Name: an in vitro model of a parallel-plate perfusion system to study bacterial adherence to graft tissues
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about An In Vitro Model of a Parallel-Plate Perfusion System to Study Bacterial Adherence to Graft Tissues at JoVE.com

Denna studie var sponsrad av ett bidrag på den forskning fonden KU Leuven (OT/14/097) ges till RH. TRV var postdoktor för CVE Research Foundation - Flandern (Belgien. Bevilja nummer - 12K0916N) och RH stöds av kliniska forskning fonden UZ Leuvens.

1. förbereda Graft vävnader för In Vitro studier
Obs: Användes tre typer av vävnader: nötkreatur hjärtsäck patch (BP), fryst tillstånd Homograft (CH) och bovin halsvenen transplantat (BJV). Vid BJV conduit och CH (vävnad behandlas av den europeiska Homograft Bank (EHB) och lagras i flytande kväve före användning), användes både vägg och valvulär broschyrer. BP patch och BJV conduit köptes från tillverkarna. Före användning, Tina CH efter EHB instruktioner<sup class=...

<ol>
	<li>Que, Y. A., Moreillon, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infective+endocarditis.">Infective endocarditis.</a> Nature Reviews Cardiology. 8 (6), 322-336 (2011).</li><li>Werdan, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+infective+endocarditis:+pathogen-host+interaction+and+risk+states.">Mechanisms of infective endocarditis: pathogen-host interaction and risk states.</a> Nature Reviews Cardiology. 11 (1), 35-50 (2014).</li><li>Moreillon, P., Que, Y. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infective+endocarditis.">Infective endocarditis.</a> The Lancet. 363 (9403), 139-149 (2004).</li><li>Jalal, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+propensity+of+bovine+jugular+vein+material+to+bacterial+adhesions:+An+in+vitro+study.">Selective propensity of bovine jugular vein material to bacterial adhesions: An in vitro study.</a> International Journal of Cardiology. 198, 201-205 (2015).</li><li>Sharma, A., Cote, A. T., Hosking, M. C. K., Harris, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Systematic+Review+of+Infective+Endocarditis+in+Patients+With+Bovine+Jugular+Vein+Valves+Compared+With+Other+Valve+Types.">A Systematic Review of Infective Endocarditis in Patients With Bovine Jugular Vein Valves Compared With Other Valve Types.</a> JACC Cardiovascular Interventions. 10 (14), 1449-1458 (2017).</li><li>Malekzadeh-Milani, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incidence+and+predictors+of+Melody(R)+valve+endocarditis:+a+prospective+study.">Incidence and predictors of Melody(R) valve endocarditis: a prospective study.</a> Archives of Cardiovascular Diseases. 108 (2), 97-106 (2015).</li><li>Hill, E. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Management+of+prosthetic+valve+infective+endocarditis.">Management of prosthetic valve infective endocarditis.</a> American Journal of Cardiology. 101 (8), 1174-1178 (2008).</li><li>Claes, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clumping+factor+A,+von+Willebrand+factor-binding+protein+and+von+Willebrand+factor+anchor+Staphylococcus+aureus+to+the+vessel+wall.">Clumping factor A, von Willebrand factor-binding protein and von Willebrand factor anchor Staphylococcus aureus to the vessel wall.</a> Journal of Thrombosis and Haemostasis. 15 (5), 1009-1019 (2017).</li><li>Fowler, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+invasion+by+Staphylococcus+aureus+involves+a+fibronectin+bridge+between+the+bacterial+fibronectin-binding+MSCRAMMs+and+host+cell+beta1+integrins.">Cellular invasion by Staphylococcus aureus involves a fibronectin bridge between the bacterial fibronectin-binding MSCRAMMs and host cell beta1 integrins.</a> European Journal of Cell Biology. 79 (10), 672-679 (2000).</li><li>Patti, J. M., Hook, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbial+adhesins+recognizing+extracellular+matrix+macromolecules.">Microbial adhesins recognizing extracellular matrix macromolecules.</a> Current Opinion in Cell Biology. 6 (5), 752-758 (1994).</li><li>Massey, R. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibronectin-binding+protein+A+of+Staphylococcus+aureus+has+multiple,+substituting,+binding+regions+that+mediate+adherence+to+fibronectin+and+invasion+of+endothelial+cells.">Fibronectin-binding protein A of Staphylococcus aureus has multiple, substituting, binding regions that mediate adherence to fibronectin and invasion of endothelial cells.</a> Cellular Microbiology. 3 (12), 839-851 (2001).</li><li>Jashari, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Belgian+and+European+experience+with+the+European+Homograft+Bank+(EHB)+cryopreserved+allograft+valves--assessment+of+a+20+year+activity.">Belgian and European experience with the European Homograft Bank (EHB) cryopreserved allograft valves--assessment of a 20 year activity.</a> Acta Chirurgica Belgica. 110 (3), 280-290 (2010).</li><li>Cheatham, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+and+hemodynamic+outcomes+up+to+7+years+after+transcatheter+pulmonary+valve+replacement+in+the+US+melody+valve+investigational+device+exemption+trial.">Clinical and hemodynamic outcomes up to 7 years after transcatheter pulmonary valve replacement in the US melody valve investigational device exemption trial.</a> Circulation. 131 (22), 1960-1970 (2015).</li><li>Que, Y. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibrinogen+and+fibronectin+binding+cooperate+for+valve+infection+and+invasion+in+Staphylococcus+aureus+experimental+endocarditis.">Fibrinogen and fibronectin binding cooperate for valve infection and invasion in Staphylococcus aureus experimental endocarditis.</a> The Journal of Experimental Medicine. 201 (10), 1627-1635 (2005).</li><li>Veloso, T. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+adherence+to+graft+tissues+in+static+and+flow+conditions.">Bacterial adherence to graft tissues in static and flow conditions.</a> The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 155 (1), 325-332 (2018).</li><li>Liesenborghs, L., Verhamme, P., Vanassche, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Staphylococcus+aureus,+master+manipulator+of+the+human+hemostatic+system.">Staphylococcus aureus, master manipulator of the human hemostatic system.</a> Journal of Thrombosis and Haemostasis. 16 (3), 441-454 (2018).</li><li>Chiu, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shear+stress+increases+ICAM-1+and+decreases+VCAM-1+and+E-selectin+expressions+induced+by+tumor+necrosis+factor-[alpha]+in+endothelial+cells.">Shear stress increases ICAM-1 and decreases VCAM-1 and E-selectin expressions induced by tumor necrosis factor-[alpha] in endothelial cells.</a> Artheriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 24 (1), 73-79 (2004).</li><li>Jockenhoevel, S., Zund, G., Hoerstrup, S. P., Schnell, A., Turina, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiovascular+tissue+engineering:+a+new+laminar+flow+chamber+for+in+vitro+improvement+of+mechanical+tissue+properties.">Cardiovascular tissue engineering: a new laminar flow chamber for in vitro improvement of mechanical tissue properties.</a> ASAIO Journal. 48 (1), 8-11 (2002).</li><li>Veltrop, M. H. A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+Species-+and+Strain-Dependent+Induction+of+Tissue+Factor+in+Human+Vascular+Endothelial+Cells.">Bacterial Species- and Strain-Dependent Induction of Tissue Factor in Human Vascular Endothelial Cells.</a> Infection and Immunity. 67 (11), 6130-6138 (1999).</li></ol>

Senaste kliniska observationer ge särskilda medvetenhet till IE som en komplikation hos patienter som genomgått ventil ersättning av RVOT6,13. Dysfunktion av implanterade ventilen i IE är resultatet av bakteriell interaktion med endovaskulär graften leder till omfattande inflammatoriska och prokoagulanta reaktioner1,14. Presenterade nya in vitro- modellen tillät oss att undersöka om skilln...

Staphylococcus aureus (S. aureus) sysselsätter en mängd virulens strategier att kringgå immunförsvar värdsystemet kolonisera biologiska eller icke-biologiska ytor som implanteras i mänskliga cirkulationen, vilket leder till allvarlig intravaskulär infektioner såsom sepsis och IE1,2,3,4,5. IE förblir en viktig behandling associerade komplikation hos patienter efter implantation av hjärtklaffprotes medan enskilda faktorer som bidrar till uppkomsten av IEare inte ännu fullt förstådd6,7. Under flödesförhållanden möter bakterier skeva styrkor, som de måste övervinna för att hålla sig till fartygets vägg8. Modeller, som tillåter att studera samspelet mellan bakterier och protes ventil vävnad eller endotel under flöde, är av intresse då de avspeglar i vivo situationen mer.
Flera specifika mekanismer underlätta bakteriell vidhäftning till endotelceller (ECs) och den exponerade subendothelial matrix (ECM) leder till vävnad koloniseringen och mognaden av vegetation, att vara viktiga tidiga steg i IE9. Olika staphylococcal ytproteiner eller MSCRAMMs (mikrobiell ytan komponenter erkänner limmatris molekyler) har beskrivits som medlarear av vidhäftning till värdceller och ECM proteiner genom att interagera med molekyler såsom Fibronektin, fibrinogen, kollagen och von Willebrand faktor (VWF)8,10,11. Dock med tanke på inom molekylär vikning av vissa virulensfaktorer, mestadels studerade i statiska förhållanden, kan många av dessa interaktioner ha olika betydelse i endovaskulär infektioner i cirkulerande blod.
Därför presenterar vi en egen designade in vitro- parallell-plattan kammare modell för flödet, vilket gör bedömningen av bakteriell vidhäftning till olika komponenter i ECM och ECs i samband med vävnad ympkvistar implanteras i RVOT position. Det övergripande syftet med den metod som beskrivs i detta arbete är att studera mekanismer i samspelet mellan bakterier och underliggande endovaskulär vävnader i flödet villkorar, som är nära relaterade till den in-vivo -miljön i blodomloppet patogener såsom S. aureus. Denna nya strategi fokuserar på känslighet av transplantat vävnaden ytor till bakteriell vidhäftning att identifiera potentiella riskfaktorer för utveckling av IE.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Bovine Pericardium (BP) patch, Supple Peri-Guard Pericardium</td>
			<td>Synovis Surgical Innovations, USA</td>
			<td>PC-0404SN</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Jugular Vein conduits (BJV)</td>
			<td>Contegra conduit; Medtronic Inc, USA</td>
			<td>M333105D001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CH cryopreserved homograft</td>
			<td>European Homograft Bank (EHB)</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acu-Punch</td>
			<td>Acuderm Inc, USA</td>
			<td>P850 (8 mm); P1050 (10 mm)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>human Albumin</td>
			<td>Flexbumin; Baxter, Belgium</td>
			<td>BE171464 
			LOT:16G12C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tryptic soy broth (TSB)</td>
			<td>Fluka, Steinheim, Germany</td>
			<td>22092-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heart infusion broth (BHI)</td>
			<td>Fluka</td>
			<td>53286-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline (PBS).</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14190-094</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5(6)-Carboxyfluorescein N-hydroxysuccinimide ester (CF)</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Germany</td>
			<td>21878-100MG-F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peristaltic pump (MODEL ISM444B)</td>
			<td>Ismatec BVP-Z Standard; Cole Parmer, Wertheim, Germany</td>
			<td>631942-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sonication bath</td>
			<td>VWR Ultrasonic Cleaner; VWR, Radnor, Pa</td>
			<td>142-6044</td>
			<td>230V/50 -60Hz 60VA; HF45kHz, 30W</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ProLong Gold Antifade Mountant</td>
			<td>Invitrogen by ThermoFisher</td>
			<td>P36930</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>InCell Analyzer 2000 (fluorescence scanner)</td>
			<td>GE Healthcare Life Sciences, Pittsburgh, Pa</td>
			<td>29027886</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Arium Pro VF - ultrapure water - H2O MilliQ</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>87206462</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscopic slides - Tissue Culture Chambers (1-well)</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>94.6140.102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1-well on Lumox detachable</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>94.6150.101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless Steel - surgical Blades</td>
			<td>Swann-Morton</td>
			<td>311</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tygon Silicone Tubing, 1/8&#34;ID x 1/4&#34;OD</td>
			<td>Cole-Parmer</td>
			<td>EW-95702-06</td>
			<td>Temperature range: &#8211;80 to 200&#176;C 
			Sterilize: With ethylene oxide, gamma irradiation, or autoclave for 30 min, 15 psi of pressure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PharMed BPT Tubing</td>
			<td>Saint-Gobain</td>
			<td>AY242012</td>
			<td>Autoclavable 30 min at 121&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tygon LMT-55 Tubing</td>
			<td>Saint Gobain Performance Plastics&#8482;</td>
			<td>15312022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermostat</td>
			<td>BMG BIOMEDIZINTECHNIK</td>
			<td>300-0042</td>
			<td>230V, 90VA, 50Hz</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an in vitro model of a parallel-plate perfusion system to study bacterial adherence to graft tissues

Olika vätskeserien conduits och stent-monterade ventiler används för höger kammare utflöde tarmkanalen (RVOT) ventil ersättning hos patienter med kongenital hjärtsjukdom. När du använder protetiska material emellertid, är dessa transplantat mottagliga för bakterieinfektioner och olika värd svaren.
Identifiering av bakteriell och värd faktorer som spelar en viktig roll i endovaskulär följsamhet av mikroorganismer är av betydelse att bättre förstå patofysiologin bakom uppkomsten av infektioner som endokardit (IE) och att utveckla förebyggande strategier. Därför behövs utveckling av behöriga modeller att undersöka bakteriell vidhäftning fysiologiska skeva villkor. Här, beskriver vi användningen av en nydesignade in vitro- perfusion kammare baserat på parallella plattor som gör studien av bakteriell vidhäftning till olika komponenter av transplantat vävnader såsom synliga extracellulärmatrix, endotelceller och inert områden . Denna metod kombineras med kolonibildande enhet (CFU) räknar är tillräcklig för att utvärdera transplantat material benägenhet mot bakteriell vidhäftning under flöde. Ytterligare kan på, flöde kammare systemet användas för att undersöka betydelsen av blodkomponenter i bakteriell vidhäftning skeva villkor. Vi visat att källan till vävnad, deras ytan morfologi och bakteriearter specificitet inte är de stora avgörande faktorerna i bakteriell adherencen till ympa vävnader med hjälp av vår egen designade i vitro perfusion modell.

Att bättre förstå mekanismerna bakom IE utveckling, denna modell möjliggör utvärdering av bakteriell och vävnad associerade faktorer förekommer i vivo situationen för infektion debut.
I detalj, den nya in vitro- metoden gör det möjligt för att kvantifiera bakteriell vidhäftning i flödesförhållanden till olika transplantat vävnader av startas fluorescently märkta bakterier över vävna...

Watch this Scientific Journal Video about An In Vitro Model of a Parallel-Plate Perfusion System to Study Bacterial Adherence to Graft Tissues at JoVE.com

An In Vitro Model of a Parallel-Plate Perfusion System to Study Bacterial Adherence to Graft Tissues

Vi beskriver en egen designade in vitro- flöde kammare modell, vilket gör att utredningen av bakteriell adherencen till ympa vävnader.

En In Vitro -modell av ett parallell-plattan Perfusion System att studera bakteriell vidhäftning för att ympa vävnader

Various valved conduits and stent-mounted valves are used for right ventricular outflow tract (RVOT) valve replacement in patients with congenital heart ...

Denna metod kan hjälpa till att besvara viktiga frågor i patogenesen vid smittsam endokardit, och pathobiograms genom fält som samspelet mellan bakterier, blodkroppar, och endotelceller foder muskulatur. Den största fördelen med denna teknik är att vävnadstransplantaten kan vara direkt exponerade för ömsesidig interaktion med olika mål, såsom bakterier, trombocyter och proteiner i standardiserade flödesförhållanden. Innebörden av denna teknik sträcker sig till vår terapi av infective endokardit, eftersom det kan nysta upp viktiga molekylära interaktioner och faktorer som driver hög infectiveness av vissa vävnader.Denna metod ger insikt i patogenes av vegetationsbildning. Det kan också vara tillämpligt i studier som undersöker vaskulär permeabilitet, cellrörlighet, och gencelluttryck. För att börja protokollet, placera en tidigare beredd vävnad biopsi 10 millimeter i diameter, och samma tjocklek mellan ett mikroskop glida och en åtta millimeter cirkulär perforering, och en gummipackning med den inre ytan uppåt, att kontakta bakteriell suspension.Fokusera på vävnadstransplantatorienteringen medan den placeras i hållaren. Se till att den inre ytan av vävnaden redan utsätts för blodomloppet ansikten upp för att kontakta din experimentella medium. Därefter för in din hållare med vävnaden i packningsplåten som är inbäddad i kammarens bottenmetallram.Fäst den övre metallramen med motsvarande packningsplåt på kammarens botten med den tidigare insatta vävnadshållaren. Montera sedan hela kammaren med åtta skruvar och skruvmuttrar. Se till att kammarhöjden alltid är densamma över transplantat genom att använda ett bromsok eller linjal.Nästa ansluta flödeskammaren med en peristaltisk pump. Anslut sedan 400 milliliter vätskereservoaren med rören. Genomsyra vävnaderna med 100 milliliter suspensioner av tio till de sju fluorescently-märkta kolonibildande enheter i fosfat buffrad saltlösning med den stora stressen av tre dines per kvadratcentimeter och motsvarande flödeshastighet på fyra milliliter per minut under en timme med hjälp av peristaltiska pumpen och bakteriell reservoaren.Recirkulera kontinuerligt den 100 milliliter bakterieupphängningen med hjälp av samma uppsamlingsbehållare. Efter perfusion, demontera kammaren för att frigöra transplantatet. Tvätta vävnadsstycket två gånger med fyra milliliter PBS i en 12-brunnsplatta med en orbitalskakare i tre minuter.Skär sedan den inre delen av transplantatet med hjälp av en hudbiopsistans med en mindre diameter. Placera varje vävnadsbiopsi i ett separat 14 milliliterrör som innehåller en milliliter steril 0,9%natriumklorid. Lösgör bakterierna från vävnaden med hjälp av ett ultraljudsbad i 10 minuter.Förbered ett enda 14 milliliterrör med 10 milliliter steril 0,9%natriumklorid för att göra serieutspädningar av den bakteriella suspensionen som erhållits efter ultraljudsbehandling. Märk tuben nummer två. Förbered tre 14 milliliterrör med 10 milliliter steril 0,9%natriumklorid för serieutspädningar av den initiala bakteriefjädringen som tagits till profusionsexperimentet.Märk rören nummer tre, nummer fyra och nummer fem. Därefter säkra tre agar plattor, en för bakteriell perfusion, en för kontrollperfusion av PBS, och den tredje för den inledande bakteriell suspension som används för perfusioner. Märk tre sektorer per platta för vävnadsexperimentet på följande sätt:10-1, 10-3 och 10-4.För att räkna antalet kolonibildande enheter i bakterieperfusing, märka plattan på följande sätt:10-1, 10-3, 10-5, och 10-7. Vortexa rören som innehåller vävnadsbiopsin i 15 sekunder vardera, för att göra serieutspädningar. För att förbereda serieutspädningarna, överför 100 mikroliter av rör nummer ett till rör nummer två, och vortexa röret för att noggrant blanda lösningen.Sprid 100 mikroliter av innehållet i rör nummer ett och nummer två på motsvarande sektorer, 10-1 och 10-3 av agarplattan. Sprid sedan 10 mikroliter av rör nummer två på sektor 10 fyra. Upprepa detta steg fyra gånger för att få fyra separata utstÃ ningar från varje volym av 10 mikroliter.För att förbereda serieutspädningar av den initiala kulturen, först virvel utspädningen i 15 sekunder och överföra 100 mikroliter av bakteriell suspension till rör nummer tre, och blanda kraftigt genom att vortexa. Tillsätt 100 mikroliter av rör nummer tre till tub nummer fyra och blanda igen. Upprepa proceduren för rör nummer fem från rör nummer fyra.Sprid 100 mikroliter av innehållet i rör nummer tre, nummer fyra, nummer fem, respektive den märkta initialkulturen på sektorerna 10-3, 10-5, 10-7 och 10-1 av blodagarplattan. Låt blodagarplattorna under laminärhuven lufttorka bakteriespridningarna, vanligtvis i 10 minuter. Därefter placerar du plattorna i 37 grader Celsius för inkubation över natten.Efter inkubation över natten, räkna bakteriekolonierna för att erhålla antalet CFUs. Under ren stress villkor, liknande bakteriell fastsättning över de olika moderplantor vävnader observerades för både staphylococcus aureus och staphylococcus epidermidis infektion. Efter förfarandena visade streptokocker sanguinis betydande minskning av följsamheten till väggen hos nötkreatur halsvenen, när man jämför med nötkreaturs perikardium plåstret.Vid jämförelse av de tre arter av bakterier, streptococcus sanguinis presenterar betydligt lägre vidhäftning till bovin halsvenen väggen i förhållande till staphylococcus aureus och staphylococcus epidermidis. Medan du försöker detta förfarande, Det är viktigt att komma ihåg att ha förberett korrekta vävnader i samma huvud. Det kommer att säkerställa liknande förhållanden i alla experiment exemplar och minimera datavarierbarhet mellan olika serier av experiment.Efter dess utveckling, denna teknik gör det möjligt för forskare att utforska komplexa oordning system i ett steg för steg sätt genom att berika deras in vitro-modell metoder med olika element för att bygga upp full komplexitet nära medicinsk status.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

An In Vitro Model of a Parallel-Plate Perfusion System to Study Bacterial Adherence to Graft Tissues

A Novel Ex Ovo Banding Technique to Alter Intracardiac Hemodynamics in an Embryonic Chicken System

A Novel Ex Ovo Banding Technique to Alter Intracardiac Hemodynamics in an Embryonic Chicken System

En novell<em&gt; Ex Ovo</em&gt; Banding Teknik Alter Intrakardiell Hemodynamik i en embryonala kyckling System

The new model presented here can be used to understand the influence of hemodynamics on specific cardiac developmental processes, at the cellular and ...

Development of an Ethanol-induced Fibrotic Liver Model in Zebrafish to Study Progenitor Cell-mediated Hepatocyte Regeneration

Utveckling av en etanol-inducerad Fibrotisk Lever modell i Zebrafish att studera stamceller-medierad Hepatocyte Regeneration

Sustained liver fibrosis with continuation of extracellular matrix (ECM) protein build-up results in the loss of cellular competency of the liver, leading ...

In Vitro and In Vivo Models to Study Corneal Endothelial-mesenchymal Transition

In Vitro and In Vivo Models to Study Corneal Endothelial-mesenchymal Transition

In vitro och in vivo-modeller för att studera hornhinnan Endothelial-mesenkymala Transition

Corneal endothelial cells (CECs) play a crucial role in maintaining corneal clarity through active pumping. A reduced CEC count may lead to corneal edema ...

A 5-mC Dot Blot Assay Quantifying the DNA Methylation Level of Chondrocyte Dedifferentiation In Vitro

A 5-mC Dot Blot Assay Quantifying the DNA Methylation Level of Chondrocyte Dedifferentiation In Vitro

En 5-mC primärblottanalys som kvantifierar DNA-metyleringsnivån av kondrocyt-skillnad<em&gt; In Vitro</em

The dedifferentiation of hyaline chondrocytes into fibroblastic chondrocytes often accompanies monolayer expansion of chondrocytes in vitro. The global ...

Whole-mount Confocal Microscopy for Adult Ear Skin: A Model System to Study Neuro-vascular Branching Morphogenesis and Immune Cell Distribution

Hela-mount konfokalmikroskopi för vuxna öron hud: modellsystem studera Neuro-vaskulär förgrenade morfogenes och immunceller Distribution

Here, we present a protocol of a whole-mount adult ear skin imaging technique to study comprehensive three-dimensional neuro-vascular branching ...

Organotypic Culture Method to Study the Development Of Embryonic Chicken Tissues

Organotypic kultur metod att studera utvecklingen av embryonala kyckling vävnader

The embryonic chicken is commonly used as a reliable model organism for vertebrate development. Its accessibility and short incubation period makes it ...

A Hyperandrogenic Mouse Model to Study Polycystic Ovary Syndrome

En Hyperandrogenic musmodell att studera polycystiskt ovariesyndrom

Hyperandrogenemia plays a critical role in reproductive and metabolic function in females and is the hallmark of polycystic ovary syndrome. Developing a ...

Assessment of Oxidative Damage in the Primary Mouse Ocular Surface Cells/Stem Cells in Response to Ultraviolet-C (UV-C) Damage

Assessment of Oxidative Damage in the Primary Mouse Ocular Surface Cells/Stem Cells in Response to Ultraviolet-C UV-C Damage

Bedömning av oxidativ skada i de primära musokulära ytcellerna/stamcellerna som svar på ultraviolett-C (UV-C) Skada

The ocular surface is subjected to regular wear and tear due to various environmental factors. Exposure to UV-C radiation constitutes an occupational ...

Clonal Genetic Tracing using the Confetti Mouse to Study Mineralized Tissues

Klonala genetiska spårning använda Confetti musen för att studera mineraliserade vävnader

Labeling an individual cell in the body to monitor which cell types it can give rise to and track its migration through the organism or determine its ...

Whole-Mount In Situ Hybridization in Zebrafish Embryos and Tube Formation Assay in iPSC-ECs to Study the Role of Endoglin in Vascular Development

Helmonterad in situ-hybridisering i Zebrafish Embryon och Tube Formation Assay i iPSC-ECs att studera rollen av Endoglin i vaskulär utveckling

Vascular development is determined by the sequential expression of specific genes, which can be studied by performing in situ hybridization assays in ...