Name: endotoxin activity assay for the detection of whole blood endotoxemia in critically ill patients
Uploaded: 2019-06-24T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Endotoxin Activity Assay for the Detection of Whole Blood Endotoxemia in Critically Ill Patients at JoVE.com

Мы благодарим Паоло Брагане и Лизу Матиасен, доктор скую степень, за их обзор методологии протокола анализа. Дарио Уинтертон, MD, оказал существенную помощь в просмотре рукописи для владения английским языком.

Протокол проводится в соответствии с институциональными руководящими принципами, касающимися обработки биопроб человека и в соответствии с действующими стандартными оперативными процедурами нашей клинической лаборатории. Использование данных ЕА и клинической информации о пациент...

<ol>
	<li>Akira, S., Takeda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toll-like+receptor+signalling.">Toll-like receptor signalling.</a> Nature Reviews Immunology. 4 (7), 499-511 (2004).</li><li>Takeda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolution+and+integration+of+innate+immune+recognition+systems:+the+Toll-like+receptors.">Evolution and integration of innate immune recognition systems: the Toll-like receptors.</a> Journal of Endotoxin Research. 11 (1), 51-55 (2005).</li><li>Ulevitch, R. J., Tobias, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recognition+of+gram-negative+bacteria+and+endotoxin+by+the+innate+immune+system.">Recognition of gram-negative bacteria and endotoxin by the innate immune system.</a> Current Opinion in Immunology. 11 (1), 19-22 (1999).</li><li>Natanson, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endotoxin+and+tumor+necrosis+factor+challenges+in+dogs+simulate+the+cardiovascular+profile+of+human+septic+shock.">Endotoxin and tumor necrosis factor challenges in dogs simulate the cardiovascular profile of human septic shock.</a> The Journal of Experimental Medicine. 169 (3), 823-832 (1989).</li><li>Suffredini, A. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cardiovascular+response+of+normal+humans+to+the+administration+of+endotoxin.">The cardiovascular response of normal humans to the administration of endotoxin.</a> The New England Journal of Medicine. 321 (5), 280-287 (1989).</li><li>Singer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Third+International+Consensus+Definitions+for+Sepsis+and+Septic+Shock+(Sepsis-3).">The Third International Consensus Definitions for Sepsis and Septic Shock (Sepsis-3).</a> JAMA: The Journal of the American Medical Association. 315 (8), 801-810 (2016).</li><li>Gupta, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culture-Negative+Severe+Sepsis:+Nationwide+Trends+and+Outcomes.">Culture-Negative Severe Sepsis: Nationwide Trends and Outcomes.</a> Chest. 150 (6), 1251-1259 (2016).</li><li>Ikeda, T., Ikeda, K., Suda, S., Ueno, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Usefulness+of+the+endotoxin+activity+assay+as+a+biomarker+to+assess+the+severity+of+endotoxemia+in+critically+ill+patients.">Usefulness of the endotoxin activity assay as a biomarker to assess the severity of endotoxemia in critically ill patients.</a> Innate Immunity. 20 (8), 881-887 (2014).</li><li>Dellinger, R. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+Targeted+Polymyxin+B+Hemoperfusion+on+28-Day+Mortality+in+Patients+With+Septic+Shock+and+Elevated+Endotoxin+Level.">Effect of Targeted Polymyxin B Hemoperfusion on 28-Day Mortality in Patients With Septic Shock and Elevated Endotoxin Level.</a> The EUPHRATES Randomized Clinical Trial. JAMA: The Journal of the American Medical Association. 320 (14), 1455-1463 (2018).</li><li>Marshall, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnostic+and+prognostic+implications+of+endotoxemia+in+critical+illness:+results+of+the+MEDIC+study.">Diagnostic and prognostic implications of endotoxemia in critical illness: results of the MEDIC study.</a> The Journal of Infectious Diseases. 190 (3), 527-534 (2004).</li><li>Levin, J., Bang, F. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clottable+protein+in+Limulus;+its+localization+and+kinetics+of+its+coagulation+by+endotoxin.">Clottable protein in Limulus; its localization and kinetics of its coagulation by endotoxin.</a> Thrombosis et Diathesis Haemorrhagica. 19 (1), 186-197 (1968).</li><li>Marshall, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+endotoxin+activity+in+critically+ill+patients+using+whole+blood+neutrophil+dependent+chemiluminescence.">Measurement of endotoxin activity in critically ill patients using whole blood neutrophil dependent chemiluminescence.</a> Critical Care. 6 (4), 342-348 (2002).</li><li>Grimaldi, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+Level+of+Endotoxemia+Following+Out-of-Hospital+Cardiac+Arrest+Is+Associated+With+Severity+and+Duration+of+Postcardiac+Arrest+Shock.">High Level of Endotoxemia Following Out-of-Hospital Cardiac Arrest Is Associated With Severity and Duration of Postcardiac Arrest Shock.</a> Critical Care Medicine. 43 (12), 2597-2604 (2015).</li><li>Klein, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+EUPHRATES+trial+(Evaluating+the+Use+of+Polymyxin+B+Hemoperfusion+in+a+Randomized+controlled+trial+of+Adults+Treated+for+Endotoxemia+and+Septic+shock):+study+protocol+for+a+randomized+controlled+trial.">The EUPHRATES trial (Evaluating the Use of Polymyxin B Hemoperfusion in a Randomized controlled trial of Adults Treated for Endotoxemia and Septic shock): study protocol for a randomized controlled trial.</a> Trials. 15, 218 (2014).</li><li>Bottiroli, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevalence+and+clinical+significance+of+early+high+Endotoxin+Activity+in+septic+shock:+An+observational+study.">Prevalence and clinical significance of early high Endotoxin Activity in septic shock: An observational study.</a> Journal of Critical Care. 41, 124-129 (2017).</li><li>Kaukonen, K. M., Bailey, M., Suzuki, S., Pilcher, D., Bellomo, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mortality+related+to+severe+sepsis+and+septic+shock+among+critically+ill+patients+in+Australia+and+New+Zealand.">Mortality related to severe sepsis and septic shock among critically ill patients in Australia and New Zealand.</a> JAMA: The Journal of the American Medical Association. 311 (13), 1308-1316 (2014).</li><li>Biagioni, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endotoxin+activity+levels+as+a+prediction+tool+for+risk+of+deterioration+in+patients+with+sepsis+not+admitted+to+the+intensive+care+unit:+a+pilot+observational+study.">Endotoxin activity levels as a prediction tool for risk of deterioration in patients with sepsis not admitted to the intensive care unit: a pilot observational study.</a> Journal of Critical Care. 28 (5), 612-617 (2013).</li><li>Roth, R. I., Levin, F. C., Levin, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+detection+of+bacterial+endotoxin+in+plasma+with+the+Limulus+test.">Optimization of detection of bacterial endotoxin in plasma with the Limulus test.</a> The Journal of Laboratory and Clinical Medicine. 116 (2), 153-161 (1990).</li><li>Yaguchi, A., Yuzawa, J., Klein, D. J., Takeda, M., Harada, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combining+intermediate+levels+of+the+Endotoxin+Activity+Assay+(EA)+with+other+biomarkers+in+the+assessment+of+patients+with+sepsis:+results+of+an+observational+study.">Combining intermediate levels of the Endotoxin Activity Assay (EA) with other biomarkers in the assessment of patients with sepsis: results of an observational study.</a> Critical Care. 16 (3), (2012).</li><li>Earley, Z. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Burn+Injury+Alters+the+Intestinal+Microbiome+and+Increases+Gut+Permeability+and+Bacterial+Translocation.">Burn Injury Alters the Intestinal Microbiome and Increases Gut Permeability and Bacterial Translocation.</a> PLoS One. 10 (7), (2015).</li><li>Munster, A. M., Smith-Meek, M., Dickerson, C., Translocation Winchurch, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incidental+phenomenon+or+true+pathology?.">Incidental phenomenon or true pathology?.</a> Annals of Surgery. 218 (3), 321 (1993).</li><li>Clementi, A., Virz&#236;, G. M., Brocca, A., Ronco, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Role+of+Endotoxin+in+the+Setting+of+Cardiorenal+Syndrome+Type+5.">The Role of Endotoxin in the Setting of Cardiorenal Syndrome Type 5.</a> Cardiorenal Medicine. 7 (4), 276-283 (2017).</li><li>Virz&#236;, G. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiorenal+Syndrome+Type+5+in+Sepsis:+Role+of+Endotoxin.">Cardiorenal Syndrome Type 5 in Sepsis: Role of Endotoxin.</a> in Cell Death Pathways and Inflammation. Kidney and Blood Pressure Research. 41 (6), 1008-1015 (2016).</li><li>Mignon, F., Piagnerelli, M., Van Nuffelen, M., Vincent, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+empiric+antibiotic+treatment+on+plasma+endotoxin+activity+in+septic+patients.">Effect of empiric antibiotic treatment on plasma endotoxin activity in septic patients.</a> Infection. 42 (3), 521-528 (2014).</li><li>Klein, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Daily+variation+in+endotoxin+levels+is+associated+with+increased+organ+failure+in+critically+ill+patients.">Daily variation in endotoxin levels is associated with increased organ failure in critically ill patients.</a> Shock. 28 (5), 524-529 (2007).</li></ol>

Септический шок по-прежнему в настоящее время связано со смертностью выше, чем 40%, хотя этот показатель варьируется в соответствии с рассмотренными докладами16. Необходимость новых и лучших биомаркеров пропагандируется большинством экспертов в области, с тем чтобы помочь ?...

Липополисахарид (LPS), также известный как эндотоксин, является ключевым компонентом мембранной структуры грамположительных (GN) бактерий. Он составляет около 10% клеточной стенки, будучи жизненно важным для внешней целостности мембраны и гомеостаза. Кроме того, это мощный активатор врожденнойиммунной системы хозяина 1,2.
В пробирке воздействие врожденных клеток иммунной системына LPS приводит к изменениям в экспрессии нескольких генов 3. Введение очень небольших количеств ЛПС у здоровых добровольцев человека вызывает каскад острого системного воспаления, в то время как сепсис и септический шок могут возникнуть при более высоких концентрациях эндотоксина4,5.
Сепсис является опасным для жизни состоянием, которое, если не быстро распознается, может привести к многоорганной недостаточности и смерти. Пациенты септиками должны лечиться своевременно, с агрессивной реанимацией, адекватной антибиотикотерапией, оптимальным контролем источника и быстрыми стратегиями поддержки органов. Диагноз этиологии сепсиса в первую очередь основан на клиническом признании и культурном обнаружении патогенов6. Тем не менее, результаты микробных культур может занять до 48 ч и являются неубедительными в 30% случаев7. Ранняя идентификация и вмешательство могут привести к улучшению исходов для пациентов. У пациентов, у которых подозревается сепсис, решения часто принимаются на основе физиологических и биохимических параметров, без явных признаков эндотоксемии.
Измерение эндотоксинной активности (ЕА) может быть получено с помощью коммерческого анализа (см. Таблицаматериалов) в цельной крови. Он может быть использован в качестве биомаркера системной эндотоксемии для раннего расслоения тяжести заболевания, особенно у пациентов с риском развития септического шока8. Ассес был использован для руководства Полимиксин B гемоперфузионной терапии в недавно опубликованном двойном слепом рандомизированно-контролируемого клинического испытания у пациентов с септическим шоком9. У тяжелобольных пациентов исследование MEDIC показало, что повышенные уровни Е.А. связаны с множественной дисфункцией органов, продолжительностью пребывания в отделении интенсивной терапии (ICU) и смертностью10.
Различные анализы были разработаны для обнаружения эндотоксина. Анализ Limulus Amoebocyte Lysate (LAL) либо в качестве гель-сгустка, мутбидиметрического или хромогенного теста, до сих пор был наиболее часто принятым для оценки эндотоксина сыворотки. Он основан на способности эндотоксина вызывать коагуляцию гемолимфа краба подковы, Limulus polyphemus. Тем не менее, этот ассес имеет некоторые ограничения с точки зрения специфики. В частности, он также может быть активирован микробных продуктов, помимо эндотоксина, таких как компоненты грибковой клеточной стенки, и он может быть ингибирован различными белками плазмы человека11.
В течение последнего десятилетия измерение Е.А. было разработано и проверено в качестве биомаркера циркулирующей эндотоксемии. По сравнению с тестом LAL, EA быстрее и проще внедряется в клинических условиях. Кроме того, было показано, что более точным, чем LAL в цельной крови, с повышенной чувствительностью и специфичностью, как в пробирке и in vivo12.
Несмотря на его первоначальную реализацию в качестве раннего диагностического инструмента для быстрого выявления бактерий GN как сепсиса возбудительов, уровень Е.А. также был изучен как биомаркер тяжести заболевания. В этом контексте было показано, что особенно полезно для оценки состояния гипоперфузии из-за продолжающихся критических заболеваний, таких как септический шок или синдром после остановки сердца13. Совсем недавно, с момента разработки систем гемоочищения, положительный результат Е.А. также был предложен в качестве инструмента скрининга для точного выявления потенциальных кандидатов на такую терапию14. Недавно мы провели ретроспективное исследование по распространенности и клинической значимости ранних высоких уровней ЕА у 107 пациентов с септическим шоком. В соответствии с другими последними результатами, мы обнаружили, что Е.А. является перспективным маркером тяжести заболевания у пациентов с септическим шоком15.
Цель настоящей рукописи состоит в том, чтобы описать метод выполнения анализов Е.А., либо у постели, либо в лаборатории, и описать его потенциальное использование в репрезентативном сценарии септического шока. Этот метод может обнаружить активность LPS путем измерения повышенного окислительного всплеска в нейтрофилов после их грунтовки комплексами антиэндотоксина антитела и LPS. Повышенный респираторный всплеск обнаруживается хемилюминометром, а количество излучаемого света считается пропорциональным количеству эндотоксина в образце крови. Анализ требует нескольких реагентов, занимает около 30 минут для выполнения и использует всего лишь 40 зл цельной крови12.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:727px;" width="726">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:184px;">EAA kit</td>
			<td style="width:141px;">Spectral Medical Inc.</td>
			<td style="width:133px;">EAAST-20</td>
			<td style="width:268px;">Package with 20 tests + 1 quality control</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:184px;">Smart Line TL</td>
			<td style="width:141px;">Berthold</td>
			<td style="width:133px;">EAASL</td>
			<td>Luminometer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:184px;">Incubator shaker</td>
			<td style="width:141px;">GRANT</td>
			<td style="width:133px;">ES-20</td>
			<td>Mini-incubator shaker</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:184px;">Vortexer</td>
			<td style="width:141px;">VWR</td>
			<td style="width:133px;">444-2790</td>
			<td>Vortex instrument</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

endotoxin activity assay for the detection of whole blood endotoxemia in critically ill patients

Липополисахарид, также известный как эндотоксин, является фундаментальным компонентом грамотрицательных бактерий и играет решающую роль в развитии сепсиса и септического шока. Раннее выявление инфекционного процесса, который быстро превращается в критическое заболевание, может привести к более быстрому и интенсивному лечению, что потенциально может привести к улучшению исходов для пациентов. Эндотоксинная активность (ЕА) можно использовать у постели в качестве надежного биомаркера системной эндотоксемии. Обнаружение повышенных уровней эндотоксинной активности неоднократно было показано, что связано с повышенной тяжести заболевания у пациентов с сепсисом и септическим шоком. Ассес быстро и легко выполнить. Кратко, после отбора проб, аликвот цельной крови смешивается с антиэндотоксином антитела и с добавлением LPS. Эндотоксинная активность измеряется как относительный окислительный всплеск загрунтованных нейтрофилов, обнаруженный хемиолюминесценцией. Выход асссея выражается по шкале от 0 (отсутствует) до 1 (максимальный) и классифицируется как "низкий" (0,4 единицы), "промежуточный" (0,4-0,59 единицы) или "высокий" (0,6 единицы). Подробная методология и обоснование реализации асссеа Е.А. представлены в данной рукописи.

72-летний мужчина был госпитализирован в отделение неотложной помощи (ЭД) академической городской больницы. Несколькими днями ранее он представил своему лечащему врачу жалобу на жжение при мочеиспускании. Была рекомендована кратковременная терапия с оральным фосфом?...

Watch this Scientific Journal Video about Endotoxin Activity Assay for the Detection of Whole Blood Endotoxemia in Critically Ill Patients at JoVE.com

Endotoxin Activity Assay for the Detection of Whole Blood Endotoxemia in Critically Ill Patients

Настоящим мы представляем протокол для измерения у постели эндотоксинной активности образцов крови человека. Эндотоксин активность анализ простой тест для выполнения и может быть полезным биомаркером в критически больных пациентов с сепсисом.

Эндотоксин деятельности Анализ для обнаружения эндотоксемии всей крови у критически больных пациентов

Lipopolysaccharide, also known as endotoxin, is a fundamental component of gram-negative bacteria and plays a crucial role in the development of sepsis ...

Сепсис может привести к многоохокторной недостаточности и смерти. Эндотоксин является фундаментальным компонентом грамотрицательных бактерий. Повышенный циркулирующий уровень эндотоксина может выявить пациента с более высоким риском развития более тяжелого заболевания.Анализ активности эндотоксина может быть использован в качестве простого, быстрого и надежного биомаркера системной эндотоксии. Раннее выявление этого токсина может помочь врачам лечения пациентов с септическим шоком. У пациента с септическим шоком раннее выявление быстро развивающегося состояния может привести к более быстрой и интенсивной терапии жизнеобеспечения, что потенциально приведет к лучшим результатам.Демонстрацией этой процедуры будет Лиза Матиасен, молекулярный биолог, который сотрудничает с нашей исследовательской группой. Чтобы начать эту процедуру, установите набор тестов EA и распаковать пять различных видов труб. Используйте трубку номер один, контрольную трубку, для измерения базальной активности неспецифического окислительного всплеска нейтрофилов пациента при отсутствии конкретного антитела.Используйте трубку номер два, образец трубки, для измерения окислительного всплеска в ответ на lpS-антитела комплекса. Используйте трубку номер три, трубку Макса, для измерения максимального окислительного всплеска нейтрофилов пациента в ответ на избыток эндотоксина. Используйте трубку номер четыре, трубку LPS, в качестве источника экзогенного эндотоксина.И используйте трубку номер пять, трубку Aliquot, для хранения крови. Соберите образцы крови пациента в стерильных трубках, содержащих антикоагулянт ЭДТА, и храните их при комнатной температуре перед запуском теста EA. Перед началом теста включите химилюминометр и инкубатор шейкер и подогреете инкубатор до 37 градусов по Цельсию.Во-первых, поместите трубки EA, которые будут использоваться в трубчатых стеллажах, и удалите колпачки. Используйте combipipette для передачи одного миллилитров реагента EA из бутылки в трубки номер один, номер два, и номер три, трубя вниз стороне труб. Аккуратно инвертировать трубку сбора крови 20 раз, чтобы смешать образец крови пациента.Затем пипетка 0,5 миллилитров крови пациента в трубку номер четыре и трубку номер пять. Вихревая трубка номер четыре в течение 10 секунд. Поместите трубчатые стойки со всеми пробирками EA в шейкер инкубатора.Закройте крышку и инкубировать при 37 градусах по Цельсию в течение 10 минут. После этого откройте крышку инкубатора и снимите трубчатые стойки со шейкера. Вихревая трубка номер пять.Используя стерильный наконечник, пипетка 40 микролитров крови в трубки номер один и номер два, в дубликате. Вихревая трубка номер четыре. Используя тот же наконечник пипетки, перенесите 40 микролитров крови из трубки номер четыре в трубку номер три, в дубликат.Вихрь шесть окончательных пробирок один за другим. Поместите трубки стойки обратно в инкубационный шейкер, и закрыть крышку. Установите шейкер до 100 об/мин, и начать движение в течение 14 минут.Вставьте чип-карту с маркировкой EA в химилюминометр и нажмите Start. После 14-минутной инкубации следуйте инструкциям, отображаемым на хемилюминометре. Аккуратно вихрь каждой трубки в течение 10 секунд, прежде чем поместить его на образец держателя хемилюминометра.Откройте ящик образца и поместите трубку номер один в держатель образца. Затем закройте ящик образца и дождите относительное чтение светового блока. Повторите этот процесс чтения для трубок два и три и все дубликаты, как указано в текстовом протоколе.После обработки всех труб результаты советника будут рассчитываться и печататься автоматически. Повторите весь процесс анализа для каждого образца крови, который должен быть проверен. Храните комплект EA Assay и его компоненты в оригинальной герметичной упаковке при температуре от двух до 25 градусов по Цельсию.В этом исследовании проводится анализ активности эндотоксина для выявления эндотоксемии всей крови у тяжелобольных пациентов. Значение советника менее 0,40 единиц EA указывает на низкий уровень активности эндотоксина, равный низкой концентрации циркулирующих LPS, что представляет собой низкий риск прогрессирования в тяжелом состоянии заболевания. Результат от 0,40 до 0,59 единиц ЕА указывает на промежуточный уровень активности эндотоксина, что представляет собой промежуточный риск развития тяжелого сепсиса и септического шока.Результаты, равные или более 0,60 единиц EA, указывают на высокий уровень активности эндотоксина, что представляет высокий риск септических шоков и плохих исходов пациентов. Кровь из трубок номер четыре и пять должны быть смешаны с правильной пробирки. Необходимо принять дополнительные меры для следовать правильному порядку, указанного в протоколе.Каждая трубка работает в дубликатах, что потенциально приводит к ошибкам на этом этапе. После его введения, EA Assay был предложен в качестве биомаркера для стратификации риска пациента с системной гипоперфузией. Кроме того, он был изучен в качестве скрининг-теста для отбора пациентов для передовых стратегий лечения гемопурификации.

Research

JoVE Journal

Medicine

Manual Muscle Testing:  A Method of Measuring Extremity Muscle Strength Applied to Critically Ill Patients

Руководство Тестирование мышц: метод измерения силы мышц конечностей Применяют для критически больных пациентов

Survivors of acute respiratory distress syndrome (ARDS) and other causes of critical illness often have generalized weakness, reduced exercise tolerance, ...

Accurate and Simple Measurement of the Pro-inflammatory Cytokine IL-1&beta; using a Whole Blood Stimulation Assay

Accurate and Simple Measurement of the Pro-inflammatory Cytokine IL-1ÃƒÅ½Ã‚Â² using a Whole Blood Stimulation Assay

Точные и простые измерения провоспалительных цитокинов IL-1β использованием Всего Пробирная стимуляция крови

Inflammatory processes resulting from the secretion of soluble mediators by immune cells, lead to various manifestations in skin, joints and other tissues ...

Sequencing of Bacterial Microflora in Peripheral Blood: our Experience with HIV-infected Patients

Секвенирование бактериальной микрофлоры в периферической крови: Наш опыт работы с ВИЧ-инфицированных пациентов

The healthy gastrointestinal tract is physiologically colonized by a large variety of commensal microbes that influence the development 
	of the humoral ...

Rapid Point-of-Care Assay of Enoxaparin Anticoagulant Efficacy in Whole Blood

Быстрое Точка-санитарной помощи анализа эффективности эноксапарина антикоагулянтов в цельной крови

There is the need for a clinical assay to determine the extent to which a patient's blood is effectively anticoagulated by the ...

Real-time Cytotoxicity Assays in Human Whole Blood

В режиме реального времени на цитотоксичность в человека цельной крови

A live cell-based whole blood cytotoxicity assay (WCA) that allows access to temporal information of the overall cell cytotoxicity is developed with ...

Network Analysis of Foramen Ovale Electrode Recordings in Drug-resistant Temporal Lobe Epilepsy Patients

Сетевой анализ овального электродных Recordings в устойчивых к лекарственным средствам височная эпилепсия пациентов

Approximately 30% of epilepsy patients are refractory to antiepileptic drugs. In these cases, surgery is the only alternative to eliminate/control ...

Whole Genome Sequencing of Candida glabrata for Detection of Markers of Antifungal Drug Resistance

Whole Genome Sequencing of Candida glabrata for Detection of Markers of Antifungal Drug Resistance

Весь геном последовательности Candida glabrata для обнаружения маркеров противогрибковым препаратам

Candida glabrata can rapidly acquire mutations that result in drug resistance, especially to azoles and echinocandins. Identification of genetic mutations ...

How to Administer Near-Infrared Spectroscopy in Critically ill Neonates, Infants, and Children

Как управлять ближней инфракрасной спектроскопией у тяжелобольных новорожденных, младенцев и детей

Near infrared spectroscopy (NIRS) calculates regional tissue oxygenation (rSO2) using the different absorption spectra of oxygenated and deoxygenated ...

Infrared Thermography for the Detection of Changes in Brown Adipose Tissue Activity

Инфракрасная термография для выявления изменений активности бурой жировой ткани

Measuring brown adipose tissue (BAT) activity by positron emission tomography computed tomography (PET-CT) via the accumulation of 18F-fluorodeoxyglucose ...