Name: endotoxin activity assay for the detection of whole blood endotoxemia in critically ill patients
Uploaded: 2019-06-24T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Endotoxin Activity Assay for the Detection of Whole Blood Endotoxemia in Critically Ill Patients at JoVE.com

نشكر باولو براغانو وليزا ماتياسين، دكتوراه على استعراضمنهجية بروتوكول التقييم. قدم داريو وينترتون، دكتوراه في الطب مساعدة كبيرة في مراجعة المخطوطة لإتقان اللغة الإنجليزية.

يتم تنفيذ البروتوكول وفقا للمبادئ التوجيهية المؤسسية المتعلقة بمعالجة العينات البيولوجية البشرية واتباع الإجراءات التشغيلية القياسية الحالية لمختبرنا السريري. يتبع استخدام بيانات EA والمعلومات السريرية للمرضى الذين يتم اختبارهم المبادئ التوجيهية للجنة أخلاقيات البحث البشري في مؤسست?...

<ol>
	<li>Akira, S., Takeda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toll-like+receptor+signalling.">Toll-like receptor signalling.</a> Nature Reviews Immunology. 4 (7), 499-511 (2004).</li><li>Takeda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolution+and+integration+of+innate+immune+recognition+systems:+the+Toll-like+receptors.">Evolution and integration of innate immune recognition systems: the Toll-like receptors.</a> Journal of Endotoxin Research. 11 (1), 51-55 (2005).</li><li>Ulevitch, R. J., Tobias, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recognition+of+gram-negative+bacteria+and+endotoxin+by+the+innate+immune+system.">Recognition of gram-negative bacteria and endotoxin by the innate immune system.</a> Current Opinion in Immunology. 11 (1), 19-22 (1999).</li><li>Natanson, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endotoxin+and+tumor+necrosis+factor+challenges+in+dogs+simulate+the+cardiovascular+profile+of+human+septic+shock.">Endotoxin and tumor necrosis factor challenges in dogs simulate the cardiovascular profile of human septic shock.</a> The Journal of Experimental Medicine. 169 (3), 823-832 (1989).</li><li>Suffredini, A. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cardiovascular+response+of+normal+humans+to+the+administration+of+endotoxin.">The cardiovascular response of normal humans to the administration of endotoxin.</a> The New England Journal of Medicine. 321 (5), 280-287 (1989).</li><li>Singer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Third+International+Consensus+Definitions+for+Sepsis+and+Septic+Shock+(Sepsis-3).">The Third International Consensus Definitions for Sepsis and Septic Shock (Sepsis-3).</a> JAMA: The Journal of the American Medical Association. 315 (8), 801-810 (2016).</li><li>Gupta, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culture-Negative+Severe+Sepsis:+Nationwide+Trends+and+Outcomes.">Culture-Negative Severe Sepsis: Nationwide Trends and Outcomes.</a> Chest. 150 (6), 1251-1259 (2016).</li><li>Ikeda, T., Ikeda, K., Suda, S., Ueno, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Usefulness+of+the+endotoxin+activity+assay+as+a+biomarker+to+assess+the+severity+of+endotoxemia+in+critically+ill+patients.">Usefulness of the endotoxin activity assay as a biomarker to assess the severity of endotoxemia in critically ill patients.</a> Innate Immunity. 20 (8), 881-887 (2014).</li><li>Dellinger, R. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+Targeted+Polymyxin+B+Hemoperfusion+on+28-Day+Mortality+in+Patients+With+Septic+Shock+and+Elevated+Endotoxin+Level.">Effect of Targeted Polymyxin B Hemoperfusion on 28-Day Mortality in Patients With Septic Shock and Elevated Endotoxin Level.</a> The EUPHRATES Randomized Clinical Trial. JAMA: The Journal of the American Medical Association. 320 (14), 1455-1463 (2018).</li><li>Marshall, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnostic+and+prognostic+implications+of+endotoxemia+in+critical+illness:+results+of+the+MEDIC+study.">Diagnostic and prognostic implications of endotoxemia in critical illness: results of the MEDIC study.</a> The Journal of Infectious Diseases. 190 (3), 527-534 (2004).</li><li>Levin, J., Bang, F. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clottable+protein+in+Limulus;+its+localization+and+kinetics+of+its+coagulation+by+endotoxin.">Clottable protein in Limulus; its localization and kinetics of its coagulation by endotoxin.</a> Thrombosis et Diathesis Haemorrhagica. 19 (1), 186-197 (1968).</li><li>Marshall, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+endotoxin+activity+in+critically+ill+patients+using+whole+blood+neutrophil+dependent+chemiluminescence.">Measurement of endotoxin activity in critically ill patients using whole blood neutrophil dependent chemiluminescence.</a> Critical Care. 6 (4), 342-348 (2002).</li><li>Grimaldi, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+Level+of+Endotoxemia+Following+Out-of-Hospital+Cardiac+Arrest+Is+Associated+With+Severity+and+Duration+of+Postcardiac+Arrest+Shock.">High Level of Endotoxemia Following Out-of-Hospital Cardiac Arrest Is Associated With Severity and Duration of Postcardiac Arrest Shock.</a> Critical Care Medicine. 43 (12), 2597-2604 (2015).</li><li>Klein, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+EUPHRATES+trial+(Evaluating+the+Use+of+Polymyxin+B+Hemoperfusion+in+a+Randomized+controlled+trial+of+Adults+Treated+for+Endotoxemia+and+Septic+shock):+study+protocol+for+a+randomized+controlled+trial.">The EUPHRATES trial (Evaluating the Use of Polymyxin B Hemoperfusion in a Randomized controlled trial of Adults Treated for Endotoxemia and Septic shock): study protocol for a randomized controlled trial.</a> Trials. 15, 218 (2014).</li><li>Bottiroli, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevalence+and+clinical+significance+of+early+high+Endotoxin+Activity+in+septic+shock:+An+observational+study.">Prevalence and clinical significance of early high Endotoxin Activity in septic shock: An observational study.</a> Journal of Critical Care. 41, 124-129 (2017).</li><li>Kaukonen, K. M., Bailey, M., Suzuki, S., Pilcher, D., Bellomo, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mortality+related+to+severe+sepsis+and+septic+shock+among+critically+ill+patients+in+Australia+and+New+Zealand.">Mortality related to severe sepsis and septic shock among critically ill patients in Australia and New Zealand.</a> JAMA: The Journal of the American Medical Association. 311 (13), 1308-1316 (2014).</li><li>Biagioni, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endotoxin+activity+levels+as+a+prediction+tool+for+risk+of+deterioration+in+patients+with+sepsis+not+admitted+to+the+intensive+care+unit:+a+pilot+observational+study.">Endotoxin activity levels as a prediction tool for risk of deterioration in patients with sepsis not admitted to the intensive care unit: a pilot observational study.</a> Journal of Critical Care. 28 (5), 612-617 (2013).</li><li>Roth, R. I., Levin, F. C., Levin, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+detection+of+bacterial+endotoxin+in+plasma+with+the+Limulus+test.">Optimization of detection of bacterial endotoxin in plasma with the Limulus test.</a> The Journal of Laboratory and Clinical Medicine. 116 (2), 153-161 (1990).</li><li>Yaguchi, A., Yuzawa, J., Klein, D. J., Takeda, M., Harada, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combining+intermediate+levels+of+the+Endotoxin+Activity+Assay+(EA)+with+other+biomarkers+in+the+assessment+of+patients+with+sepsis:+results+of+an+observational+study.">Combining intermediate levels of the Endotoxin Activity Assay (EA) with other biomarkers in the assessment of patients with sepsis: results of an observational study.</a> Critical Care. 16 (3), (2012).</li><li>Earley, Z. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Burn+Injury+Alters+the+Intestinal+Microbiome+and+Increases+Gut+Permeability+and+Bacterial+Translocation.">Burn Injury Alters the Intestinal Microbiome and Increases Gut Permeability and Bacterial Translocation.</a> PLoS One. 10 (7), (2015).</li><li>Munster, A. M., Smith-Meek, M., Dickerson, C., Translocation Winchurch, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incidental+phenomenon+or+true+pathology?.">Incidental phenomenon or true pathology?.</a> Annals of Surgery. 218 (3), 321 (1993).</li><li>Clementi, A., Virz&#236;, G. M., Brocca, A., Ronco, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Role+of+Endotoxin+in+the+Setting+of+Cardiorenal+Syndrome+Type+5.">The Role of Endotoxin in the Setting of Cardiorenal Syndrome Type 5.</a> Cardiorenal Medicine. 7 (4), 276-283 (2017).</li><li>Virz&#236;, G. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiorenal+Syndrome+Type+5+in+Sepsis:+Role+of+Endotoxin.">Cardiorenal Syndrome Type 5 in Sepsis: Role of Endotoxin.</a> in Cell Death Pathways and Inflammation. Kidney and Blood Pressure Research. 41 (6), 1008-1015 (2016).</li><li>Mignon, F., Piagnerelli, M., Van Nuffelen, M., Vincent, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+empiric+antibiotic+treatment+on+plasma+endotoxin+activity+in+septic+patients.">Effect of empiric antibiotic treatment on plasma endotoxin activity in septic patients.</a> Infection. 42 (3), 521-528 (2014).</li><li>Klein, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Daily+variation+in+endotoxin+levels+is+associated+with+increased+organ+failure+in+critically+ill+patients.">Daily variation in endotoxin levels is associated with increased organ failure in critically ill patients.</a> Shock. 28 (5), 524-529 (2007).</li></ol>

صدمة الصرف الصحي لا تزال في الوقت الحاضر المرتبطة بوفيات تصل إلى 40٪، على الرغم من أن هذا المعدل يختلف وفقا للتقارير النظر16. تدعو معظم الخبراء في المجالات إلى الحاجة إلى علامات حيوية جديدة وأفضل من أجل مساعدة الأطباء في التشخيصالمبكر، وتحسين الإدارة، والتنبؤ بال?...

يُيعتبر الليبوبوليساكاريد (LPS)، المعروف أيضًا باسم endotoxin، مكونًا رئيسيًا في بنية غشاء بكتيريا الغرام سلبية (GN). أنها تشكل حوالي 10٪ من جدار الخلية، كونها حيوية لسلامة الغشاء الخارجي والتوازن. وعلاوة على ذلك، بل هو المنشط قوية من الجهاز المناعي الفطري المضيف1،2.
التعرض في المختبر من خلايا الجهاز المناعي الفطرية إلى LPS يؤدي إلى تغييرات في التعبير عن جينات متعددة3. إدارة كميات صغيرة جدا من LPS في المتطوعين الإنسان الأصحاء يؤدي إلى سلسلة من التهاب الجهازية الحادة، في حين أن الإنتان وصدمة الصرف الصحي قد تنشأ مع تركيزات أعلى endotoxin4،5.
الإنتان هو حالة تهدد الحياة والتي، إذا لم يتم التعرف عليها على الفور، يمكن أن يؤدي إلى فشل متعدد الأعضاء والموت. يجب علاج مرضى الصرف الصحي في الوقت المناسب، مع الإنعاش العدواني، والعلاج بالمضادات الحيوية الكافية، والسيطرة المثلى على المصدر، واستراتيجيات دعم الأعضاء الفورية. ويستند تشخيص مسببات الإنتان في المقام الأول على الاعتراف السريري والكشف عن مسببات الأمراض القائمة على الثقافة6. ومع ذلك، قد تستغرق نتائج الثقافات الميكروبية ما يصل إلى 48 ساعة وهي غير حاسمة في ما يصل إلى 30٪ من الحالات7. وقد يؤدي التحديد والتدخل المبكران إلى نتائج أفضل للمرضى. في المرضى الذين يشتبه في الإنتان ، غالبا ما تتخذ القرارات على أساس المعلمات الفسيولوجية والكيميائية الحيوية ، دون علامة واضحة على بطانة الرحم.
قياس نشاط إندوتوكسين (EA) يمكن الحصول عليه او طريق اختبار تجاري (انظر جدولالمواد) في الدم كله. ويمكن استخدامه كعلامة بيولوجية للبطانة السينية الجهازية للتقسيم الطبقي المبكر لشدة المرض، وخاصة في المرضى المعرضين لخطر الإصابة بصدمة الصرف الصحي8. تم استخدام اختبار لتوجيه بوليماكسين B العلاج الهيموبيرفيوجن في تجربة سريرية مزدوجة التعمية التي تم نشرها مؤخرا معشاة التعمية في المرضى الذين يعانون من صدمة الصرف الصحي9. في المرضى الذين يعانون من أمراض خطيرة، وأظهرت الدراسة MEDIC زيادة مستويات EA أن تكون مرتبطة مع خلل الجهاز متعددة، وحدة العناية المركزة (ICU) طول مدة الإقامة، والوفيات10.
وقد وضعت تجارب مختلفة للكشف عن الاندوتوكسين. اختبار ليمولوس الأميبوسيت ليسات (LAL)، إما كاختبار جل جلطة، عكر، أو كروموجينيك، كان حتى الآن الأكثر شيوعا ً المعتمدة لتقدير إندوتوكسين المصل. وهو يقوم على قدرة endotoxin للحث على تخثر الهيمولمفي من سرطان البحر حدوة الحصان ، Limulus polyphemus. ومع ذلك، فإن هذا القول له بعض القيود من حيث الخصوصية. على وجه الخصوص، فإنه يمكن أيضا أن تنشط من قبل المنتجات الميكروبية غير endotoxin، مثل مكونات جدار الخلية الفطرية، ويمكن أن تمنعها مختلف بروتينات البلازما البشرية11.
خلال العقد الماضي تم تطوير قياس EA والتحقق من صحته كعلامة بيولوجية لتدوير بطانة الرحم. بالمقارنة مع اختبار LAL، EA هو أسرع وأسهل لتنفيذ في الإعداد السريري. وعلاوة على ذلك، فقد ثبت أن تكون أكثر دقة من LAL في الدم كله، مع زيادة الحساسية والخصوصية، سواء في المختبر وفي الجسم الحي12.
وعلى الرغم من تنفيذه الأولي كأداة تشخيصية مبكرة للتعرف السريع على بكتيريا GN كعوامل تسببية للإنتان، فقد تمت دراسة مستوى EA أيضًا كعلامة حيوية لشدة المرض. في هذا السياق، وقد ثبت أن تكون مفيدة بشكل خاص لتقييم حالة نقص التسريب بسبب الأمراض الحرجة المستمرة، مثل صدمة الصرف الصحي أو متلازمة ما بعد توقف القلب13. في الآونة الأخيرة، منذ تطوير أنظمة تنقية الهيموتنقية، كما تم اقتراح نتيجة إيجابية EA كأداة فحص لتحديد بدقة المرشحين المحتملين لمثل هذا العلاج14. أجرينا مؤخرا دراسة استعادية مراقبة حول انتشار ودلالة سريرية من مستويات عالية في وقت مبكر من EA في 107 المرضى الذين يعانون من صدمة الصرف الصحي. تمشيا مع النتائج الأخيرة الأخرى، وجدنا أن EA هو علامة واعدة من شدة المرض في المرضى الذين يعانون من صدمة الصرف الصحي15.
الهدف من هذه المخطوطة هو وصف طريقة إجراء الفحص EA، سواء في السرير أو في المختبر، ووصف استخدامه المحتمل في سيناريو تمثيلي لصدمة الصرف الصحي. هذه التقنية يمكن الكشف عن نشاط LPS عن طريق قياس انفجار الأكسدة المعززة في العدلات بعد فتيلة من قبل مجمعات من الأجسام المضادة للاندوتوكسين وLPS. يتم الكشف عن زيادة انفجار الجهاز التنفسي عن طريق مقياس الكيميلومين ويعتبر مقدار الضوء المنبعث متناسبا مع كمية الإندوتوكسين في عينة الدم. يتطلب فحص عدد قليل من الكواشف، ويستغرق حوالي 30 دقيقة لأداء ويستخدم أقل من 40 ميكرولتر من الدم كله12.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:727px;" width="726">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:184px;">EAA kit</td>
			<td style="width:141px;">Spectral Medical Inc.</td>
			<td style="width:133px;">EAAST-20</td>
			<td style="width:268px;">Package with 20 tests + 1 quality control</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:184px;">Smart Line TL</td>
			<td style="width:141px;">Berthold</td>
			<td style="width:133px;">EAASL</td>
			<td>Luminometer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:184px;">Incubator shaker</td>
			<td style="width:141px;">GRANT</td>
			<td style="width:133px;">ES-20</td>
			<td>Mini-incubator shaker</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:184px;">Vortexer</td>
			<td style="width:141px;">VWR</td>
			<td style="width:133px;">444-2790</td>
			<td>Vortex instrument</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

endotoxin activity assay for the detection of whole blood endotoxemia in critically ill patients

Lipopolysaccharide، والمعروف أيضا باسم endotoxin، هو عنصر أساسي من البكتيريا سلبية الغرام ويلعب دورا حاسما في تطوير الإنتان وصدمة الصرف الصحي. وقد يؤدي التحديد المبكر لعملية معدية تتطور بسرعة إلى مرض حرج إلى علاج أسرع وأكثر كثافة، مما قد يؤدي إلى نتائج أفضل للمرضى. يمكن استخدام اختبار نشاط الإندوتوكسين (EA) في جانب السرير كعلامة حيوية موثوق بها لبطانة الرحم الجهازية. وقد ثبت مرارا وتكرارا الكشف عن ارتفاع مستويات النشاط endotoxin أن تكون مرتبطة مع زيادة شدة المرض في المرضى الذين يعانون من الإنتان وصدمة الصرف الصحي. يمكن إجراء الإنقاب بسرعة وسهولة الأداء. لفترة وجيزة، بعد أخذ العينات، يتم خلط aliquot من الدم كله مع الأجسام المضادة للاندوتوكسين ومع LPS المضافة. يتم قياس نشاط Endotoxin كانفجار الأكسدة النسبية من العدلات تستعد كما تم الكشف عنها من قبل chemioluminescence. يتم التعبير عن ناتج التقييم على مقياس من 0 (غائب) إلى 1 (الحد الأقصى) ويصنف على أنه "منخفض" (<0.4 وحدة) أو "متوسط" (0.4-0.59 وحدة) أو "مرتفع" (≥ 0.6 وحدة). وترد في هذه المخطوطة المنهجية التفصيلية والأساس المنطقي لتنفيذ هذا التبيّن.

وأدخل رجل يبلغ من العمر 72 عاما إلى قسم الطوارئ في مستشفى حضري أكاديمي. وقبل ذلك ببضعة أيام قدم إلى طبيب الرعاية الأولية يشكو من حرق التبول. وأوصى بإجراء علاج قصير مع فوسفومايسين عن طريق الفم. وشمل تاريخه الطبي ارتفاع ضغط الدم، ومرض السكري من النوع 2 غير المعقد، وتضخم البرو?...

Watch this Scientific Journal Video about Endotoxin Activity Assay for the Detection of Whole Blood Endotoxemia in Critically Ill Patients at JoVE.com

Endotoxin Activity Assay for the Detection of Whole Blood Endotoxemia in Critically Ill Patients

نقدم بموجب هذا بروتوكول لقياس النشاط الإندوتوكسين لعينات الدم البشرية الكاملة في السرير. اختبار نشاط إندوتوكسين هو اختبار بسيط للأداء وقد يكون علامة حيوية مفيدة في المرضى الذين يعانون من أمراض خطيرة مع الإنتان.

فحص نشاط إندوتوكسين للكشف عن بطانة الدم الكاملة في المرضى الذين يعانون من أمراض خطيرة

Lipopolysaccharide, also known as endotoxin, is a fundamental component of gram-negative bacteria and plays a crucial role in the development of sepsis ...

يمكن أن يؤدي الإنتان إلى فشل متعدد الأعضاء والموت. إندوتكسين هو عنصر أساسي من البكتيريا السلبية الغرام. قد تحدد مستويات الانتشار المرتفعة من التسمم الداخلي للمرضى المعرضين لخطر أعلى للإصابة بمرض أكثر حدة.يمكن استخدام مقايسة نشاط إندو السامين كعلامة بيولوجية بسيطة وسريعة وموثوق بها من إندotoxemia النظامية. قد يساعد الكشف المبكر عن هذا السم الأطباء المعالجين الذين يعالجون المرضى الذين يعانون من صدمة تعفن. في المريض الذي يُصاب بصدمة تعفن، قد يدفع التحديد المبكر لحالة سريعة التطور إلى علاج أسرع وأكثر كثافة في دعم الحياة، مما قد يؤدي إلى نتائج أفضل.إظهار هذا الإجراء سيكون ليزا ماتياسن، عالمة الأحياء الجزيئية التي تتعاون مع مجموعتنا البحثية. لبدء هذا الإجراء، حدد مجموعة اختبار EA وفك خمسة أنواع مختلفة من الأنابيب. استخدام أنبوب رقم واحد، أنبوب التحكم، لقياس النشاط القاعدي للانفجار التأدي غير محددة من العدلات المريض في غياب جسم مضاد معين.استخدام أنبوب رقم اثنين، أنبوب عينة، لقياس انفجار الأكسدة استجابة لمجمع LPS-الأجسام المضادة. استخدام أنبوب رقم ثلاثة، أنبوب ماكس، لقياس الانفجار التأدي المؤسد القصوى من العدلات المريض استجابة لفائض من endotoxin. استخدام أنبوب رقم أربعة، أنبوب LPS، كمصدر للـ endotoxin الخارجية.واستخدم الأنبوب رقم خمسة، أنبوب أليكوت، لتخزين الدم. جمع عينات دم المريض في أنابيب معقمة تحتوي على EDTA مضادات التخثر، وتخزينها في درجة حرارة الغرفة قبل تشغيل اختبار EA. قبل البدء في الاختبار، قم بتشغيل مقياس اللبن والحاضنة شاكر وسخّن الحاضنة إلى 37 درجة مئوية.أولا، ضع أنابيب EA لاستخدامها في رفوف الأنبوب، وإزالة القبعات. استخدام combipipette لنقل ملليلتر واحد من كاشف EA من الزجاجة إلى أنابيب رقم واحد، رقم اثنين، ورقم ثلاثة عن طريق الأنابيب أسفل الجانب من الأنابيب. عكس بلطف أنبوب جمع الدم 20 مرة لخلط عينة دم المريض.ثم، ماصة 0.5 ملليلتر من دم المريض في أنبوب رقم أربعة وأنبوب رقم خمسة. دوامة أنبوب رقم أربعة لمدة 10 ثوان. ضع رفوف الأنبوب مع جميع أنابيب اختبار EA في حاضنة شاكر.أغلق الغطاء، وحضن عند درجة حرارة 37 درجة مئوية لمدة 10 دقائق. بعد ذلك، افتح غطاء الحاضنة وأزل رفوف الأنبوب من الشاكر. دوامة أنبوب رقم خمسة.باستخدام طرف معقمة، ماصة 40 ميكرولترات من الدم في أنابيب رقم واحد ورقم اثنين، في مكررة. أنبوب دوامة رقم أربعة. باستخدام نفس طرف الماصات، نقل 40 ميكرولترات من الدم من أنبوب رقم أربعة إلى أنبوب رقم ثلاثة، في نسخة مكررة.دوامة ستة أنابيب الاختبار النهائي واحدا تلو الآخر. ضع رفوف الأنبوب مرة أخرى في شاكر احتضان، وإغلاق الغطاء. تعيين شاكر إلى 100 دورة في الدقيقة، وبدء الحركة لمدة 14 دقيقة.أدخل بطاقة رقاقة EA المسماة في مقياس الشفة، واضغط على ابدأ. بعد الحضانة لمدة 14 دقيقة، اتبع التعليمات المعروضة على مقياس الميل. دوامة بلطف كل أنبوب لمدة 10 ثانية قبل وضعه على حامل العينة من سموميمينتر.فتح درج العينة، ووضع أنبوب رقم واحد في حامل العينة. ثم أغلق درج العينة وانتظر قراءة وحدة الإضاءة النسبية. كرر عملية القراءة هذه للأنابيب اثنين وثلاثة وجميع التكرارات، كما هو موضح في بروتوكول النص.بعد أن تتم معالجة جميع الأنابيب، سيتم حساب نتائج EA وطباعتها تلقائيًا. كرر عملية فحص كامل لكل عينة الدم التي تحتاج إلى اختبار. تخزين مجموعة EA فحص ومكوناتها في حزمة مختومة الأصلي في درجة حرارة تتراوح بين درجتين و 25 درجة مئوية.في هذه الدراسة, يتم إجراء فحص نشاط إند السامين للكشف عن endotoxemia الدم كله في المرضى الذين يعانون من أمراض خطيرة. وتشير قيمة EA التي تقل عن 0.40 وحدة EA إلى انخفاض مستوى نشاط الـ endotoxin، أي ما يعادل تركيز LPS منخفض الانتشار، وهو ما يمثل خطرًا منخفضًا للتقدم إلى حالة مرض حاد. تشير النتيجة التي تتراوح بين 0.40 و 0.59 وحدة EA إلى مستوى نشاط إندوكسيين متوسط، وهو ما يمثل خطرًا متوسطًا للإصابة بتعفن الدم الشديد والصدمات الإنتانية.تشير النتائج التي تساوي أو تزيد عن 0.60 وحدة EA إلى مستوى نشاط عالي للـ endotoxin ، مما يمثل خطرًا كبيرًا لصدمة الإنتان وضعف نتائج المرضى. الدم من أنابيب رقم أربعة وخمسة يجب أن تكون مختلطة مع أنبوب الاختبار الصحيح. ويجب توخي المزيد من الحذر لاتباع الترتيب الصحيح الوارد في البروتوكول.يتم تشغيل كل أنبوب في التكرارات، مما قد يؤدي إلى أخطاء في هذه المرحلة. بعد عرضه، وقد اقترح EA Assay كعلامة بيولوجية لطبقة خطر المريض مع نقص ضغط الجهازية. كما أنه قد درس كاختبار فحص لاختيار المرضى لإستراتيجيات متقدمة لعلاج الهيموبوريشن.

Research

JoVE Journal

Medicine

Manual Muscle Testing:  A Method of Measuring Extremity Muscle Strength Applied to Critically Ill Patients

التطبيقية وسيلة لقياس قوة العضلات إلى أقصى المرضى ذوي الحالات الحرجة : دليل اختبار العضلات

Survivors of acute respiratory distress syndrome (ARDS) and other causes of critical illness often have generalized weakness, reduced exercise tolerance, ...

Accurate and Simple Measurement of the Pro-inflammatory Cytokine IL-1&beta; using a Whole Blood Stimulation Assay

Accurate and Simple Measurement of the Pro-inflammatory Cytokine IL-1ÃƒÅ½Ã‚Â² using a Whole Blood Stimulation Assay

دقيقة وبسيطة قياس الموالية للالتهابات سايتوكاين 1β ايل باستخدام تحفيز الدم الجامعة الفحص

Inflammatory processes resulting from the secretion of soluble mediators by immune cells, lead to various manifestations in skin, joints and other tissues ...

Sequencing of Bacterial Microflora in Peripheral Blood: our Experience with HIV-infected Patients

تسلسل الدقيقة البكتيرية في الدم المحيطي : لدينا تجربة مع المرضى المصابين بفيروس الإيدز

The healthy gastrointestinal tract is physiologically colonized by a large variety of commensal microbes that influence the development 
	of the humoral ...

Rapid Point-of-Care Assay of Enoxaparin Anticoagulant Efficacy in Whole Blood

السريع في نقاط الفحص من كفاءة الرعاية تخثر الدم الكامل في Enoxaparin

There is the need for a clinical assay to determine the extent to which a patient's blood is effectively anticoagulated by the ...

Real-time Cytotoxicity Assays in Human Whole Blood

في الوقت الحقيقي السمسة فحوصات في الدم الكامل بالبشر

A live cell-based whole blood cytotoxicity assay (WCA) that allows access to temporal information of the overall cell cytotoxicity is developed with ...

Network Analysis of Foramen Ovale Electrode Recordings in Drug-resistant Temporal Lobe Epilepsy Patients

تحليل شبكة الثقبة البيضوية الكهربائي تسجيلات في الفص الصدغي الصرع المرضى المقاوم للأدوية

Approximately 30% of epilepsy patients are refractory to antiepileptic drugs. In these cases, surgery is the only alternative to eliminate/control ...

Whole Genome Sequencing of Candida glabrata for Detection of Markers of Antifungal Drug Resistance

Whole Genome Sequencing of Candida glabrata for Detection of Markers of Antifungal Drug Resistance

كله "تسلسل الجينوم" المبيضات صناعي "الكشف عن علامات للمقاومة المضادة للفطور المخدرات"

Candida glabrata can rapidly acquire mutations that result in drug resistance, especially to azoles and echinocandins. Identification of genetic mutations ...

How to Administer Near-Infrared Spectroscopy in Critically ill Neonates, Infants, and Children

كيفية إدارة التحليل الطيفي تحت الأحمر القريب في الأطفال حديثي الولادة والرضّع والأطفال المصابين بأمراض خطيرة

Near infrared spectroscopy (NIRS) calculates regional tissue oxygenation (rSO2) using the different absorption spectra of oxygenated and deoxygenated ...

Infrared Thermography for the Detection of Changes in Brown Adipose Tissue Activity

التصوير الحراري بالأشعة تحت الحمراء للكشف عن التغيرات في نشاط الأنسجة الدهنية البنية

Measuring brown adipose tissue (BAT) activity by positron emission tomography computed tomography (PET-CT) via the accumulation of 18F-fluorodeoxyglucose ...