Name: subclavian vein puncture as an alternative method of blood sample collection in rats
Uploaded: 2018-11-18T13:00:00
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Keiner erklärt.

Diese Studie wurde von der zentralen Ethikkommission South University für Animal Research aus dem zweiten Xiangya Krankenhaus (Changsha, China) genehmigt. Das Manuskript wurde nach Ankunft vorbereitet (Animal Research: Berichterstattung von In Vivo Experimente) Leitlinien-9.
1. Material und Tier Vorbereitung
<ol><li>Benötigte Materialien vorbereiten: Klebeband, Epilieren Agent, 75 % Ethanol, Blutsammelröhrchen, 2,5 mL Spritze mit Nadel (24 G, 0,6 x 25 mm), Haar Ras...

<ol>
	<li>Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+sample+collection+in+small+laboratory+animals.">Blood sample collection in small laboratory animals.</a> Journal of Pharmacology, Pharmacotherapeutics. 1 (2), 87-93 (2010).</li><li>Korfmacher, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Utility+of+capillary+microsampling+for+rat+pharmacokinetic+studies:+Comparison+of+tail-vein+bleed+to+jugular+vein+cannula+sampling.">Utility of capillary microsampling for rat pharmacokinetic studies: Comparison of tail-vein bleed to jugular vein cannula sampling.</a> Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 76, 7-14 (2015).</li><li>Feng, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Catheterization+of+the+carotid+artery+and+jugular+vein+to+perform+hemodynamic+measures,+infusions+and+blood+sampling+in+a+conscious+rat+model.">Catheterization of the carotid artery and jugular vein to perform hemodynamic measures, infusions and blood sampling in a conscious rat model.</a> Journal of Visualized Experiments. (95), (2015).</li><li>Wickremsinhe, E. R., Renninger, M., Paulman, A., Pritt, M., Schultze, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+Repeated+Tail+Clip+and+Saphenous+Vein+Phlebotomy+on+Rats+Used+in+Toxicology+Studies.">Impact of Repeated Tail Clip and Saphenous Vein Phlebotomy on Rats Used in Toxicology Studies.</a> Toxicologic Pathology. 44 (7), 1013-1020 (2016).</li><li>Takahashi, M., Makino, S., Kikkawa, T., Osumi, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+rat+serum+suitable+for+mammalian+whole+embryo+culture.">Preparation of rat serum suitable for mammalian whole embryo culture.</a> Journal of Visualized Experiments. (90), e51969 (2014).</li><li>Cochran, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determining+Glucose+Metabolism+Kinetics+Using+18F-FDG+Micro-PET/CT.">Determining Glucose Metabolism Kinetics Using 18F-FDG Micro-PET/CT.</a> Journal of Visualized Experiments. (123), (2017).</li><li>Beeton, C., Garcia, A., Chandy, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drawing+blood+from+rats+through+the+saphenous+vein+and+by+cardiac+puncture.">Drawing blood from rats through the saphenous vein and by cardiac puncture.</a> Journal of Visualized Experiments. (7), 266 (2007).</li><li>Zou, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Repeated+Blood+Collection+from+Tail+Vein+of+Non-Anesthetized+Rats+with+a+Vacuum+Blood+Collection+System.">Repeated Blood Collection from Tail Vein of Non-Anesthetized Rats with a Vacuum Blood Collection System.</a> Journal of Visualized Experiments. (130), (2017).</li><li>Kilkenny, C., Altman, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improving+bioscience+research+reporting:+ARRIVE-ing+at+a+solution.">Improving bioscience research reporting: ARRIVE-ing at a solution.</a> Lab Animal. 44 (4), 377-378 (2010).</li><li>National Institute of Health. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. , (2011).</li><li>Antonelli, D., Feldman, A., Freedberg, N. A., Turgeman, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Axillary+vein+puncture+without+contrast+venography+for+pacemaker+and+defibrillator+leads+implantation.">Axillary vein puncture without contrast venography for pacemaker and defibrillator leads implantation.</a> Pacing and Clinical Electrophysiology. 36 (9), 1107-1110 (2013).</li><li>Luis, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microscopic+magnetic+resonance+imaging+of+the+thoracic+venous+system+in+rats+with+congenital+diaphragmatic+hernia.">Microscopic magnetic resonance imaging of the thoracic venous system in rats with congenital diaphragmatic hernia.</a> Pediatric Surgery International. 27 (2), 175-180 (2011).</li><li>Tsukamoto, A., Serizawa, K., Sato, R., Yamazaki, J., Inomata, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vital+signs+monitoring+during+injectable+and+inhalant+anesthesia+in+mice.">Vital signs monitoring during injectable and inhalant anesthesia in mice.</a> Experimental Animals. 64 (1), 57-64 (2015).</li></ol>

Hier stellen wir eine alternative Methode für die Extraktion von Blut aus der Vene subclavia und wir zeigen, dass diese Methode möglich, sichere und anwendbar für die Blutentnahme bei Ratten. Diese Methode wird von der subclavia Vene Punktion im Herzschrittmacher Blei Implantation für Patienten11abgeleitet. Die subclavia Vene liegt nur posterior und kaudalen, das Schlüsselbein und ist eine Fortsetzung der axillären Ader. Er verläuft von der äußeren Grenze der ersten Rippe auf den medialen...

Blutentnahme ist in Tierversuchen unerlässlich. Die Ziel-Adern für die Blutentnahme gehören die Retro-Orbital-Plexus, die Halsschlagader der Stammvenen, Tail Blutgefäße und die Halsschlagader1,2,3,4. Manchmal könnte Blut der abdominalen Aorta, Vena Cava oder sogar das Herz5,6,7entnommen werden. Bei solchen Gelegenheiten die Tiere geopfert werden müssen und nicht für nachfolgende Beobachtung verwendet werden; so, mit diesen Methoden sind weniger in der täglichen experimentelle Arbeit. Blutentnahme aus der Vene Schweif von Ratten ist beliebt und weniger Stress im Vergleich zu den oben genannten Methoden8.
Blutentnahme aus der Vene Schweif ist jedoch manchmal durch eine unbefriedigende Erfolgsquote begrenzt. Gelegentlich ist es auch schwierig, genügend Blutvolumen von dieser Methode zu erhalten. Die subclavia Vene ist groß genug und befindet sich direkt unter dem Schlüsselbein-Knochen, läßt Vene subclavia Punktion sich eine alternative Methode für das um Blut zu probieren, wenn routinemäßige Blut Erhebungsmethoden nicht erfolgreich sind. Hier stellen wir eine Methode der Blutentnahme mittels Vene subclavia Punktion bei Ratten.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>rats</td>
			<td>Hunan SJA Laboratory Animal Co., Ltd (Changsha, Hunan Province, China)&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stastical software</td>
			<td>SPSS Statistics 17</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>epilating agent</td>
			<td>France Yi Sha Cosmetics Co.,Ltd(Guangzhou, Guangdong Province ,China)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2.5 mL syringe</td>
			<td>Shandong Weigao Group Medical Polymer Co.,Ltd(Weihai,Shandong Province ,China)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hair shaver</td>
			<td>Shanghai FLYCO Electric Co., Ltd(Shanghai,China)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>adhesive tape</td>
			<td>3M Deutschland GmbH(EdisonstraBe 6,59157 Kamen, Germany)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pentobarbital sodium</td>
			<td>Merck</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>75% ethanol</td>
			<td>Department of Pharmacy,The Second Xiangya Hospital of Central South Univesity</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>blood collection tube</td>
			<td>Hubei Jinxing Technology&#38;Development Co.,Ltd (Wuhan Hubei Province,China) (2ml)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>electronic scale</td>
			<td>Dongguan Shengheng Electronics Co.,Ltd (Dongguan,Guangdng Province,China)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>canvas gloves</td>
			<td>for anethesia</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hepain</td>
			<td>Nanjing Xinbai Pharmaceutical&#160; Co.,Limited (Nanjing, Jiangsu Province, China) (2mL, 12500 IU)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>physical saline</td>
			<td>Hunan Kelun Pharmaceutical Co., Ltd(Yueyang ,Hunan Province,China) (100ml)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

subclavian vein puncture as an alternative method of blood sample collection in rats

Blutentnahme mit genügend Blutvolumen ist unerlässlich im Tierversuch. Blutentnahme aus der Vene Schweif von Ratten ist beliebt und weniger Stress im Vergleich zu anderen aggressiveren Methoden wie Retro-Orbital Plexus Kollektion probieren. Allerdings ist dieses Blut Erfassungsmethode manchmal durch eine unbefriedigende Erfolgsquote begrenzt. Hier stellen wir eine Methode für die Blutentnahme durch die Vene subclavia Punktion. Die subclavia Vene befindet sich direkt unter das Schlüsselbein und diese Ader ist groß genug, um das Volumen der Blutentnahme zu erfüllen. Unsere Ergebnisse zeigen, dass diese Methode sicher und anwendbar für Sammlung Blutabnahme mit der benötigten Blutvolumen. Blutentnahme durch die Vene subclavia Punktion könnte als eine alternative Blut Erfassungsmethode bei fehlgeschlagenen Schweif Vene Blut Stichproben bei Ratten dienen.

Insgesamt 20 SD-Ratten (männliche n = 10, weibliche n = 10) wurden hier verwendet. Blut Collectionwas durchgeführt, indem qualifizierte Betreiber, die mehr als 20 Blut Kostproben aus der subclavia Vene an Ratten durchgeführt haben und die Anfänger-Betreiber, die keine Vene subclavia Punktion haben Erfahrung in Ratten oder andere Tiere. Vor Operationen beobachtete Anfänger mindestens 3 Verfahren durch qualifiziertes Personal durchgeführt.
<p class="jove_content" fo:keep-together...

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Subclavian Vein Puncture As an Alternative Method of Blood Sample Collection in Rats

Hier präsentieren wir ein Protokoll, um Blutproben von der Ratte subclavia Vene zu sammeln.

Vene subclavia Punktion als eine Alternative Methode zur Probe Blutentnahme bei Ratten

Blood collection with enough blood volume is essential in animal experiments. Blood collection from the tail vein of rats is popular and less stressful ...

Subklavische Venenpunktion als alternative Methode der Blutprobenentnahme bei Ratten. Nach vollnarkose, platzieren Ratten in Supine-Position und sterilisieren infraclavicularRaum mit 75%Ethanol. Identifizieren Sie überlegene sternale Fossa vor der Punktion.Suchen Sie die Punktionsstelle, kaudal zum äußeren Ein-Drittel-Bereich des Schlüsselbeins auf der gleichen Seite. Die Richtung der Nadel wurde in Richtung der überlegenen sternalen Fossa positioniert und sollte fast parallel zum Schlüsselbein, nur nachträvoll zu ihr. Nach der Blutentnahme die Punktionsstelle ein bis zwei Minuten lang drücken, um die Blutung zu stoppen.Bei Tierversuchen wird immer eine Blutentnahme mit ausreichender Menge benötigt. Blutentnahme von RattenSchwanz Vene ist beliebt und weniger stressig als einige aggressive Methoden wie Retro-Orbital Plexus Probenentnahme. Diese Methode wird jedoch durch die Erfolgsquote begrenzt.Hier stellen wir unsere Methode zur Blutentnahme mit gewünschtem Blutvolumen aus der subklavischen Vene vor. Unsere Ergebnisse zeigen, dass diese Methode sicher und praktisch ist, und könnte in Betracht gezogen werden, falls blutprobemäßige Blutentnahme aus der Schwanzvene fehlschlägt. Zum Start, bereiten Klebeband, Epiliermittel, 75%Ethanol, Blutentnahmeröhre, zwei Punkt Fünf-Milliliter-Spritze, Haarrasierer, elektronische Skala, Heparin, und physiologische Salzlösung.Hausratten unter normalen Bedingungen, mit freiem Zugang zu Nahrung und Trinkwasser, gehalten in 530 Quadratzentimeter Käfigen mit Holzrasierbetten. Induzieren Sie Die Vollnarkose bei allen Tieren durch intraperitoneale Injektion vor der Punktion. Legen Sie die Ratte in Supine-Position, fixieren Sie die Hinterbeine in einer bequemen Position, und fixieren Sie die oberen Gliedmaßen parallel zum Körper, direkt neben dem Rumpf.Reinigen Sie beide Seiten des infraclavicularen Raumes, um das Fell und sichtbaren Schmutz zu entfernen. Den Hals und die Brusthaut mit 75% Ethanol abwischen und den Bereich mit Gaze sauber und trocken halten. Beide Seiten der subklavischen Vene sind für die Punktion geeignet, und hier wählen wir die rechte Seite für die Punktion.Identifizieren Sie die Position und die Richtung des rechten Schlüsselbeins mit dem linken Daumen des Bedieners, und lokalisieren Sie die überlegene sternale Fossa sanft mit dem Zeigefinger. Spülen Sie unsere Spritze mit 10 Einheiten pro Milliliter Heparin-Lösung. Suchen Sie die Punktionsstelle, zeigen Sie fünf Millimeter kaudal auf den äußeren Bereich von einem Drittel des rechten Schlüsselbeins.Bewegen Sie die Spritze sanft in die Haut der Punktionsstelle. Sobald die Nadel in die infraclaviculare Haut gelangt, wenden Sie einen aktiven Druck durch die rechte Hand des Bedieners an. Die Richtung der Nadel ist in Richtung der überlegenen sternalen Fossa positioniert und sollte fast parallel zum Schlüsselbein, nur nachträvoll zu ihr.Normalerweise kann die subklavische Vene erreicht werden, indem die Nadel für etwa zwei Millimeter in diese Richtung eingesetzt wird. Sobald die Nadel in die Vene gelangt, gelangt blutgemäß unter einem aktiven Druck in die Spritze. Dann muss der aktive Druck aufrechterhalten werden, bis das richtige Blutvolumen gezogen ist.Entfernen Sie nach der Blutentnahme die Punktionsnadel, und drücken Sie die Punktionsstelle für ein bis zwei Minuten, um die Blutung zu stoppen. Achten Sie darauf: Der Druck muss sehr sanft sein, um Ersticken zu verhindern. Übertragen Sie die Blutprobe in ein antikoaguliertes Vakuumröhrchen mit EDTA und Zentrifuge bei 1600G für 10 Minuten, um Plasma zu sammeln.Aspirieren Sie das Überwinden, um Rohr wieder zu reinigen und bei minus 18 Grad Celsius zu lagern. Um die Erfolgsquote zwischen den fachkundigen Bedienern und den Anfängern zu vergleichen, wurden 20 SD-Ratten nach dem Zufallsprinzip in zwei Gruppen eingeteilt. Die Ergebnisse zeigen, dass durch die richtige subklavische Ader neun Ratten in der Fachgruppe und acht Ratten in der Anfängergruppe erfolgreich waren.Dann gelang die Blutentnahme der restlichen drei Ratten durch die linke Seite. Die Erfolgsquote hatte keinen signifikanten Unterschied zwischen diesen beiden Gruppen. Der Zeitverlauf war in diesen beiden Gruppen etwas anders.Während oder nach der Operation traten keine schwerwiegenden Komplikationen wie Pneumothorax, Hämopneumothorax und Blutungen auf. Alle Tiere überlebten nach der Blutentnahme. Um die Schwierigkeiten beim Erlernen des Punktionsverfahrens zu demonstrieren, haben wir die Anzahl der Abhebungen zwischen den Fachmanns- und den Anfängergruppen weiter verglichen.Wie aus Tabelle 2 hervorgeht, ist die durchschnittliche Zahl der Abhebungen in der Fachgruppe etwas geringer als bei den Anfängern, aber es gibt keine statistische Signifikanz. Zusammenfassend zeigen unsere Ergebnisse, dass die subklavische Venenpunktionsstrategie für die Blutentnahme bei Ratten sicher und machbar ist. Diese Methode ist wertvoll, vor allem bei Gelegenheiten, wenn eine große Menge Blut benötigt wird.Diese Methode könnte eine optimale Alternative sein, wenn die herkömmliche Blutentnahme fehlschlägt.

Research

JoVE Journal

Medicine

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Forschung

Medizin

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Context Dependent Blood Collection Methods in Rats (Video) | JoVE

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