>142-6044</td>
			<td>230V/50 -60Hz 60VA; HF45kHz, 30W</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ProLong Gold Antifade Mountant</td>
			<td>Invitrogen by ThermoFisher</td>
			<td>P36930</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>InCell Analyzer 2000 (fluorescence scanner)</td>
			<td>GE Healthcare Life Sciences, Pittsburgh, Pa</td>
			<td>29027886</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Arium Pro VF - ultrapure water - H2O MilliQ</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>87206462</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscopic slides - Tissue Culture Chambers (1-well)</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>94.6140.102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1-well on Lumox detachable</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>94.6150.101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless Steel - surgical Blades</td>
			<td>Swann-Morton</td>
			<td>311</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tygon Silicone Tubing, 1/8&#34;ID x 1/4&#34;OD</td>
			<td>Cole-Parmer</td>
			<td>EW-95702-06</td>
			<td>Temperature range: &#8211;80 to 200&#176;C 
			Sterilize: With ethylene oxide, gamma irradiation, or autoclave for 30 min, 15 psi of pressure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PharMed BPT Tubing</td>
			<td>Saint-Gobain</td>
			<td>AY242012</td>
			<td>Autoclavable 30 min at 121&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tygon LMT-55 Tubing</td>
			<td>Saint Gobain Performance Plastics&#8482;</td>
			<td>15312022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermostat</td>
			<td>BMG BIOMEDIZINTECHNIK</td>
			<td>300-0042</td>
			<td>230V, 90VA, 50Hz</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an in vitro model of a parallel-plate perfusion system to study bacterial adherence to graft tissues

विभिन्न वाल्वों नाली और स्टेंट-घुड़सवार वाल्व जन्मजात हृदय रोग के साथ रोगियों में सही वेंट्रिकुलर बहिर्वाह पथ (RVOT) वाल्व प्रतिस्थापन के लिए उपयोग किया जाता है । जब कृत्रिम सामग्री का उपयोग हालांकि, इन भ्रष्टाचार जीवाणु संक्रमण और विभिंन मेजबान प्रतिक्रियाओं के लिए अतिसंवेदनशील होते हैं ।
बैक्टीरिया और मेजबान कारकों है कि सूक्ष्मजीवों के अंतर्वाहिकी पालन में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभा की पहचान के लिए बेहतर संक्रमण की शुरुआत के pathophysiology ऐसे संक्रामक अन्तर्हृद्शोथ (IE) के रूप में समझने के लिए और निवारक विकसित करने के लिए महत्व का है रणनीतियों. इसलिए, सक्षम मॉडल के विकास के लिए शारीरिक कतरनी शर्तों के तहत बैक्टीरियल आसंजन की जांच के लिए आवश्यक है । यहां, हम एक नए के उपयोग का वर्णन इन विट्रो छिड़काव चैंबर में डिजाइन समानांतर प्लेटों के आधार पर कि ऐसे उजागर extracellular मैट्रिक्स, endothelial कोशिकाओं और निष्क्रिय क्षेत्रों के रूप में भ्रष्टाचार के ऊतकों के विभिंन घटकों के जीवाणु पालन के अध्ययन की अनुमति देता है . इस विधि के साथ संयुक्त कॉलोनी बनाने इकाई (CFU) गिनती प्रवाह के तहत बैक्टीरियल आसंजन के प्रति भ्रष्टाचार सामग्री की प्रवृत्ति का मूल्यांकन करने के लिए पर्याप्त है । इसके अलावा, प्रवाह चैंबर प्रणाली कतरनी शर्तों के तहत बैक्टीरियल आसंजन में रक्त घटकों की भूमिका की जांच करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है । हम का प्रदर्शन किया है कि ऊतक के स्रोत, उनकी सतह आकृति विज्ञान और जीवाणु प्रजातियों विशिष्टता हमारे में घर बनाया इन विट्रो छिड़काव मॉडल का उपयोग करके भ्रष्टाचार के ऊतकों के लिए बैक्टीरियल पालन में प्रमुख कारकों का निर्धारण नहीं कर रहे हैं ।

बेहतर IE विकास के पीछे तंत्र को समझने के लिए, इस मॉडल जीवाणु और ऊतक जुड़े कारकों के मूल्यांकन में सक्षम बनाता है संक्रमण शुरू होने की vivo स्थिति में मौजूद ।
विस्ता...

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An In Vitro Model of a Parallel-Plate Perfusion System to Study Bacterial Adherence to Graft Tissues

हम एक में इन विट्रो प्रवाह चैंबर मॉडल है, जो भ्रष्टाचार के ऊतकों को बैक्टीरियल पालन की जांच की अनुमति देता में डिजाइन घर का वर्णन ।

एक में इन विट्रो मॉडल एक समानांतर प्लेट छिड़काव प्रणाली के जीवाणु पालन के लिए भ्रष्टाचार के ऊतकों का अध्ययन करने के लिए

Various valved conduits and stent-mounted valves are used for right ventricular outflow tract (RVOT) valve replacement in patients with congenital heart ...

यह विधि संक्रमित एंडोकार्डाइटिस के रोगजनन में महत्वपूर्ण प्रश्नों का उत्तर देने में मदद कर सकती है, और बैक्टीरिया, रक्त कोशिकाओं और अंडोथेलियल कोशिकाओं के बीच परस्पर क्रिया जैसे क्षेत्रों के माध्यम से पाथोबिओग्राम मांसपेशी अस्तर । इस तकनीक का मुख्य लाभ यह है कि ऊतक ग्राफ्ट सीधे विभिन्न लक्ष्यों, जैसे बैक्टीरिया, प्लेटलेट्स और मानकीकृत प्रवाह स्थितियों में प्रोटीन के साथ पारस्परिक बातचीत के संपर्क में आ सकते हैं। इस तकनीक का निहितार्थ संक्रमित एंडोकार्डाइटिस की हमारी चिकित्सा तक विस्तारित होता है, क्योंकि यह महत्वपूर्ण आणविक बातचीत और कुछ ऊतकों की उच्च संक्रमितता ड्राइविंग कारकों को सुलझाना कर सकता है।यह विधि वनस्पति गठन के रोगजनन में अंतर्दृष्टि प्रदान करती है। यह संवहनी पारियता, कोशिका गतिशीलता, और जीन सेल अभिव्यक्ति की जांच अध्ययनों में भी लागू हो सकता है। प्रोटोकॉल शुरू करने के लिए, बैक्टीरियल निलंबन से संपर्क करने के लिए, पहले से तैयार ऊतक बायोप्सी 10 मिलीमीटर व्यास में रखें, और एक माइक्रोस्कोप स्लाइड और आठ मिलीमीटर परिपत्र छिद्र के बीच एक ही मोटाई, और आंतरिक सतह के साथ एक रबर गैसकेट का सामना करना पड़ रहा है।धारक में रखे जाने के दौरान ऊतक भ्रष्टाचार अभिविन्यास पर ध्यान केंद्रित करें। सुनिश्चित करें कि ऊतक की आंतरिक सतह पहले से ही रक्तप्रवाह के चेहरे को उजागर करने के लिए अपने प्रयोगात्मक माध्यम से संपर्क करें । इसके बाद, अपने धारक को टिश्यू के साथ गैसकेट शीट में डालें जो चैंबर के नीचे धातु फ्रेम में एम्बेडेड है।पहले डाले गए ऊतक धारक के साथ कक्ष के नीचे संबंधित गैसकेट शीट के साथ ऊपरी धातु फ्रेम संलग्न करें। फिर आठ शिकंजा और पेंच पागल के साथ पूरे कक्ष माउंट। सुनिश्चित करें कि कक्ष की ऊंचाई हमेशा एक कैलिपर या शासक का उपयोग करके ग्राफ्ट में समान होती है।अगले एक पेरिस्टाल्टिक पंप के साथ प्रवाह कक्ष कनेक्ट। इसके बाद 400 मिलीलीटर फ्लूइड जलाशय को ट्यूबों से जोड़ें। सात फ्लोरोसेंटी लेबल वाली कॉलोनी में दस से सात फ्लोरोसेंटी लेबल वाली कॉलोनी के 100 मिलीलीटर निलंबन वाले ऊतकों को प्रति वर्ग सेंटीमीटर तीन भोजन के सरासर तनाव के साथ और पेरिस्टाल्टिक पंप और बैक्टीरियल जलाशय का उपयोग करके एक घंटे के लिए प्रति मिनट चार मिलीलीटर की इसी प्रवाह दर के साथ लेबल किया गया है।एक ही संग्रह जलाशय का उपयोग करके लगातार 100 मिलीलीटर बैक्टीरियल निलंबन को फिर से प्रसारित करें। परफ्यूजन के बाद, भ्रष्टाचार को जारी करने के लिए कक्ष को खत्म करें। ऊतक टुकड़ा दो बार एक 12 अच्छी तरह से तीन मिनट के लिए एक कक्षीय शेखर का उपयोग कर 12 अच्छी तरह से थाली में PBS के चार मिलीलीटर के साथ धो ।फिर एक छोटे व्यास के साथ एक त्वचा बायोप्सी पंच का उपयोग कर भ्रष्टाचार के भीतरी हिस्से में कटौती। प्रत्येक ऊतक बायोप्सी को एक अलग 14 मिलीलीटर ट्यूब में रखें जिसमें बाँझ 0.9% सोडियम क्लोराइड का एक मिलीलीटर होता है। 10 मिनट के लिए एक सोनीशन स्नान का उपयोग कर ऊतक से बैक्टीरिया अलग।सोनीशन के बाद प्राप्त बैक्टीरियल सस्पेंशन के सीरियल कमजोर करने के लिए 10 मिलीलीटर बाँझ 0.9% सोडियम क्लोराइड के साथ एक एकल 14 मिलीलीटर ट्यूब तैयार करें। ट्यूब नंबर दो को लेबल करें। प्रोफेशन प्रयोग में लिए गए प्रारंभिक जीवाणु निलंबन के धारावाहिक कमजोर पड़ने के लिए 10 मिलीलीटर बाँझ 0.9% सोडियम क्लोराइड के साथ तीन 14 मिलीलीटर ट्यूब तैयार करें।ट्यूब नंबर तीन, नंबर चार और नंबर पांच को लेबल करें। इसके बाद, तीन एगर प्लेटें सुरक्षित करें, एक बैक्टीरियल परफ्यूजन के लिए, एक पीबीएस के नियंत्रण परफ्यूजन के लिए, और तीसरा प्रारंभिक बैक्टीरियल निलंबन के लिए जो परफ्यूजन के लिए उपयोग किया जाता है। ऊतक प्रयोग के लिए प्रति प्लेट तीन क्षेत्रों को निम्नलिखित तरीके से लेबल करें: 10-1, 10-3, और 10-4।बैक्टीरियल परफ्यूसिंग में कॉलोनी बनाने वाली इकाइयों की संख्या गिनने के लिए, प्लेट को इस प्रकार लेबल करें: 10-1, 10-3, 10-5, और 10-7। भंवर 15 सेकंड के लिए ऊतक बायोप्सी युक्त ट्यूब, धारावाहिक कमजोर पड़ने बनाने के लिए । सीरियल कमजोर करने की तैयारी के लिए ट्यूब नंबर एक के 100 माइक्रोलीटर को ट्यूब नंबर दो में ट्रांसफर करें और घोल को अच्छी तरह से मिक्स करने के लिए ट्यूब को भंवर से निकालें।आगर प्लेट के 10-1 और 10-3 संबंधित क्षेत्रों पर ट्यूब नंबर एक और नंबर दो की सामग्री के 100 माइक्रोलीटर फैलाएं। इसके बाद सेक्टर 10 चार पर ट्यूब नंबर दो के 10 माइक्रोलीटर फैलाए। 10 माइक्रोलीटर की प्रत्येक मात्रा से चार अलग-अलग वृद्धि प्राप्त करने के लिए इस चरण को चार बार दोहराएं।प्रारंभिक संस्कृति के धारावाहिक कमजोर पड़ने को तैयार करने के लिए, पहले 15 सेकंड के लिए कमजोर पड़ने को भंवर और बैक्टीरियल सस्पेंशन के 100 माइक्रोलीटर को ट्यूब नंबर तीन में स्थानांतरित करें, और भंवर द्वारा सख्ती से मिलाएं। ट्यूब नंबर तीन के 100 माइक्रोलीटर को ट्यूब नंबर चार में डालकर फिर से मिलाएं। ट्यूब नंबर चार से ट्यूब नंबर पांच के लिए प्रक्रिया दोहराएं।ट्यूब नंबर तीन, नंबर चार, नंबर पांच, और लेबल प्रारंभिक संस्कृति की सामग्री के १०० माइक्रोलीटर क्रमशः 10-3, 10-5, 10-7, और रक्त आगर प्लेट के 10-1 क्षेत्रों पर फैल । आमतौर पर 10 मिनट के लिए, जीवाणु फैलता है, हवा सूखी करने के लिए लेमिनार हुड के नीचे रक्त आगर प्लेटों छोड़ दें । बाद में, रात भर के इनक्यूबेशन के लिए ३७ डिग्री सेल्सियस पर प्लेटें रखें ।रात भर इनक्यूबेशन के बाद, सीएफयू की संख्या प्राप्त करने के लिए बैक्टीरियल कॉलोनियों की गणना करें। सरासर तनाव की स्थिति में, विभिन्न भ्रष्टाचार ऊतकों में इसी तरह के जीवाणु लगाव स्टेफिलोकोकस ऑरियस और स्टेफिलोकोकस एपिडर्मिस संक्रमण दोनों के लिए देखा गया था। प्रक्रियाओं के बाद, स्ट्रेप्टोकोकस सांगुइनिस ने गोजातीय पेरिकार्डियम पैच की तुलना में गोजातीय जुगुलर नस की दीवार के पालन में महत्वपूर्ण कमी प्रदर्शित की।बैक्टीरिया की तीन प्रजातियों की तुलना करते समय, स्ट्रेप्टोकोकस सांगुइनिस स्टेफिलोकोकस ऑरियस और स्टेफिलोकोकस एपिडर्मिस के संबंध में गोजातीय जुगुलर नस की दीवार के लिए काफी कम आसंजन प्रस्तुत करता है। इस प्रक्रिया का प्रयास करते समय, एक ही सिर के सही ऊतकों को तैयार करना याद रखना महत्वपूर्ण है। यह सभी प्रयोग नमूनों में समान स्थितियों को सुनिश्चित करेगा और प्रयोगों की विभिन्न श्रृंखलाओं के बीच डेटा परिवर्तनशीलता को कम करेगा ।इसके विकास के बाद, यह तकनीक शोधकर्ताओं को चिकित्सा स्थिति के करीब पूर्ण जटिलता का निर्माण करने के लिए विभिन्न तत्वों के साथ अपने इन विट्रो मॉडल दृष्टिकोणों को समृद्ध करके कदम दर कदम जटिल विकार प्रणालियों का पता लगाने की अनुमति देती है।

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

An In Vitro Model of a Parallel-Plate Perfusion System to Study Bacterial Adherence to Graft Tissues

A Novel Ex Ovo Banding Technique to Alter Intracardiac Hemodynamics in an Embryonic Chicken System

A Novel Ex Ovo Banding Technique to Alter Intracardiac Hemodynamics in an Embryonic Chicken System

एक उपन्यास<em&gt; पूर्व ओवो</em&gt; बैंडिंग तकनीक एक भ्रूण चिकन प्रणाली में इंट्राकार्डियक hemodynamics को बदलने के लिए

The new model presented here can be used to understand the influence of hemodynamics on specific cardiac developmental processes, at the cellular and ...

Development of an Ethanol-induced Fibrotic Liver Model in Zebrafish to Study Progenitor Cell-mediated Hepatocyte Regeneration

Zebrafish में एक इथेनॉल प्रेरित fibrotic लिवर मॉडल के विकास का अध्ययन करने के पूर्वज सेल की मध्यस्थता Hepatocyte पुनर्जनन

Sustained liver fibrosis with continuation of extracellular matrix (ECM) protein build-up results in the loss of cellular competency of the liver, leading ...

In Vitro and In Vivo Models to Study Corneal Endothelial-mesenchymal Transition

In Vitro and In Vivo Models to Study Corneal Endothelial-mesenchymal Transition

इन विट्रो में और vivo मॉडल में अध्ययन करने के कॉर्नियल Endothelial-mesenchymal संक्रमण

Corneal endothelial cells (CECs) play a crucial role in maintaining corneal clarity through active pumping. A reduced CEC count may lead to corneal edema ...

A 5-mC Dot Blot Assay Quantifying the DNA Methylation Level of Chondrocyte Dedifferentiation In Vitro

A 5-mC Dot Blot Assay Quantifying the DNA Methylation Level of Chondrocyte Dedifferentiation In Vitro

5-एमसी डॉट ब्लाट परख डीएनए मेथिलिकेशन लेवल ऑफ़ चॉन्ड्रोसाइट डिडिएफेनिफिकेशन<em&gt; विट्रो में</em

The dedifferentiation of hyaline chondrocytes into fibroblastic chondrocytes often accompanies monolayer expansion of chondrocytes in vitro. The global ...

Whole-mount Confocal Microscopy for Adult Ear Skin: A Model System to Study Neuro-vascular Branching Morphogenesis and Immune Cell Distribution

पूरे माउंट-वयस्क कान त्वचा के लिए फोकल माइक्रोस्कोप: एक मॉडल प्रणाली न्यूरो संवहनी Morphogenesis और प्रतिरक्षा कोशिका वितरण शाखाओं का अध्ययन करने के लिए

Here, we present a protocol of a whole-mount adult ear skin imaging technique to study comprehensive three-dimensional neuro-vascular branching ...

Organotypic Culture Method to Study the Development Of Embryonic Chicken Tissues

Organotypic संस्कृति विधि भ्रूण चिकन ऊतकों के विकास का अध्ययन करने के लिए

The embryonic chicken is commonly used as a reliable model organism for vertebrate development. Its accessibility and short incubation period makes it ...

A Hyperandrogenic Mouse Model to Study Polycystic Ovary Syndrome

पॉलीसिस्टिक अंडाशय सिंड्रोम का अध्ययन करने के लिए एक Hyperandrogenic माउस मॉडल

Hyperandrogenemia plays a critical role in reproductive and metabolic function in females and is the hallmark of polycystic ovary syndrome. Developing a ...

Assessment of Oxidative Damage in the Primary Mouse Ocular Surface Cells/Stem Cells in Response to Ultraviolet-C (UV-C) Damage

Assessment of Oxidative Damage in the Primary Mouse Ocular Surface Cells/Stem Cells in Response to Ultraviolet-C UV-C Damage

पराबैंगनी-सी (यूवी-सी) क्षति के जवाब में प्राथमिक माउस नेत्र सतह कोशिकाओं/स्टेम सेल में ऑक्सीडेटिव क्षति का आकलन

The ocular surface is subjected to regular wear and tear due to various environmental factors. Exposure to UV-C radiation constitutes an occupational ...

Clonal Genetic Tracing using the Confetti Mouse to Study Mineralized Tissues

खनिजीकृत ऊतकों का अध्ययन करने के लिए Confetti माउस का उपयोग कर क्लोनल आनुवंशिक अनुरेखण

Labeling an individual cell in the body to monitor which cell types it can give rise to and track its migration through the organism or determine its ...

Whole-Mount In Situ Hybridization in Zebrafish Embryos and Tube Formation Assay in iPSC-ECs to Study the Role of Endoglin in Vascular Development

पूरे माउंट में सीटू संकरण में जेब्राफिश भ्रूण और ट्यूब गठन परख में iPSC-ECs में परख संवहनी विकास में एंडोग्लिन की भूमिका का अध्ययन करने के लिए

Vascular development is determined by the sequential expression of specific genes, which can be studied by performing in situ hybridization assays in ...