Name: an in vitro model of a parallel-plate perfusion system to study bacterial adherence to graft tissues
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about An In Vitro Model of a Parallel-Plate Perfusion System to Study Bacterial Adherence to Graft Tissues at JoVE.com

Это исследование было организовано предоставление исследовательский фонд ку Лёвен (OT/14/097) для RH. TRV был после защиты докторской сотрудник исследовательского фонда FWO - Фландрия (Бельгия; Предоставить номер - 12K0916N) и RH поддерживается клинических исследований фонда UZ Лёвен.

1. Подготовка лоскута тканей In Vitro исследования
Примечание: Три типа тканей были использованы: патч бычьего перикарда (BP), замораживают Homograft (CH) и говядину яремной графтов (BJV). В случае BJV каналом и CH (ткани Европейского банка по Homograft (EHB) обрабатываются и хранятся в жидко?...

<ol>
	<li>Que, Y. A., Moreillon, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infective+endocarditis.">Infective endocarditis.</a> Nature Reviews Cardiology. 8 (6), 322-336 (2011).</li><li>Werdan, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+infective+endocarditis:+pathogen-host+interaction+and+risk+states.">Mechanisms of infective endocarditis: pathogen-host interaction and risk states.</a> Nature Reviews Cardiology. 11 (1), 35-50 (2014).</li><li>Moreillon, P., Que, Y. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infective+endocarditis.">Infective endocarditis.</a> The Lancet. 363 (9403), 139-149 (2004).</li><li>Jalal, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+propensity+of+bovine+jugular+vein+material+to+bacterial+adhesions:+An+in+vitro+study.">Selective propensity of bovine jugular vein material to bacterial adhesions: An in vitro study.</a> International Journal of Cardiology. 198, 201-205 (2015).</li><li>Sharma, A., Cote, A. T., Hosking, M. C. K., Harris, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Systematic+Review+of+Infective+Endocarditis+in+Patients+With+Bovine+Jugular+Vein+Valves+Compared+With+Other+Valve+Types.">A Systematic Review of Infective Endocarditis in Patients With Bovine Jugular Vein Valves Compared With Other Valve Types.</a> JACC Cardiovascular Interventions. 10 (14), 1449-1458 (2017).</li><li>Malekzadeh-Milani, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incidence+and+predictors+of+Melody(R)+valve+endocarditis:+a+prospective+study.">Incidence and predictors of Melody(R) valve endocarditis: a prospective study.</a> Archives of Cardiovascular Diseases. 108 (2), 97-106 (2015).</li><li>Hill, E. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Management+of+prosthetic+valve+infective+endocarditis.">Management of prosthetic valve infective endocarditis.</a> American Journal of Cardiology. 101 (8), 1174-1178 (2008).</li><li>Claes, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clumping+factor+A,+von+Willebrand+factor-binding+protein+and+von+Willebrand+factor+anchor+Staphylococcus+aureus+to+the+vessel+wall.">Clumping factor A, von Willebrand factor-binding protein and von Willebrand factor anchor Staphylococcus aureus to the vessel wall.</a> Journal of Thrombosis and Haemostasis. 15 (5), 1009-1019 (2017).</li><li>Fowler, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+invasion+by+Staphylococcus+aureus+involves+a+fibronectin+bridge+between+the+bacterial+fibronectin-binding+MSCRAMMs+and+host+cell+beta1+integrins.">Cellular invasion by Staphylococcus aureus involves a fibronectin bridge between the bacterial fibronectin-binding MSCRAMMs and host cell beta1 integrins.</a> European Journal of Cell Biology. 79 (10), 672-679 (2000).</li><li>Patti, J. M., Hook, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbial+adhesins+recognizing+extracellular+matrix+macromolecules.">Microbial adhesins recognizing extracellular matrix macromolecules.</a> Current Opinion in Cell Biology. 6 (5), 752-758 (1994).</li><li>Massey, R. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibronectin-binding+protein+A+of+Staphylococcus+aureus+has+multiple,+substituting,+binding+regions+that+mediate+adherence+to+fibronectin+and+invasion+of+endothelial+cells.">Fibronectin-binding protein A of Staphylococcus aureus has multiple, substituting, binding regions that mediate adherence to fibronectin and invasion of endothelial cells.</a> Cellular Microbiology. 3 (12), 839-851 (2001).</li><li>Jashari, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Belgian+and+European+experience+with+the+European+Homograft+Bank+(EHB)+cryopreserved+allograft+valves--assessment+of+a+20+year+activity.">Belgian and European experience with the European Homograft Bank (EHB) cryopreserved allograft valves--assessment of a 20 year activity.</a> Acta Chirurgica Belgica. 110 (3), 280-290 (2010).</li><li>Cheatham, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+and+hemodynamic+outcomes+up+to+7+years+after+transcatheter+pulmonary+valve+replacement+in+the+US+melody+valve+investigational+device+exemption+trial.">Clinical and hemodynamic outcomes up to 7 years after transcatheter pulmonary valve replacement in the US melody valve investigational device exemption trial.</a> Circulation. 131 (22), 1960-1970 (2015).</li><li>Que, Y. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibrinogen+and+fibronectin+binding+cooperate+for+valve+infection+and+invasion+in+Staphylococcus+aureus+experimental+endocarditis.">Fibrinogen and fibronectin binding cooperate for valve infection and invasion in Staphylococcus aureus experimental endocarditis.</a> The Journal of Experimental Medicine. 201 (10), 1627-1635 (2005).</li><li>Veloso, T. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+adherence+to+graft+tissues+in+static+and+flow+conditions.">Bacterial adherence to graft tissues in static and flow conditions.</a> The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 155 (1), 325-332 (2018).</li><li>Liesenborghs, L., Verhamme, P., Vanassche, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Staphylococcus+aureus,+master+manipulator+of+the+human+hemostatic+system.">Staphylococcus aureus, master manipulator of the human hemostatic system.</a> Journal of Thrombosis and Haemostasis. 16 (3), 441-454 (2018).</li><li>Chiu, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shear+stress+increases+ICAM-1+and+decreases+VCAM-1+and+E-selectin+expressions+induced+by+tumor+necrosis+factor-[alpha]+in+endothelial+cells.">Shear stress increases ICAM-1 and decreases VCAM-1 and E-selectin expressions induced by tumor necrosis factor-[alpha] in endothelial cells.</a> Artheriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 24 (1), 73-79 (2004).</li><li>Jockenhoevel, S., Zund, G., Hoerstrup, S. P., Schnell, A., Turina, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiovascular+tissue+engineering:+a+new+laminar+flow+chamber+for+in+vitro+improvement+of+mechanical+tissue+properties.">Cardiovascular tissue engineering: a new laminar flow chamber for in vitro improvement of mechanical tissue properties.</a> ASAIO Journal. 48 (1), 8-11 (2002).</li><li>Veltrop, M. H. A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+Species-+and+Strain-Dependent+Induction+of+Tissue+Factor+in+Human+Vascular+Endothelial+Cells.">Bacterial Species- and Strain-Dependent Induction of Tissue Factor in Human Vascular Endothelial Cells.</a> Infection and Immunity. 67 (11), 6130-6138 (1999).</li></ol>

Последние клинические наблюдения дают специальные осведомленности для IE как осложнение у пациентов, прошедших Замена клапана Антиангинальную6,13. Дисфункция имплантирован клапан в IE является результатом бактериального взаимодействия с эндоваскулярны?...

Золотистый стафилококк (S. aureus) использует различные стратегии вирулентности обойти системе хозяина иммунной обороны колонизации биологических и небиологических поверхностей, имплантированные в человека циркуляции, что приводит к тяжелой внутрисосудистого инфекций, таких как сепсис и IE1,2,3,4,5. IE остается важным лечение связанных осложнением у больных после имплантации протезов сердечных клапанов при отдельных факторов, способствующих начала IEare не еще полностью понятны6,7. Условиях потока бактерии сталкиваются сдвига, которые им необходимо преодолеть для того, чтобы придерживаться судна стены8. Модели, которые позволяют изучать взаимосвязь между бактерий и протезирование клапана тканей или эндотелием под поток, представляют интерес, поскольку они отражают в естественных условиях ситуация больше.
Несколько конкретных механизмов содействия бактериальных присоединение к эндотелиальных клеток (ECs) и подвергаются subendothelial матрица (ECM), ведущих к ткани колонизации и созревания растительностями, будучи важным первые шаги в IE9. Различные стафилококковых поверхности белки или MSCRAMMs (микробной поверхности компонентов, признавая молекул клея матрица) были описаны как посредники адгезии клеток хозяина и ECM белков, взаимодействуя с молекул, таких как фибронектин, фибриноген, коллаген и Виллебранда фактор (VWF)8,10,11. Однако учитывая складывающиеся внутри молекулярная некоторых факторов вирулентности, главным образом изучены в статических условиях, многие из этих взаимодействий могут иметь различные отношение в эндоваскулярной инфекции в циркулирующей крови.
Таким образом мы представляем доме разработан в vitro параллель плита потока камеры модель, которая позволяет оценивать бактериальной приверженность различных компонентов в контексте Tканевые трансплантаты, имплантированные в положении Антиангинальную ECM и ECs. Общая цель метода, описанного в этой работе является изучение механизмов взаимодействия между бактериями и базовой эндоваскулярных тканей в условиях потока, которые тесно связаны с в естественных условиях окружающей среды кровоток патогенов, таких как S. aureus. Этот новаторский подход фокусируется на восприимчивость трансплантат ткани поверхности бактериальной присоединения для выявления потенциальных факторов риска для развития IE.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Bovine Pericardium (BP) patch, Supple Peri-Guard Pericardium</td>
			<td>Synovis Surgical Innovations, USA</td>
			<td>PC-0404SN</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Jugular Vein conduits (BJV)</td>
			<td>Contegra conduit; Medtronic Inc, USA</td>
			<td>M333105D001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CH cryopreserved homograft</td>
			<td>European Homograft Bank (EHB)</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acu-Punch</td>
			<td>Acuderm Inc, USA</td>
			<td>P850 (8 mm); P1050 (10 mm)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>human Albumin</td>
			<td>Flexbumin; Baxter, Belgium</td>
			<td>BE171464 
			LOT:16G12C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tryptic soy broth (TSB)</td>
			<td>Fluka, Steinheim, Germany</td>
			<td>22092-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heart infusion broth (BHI)</td>
			<td>Fluka</td>
			<td>53286-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline (PBS).</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14190-094</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5(6)-Carboxyfluorescein N-hydroxysuccinimide ester (CF)</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Germany</td>
			<td>21878-100MG-F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peristaltic pump (MODEL ISM444B)</td>
			<td>Ismatec BVP-Z Standard; Cole Parmer, Wertheim, Germany</td>
			<td>631942-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sonication bath</td>
			<td>VWR Ultrasonic Cleaner; VWR, Radnor, Pa</td>
			<td>142-6044</td>
			<td>230V/50 -60Hz 60VA; HF45kHz, 30W</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ProLong Gold Antifade Mountant</td>
			<td>Invitrogen by ThermoFisher</td>
			<td>P36930</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>InCell Analyzer 2000 (fluorescence scanner)</td>
			<td>GE Healthcare Life Sciences, Pittsburgh, Pa</td>
			<td>29027886</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Arium Pro VF - ultrapure water - H2O MilliQ</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>87206462</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscopic slides - Tissue Culture Chambers (1-well)</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>94.6140.102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1-well on Lumox detachable</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>94.6150.101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless Steel - surgical Blades</td>
			<td>Swann-Morton</td>
			<td>311</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tygon Silicone Tubing, 1/8&#34;ID x 1/4&#34;OD</td>
			<td>Cole-Parmer</td>
			<td>EW-95702-06</td>
			<td>Temperature range: &#8211;80 to 200&#176;C 
			Sterilize: With ethylene oxide, gamma irradiation, or autoclave for 30 min, 15 psi of pressure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PharMed BPT Tubing</td>
			<td>Saint-Gobain</td>
			<td>AY242012</td>
			<td>Autoclavable 30 min at 121&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tygon LMT-55 Tubing</td>
			<td>Saint Gobain Performance Plastics&#8482;</td>
			<td>15312022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermostat</td>
			<td>BMG BIOMEDIZINTECHNIK</td>
			<td>300-0042</td>
			<td>230V, 90VA, 50Hz</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an in vitro model of a parallel-plate perfusion system to study bacterial adherence to graft tissues

Для замены клапана тракта (Антиангинальную) правого желудочка отток в больных с врожденным пороком сердца используются различные клапанами трубопроводы и клапаны смонтированы стента. При использовании протезов материалов, однако, эти трансплантаты восприимчивы к бактериальной инфекции и различных принимающих ответы.
Идентификация бактериальных и принимающих факторов, которые играют жизненно важную роль в эндоваскулярной прилипание микроорганизмов имеет значение лучше понимать патофизиологию начала инфекций, таких как инфекционный эндокардит (IE) и развивать превентивные стратегии. Таким образом необходима разработка моделей компетентным расследовать бактериальной адгезии в условиях физиологического сдвига. Здесь мы описывают использование недавно разработан в vitro перфузии камеры на основе параллельных пластин что позволяет исследование бактериальных присоединения к различным компонентам лоскута ткани, такие как открытые внеклеточного матрикса, эндотелиальных клеток и инертных районы . Этот метод в сочетании с колонии формирование подразделения (CFU) подсчет является достаточным для оценки склонности трансплантата материалов к бактериальной адгезии под поток. Далее, камерная система потока может использоваться для изучения роли компонентов крови в бактериальной адгезии условиях сдвига. Мы продемонстрировали, что источник ткани, их поверхности морфологии и бактериальных видов специфика не основных определяющих факторов в бактериальных приверженность графт тканей с помощью наших собственных разработан в vitro перфузии модели.

Чтобы лучше понять механизмы за IE развития, эта модель позволяет оценки бактериальных и ткани, связанные факторы представляют в ситуации в естественных условиях наступления инфекции.
В деталях, Роман в vitro подход позволя...

Watch this Scientific Journal Video about An In Vitro Model of a Parallel-Plate Perfusion System to Study Bacterial Adherence to Graft Tissues at JoVE.com

An In Vitro Model of a Parallel-Plate Perfusion System to Study Bacterial Adherence to Graft Tissues

Мы описываем доме разработан в vitro потока камеры модель, которая позволяет исследование бактериальных приверженность графт тканей.

В Vitro модель параллельно плита перфузии системы для изучения бактериальных приверженность графт тканей

Various valved conduits and stent-mounted valves are used for right ventricular outflow tract (RVOT) valve replacement in patients with congenital heart ...

Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в патогенеза инфекционного эндокардита, и патобиограммы через такие поля, как взаимодействие между бактериями, кровяными клетками и эндотелиальными клетками, выстилающими мускулатуру. Основным преимуществом этого метода является то, что трансплантаты тканей могут быть непосредственно подвержены взаимному взаимодействию с различными целями, такими как бактерии, тромбоциты и белки в стандартизированных условиях потока. Последствия этого метода распространяются на нашу терапию инфекционного эндокардита, потому что он может распутать важные молекулярные взаимодействия и факторы, способствующие высокой инфекционности некоторых тканей.Этот метод дает представление о патогенеза формирования растительности. Он также может быть применим в исследованиях, исследуя проницаемость сосудов, подвижность клеток и экспрессию генных клеток. Для начала протокола поместите предварительно подготовленную биопсию тканей диаметром 10 миллиметров, а также ту же толщину между слайдом микроскопа и восьмимиллиметровой круговой перфорацией, а также резиновую прокладку с внутренней поверхностью вверх, чтобы связаться с бактериальной суспензией.Сосредоточьтесь на ориентации трансплантата тканей при размещении в держателе. Убедитесь, что внутренняя поверхность ткани уже подвергается воздействию кровотока лица до контакта с экспериментальной среде. Затем вставьте держатель с тканью в лист прокладки, который встроен в нижний металлический каркас камеры.Прикрепите верхнюю металлическую раму с соответствующим листом прокладки на дно камеры с ранее вставленным держателем ткани. Затем смонтировать всю камеру с восемью винтами и винт орехи. Убедитесь, что высота камеры всегда одинакова в трансплантатах с помощью калипера или линейки.Затем соедините камеру потока с перистальным насосом. Затем соедините резервуар жидкости 400 миллилитров с трубками. Perfuse тканей со 100 миллилитров подвески от десяти до семи флуоресцентно помечены колонии формирования единиц в фосфатных буферных солевой раствор с отвесным стрессом от трех дина на квадратный сантиметр и соответствующая скорость потока четыре миллилитров в минуту в течение одного часа с помощью перисталистического насоса и бактериального резервуара.Непрерывно рециркуляция 100-миллилитровой бактериальной суспензии с использованием одного и того же резервуара для сбора. После перфузии, демонтировать камеру, чтобы освободить трансплантата. Вымойте часть ткани два раза с четырьмя миллилитров PBS в 12-хорошо пластины с помощью орбитального шейкера в течение трех минут.Затем вырезать внутреннюю часть трансплантата с помощью биопсии кожи удар с меньшим диаметром. Поместите биопсию каждой ткани в отдельную 14-миллилитровую трубку, содержащую один миллилитр стерильного хлорида натрия 0,9%. Отсоедините бактерии от ткани с помощью звуковой ванны в течение 10 минут.Приготовьте одну 14 миллилитровую трубку с 10 миллилитров стерильного 0,9% хлорида натрия, чтобы сделать серийные разбавления бактериальной суспензии, полученной после звукового одеяния. Наклеить ярлык на трубку номер два. Подготовка трех 14 миллилитров трубки с 10 миллилитров стерильных 0,9% хлорида натрия для серийных разбавления первоначальной бактериальной суспензии, принятых в эксперимент изобилия.Этикетка труб номер три, номер четыре и номер пять. Затем закресите три агарные пластины, одну для бактериальной перфузии, одну для контрольной перфузии PBS, и третью для первоначальной бактериальной суспензии, используемой для перфузии. Этикетка три сектора на тарелку для эксперимента ткани следующим образом:10-1, 10-3 и 10-4.Чтобы подсчитать количество колонийообразующих единиц в бактериальной перфузии, обозначить пластину следующим образом: 10-1, 10-3, 10-5 и 10-7. Vortex трубки, содержащие биопсии тканей в течение 15 секунд каждый, чтобы сделать серийные разбавления. Чтобы подготовить серийные разбавления, перенесите 100 микролитров трубки номер один в трубку номер два, и вихрь трубки тщательно перемешать раствор.Распространение 100 микролитров содержимого трубки номер один и номер два на соответствующие сектора, 10-1 и 10-3 агар пластины. Затем распространение 10 микролитров трубки номер два на секторе 10 четыре. Повторите этот шаг четыре раза, чтобы получить четыре отдельных на роста от каждого объема 10 микролитров.Чтобы подготовить серийные разбавления начальной культуры, сначала вихрь разбавления в течение 15 секунд и передачи 100 микролитров бактериальной суспензии в трубку номер три, и энергично смешивать вихрем. Добавьте 100 микролитров трубки номер три в трубку номер четыре и снова перемешайте. Повторите процедуру трубки номер пять из трубки номер четыре.Распространение 100 микролитров содержимого трубок номер три, номер четыре, номер пять, и помечены начальной культуры соответственно на секторах 10-3, 10-5, 10-7 и 10-1 крови агар пластины. Оставьте пластины агара крови под ламинарным капюшоном, чтобы высушить бактериальные спреды, как правило, в течение 10 минут. После этого поместите пластины при 37 градусах по Цельсию для ночной инкубации.После ночной инкубации, подсчитайте бактериальные колонии, чтобы получить количество CFUs. В условиях стресса, аналогичные бактериальные привязанности через различные ткани трансплантата наблюдалось как для золотистого стафилококка и стафилококка эпидермидис инфекции. После процедур, стрептококк сангвинис отображается значительное снижение приверженности к бычьей яремной стенки вены, по сравнению с крупного рогатого скота перикард патч.При сравнении трех видов бактерий, стрептококк сангвинис представляет значительно более низкую адгезию стенки яремной вены крупного рогатого скота по отношению к золотистым стафилококку и стафилококку эпидермидиса. При попытке этой процедуры, важно помнить, чтобы подготовить правильные ткани одной и той же головы. Это обеспечит аналогичные условия во всех образцах экспериментов и сведет к минимуму изменчивость данных между различными сериями экспериментов.После своего развития, этот метод позволяет исследователям исследовать сложные системы разлада в step by step manner путем обогащать их подходы модели in vitro с по-разному элементами для того чтобы build up полная сложность close to медицинское состояние.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

An In Vitro Model of a Parallel-Plate Perfusion System to Study Bacterial Adherence to Graft Tissues

A Novel Ex Ovo Banding Technique to Alter Intracardiac Hemodynamics in an Embryonic Chicken System

A Novel Ex Ovo Banding Technique to Alter Intracardiac Hemodynamics in an Embryonic Chicken System

Роман<em&gt; Ex Ово</em&gt; Кольцевание Техника Альтер внутрисердечной гемодинамики в системе Эмбриональные Chicken

The new model presented here can be used to understand the influence of hemodynamics on specific cardiac developmental processes, at the cellular and ...

Development of an Ethanol-induced Fibrotic Liver Model in Zebrafish to Study Progenitor Cell-mediated Hepatocyte Regeneration

Разработка Этанол-индуцированной фиброзных модели печени в данио рерио для изучения прогениторных клеток-гепатоцитов опосредуется Регенерация

Sustained liver fibrosis with continuation of extracellular matrix (ECM) protein build-up results in the loss of cellular competency of the liver, leading ...

In Vitro and In Vivo Models to Study Corneal Endothelial-mesenchymal Transition

In Vitro and In Vivo Models to Study Corneal Endothelial-mesenchymal Transition

В пробирке и в естественных моделей для изучения роговичный эндотелий мезенхимальных перехода

Corneal endothelial cells (CECs) play a crucial role in maintaining corneal clarity through active pumping. A reduced CEC count may lead to corneal edema ...

A 5-mC Dot Blot Assay Quantifying the DNA Methylation Level of Chondrocyte Dedifferentiation In Vitro

A 5-mC Dot Blot Assay Quantifying the DNA Methylation Level of Chondrocyte Dedifferentiation In Vitro

Анализ 5-кратного точечного блоттинга Количественный анализ уровня метилирования ДНК дифференцировки хондроцитов<em&gt; In Vitro</em

The dedifferentiation of hyaline chondrocytes into fibroblastic chondrocytes often accompanies monolayer expansion of chondrocytes in vitro. The global ...

Whole-mount Confocal Microscopy for Adult Ear Skin: A Model System to Study Neuro-vascular Branching Morphogenesis and Immune Cell Distribution

Целом гора Confocal микроскопии для уха взрослого кожи: модель системы для изучения нейро сосудистые ветвления морфогенеза и иммунных клеток распределения

Here, we present a protocol of a whole-mount adult ear skin imaging technique to study comprehensive three-dimensional neuro-vascular branching ...

Organotypic Culture Method to Study the Development Of Embryonic Chicken Tissues

Культура organotypic метод для изучения развития тканей эмбриона курицы

The embryonic chicken is commonly used as a reliable model organism for vertebrate development. Its accessibility and short incubation period makes it ...

A Hyperandrogenic Mouse Model to Study Polycystic Ovary Syndrome

Hyperandrogenic мыши модель для изучения синдром поликистозных яичников

Hyperandrogenemia plays a critical role in reproductive and metabolic function in females and is the hallmark of polycystic ovary syndrome. Developing a ...

Assessment of Oxidative Damage in the Primary Mouse Ocular Surface Cells/Stem Cells in Response to Ultraviolet-C (UV-C) Damage

Assessment of Oxidative Damage in the Primary Mouse Ocular Surface Cells/Stem Cells in Response to Ultraviolet-C UV-C Damage

Оценка окислительного повреждения в первичной мыши глазной поверхностных клеток / стволовых клеток в ответ на ультрафиолет-C (UV-C) Ущерб

The ocular surface is subjected to regular wear and tear due to various environmental factors. Exposure to UV-C radiation constitutes an occupational ...

Clonal Genetic Tracing using the Confetti Mouse to Study Mineralized Tissues

Клональная генетическая трассировка с помощью мыши Confetti для изучения минерализованных тканей

Labeling an individual cell in the body to monitor which cell types it can give rise to and track its migration through the organism or determine its ...

Whole-Mount In Situ Hybridization in Zebrafish Embryos and Tube Formation Assay in iPSC-ECs to Study the Role of Endoglin in Vascular Development

Целая гора В Ситу Гибридизация в зебрафиш эмбрионов и трубоусветки Ассав в iPSC-ECs для изучения роли эндоглин в сосудистом развитии

Vascular development is determined by the sequential expression of specific genes, which can be studied by performing in situ hybridization assays in ...