Name: endotoxin activity assay for the detection of whole blood endotoxemia in critically ill patients
Uploaded: 2019-06-24T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Endotoxin Activity Assay for the Detection of Whole Blood Endotoxemia in Critically Ill Patients at JoVE.com

हम पाओलो Bragan और लिसा Mathiasen, पीएच.डी. परख प्रोटोकॉल पद्धति की उनकी समीक्षा के लिए धन्यवाद. Dario Winterton, एमडी अंग्रेजी भाषा प्रवीणता के लिए पांडुलिपि की समीक्षा करने में पर्याप्त मदद प्रदान की.

प्रोटोकॉल मानव biospecimens से निपटने और हमारे नैदानिक प्रयोगशाला के वर्तमान मानक ऑपरेटिव प्रक्रियाओं का पालन करने से संबंधित संस्थागत दिशा निर्देशों के अनुसार आयोजित किया जाता है. ईए डेटा और रोगियों की नैद...

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	<li>Akira, S., Takeda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toll-like+receptor+signalling.">Toll-like receptor signalling.</a> Nature Reviews Immunology. 4 (7), 499-511 (2004).</li><li>Takeda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolution+and+integration+of+innate+immune+recognition+systems:+the+Toll-like+receptors.">Evolution and integration of innate immune recognition systems: the Toll-like receptors.</a> Journal of Endotoxin Research. 11 (1), 51-55 (2005).</li><li>Ulevitch, R. J., Tobias, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recognition+of+gram-negative+bacteria+and+endotoxin+by+the+innate+immune+system.">Recognition of gram-negative bacteria and endotoxin by the innate immune system.</a> Current Opinion in Immunology. 11 (1), 19-22 (1999).</li><li>Natanson, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endotoxin+and+tumor+necrosis+factor+challenges+in+dogs+simulate+the+cardiovascular+profile+of+human+septic+shock.">Endotoxin and tumor necrosis factor challenges in dogs simulate the cardiovascular profile of human septic shock.</a> The Journal of Experimental Medicine. 169 (3), 823-832 (1989).</li><li>Suffredini, A. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cardiovascular+response+of+normal+humans+to+the+administration+of+endotoxin.">The cardiovascular response of normal humans to the administration of endotoxin.</a> The New England Journal of Medicine. 321 (5), 280-287 (1989).</li><li>Singer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Third+International+Consensus+Definitions+for+Sepsis+and+Septic+Shock+(Sepsis-3).">The Third International Consensus Definitions for Sepsis and Septic Shock (Sepsis-3).</a> JAMA: The Journal of the American Medical Association. 315 (8), 801-810 (2016).</li><li>Gupta, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culture-Negative+Severe+Sepsis:+Nationwide+Trends+and+Outcomes.">Culture-Negative Severe Sepsis: Nationwide Trends and Outcomes.</a> Chest. 150 (6), 1251-1259 (2016).</li><li>Ikeda, T., Ikeda, K., Suda, S., Ueno, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Usefulness+of+the+endotoxin+activity+assay+as+a+biomarker+to+assess+the+severity+of+endotoxemia+in+critically+ill+patients.">Usefulness of the endotoxin activity assay as a biomarker to assess the severity of endotoxemia in critically ill patients.</a> Innate Immunity. 20 (8), 881-887 (2014).</li><li>Dellinger, R. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+Targeted+Polymyxin+B+Hemoperfusion+on+28-Day+Mortality+in+Patients+With+Septic+Shock+and+Elevated+Endotoxin+Level.">Effect of Targeted Polymyxin B Hemoperfusion on 28-Day Mortality in Patients With Septic Shock and Elevated Endotoxin Level.</a> The EUPHRATES Randomized Clinical Trial. JAMA: The Journal of the American Medical Association. 320 (14), 1455-1463 (2018).</li><li>Marshall, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnostic+and+prognostic+implications+of+endotoxemia+in+critical+illness:+results+of+the+MEDIC+study.">Diagnostic and prognostic implications of endotoxemia in critical illness: results of the MEDIC study.</a> The Journal of Infectious Diseases. 190 (3), 527-534 (2004).</li><li>Levin, J., Bang, F. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clottable+protein+in+Limulus;+its+localization+and+kinetics+of+its+coagulation+by+endotoxin.">Clottable protein in Limulus; its localization and kinetics of its coagulation by endotoxin.</a> Thrombosis et Diathesis Haemorrhagica. 19 (1), 186-197 (1968).</li><li>Marshall, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+endotoxin+activity+in+critically+ill+patients+using+whole+blood+neutrophil+dependent+chemiluminescence.">Measurement of endotoxin activity in critically ill patients using whole blood neutrophil dependent chemiluminescence.</a> Critical Care. 6 (4), 342-348 (2002).</li><li>Grimaldi, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+Level+of+Endotoxemia+Following+Out-of-Hospital+Cardiac+Arrest+Is+Associated+With+Severity+and+Duration+of+Postcardiac+Arrest+Shock.">High Level of Endotoxemia Following Out-of-Hospital Cardiac Arrest Is Associated With Severity and Duration of Postcardiac Arrest Shock.</a> Critical Care Medicine. 43 (12), 2597-2604 (2015).</li><li>Klein, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+EUPHRATES+trial+(Evaluating+the+Use+of+Polymyxin+B+Hemoperfusion+in+a+Randomized+controlled+trial+of+Adults+Treated+for+Endotoxemia+and+Septic+shock):+study+protocol+for+a+randomized+controlled+trial.">The EUPHRATES trial (Evaluating the Use of Polymyxin B Hemoperfusion in a Randomized controlled trial of Adults Treated for Endotoxemia and Septic shock): study protocol for a randomized controlled trial.</a> Trials. 15, 218 (2014).</li><li>Bottiroli, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevalence+and+clinical+significance+of+early+high+Endotoxin+Activity+in+septic+shock:+An+observational+study.">Prevalence and clinical significance of early high Endotoxin Activity in septic shock: An observational study.</a> Journal of Critical Care. 41, 124-129 (2017).</li><li>Kaukonen, K. M., Bailey, M., Suzuki, S., Pilcher, D., Bellomo, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mortality+related+to+severe+sepsis+and+septic+shock+among+critically+ill+patients+in+Australia+and+New+Zealand.">Mortality related to severe sepsis and septic shock among critically ill patients in Australia and New Zealand.</a> JAMA: The Journal of the American Medical Association. 311 (13), 1308-1316 (2014).</li><li>Biagioni, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endotoxin+activity+levels+as+a+prediction+tool+for+risk+of+deterioration+in+patients+with+sepsis+not+admitted+to+the+intensive+care+unit:+a+pilot+observational+study.">Endotoxin activity levels as a prediction tool for risk of deterioration in patients with sepsis not admitted to the intensive care unit: a pilot observational study.</a> Journal of Critical Care. 28 (5), 612-617 (2013).</li><li>Roth, R. I., Levin, F. C., Levin, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+detection+of+bacterial+endotoxin+in+plasma+with+the+Limulus+test.">Optimization of detection of bacterial endotoxin in plasma with the Limulus test.</a> The Journal of Laboratory and Clinical Medicine. 116 (2), 153-161 (1990).</li><li>Yaguchi, A., Yuzawa, J., Klein, D. J., Takeda, M., Harada, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combining+intermediate+levels+of+the+Endotoxin+Activity+Assay+(EA)+with+other+biomarkers+in+the+assessment+of+patients+with+sepsis:+results+of+an+observational+study.">Combining intermediate levels of the Endotoxin Activity Assay (EA) with other biomarkers in the assessment of patients with sepsis: results of an observational study.</a> Critical Care. 16 (3), (2012).</li><li>Earley, Z. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Burn+Injury+Alters+the+Intestinal+Microbiome+and+Increases+Gut+Permeability+and+Bacterial+Translocation.">Burn Injury Alters the Intestinal Microbiome and Increases Gut Permeability and Bacterial Translocation.</a> PLoS One. 10 (7), (2015).</li><li>Munster, A. M., Smith-Meek, M., Dickerson, C., Translocation Winchurch, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incidental+phenomenon+or+true+pathology?.">Incidental phenomenon or true pathology?.</a> Annals of Surgery. 218 (3), 321 (1993).</li><li>Clementi, A., Virz&#236;, G. M., Brocca, A., Ronco, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Role+of+Endotoxin+in+the+Setting+of+Cardiorenal+Syndrome+Type+5.">The Role of Endotoxin in the Setting of Cardiorenal Syndrome Type 5.</a> Cardiorenal Medicine. 7 (4), 276-283 (2017).</li><li>Virz&#236;, G. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiorenal+Syndrome+Type+5+in+Sepsis:+Role+of+Endotoxin.">Cardiorenal Syndrome Type 5 in Sepsis: Role of Endotoxin.</a> in Cell Death Pathways and Inflammation. Kidney and Blood Pressure Research. 41 (6), 1008-1015 (2016).</li><li>Mignon, F., Piagnerelli, M., Van Nuffelen, M., Vincent, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+empiric+antibiotic+treatment+on+plasma+endotoxin+activity+in+septic+patients.">Effect of empiric antibiotic treatment on plasma endotoxin activity in septic patients.</a> Infection. 42 (3), 521-528 (2014).</li><li>Klein, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Daily+variation+in+endotoxin+levels+is+associated+with+increased+organ+failure+in+critically+ill+patients.">Daily variation in endotoxin levels is associated with increased organ failure in critically ill patients.</a> Shock. 28 (5), 524-529 (2007).</li></ol>

सेप्टिक सदमे आजभी भी 40% के रूप में उच्च के रूप में एक मृत्यु दर के साथ जुड़ा हुआ है, हालांकि यह दर माना रिपोर्ट16के अनुसार भिन्न होता है. उपन्यास और बेहतर biomarkers के लिए की जरूरत है क्रम में जल्दी निदान...

Lipopolysaccharide (LPS), भी endotoxin के रूप में जाना जाता है, ग्राम-नकारात्मक (जीएन) बैक्टीरिया की झिल्ली संरचना का एक प्रमुख घटक है। यह कोशिका दीवार के बारे में 10% बनाता है, बाहरी झिल्ली अखंडता और homeostasis के लिए महत्वपूर्ण जा रहा है. इसके अलावा, यह मेजबान जन्मजात प्रतिरक्षा प्रणाली 1,2का एक शक्तिशाली उत्प्रेरक है।
एलपीएस के लिए सहज प्रतिरक्षा प्रणाली कोशिकाओं के इनविट्रो जोखिम में कई जीनों की अभिव्यक्ति में परिवर्तन होताहै 3. स्वस्थ मानव स्वयंसेवकों में एलपीएस की बहुत कम मात्रा का प्रशासन तीव्र प्रणालीगत सूजन के झरना को ट्रिगर करता है, जबकि सेप्सिस और सेप्टिक सदमे उच्च एंडोटॉक्सिन सांद्रता4,5के साथ उत्पन्न हो सकते हैं .
सेपसिस एक जीवन-धमकी देने वाली स्थिति है, जिसे तुरंत मान्यता नहीं दी जाती है, तो बहु-अंग विफलता और मौत का कारण बन सकता है। सेप्टिक रोगियों को एक समय पर तरीके से इलाज किया जाना चाहिए, आक्रामक पुनर्जीवन, पर्याप्त एंटीबायोटिक थेरेपी, इष्टतम स्रोत नियंत्रण, और शीघ्र अंग समर्थन रणनीतियों के साथ। सेप्सिस के ईटियोलॉजी का निदान मुख्य रूप से नैदानिकमान्यता और संस्कृति आधारित रोगज़नक़ का पता लगाने 6 पर आधारित है। तथापि, माइक्रोबियल संस्कृतियों के परिणाम 48 एच तक लग सकते हैं और7मामलों के 30% तक अनिर्णीत हो सकते हैं। प्रारंभिक पहचान और हस्तक्षेप बेहतर रोगी परिणामों के लिए नेतृत्व कर सकते हैं. जिन रोगियों में सेप्सिस संदिग्ध है, उनमें अक्सर एंडोक्सिमिया के स्पष्ट संकेत के बिना शारीरिक और जैव रासायनिक मापदंडों के आधार पर निर्णय किए जाते हैं।
एंडोटॉक्सिन गतिविधि (EA) की माप पूरे रक्त में एक वाणिज्यिक परख के माध्यम से प्राप्त किया जा सकता है (सामग्री की तालिकादेखें)। यह रोग गंभीरता के प्रारंभिक स्तरीकरण के लिए प्रणालीगत एंडोक्रॉक्सेमिया के एक बायोमार्कर के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है, विशेष रूप से सेप्टिक सदमे8के विकास के लिए जोखिम में रोगियों में. परख सेप्टिक सदमे9के साथ रोगियों में हाल ही में प्रकाशित डबल अंधा यादृच्छिक नियंत्रित नैदानिक परीक्षण में Polymyxin बी hemoperfusion चिकित्सा मार्गदर्शन करने के लिए इस्तेमाल किया गया था. गंभीर रूप से बीमार रोगियों में, चिकित्सा अध्ययन से पता चला कि कई अंग रोग, गहन देखभाल इकाई (आईसीयू) रहने की लंबाई, और मृत्यु दर10के साथ जुड़े होने के लिए बढ़ी हुई ईए के स्तर से जुड़ा हुआ है।
एंडोटॉक्सिन का पता लगाने के लिए विभिन्न परख विकसित की गई हैं। Limulus Amoebocyte Lysate (LAL) परख, या तो एक जेल-क्लॉट, turbidimetric, या क्रोमोजेनिक परीक्षण के रूप में, अब तक सबसे अक्सर सीरम endotoxin के आकलन के लिए अपनाया गया है. यह घोड़े की नाल केकड़ा, लिमुलस पॉलीफिमसके हेमोलिम्फ के जमावकोश को प्रेरित करने के लिए एंडोटॉक्सिन की क्षमता पर आधारित है। हालांकि, इस परख विशिष्टता के मामले में कुछ सीमाएं हैं. विशेष रूप से, यह भी endotoxin के अलावा अन्य माइक्रोबियल उत्पादों द्वारा सक्रिय किया जा सकता है, इस तरह के कवक सेल दीवार के घटकों के रूप में, और यह विभिन्न मानव प्लाज्मा प्रोटीन11द्वारा बाधित किया जा सकता है।
पिछले दशक के दौरान ईए की माप विकसित किया गया है और endotoxemia घूम के एक biomarker के रूप में मान्य. LAL परीक्षण की तुलना में, ईए जल्दी और नैदानिक सेटिंग में लागू करने के लिए आसान है. इसके अलावा, यह वृद्धि की संवेदनशीलता और विशिष्टता के साथ, पूरे रक्त में LAL की तुलना में अधिक सटीक होना दिखाया गया है, दोनों इन विट्रो में और विवो12में.
सेप्सिस कारक एजेंटों के रूप में जीएन बैक्टीरिया की तेजी से पहचान के लिए एक प्रारंभिक नैदानिक उपकरण के रूप में अपने प्रारंभिक कार्यान्वयन के बावजूद, ईए स्तर भी रोग गंभीरता के एक biomarker के रूप में अध्ययन किया गया है. इस संदर्भ में, यह विशेष रूप से इस तरह के सेप्टिक सदमे या बाद हृदय गिरफ्तारी सिंड्रोम13के रूप में चल रही गंभीर बीमारी के कारण hypoperfusion राज्य का आकलन करने के लिए उपयोगी दिखाया गया है. हाल ही में, हेमोशुद्धि प्रणालियों के विकास के बाद से, एक सकारात्मक ईए परिणाम भी एक स्क्रीनिंग उपकरण के रूप में प्रस्तावित किया गया है ताकि इस तरह के चिकित्सा14के लिए संभावित उम्मीदवारों की सही पहचान की जा सके। हमने हाल ही में सेप्टिक शॉक वाले 107 रोगियों में ईए के प्रारंभिक उच्च स्तर के प्रसार और नैदानिक महत्व पर एक अवलोकन पूर्वव्यापी अध्ययन किया है। अन्य हाल के परिणामों के साथ लाइन में, हमने पाया कि ईए सेप्टिक सदमे15के साथ रोगियों में रोग की गंभीरता का एक आशाजनक मार्कर है।
वर्तमान पांडुलिपि का उद्देश्य ईए परख प्रदर्शन करने के लिए विधि का वर्णन करने के लिए है, या तो बिस्तर पर या प्रयोगशाला में, और सेप्टिक सदमे के एक प्रतिनिधि परिदृश्य में इसके संभावित उपयोग का वर्णन करने के लिए. इस तकनीक को एक एंटी-एंडोटॉक्सिन एंटीबॉडी और एलपीएस के परिसरों द्वारा उनके प्राइमिंग के बाद न्यूट्रोफिल में बढ़ाया ऑक्सीडेटिव फट को मापने के द्वारा एलपीएस गतिविधि का पता लगा सकते हैं। बढ़ी हुई श्वसन फट एक chemiluminometer द्वारा पता चला है और उत्सर्जित प्रकाश की मात्रा रक्त के नमूने में endotoxin की मात्रा के लिए आनुपातिक माना जाता है. परख कुछ अभिकर्मकों की आवश्यकता है, के बारे में 30 मिनट लगते हैं प्रदर्शन और पूरे रक्त12के रूप में कम से कम 40 डिग्री सेल्सियस का उपयोग करता है .

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:727px;" width="726">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:184px;">EAA kit</td>
			<td style="width:141px;">Spectral Medical Inc.</td>
			<td style="width:133px;">EAAST-20</td>
			<td style="width:268px;">Package with 20 tests + 1 quality control</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:184px;">Smart Line TL</td>
			<td style="width:141px;">Berthold</td>
			<td style="width:133px;">EAASL</td>
			<td>Luminometer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:184px;">Incubator shaker</td>
			<td style="width:141px;">GRANT</td>
			<td style="width:133px;">ES-20</td>
			<td>Mini-incubator shaker</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:184px;">Vortexer</td>
			<td style="width:141px;">VWR</td>
			<td style="width:133px;">444-2790</td>
			<td>Vortex instrument</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

endotoxin activity assay for the detection of whole blood endotoxemia in critically ill patients

लाइपोपॉलीसैकराइड, जिसे एंडोटॉक्सिन के रूप में भी जाना जाता है, ग्राम-नकारात्मक बैक्टीरिया का एक मौलिक घटक है और सेप्सिस और सेप्टिक सदमे के विकास में महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है। एक संक्रामक प्रक्रिया है कि तेजी से एक गंभीर बीमारी के लिए विकसित हो रहा है की जल्दी पहचान एक तेज और अधिक गहन उपचार शीघ्र हो सकता है, जिससे संभावित बेहतर रोगी परिणामों के लिए अग्रणी. एंडोटॉक्सिन गतिविधि (EA) परख प्रणालीगत एंडोटॉक्सिया के एक विश्वसनीय बायोमार्कर के रूप में बिस्तर पर इस्तेमाल किया जा सकता है। ऊंचा endotoxin गतिविधि के स्तर का पता लगाने बार बार सेप्सिस और सेप्टिक सदमे के साथ रोगियों में एक वृद्धि की बीमारी की गंभीरता के साथ जुड़े दिखाया गया है. परख त्वरित और प्रदर्शन करने के लिए आसान है। संक्षेप में, नमूने के बाद, पूरे रक्त की एक alicot एक विरोधी endotoxin एंटीबॉडी के साथ और जोड़ा LPS के साथ मिलाया जाता है. एंडोटॉक्सिन गतिविधि को प्राइमेड न्यूट्रोफिल्स के सापेक्ष ऑक्सीडेटिव फट के रूप में मापा जाता है जैसा कि केमोल्युमिनेसीसेंस द्वारा पता लगाया गया है। परख के उत्पादन से एक पैमाने पर व्यक्त की है 0 (absent) करने के लिए 1 (अधिकतम) और के रूप में वर्गीकृत "कम" (और lt;0.4 इकाइयों), "मध्यस्थ" (0.4-0.59 इकाइयों), या "उच्च" ($0.6 इकाइयों). विस्तृत पद्धति और ईए परख के कार्यान्वयन के लिए तर्क इस पांडुलिपि में रिपोर्ट कर रहे हैं.

एक 72 वर्षीय व्यक्ति को एक शैक्षणिक शहरी अस्पताल के आपातकालीन विभाग (ईडी) में भर्ती कराया गया था। कुछ दिन पहले वह पेशाब पर जलने की शिकायत अपने प्राथमिक देखभाल चिकित्सक को प्रस्तुत किया था. मौ...

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Endotoxin Activity Assay for the Detection of Whole Blood Endotoxemia in Critically Ill Patients

हम इसके द्वारा मानव पूरे रक्त के नमूनों के endotoxin गतिविधि बिस्तर पर मापने के लिए एक प्रोटोकॉल पेश करते हैं. Endotoxin गतिविधि परख प्रदर्शन करने के लिए एक सरल परीक्षण है और सेप्सिस के साथ गंभीर रूप से बीमार रोगियों में एक उपयोगी biomarker हो सकता है.

गंभीर रूप से बीमार रोगियों में पूरे रक्त एंडोटॉक्सिया की जांच के लिए एंडोटॉक्सिन गतिविधि परख

Lipopolysaccharide, also known as endotoxin, is a fundamental component of gram-negative bacteria and plays a crucial role in the development of sepsis ...

सेप्सिस बहु अंग विफलता और मौत के लिए नेतृत्व कर सकते हैं। एंडोटॉक्सिन चने-नकारात्मक बैक्टीरिया का एक मौलिक घटक है। एंडोटॉक्सिन के ऊंचा परिसंचारी स्तर अधिक गंभीर बीमारी विकसित करने के लिए उच्च जोखिम पर रोगी की पहचान कर सकता है।एंडोटॉक्सिन एक्टिविटी परख का उपयोग प्रणालीगत एंडोऑक्सीमिया के सरल, त्वरित और विश्वसनीय बायोमार्कर के रूप में किया जा सकता है। इस विष का जल्दी पता लगाने सेप्टिक सदमे के साथ रोगियों का इलाज चिकित्सकों में मदद कर सकता है । सेप्टिक सदमे के साथ रोगी में, एक तेजी से विकसित हालत की जल्दी पहचान एक तेज और अधिक गहन जीवन सहायता चिकित्सा, संभवतः बेहतर परिणाम के लिए अग्रणी संकेत हो सकता है ।इस प्रक्रिया का प्रदर्शन लिसा मैथिसेन, एक आणविक जीवविज्ञानी होगा जो हमारे अनुसंधान समूह के साथ सहयोग करता है । इस प्रक्रिया को शुरू करने के लिए, एक ईए टेस्ट किट सेट करें और पांच अलग-अलग प्रकार की ट्यूबों को खोलें। एक विशिष्ट एंटीबॉडी के अभाव में रोगी के न्यूट्रोफिल के गैर-विशिष्ट ऑक्सीडेटिव फटने की बेसल गतिविधि को मापने के लिए ट्यूब नंबर एक, नियंत्रण ट्यूब का उपयोग करें।एलपीएस-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स के जवाब में ऑक्सीडेटिव फटने को मापने के लिए ट्यूब नंबर दो, सैंपल ट्यूब का इस्तेमाल करें। एंडोटॉक्सिन की अधिकता के जवाब में रोगी के न्यूट्रोफिल के अधिकतम ऑक्सीडेटिव फट को मापने के लिए ट्यूब नंबर तीन, मैक्स ट्यूब का उपयोग करें। एक्सोजेनस एंडोटॉक्सिन के स्रोत के रूप में ट्यूब नंबर चार, एलपीएस ट्यूब का उपयोग करें।और रक्त भंडारण के लिए ट्यूब नंबर पांच, अलीकोट ट्यूब का उपयोग करें। EDTA एंटीकोगुलैंट युक्त बाँझ ट्यूबों में रोगी रक्त के नमूने ले लीजिए, और ईए परीक्षण चलाने से पहले उन्हें कमरे के तापमान पर स्टोर करें। टेस्ट शुरू करने से पहले चेमिल्यूमिनोमीटर और इनक्यूबेटर शेकर को चालू करें और इनक्यूबेटर को 37 डिग्री सेल्सियस तक गर्म करें।सबसे पहले, ईए ट्यूब को ट्यूब रैक में उपयोग करने के लिए रखें, और टोपियां हटा दें। ट्यूबों के किनारे पाइपिंग करके बोतल से ईए रिएजेंट के एक मिलीलीटर को ट्यूब नंबर एक, नंबर दो और नंबर तीन में स्थानांतरित करने के लिए एक कॉम्बिपेट का उपयोग करें। मरीज के ब्लड सैंपल को मिलाने के लिए ब्लड कलेक्शन ट्यूब को 20 बार धीरे-धीरे उलटा करें।इसके बाद पाइपेट 05 मिलीलीटर मरीज का खून ट्यूब नंबर चार और ट्यूब नंबर पांच में लगा दिया। 10 सेकंड के लिए भंवर ट्यूब नंबर चार। इन्क्यूबेटर शेकर में ईए टेस्ट ट्यूब के सभी के साथ ट्यूब रैक रखें।ढक्कन बंद करें, और 10 मिनट के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर इनक्यूबेट करें। इसके बाद इनक्यूबेटर का ढक्कन खोलें और शेकर से ट्यूब रैक निकाल लें। भंवर ट्यूब नंबर पांच।एक बाँझ टिप का उपयोग करना, पाइपेट 40 माइक्रोलीटर रक्त के ट्यूब नंबर एक और नंबर दो में, डुप्लिकेट में। भंवर ट्यूब नंबर चार। इसी पिपेट टिप का इस्तेमाल करते हुए डुप्लीकेट में ट्यूब नंबर चार से 40 माइक्रोलीटर ब्लड को ट्यूब नंबर तीन में ट्रांसफर करें।भंवर छह अंतिम टेस्ट ट्यूब एक-एक करके । ट्यूब रैक को इनक्यूबेटिंग शेकर में वापस रखें, और ढक्कन बंद करें। शेकर को 100 आरपीएम पर सेट करें, और 14 मिनट के लिए गति शुरू करें।चेमिलुमिनोमीटर में ईए लेबल वाले चिपकार्ड डालें, और स्टार्ट दबाए। 14 मिनट के इनक्यूबेशन के बाद, चेमिलुमिनोमीटर पर प्रदर्शित निर्देशों का पालन करें। धीरे से 10 सेकंड के लिए भंवर प्रत्येक ट्यूब यह chemiluminometer के नमूना धारक पर रखने से पहले ।नमूना दराज खोलें, और नमूना धारक में ट्यूब नंबर एक रखें। फिर, नमूना दराज बंद करें, और रिश्तेदार प्रकाश इकाई पढ़ने का इंतजार करें। पाठ प्रोटोकॉल में उल्लिखित ट्यूबों दो और तीन और सभी डुप्लिकेट के लिए इस पढ़ने की प्रक्रिया को दोहराएं।सभी ट्यूबों को संसाधित करने के बाद, ईए परिणामों की गणना की जाएगी और स्वचालित रूप से मुद्रित किया जाएगा। प्रत्येक रक्त नमूने के लिए पूरी परख प्रक्रिया दोहराएं जिसका परीक्षण करने की आवश्यकता है। ईए परख किट और उसके घटकों को मूल सीलबंद पैकेज में दो और 25 डिग्री सेल्सियस के बीच तापमान पर स्टोर करें।इस अध्ययन में, गंभीर रूप से बीमार रोगियों में पूरे रक्त एंडोटेक्सेमिया का पता लगाने के लिए एक एंडोटॉक्सिन गतिविधि परख किया जाता है। 0.40 ईए इकाइयों से कम का ईए मूल्य कम एंडोटॉक्सिन गतिविधि स्तर को इंगित करता है, जो कम परिसंचारी एलपीएस एकाग्रता के बराबर होता है, जो गंभीर रोग स्थिति में प्रगति के कम जोखिम का प्रतिनिधित्व करता है। 0.40 और 0.59 ईए इकाइयों के बीच एक परिणाम एक मध्यवर्ती एंडोटॉक्सिन गतिविधि स्तर को इंगित करता है, जो गंभीर सेप्सिस और सेप्टिक सदमे के विकास के लिए एक मध्यवर्ती जोखिम का प्रतिनिधित्व करता है।0.60 ईए इकाइयों के बराबर या उससे अधिक परिणाम एक उच्च एंडोटॉक्सिन गतिविधि स्तर को इंगित करता है, जो सेप्टिक शॉक और खराब रोगी परिणामों के लिए उच्च जोखिम का प्रतिनिधित्व करता है। ट्यूब नंबर चार और पांच से खून सही टेस्ट ट्यूब के साथ मिलाया जाना चाहिए। प्रोटोकॉल में दर्शाए गए सही आदेश का पालन करने के लिए अतिरिक्त सावधानी बरती जानी चाहिए ।हर ट्यूब डुप्लिकेट में चलाया जाता है, संभावित इस चरण में गलतियों के लिए अग्रणी । इसके लागू होने के बाद, ईए परख को प्रणालीगत हाइपोपरफ्यूजन के साथ रोगी के जोखिम स्तरीकरण के लिए एक बायोमार्कर के रूप में प्रस्तावित किया गया है। इसके अलावा, यह एक स्क्रीनिंग परीक्षण के रूप में अध्ययन किया गया है उन्नत हीमोपुरिफिकेशन उपचार रणनीतियों के लिए रोगियों का चयन करें ।

Research

JoVE Journal

Medicine

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मैनुअल स्नायु परीक्षण: सिरा स्नायु शक्ति को मापने की एक विधि गंभीर रूप से बीमार रोगियों के लिए एप्लाइड

Survivors of acute respiratory distress syndrome (ARDS) and other causes of critical illness often have generalized weakness, reduced exercise tolerance, ...

Accurate and Simple Measurement of the Pro-inflammatory Cytokine IL-1&beta; using a Whole Blood Stimulation Assay

Accurate and Simple Measurement of the Pro-inflammatory Cytokine IL-1ÃƒÅ½Ã‚Â² using a Whole Blood Stimulation Assay

समर्थक भड़काऊ cytokine आईएल - 1β के सटीक और सरल मापन एक पूरे रक्त उत्तेजना परख का उपयोग

Inflammatory processes resulting from the secretion of soluble mediators by immune cells, lead to various manifestations in skin, joints and other tissues ...

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परिधीय रक्त में बैक्टीरियल microflora के अनुक्रमण: एचआईवी संक्रमित मरीजों के साथ हमारे अनुभव

The healthy gastrointestinal tract is physiologically colonized by a large variety of commensal microbes that influence the development 
	of the humoral ...

Rapid Point-of-Care Assay of Enoxaparin Anticoagulant Efficacy in Whole Blood

पूरे रक्त में तेजी से प्वाइंट की देखभाल enoxaparin anticoagulant प्रभावकारिता की परख

There is the need for a clinical assay to determine the extent to which a patient's blood is effectively anticoagulated by the ...

Real-time Cytotoxicity Assays in Human Whole Blood

मानव पूरे रक्त में वास्तविक समय cytotoxicity Assays

A live cell-based whole blood cytotoxicity assay (WCA) that allows access to temporal information of the overall cell cytotoxicity is developed with ...

Network Analysis of Foramen Ovale Electrode Recordings in Drug-resistant Temporal Lobe Epilepsy Patients

दवा प्रतिरोधी टेम्पोरल लोब मिर्गी रोगियों में रंध्र अंडाकार इलेक्ट्रोड रिकॉर्डिंग के नेटवर्क विश्लेषण

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रोधी दवा प्रतिरोध के मार्करों का पता लगाने के लिए Candida glabrata के पूरे जीनोम अनुक्रमण

Candida glabrata can rapidly acquire mutations that result in drug resistance, especially to azoles and echinocandins. Identification of genetic mutations ...

How to Administer Near-Infrared Spectroscopy in Critically ill Neonates, Infants, and Children

गंभीर रूप से बीमार नवजात शिशुओं, शिशुओं और बच्चों में नियर-इन्फ्रारेड स्पेक्ट्रोस्कोपी कैसे प्रशासित करें

Near infrared spectroscopy (NIRS) calculates regional tissue oxygenation (rSO2) using the different absorption spectra of oxygenated and deoxygenated ...

Infrared Thermography for the Detection of Changes in Brown Adipose Tissue Activity

ब्राउन वसा ऊतक गतिविधि में परिवर्तन का पता लगाने के लिए इन्फ्रारेड थर्मोग्राफी

Measuring brown adipose tissue (BAT) activity by positron emission tomography computed tomography (PET-CT) via the accumulation of 18F-fluorodeoxyglucose ...