Name: subclavian vein puncture as an alternative method of blood sample collection in rats
Uploaded: 2018-11-18T13:00:00
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Nenhum declarado.

Este estudo foi aprovado pelo Comitê de ética de Universidade de South Central para a pesquisa Animal do segundo Xiangya Hospital (Changsha, China). O manuscrito foi preparado de acordo com a chegada (pesquisa Animal: relatórios no Vivo experimentos) orientações9.
1. material e Animal preparação
<ol><li>Preparar os materiais necessários: fita adesiva, agente de depilação, 75% de etanol, tubo de coleta de sangue, seringa de 2,5 mL, conectado com agulha (24 G,...

<ol>
	<li>Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+sample+collection+in+small+laboratory+animals.">Blood sample collection in small laboratory animals.</a> Journal of Pharmacology, Pharmacotherapeutics. 1 (2), 87-93 (2010).</li><li>Korfmacher, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Utility+of+capillary+microsampling+for+rat+pharmacokinetic+studies:+Comparison+of+tail-vein+bleed+to+jugular+vein+cannula+sampling.">Utility of capillary microsampling for rat pharmacokinetic studies: Comparison of tail-vein bleed to jugular vein cannula sampling.</a> Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 76, 7-14 (2015).</li><li>Feng, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Catheterization+of+the+carotid+artery+and+jugular+vein+to+perform+hemodynamic+measures,+infusions+and+blood+sampling+in+a+conscious+rat+model.">Catheterization of the carotid artery and jugular vein to perform hemodynamic measures, infusions and blood sampling in a conscious rat model.</a> Journal of Visualized Experiments. (95), (2015).</li><li>Wickremsinhe, E. R., Renninger, M., Paulman, A., Pritt, M., Schultze, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+Repeated+Tail+Clip+and+Saphenous+Vein+Phlebotomy+on+Rats+Used+in+Toxicology+Studies.">Impact of Repeated Tail Clip and Saphenous Vein Phlebotomy on Rats Used in Toxicology Studies.</a> Toxicologic Pathology. 44 (7), 1013-1020 (2016).</li><li>Takahashi, M., Makino, S., Kikkawa, T., Osumi, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+rat+serum+suitable+for+mammalian+whole+embryo+culture.">Preparation of rat serum suitable for mammalian whole embryo culture.</a> Journal of Visualized Experiments. (90), e51969 (2014).</li><li>Cochran, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determining+Glucose+Metabolism+Kinetics+Using+18F-FDG+Micro-PET/CT.">Determining Glucose Metabolism Kinetics Using 18F-FDG Micro-PET/CT.</a> Journal of Visualized Experiments. (123), (2017).</li><li>Beeton, C., Garcia, A., Chandy, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drawing+blood+from+rats+through+the+saphenous+vein+and+by+cardiac+puncture.">Drawing blood from rats through the saphenous vein and by cardiac puncture.</a> Journal of Visualized Experiments. (7), 266 (2007).</li><li>Zou, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Repeated+Blood+Collection+from+Tail+Vein+of+Non-Anesthetized+Rats+with+a+Vacuum+Blood+Collection+System.">Repeated Blood Collection from Tail Vein of Non-Anesthetized Rats with a Vacuum Blood Collection System.</a> Journal of Visualized Experiments. (130), (2017).</li><li>Kilkenny, C., Altman, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improving+bioscience+research+reporting:+ARRIVE-ing+at+a+solution.">Improving bioscience research reporting: ARRIVE-ing at a solution.</a> Lab Animal. 44 (4), 377-378 (2010).</li><li>National Institute of Health. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. , (2011).</li><li>Antonelli, D., Feldman, A., Freedberg, N. A., Turgeman, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Axillary+vein+puncture+without+contrast+venography+for+pacemaker+and+defibrillator+leads+implantation.">Axillary vein puncture without contrast venography for pacemaker and defibrillator leads implantation.</a> Pacing and Clinical Electrophysiology. 36 (9), 1107-1110 (2013).</li><li>Luis, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microscopic+magnetic+resonance+imaging+of+the+thoracic+venous+system+in+rats+with+congenital+diaphragmatic+hernia.">Microscopic magnetic resonance imaging of the thoracic venous system in rats with congenital diaphragmatic hernia.</a> Pediatric Surgery International. 27 (2), 175-180 (2011).</li><li>Tsukamoto, A., Serizawa, K., Sato, R., Yamazaki, J., Inomata, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vital+signs+monitoring+during+injectable+and+inhalant+anesthesia+in+mice.">Vital signs monitoring during injectable and inhalant anesthesia in mice.</a> Experimental Animals. 64 (1), 57-64 (2015).</li></ol>

Aqui, apresentamos um método alternativo para a extração de sangue da veia subclávia e mostramos que esse método é viável, seguro e aplicável para amostragem de sangue em ratos. Este método é derivado a punção da veia subclávia em implante de marcapasso chumbo para pacientes11. Veia subclávia situa-se apenas caudal à clavícula e posterior e é uma continuação da veia axilar. Corre da borda externa da primeira costela à borda medial do músculo escaleno anterior...

Coleta de sangue é essencial em pesquisas com animais. As veias de destino para coleta de sangue incluem o plexo retrô-orbital, a veia jugular, a veia safena, os vasos sanguíneos de cauda e a artéria carótida1,2,3,4. Às vezes, sangue, poderia ser obtido da aorta abdominal, veia cava ou até mesmo o coração5,6,7. Em tais ocasiões, os animais devem ser sacrificados e não podem ser usados para observação posterior; assim, esses métodos são usados menos no trabalho diário experimental. Coleta de sangue da veia da cauda de ratos é popular e menos estressante em comparação com o acima mencionado métodos8.
No entanto, coleta de sangue da veia da cauda é às vezes limitada por uma taxa de sucesso insatisfatório. Ocasionalmente, também é difícil de obter suficiente volume de sangue por esse método. Como a veia subclávia é grande o suficiente e está localizada logo abaixo do osso da clavícula, punção de veia subclávia pode ser um método alternativo para amostragem de sangue se métodos de coleta de sangue de rotina são mal sucedidos. Aqui, apresentamos um método de coleta de sangue por meio de punção da veia subclávia em ratos.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>rats</td>
			<td>Hunan SJA Laboratory Animal Co., Ltd (Changsha, Hunan Province, China)&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stastical software</td>
			<td>SPSS Statistics 17</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>epilating agent</td>
			<td>France Yi Sha Cosmetics Co.,Ltd(Guangzhou, Guangdong Province ,China)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2.5 mL syringe</td>
			<td>Shandong Weigao Group Medical Polymer Co.,Ltd(Weihai,Shandong Province ,China)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hair shaver</td>
			<td>Shanghai FLYCO Electric Co., Ltd(Shanghai,China)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>adhesive tape</td>
			<td>3M Deutschland GmbH(EdisonstraBe 6,59157 Kamen, Germany)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pentobarbital sodium</td>
			<td>Merck</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>75% ethanol</td>
			<td>Department of Pharmacy,The Second Xiangya Hospital of Central South Univesity</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>blood collection tube</td>
			<td>Hubei Jinxing Technology&#38;Development Co.,Ltd (Wuhan Hubei Province,China) (2ml)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>electronic scale</td>
			<td>Dongguan Shengheng Electronics Co.,Ltd (Dongguan,Guangdng Province,China)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>canvas gloves</td>
			<td>for anethesia</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hepain</td>
			<td>Nanjing Xinbai Pharmaceutical&#160; Co.,Limited (Nanjing, Jiangsu Province, China) (2mL, 12500 IU)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>physical saline</td>
			<td>Hunan Kelun Pharmaceutical Co., Ltd(Yueyang ,Hunan Province,China) (100ml)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

subclavian vein puncture as an alternative method of blood sample collection in rats

Coleta de sangue com o volume de sangue suficiente é essencial em experiências com animais. Coleta de sangue da veia da cauda de ratos é popular e menos estressante, comparado a outros métodos mais agressivos, tais como retro-orbital plexo coleta da amostra. No entanto, este método de coleta de sangue às vezes é limitado por uma taxa de sucesso insatisfatório. Aqui, apresentamos um método para coleta de sangue através de punção da veia subclávia. A veia subclávia está localizada logo abaixo da clavícula e esta veia é grande o suficiente para cumprir os requisitos de volume de coleta de sangue. Nossos resultados mostram que este método é seguro e aplicável para amostragem de coleta de sangue com o volume de sangue necessário. Coleta de sangue através de punção da veia subclávia poderia servir como um método de coleta de sangue alternativos em caso de colheita de sangue de veia de cauda falhou em ratos.

Um total de 20 ratos SD (masculino n = 10, feminino n = 10) foram utilizados aqui. Collectionwas de sangue realizadas por operadores qualificados, que tenham realizado a mais de 20 amostras de sangue da veia subclávia em ratos e dos operadores de iniciante, que tenham não punção da veia subclávia experiência em ratos ou outros animais. Antes de operações, iniciantes assistiram pelo menos 3 procedimentos feitos por operadores qualificados.
<p class="jove_content" fo:keep-toget...

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Subclavian Vein Puncture As an Alternative Method of Blood Sample Collection in Rats

Aqui, apresentamos um protocolo para coletar amostras de sangue de rato veia subclávia.

Punção da veia subclávia como um método alternativo de coleta de amostra de sangue em ratos

Blood collection with enough blood volume is essential in animal experiments. Blood collection from the tail vein of rats is popular and less stressful ...

Punção de veia subclávia como método alternativo de coleta de amostras de sangue em ratos. Após anestesia geral, coloque os ratos em posição supina e esterilize o espaço infraclavicular com 75% de etanol. Identifique a fossa sternal superior antes da punção.Local de perfuração, caudal para a região externa de um terço da clavícula no mesmo lado. A direção da agulha foi posicionada em direção à fossa sternal superior e deve quase paralelo à clavícula, apenas posterior a ela. Após a coleta de sangue, pressione o local da punção por um a dois minutos, para parar de sangrar.Coleta de sangue com volume suficiente é sempre necessária em experimentos em animais. A coleta de sangue da veia da cauda dos ratos é popular e menos estressante do que alguns métodos agressivos, como a coleta de amostras de plexo orbital retrô. No entanto, este método é limitado pela taxa de sucesso.Aqui, introduzimos nosso método de coleta de sangue com o volume sanguíneo desejado da veia subclávia. Nossos resultados mostram que este método é seguro e prático, e pode ser considerado no caso de a amostragem de sangue da veia da cauda falhar. Para começar, prepare fita adesiva, agente de depilação, 75% de etanol, tubo de coleta de sangue, dois ponto cinco mililitros de seringe, barbeador de cabelo, balança eletrônica, heparina e soro fisiológico.Ratos domésticos em condições padrão, com livre acesso a alimentos e água potável, mantidos em gaiolas de 530 centímetros quadrados com roupa de cama de barbear de madeira. Induzir anestesia geral em todos os animais através de injeção intraperitoneal antes da punção. Coloque o rato em posição supina, fixe os membros traseiros em uma posição confortável e fixe os membros superiores paralelos ao corpo, ao lado do tronco.Limpe ambos os lados do espaço infraclavicular para remover a pele e qualquer sujeira visível. Limpe o pescoço e a pele torácica com 75% de etanol, e mantenha a área limpa e seca com gaze. Ambos os lados da veia subclávia são adequados para perfuração, e aqui, escolhemos o lado direito para perfuração.Identifique a localização e a direção da clavícula direita com o polegar esquerdo do operador, e localize a fossa sternal superior suavemente com o dedo indicador. Enxágüe nossa seringa com 10 unidades por mililitro solução de heparina. Local de perfuração, aponte cinco milímetros caudal para a região externa de um terço da clavícula direita.Mova a seringa suavemente para a pele do local da punção. Uma vez que a agulha entre na pele infraclavicular, aplique uma pressão ativa através da mão direita do operador. A direção da agulha está posicionada em direção à fossa sternal superior, e deve quase paralelo à clavícula, apenas posterior a ela.Normalmente, a veia subclávia poderia ser alcançada inserindo a agulha por cerca de dois milímetros nesta direção. Uma vez que a agulha entra na veia, o sangue entrará na seringa sob uma pressão ativa. Em seguida, a pressão ativa deve ser mantida até que o volume adequado de sangue seja extraído.Após a coleta de sangue, remova a agulha de perfuração, e pressione o local da punção por um a dois minutos para parar o sangramento. Preste atenção:a pressão deve ser muito suave para evitar o estrangulamento. Transfira a amostra de sangue para um tubo de vácuo antiagulado com EDTA e centrífuga a 1600G por 10 minutos para coletar plasma.Aspire o supernatent para remasco do tubo e armazene a menos 18 graus Celsius. Para comparar a taxa de sucesso entre os operadores qualificados e os iniciantes, 20 ratos SD foram divididos em dois grupos aleatoriamente. Os resultados mostram que, através da veia subclávia direita, nove ratos do grupo qualificado e oito ratos do grupo iniciante conseguiram, respectivamente.Então a coleta de sangue dos três ratos restantes conseguiu através do lado esquerdo. A taxa de sucesso não teve diferença significativa entre esses dois grupos. O curso de tempo foi ligeiramente diferente nesses dois grupos.Não houve complicações graves, como pneumotórax, hemopneumothorax e hemorragia durante ou após a operação. Todos os animais sobreviveram após a amostragem de sangue. Para demonstrar as dificuldades de aprender o procedimento de punção, comparamos ainda mais o número de saques entre os grupos qualificados e iniciantes.Como mostrado na Tabela Dois, o número médio de saques em grupo qualificado é ligeiramente menor do que os iniciantes, mas não há significância estatística. Em conclusão, nossos resultados mostram que a estratégia de punção venosa subclávia para coleta de sangue é segura e viável em ratos. Este método é valioso, especialmente em ocasiões em que grande quantidade de sangue é necessária.Este método pode ser uma alternativa ideal se a amostragem de sangue convencional falhar.

Research

JoVE Journal

Medicine

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Medicina

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Coleta de sangue por punção da veia subclávia em camundongos

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Comparative Study of Blood Collection Techniques in Rats

Modified Tail Vein and Penile Vein Puncture for Blood Sampling in the Rat Model

Context Dependent Blood Collection Methods in Rats (Video) | JoVE

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