Name: endotoxin activity assay for the detection of whole blood endotoxemia in critically ill patients
Uploaded: 2019-06-24T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Endotoxin Activity Assay for the Detection of Whole Blood Endotoxemia in Critically Ill Patients at JoVE.com

Biz Paolo Braganò ve Lisa Mathiasen, Ph.D. tahlil protokol metodolojisi gözden geçirilmesi için teşekkür ederiz. Dario Winterton, MD Ingilizce dil yeterlilik için el yazması gözden önemli yardım sağladı.

Protokol, insan biyoörneklerinin işlenmesi ile ilgili kurumsal yönergelere göre ve klinik laboratuvarımızın mevcut standart operatif prosedürlerini takiben gerçekleştirilir. Test edilen hastaların EA verilerinin ve klinik bilgilerinin kullanımı, kurumunuzun insan Araştırma Etik Komitesinin yönergelerini takip eder.
1. laboratuar ekipmanları ve tahlil kiti Içeriği
<ol><li>EA setini kullanımda değilken 2 – 8 °C ' de saklayın.</li>
	<li>
Her EA testi 5 farklı ?...

<ol>
	<li>Akira, S., Takeda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toll-like+receptor+signalling.">Toll-like receptor signalling.</a> Nature Reviews Immunology. 4 (7), 499-511 (2004).</li><li>Takeda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolution+and+integration+of+innate+immune+recognition+systems:+the+Toll-like+receptors.">Evolution and integration of innate immune recognition systems: the Toll-like receptors.</a> Journal of Endotoxin Research. 11 (1), 51-55 (2005).</li><li>Ulevitch, R. J., Tobias, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recognition+of+gram-negative+bacteria+and+endotoxin+by+the+innate+immune+system.">Recognition of gram-negative bacteria and endotoxin by the innate immune system.</a> Current Opinion in Immunology. 11 (1), 19-22 (1999).</li><li>Natanson, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endotoxin+and+tumor+necrosis+factor+challenges+in+dogs+simulate+the+cardiovascular+profile+of+human+septic+shock.">Endotoxin and tumor necrosis factor challenges in dogs simulate the cardiovascular profile of human septic shock.</a> The Journal of Experimental Medicine. 169 (3), 823-832 (1989).</li><li>Suffredini, A. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cardiovascular+response+of+normal+humans+to+the+administration+of+endotoxin.">The cardiovascular response of normal humans to the administration of endotoxin.</a> The New England Journal of Medicine. 321 (5), 280-287 (1989).</li><li>Singer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Third+International+Consensus+Definitions+for+Sepsis+and+Septic+Shock+(Sepsis-3).">The Third International Consensus Definitions for Sepsis and Septic Shock (Sepsis-3).</a> JAMA: The Journal of the American Medical Association. 315 (8), 801-810 (2016).</li><li>Gupta, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culture-Negative+Severe+Sepsis:+Nationwide+Trends+and+Outcomes.">Culture-Negative Severe Sepsis: Nationwide Trends and Outcomes.</a> Chest. 150 (6), 1251-1259 (2016).</li><li>Ikeda, T., Ikeda, K., Suda, S., Ueno, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Usefulness+of+the+endotoxin+activity+assay+as+a+biomarker+to+assess+the+severity+of+endotoxemia+in+critically+ill+patients.">Usefulness of the endotoxin activity assay as a biomarker to assess the severity of endotoxemia in critically ill patients.</a> Innate Immunity. 20 (8), 881-887 (2014).</li><li>Dellinger, R. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+Targeted+Polymyxin+B+Hemoperfusion+on+28-Day+Mortality+in+Patients+With+Septic+Shock+and+Elevated+Endotoxin+Level.">Effect of Targeted Polymyxin B Hemoperfusion on 28-Day Mortality in Patients With Septic Shock and Elevated Endotoxin Level.</a> The EUPHRATES Randomized Clinical Trial. JAMA: The Journal of the American Medical Association. 320 (14), 1455-1463 (2018).</li><li>Marshall, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnostic+and+prognostic+implications+of+endotoxemia+in+critical+illness:+results+of+the+MEDIC+study.">Diagnostic and prognostic implications of endotoxemia in critical illness: results of the MEDIC study.</a> The Journal of Infectious Diseases. 190 (3), 527-534 (2004).</li><li>Levin, J., Bang, F. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clottable+protein+in+Limulus;+its+localization+and+kinetics+of+its+coagulation+by+endotoxin.">Clottable protein in Limulus; its localization and kinetics of its coagulation by endotoxin.</a> Thrombosis et Diathesis Haemorrhagica. 19 (1), 186-197 (1968).</li><li>Marshall, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+endotoxin+activity+in+critically+ill+patients+using+whole+blood+neutrophil+dependent+chemiluminescence.">Measurement of endotoxin activity in critically ill patients using whole blood neutrophil dependent chemiluminescence.</a> Critical Care. 6 (4), 342-348 (2002).</li><li>Grimaldi, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+Level+of+Endotoxemia+Following+Out-of-Hospital+Cardiac+Arrest+Is+Associated+With+Severity+and+Duration+of+Postcardiac+Arrest+Shock.">High Level of Endotoxemia Following Out-of-Hospital Cardiac Arrest Is Associated With Severity and Duration of Postcardiac Arrest Shock.</a> Critical Care Medicine. 43 (12), 2597-2604 (2015).</li><li>Klein, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+EUPHRATES+trial+(Evaluating+the+Use+of+Polymyxin+B+Hemoperfusion+in+a+Randomized+controlled+trial+of+Adults+Treated+for+Endotoxemia+and+Septic+shock):+study+protocol+for+a+randomized+controlled+trial.">The EUPHRATES trial (Evaluating the Use of Polymyxin B Hemoperfusion in a Randomized controlled trial of Adults Treated for Endotoxemia and Septic shock): study protocol for a randomized controlled trial.</a> Trials. 15, 218 (2014).</li><li>Bottiroli, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevalence+and+clinical+significance+of+early+high+Endotoxin+Activity+in+septic+shock:+An+observational+study.">Prevalence and clinical significance of early high Endotoxin Activity in septic shock: An observational study.</a> Journal of Critical Care. 41, 124-129 (2017).</li><li>Kaukonen, K. M., Bailey, M., Suzuki, S., Pilcher, D., Bellomo, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mortality+related+to+severe+sepsis+and+septic+shock+among+critically+ill+patients+in+Australia+and+New+Zealand.">Mortality related to severe sepsis and septic shock among critically ill patients in Australia and New Zealand.</a> JAMA: The Journal of the American Medical Association. 311 (13), 1308-1316 (2014).</li><li>Biagioni, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endotoxin+activity+levels+as+a+prediction+tool+for+risk+of+deterioration+in+patients+with+sepsis+not+admitted+to+the+intensive+care+unit:+a+pilot+observational+study.">Endotoxin activity levels as a prediction tool for risk of deterioration in patients with sepsis not admitted to the intensive care unit: a pilot observational study.</a> Journal of Critical Care. 28 (5), 612-617 (2013).</li><li>Roth, R. I., Levin, F. C., Levin, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+detection+of+bacterial+endotoxin+in+plasma+with+the+Limulus+test.">Optimization of detection of bacterial endotoxin in plasma with the Limulus test.</a> The Journal of Laboratory and Clinical Medicine. 116 (2), 153-161 (1990).</li><li>Yaguchi, A., Yuzawa, J., Klein, D. J., Takeda, M., Harada, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combining+intermediate+levels+of+the+Endotoxin+Activity+Assay+(EA)+with+other+biomarkers+in+the+assessment+of+patients+with+sepsis:+results+of+an+observational+study.">Combining intermediate levels of the Endotoxin Activity Assay (EA) with other biomarkers in the assessment of patients with sepsis: results of an observational study.</a> Critical Care. 16 (3), (2012).</li><li>Earley, Z. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Burn+Injury+Alters+the+Intestinal+Microbiome+and+Increases+Gut+Permeability+and+Bacterial+Translocation.">Burn Injury Alters the Intestinal Microbiome and Increases Gut Permeability and Bacterial Translocation.</a> PLoS One. 10 (7), (2015).</li><li>Munster, A. M., Smith-Meek, M., Dickerson, C., Translocation Winchurch, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incidental+phenomenon+or+true+pathology?.">Incidental phenomenon or true pathology?.</a> Annals of Surgery. 218 (3), 321 (1993).</li><li>Clementi, A., Virz&#236;, G. M., Brocca, A., Ronco, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Role+of+Endotoxin+in+the+Setting+of+Cardiorenal+Syndrome+Type+5.">The Role of Endotoxin in the Setting of Cardiorenal Syndrome Type 5.</a> Cardiorenal Medicine. 7 (4), 276-283 (2017).</li><li>Virz&#236;, G. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiorenal+Syndrome+Type+5+in+Sepsis:+Role+of+Endotoxin.">Cardiorenal Syndrome Type 5 in Sepsis: Role of Endotoxin.</a> in Cell Death Pathways and Inflammation. Kidney and Blood Pressure Research. 41 (6), 1008-1015 (2016).</li><li>Mignon, F., Piagnerelli, M., Van Nuffelen, M., Vincent, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+empiric+antibiotic+treatment+on+plasma+endotoxin+activity+in+septic+patients.">Effect of empiric antibiotic treatment on plasma endotoxin activity in septic patients.</a> Infection. 42 (3), 521-528 (2014).</li><li>Klein, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Daily+variation+in+endotoxin+levels+is+associated+with+increased+organ+failure+in+critically+ill+patients.">Daily variation in endotoxin levels is associated with increased organ failure in critically ill patients.</a> Shock. 28 (5), 524-529 (2007).</li></ol>

Septik şok halen günümüzde% 40 kadar yüksek bir mortalite ile ilişkilidir, ancak bu oran kabul edilen raporlara göre değişir16. Yeni ve daha iyi biyomarkerlere olan ihtiyaç, klinisyenler erken teşhis, daha iyi yönetim ve septik şok6olan hastaların prognostikasyonunda yardımcı olmak amacıyla alanlarda çoğu uzman tarafından savunulmuş.
Bir EA testi yapmak, önceki teknik bilgi veya sofistike laboratuvar ekipmanlarını gerektir...

Endotoksin olarak da bilinen Lipopolysaccharide (LPS), gram-negatif (GN) bakterilerin membran yapısının önemli bir bileşenidir. Hücre duvarının yaklaşık% 10 ' unda, dış membran bütünlüğü ve homeostaz için hayati önem taşımaktadır. Dahası, bu ev sahibi doğuştan gelen bağışıklık sistemi güçlü bir aktivatörü1,2.
LPS için doğuştan gelen bağışıklık sistemi hücrelerinin in vitro pozlama çoklu genler ifadesinde değişikliklere yol açar3. Sağlıklı insan Gönüllüleri çok küçük miktarlarda LPS yönetimi Akut sistemik inflamasyon Cascade tetikler, sepsis ve septik şok yüksek endotoksin konsantrasyonları ile ortaya çıkabilir4,5.
Sepsis hayat tehdit edici bir durumdur, Eğer hemen tanınmazsa, çoklu organ yetmezliği ve ölüme yol açabilir. Septik hastalar zamanında tedavi edilmelidir, agresif resüsitasyon ile, yeterli antibiyotik tedavisi, optimum kaynak kontrolü, ve hızlı organ destek stratejileri. Sepsis etiyolojisinin tanısı öncelikle klinik tanıma ve kültür bazlı patojen algılama6' ya dayanır. Bununla birlikte, mikrobiyal kültürlerin sonuçları 48 h 'ye kadar sürebilir ve7' ye kadar% 30 ' a kadar sonuçsuz olabilir. Erken teşhis ve müdahale daha iyi hasta sonuçlarına yol açabilir. Sepsis şüphelenilen hastalarda, kararlar genellikle fizyolojik ve biyokimyasal parametreler temelinde yapılır, endotoksemi net bir işareti olmadan.
Endotoksin aktivitesi (EA) ölçümü, tüm kandaki ticari bir tahlil ( malzeme tablosunabakın) yoluyla elde edilebilir. Hastalığın şiddetinin erken katmanlaştırılması için sistemik endotoksemi biyomarker olarak kullanılabilir, özellikle septik şok geliştirme riski olan hastalarda8. Tahlil, septik şok9olan hastalarda son zamanlarda yayınlanan çift kör randomize kontrollü klinik denemlerde Polymyxin B hemoperfüzyon tedavisine rehberlik etmek için kullanılmıştır. Kritik hasta hastalarda, MEDIC çalışması, birden fazla organ fonksiyon bozukluğu, yoğun bakım ünitesi (ıCU) konaklama süresi ve mortalite10ile ILIŞKILENDIRILECEK EA düzeylerini artırdı.
Endotoksini tespit etmek için farklı YAZIS geliştirilmiştir. Limulus Amoebocyte lysate (LAL) assay, bir jel-pıhtısı olarak, turbidimetrik, veya kromojenik test, şimdiye kadar en sık serum endotoksin tahmini için benimsenen olmuştur. Bu endotoksin, at nalı yengeç, Limulus Polyphemushemolymph koagülasyon neden yeteneği dayanmaktadır. Ancak, bu tahlil özgüllük açısından bazı sınırlamalar vardır. Özellikle, ayrıca endotoksin dışında Mikrobiyal Ürünler tarafından aktive edilebilir, mantar hücre duvar bileşenleri gibi, ve çeşitli insan Plazma proteinleri tarafından engellenmiş olabilir11.
Son on yıl içinde EA ölçümü gelişen endotoksemi biyomarker olarak geliştirilmiştir ve doğrulandı. LAL testi ile karşılaştırıldığında, EA daha hızlı ve klinik ortamda uygulanması daha kolaydır. Dahası, her ikisi de in vitro ve in vivo12, artan duyarlılık ve özgüllük ile, tüm kanda Lal daha doğru olduğu gösterilmiştir.
GN bakterilerinin sepsis nedensel ajanlar olarak hızlı tanımlanması için erken teşhis aracı olarak ilk uygulanmasına rağmen, EA seviyesi de hastalık şiddetinin biyomarker olarak incelenmiştir. Bu bağlamda, septik şok veya kardiyo sonrası tutuklanma sendromu13gibi devam eden kritik hastalık nedeniyle hipoperfüzyon durumunu değerlendirmek için özellikle yararlı olduğu gösterilmiştir. Daha yakın zamanda, hemofurasyon sistemlerinin gelişimi nedeniyle, olumlu bir EA sonucu da bu tür terapi için potansiyel adaylar doğru belirlemek için bir tarama aracı olarak önerilmiştir14. Son zamanlarda 107 yılında septik şok olan hastalarda EA 'nın erken yüksek düzeylerinin prevalansı ve klinik önemi hakkında gözlemsel retrospektif bir çalışma gerçekleştirdik. Diğer son sonuçlara göre, EA 'nın septik şok olan hastalarda hastalığın şiddetinin umut verici bir belirteci olduğunu bulduk15.
Bu yazının amacı, EA tahlil işlemini, baş ucunda ya da laboratuarda gerçekleştirme yöntemini tarif etmek ve septik şok temsili senaryosunda potansiyel kullanımını açıklamak. Bu teknik, bir anti-endotoksin antikor ve LPS kompleksler tarafından kendi astar aşağıdaki nötrofiller gelişmiş oksidatif patlama ölçerek LPS etkinliğini algılayabilir. Artmış solunum patlaması bir kemiluminometre ile tespit edilir ve yayılan ışık miktarı kan örneğinde endotoksin miktarına orantılı olarak kabul edilir. Tahlil birkaç reaktifler gerektirir, yaklaşık 30 dakika gerçekleştirmek için alır ve tüm kan 40 μL kadar az kullanır12.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:727px;" width="726">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:184px;">EAA kit</td>
			<td style="width:141px;">Spectral Medical Inc.</td>
			<td style="width:133px;">EAAST-20</td>
			<td style="width:268px;">Package with 20 tests + 1 quality control</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:184px;">Smart Line TL</td>
			<td style="width:141px;">Berthold</td>
			<td style="width:133px;">EAASL</td>
			<td>Luminometer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:184px;">Incubator shaker</td>
			<td style="width:141px;">GRANT</td>
			<td style="width:133px;">ES-20</td>
			<td>Mini-incubator shaker</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:184px;">Vortexer</td>
			<td style="width:141px;">VWR</td>
			<td style="width:133px;">444-2790</td>
			<td>Vortex instrument</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

endotoxin activity assay for the detection of whole blood endotoxemia in critically ill patients

Endotoksin olarak da bilinen lipopolysaccharide, gram-negatif bakterilerin temel bir bileşenidir ve sepsis ve septik şok gelişiminde önemli bir rol oynamaktadır. Kritik bir hastalığa hızla gelişen bulaşıcı bir sürecin erken tanımlanması, daha hızlı ve daha yoğun bir tedavi isteyebilir, böylece potansiyel olarak daha iyi hasta sonuçlarına yol açın. Endotoksin aktivitesi (EA) assay, sistemik endotoksemi güvenilir bir biyomarker olarak başucunda kullanılabilir. Yüksek endotoksin aktivite düzeylerinin tespiti, sepsis ve septik şok hastalarında artan bir hastalık şiddetiyle ilişkili olarak tekrar tekrar gösterildi. Tahlil hızlı ve kolay gerçekleştirmek için. Kısaca, örnekleme sonra, tam kan bir kısım bir anti-endotoksin antikor ile karıştırılır ve eklenen LPS ile. Endotoksin aktivitesi, kemioluminesans ile algılandığı gibi, astar nötrofiller bağıl oksidatif patlaması olarak ölçülür. Testin çıkışı 0 ' dan (bulunmayan) 1 ' e (maksimal) ve "düşük" (< 0.4 ünite), "Orta" (0.4 – 0.59 birimler) veya "yüksek" (≥ 0,6 birimler) olarak sınıflandırılmış bir ölçekte ifade edilir. Bu yazıda EA testin uygulanması için ayrıntılı metodoloji ve mantık bildirilmektedir.

72 yaşındaki bir adam, akademik bir kentsel hastanenin acil servise (ED) kabul edildi. Birkaç gün önce onun birincil bakım Doktoru idrar üzerine yanma şikayet sundu. Oral fosfomiyisin kısa kurs tedavisi tavsiye edildi. Onun tıbbi geçmişi hipertansiyon, karmaşık olmayan tip-2 diyabet ve benign prostat hiperplazisi dahil. İlaçları enalapril, atorvastatin, tamsulosin ve metformin dahil.
ED 'de, uyanmış olduğunda...

Watch this Scientific Journal Video about Endotoxin Activity Assay for the Detection of Whole Blood Endotoxemia in Critically Ill Patients at JoVE.com

Endotoxin Activity Assay for the Detection of Whole Blood Endotoxemia in Critically Ill Patients

Bu konuda, insan bütün kan örneklerinin endotoksin aktivitesinin başında ölçmek için bir protokol sunuyoruz. Endotoksin aktivite tahlil gerçekleştirmek için basit bir test ve sepsis ile eleştirel hasta hastalarda yararlı bir biyomarker olabilir.

Eleştirel hasta hastalarda tam kan endotoksemi tespiti için endotoksin aktivite assay

Lipopolysaccharide, also known as endotoxin, is a fundamental component of gram-negative bacteria and plays a crucial role in the development of sepsis ...

Sepsis çoklu organ yetmezliği ve ölüme yol açabilir. Endotoksin gram-negatif bakterilerin temel bir bileşenidir. Endotoksinin yüksek dolaşım düzeyleri daha ciddi bir hastalık geliştirmek için daha yüksek risk altındaki hasta yı belirleyebilir.Endotoksin Aktivite Ssay sistemik endotoksemi basit, hızlı ve güvenilir bir biyomarker olarak kullanılabilir. Bu toksinerken teşhis septik şok hastaları tedavi klinisyenler yardımcı olabilir. Septik şok uyğun hastada, hızla gelişen bir durumun erken teşhisi daha hızlı ve daha yoğun bir yaşam destek tedavisi ne kadar hızlı ve daha yoğun olabilir, potansiyel olarak daha iyi sonuçlara yol açabilir.Bu prosedürü gösteren Lisa Mathiasen, araştırma grubumuzla işbirliği yapan moleküler biyolog. Bu yordamı başlatmak için, bir EA test kiti ayarlayın ve tüpler beş farklı türde açmak. Belirli bir antikor yokluğunda hastanın nötrofillerin spesifik olmayan oksidatif patlama bazal aktivitesini ölçmek için tüp bir numaralı, Kontrol tüpü kullanın.LPS-antikor kompleksine yanıt olarak oksidatif patlamayı ölçmek için iki numaralı tüp olan Örnek tüpü kullanın. Endotoksin fazlasına yanıt olarak hastanın nötrofillerinin maksimal oksidatif patlamasını ölçmek için üç numaralı Max tüpü kullanın. Eksojen endotoksin kaynağı olarak dört numaralı tüp LPS tüpünü kullanın.Ve kan depolamak için beş numaralı Tüpü, Aliquot tüpünü kullanın. EDTA antikoagülan içeren steril tüplerde hasta kan örneklerini toplayın ve EA testini çalıştırmadan önce oda sıcaklığında saklayın. Teste başlamadan önce, kemilüminometreyi ve kuvöz çalkalayıcıyı açın ve kuvözden 37 dereceye Kadar ısıtın.İlk olarak, tüp raflarında kullanılmak üzere EA tüpleri yerleştirin ve kapakları çıkarın. Bir mililitre EA reaktifini şişeden bir mililitresini tüplerin yan tarafına boru lar atarak bir numaralı, iki numara ve üç numaralı tüplere aktarmak için bir kombi kullanın. Hastanın kan örneğini karıştırmak için kan toplama tüpünü 20 kez hafifçe ters çevirin.Sonra, pipet 0.5 mililitre hasta kanı dört numaralı tüpe ve beş numaralı tüpe. 10 saniye boyunca dört numaralı girdap tüpü. Tüm EA test tüplerini içeren tüp raflarını kuvöz çalkalayıcıya yerleştirin.Kapağıkapatın ve 37 derecede 10 dakika kuluçkaya yatın. Bundan sonra, kuvöz kapağını açın ve tüp raflarını çalkalayıcıdan çıkarın. Beş numaralı girdap tüpü.Steril bir uç kullanarak, pipet 40 mikrolitre kan tüpleri sayısı bir ve iki numara, yinelenen. Dört numaralı girdap tüpü. Aynı pipet ucunu kullanarak, 40 mikrolitre kanı dört numaralı tüpten üç numaralı tüpe aktarın.Girdap altı son test tüplerini birer birer. Tüp raflarını kuluçka yakaya geri yerleştirin ve kapağıkapatın. Shaker'ı 100 rpm'ye ayarlayın ve hareketi 14 dakika boyunca başlatın.EA etiketli yonga kartını kemiluminometreye takın ve Başlat tuşuna basın. 14 dakikalık kuluçkadan sonra, kemilüinometrede görüntülenen talimatları uygulayın. Kemilüminometrenin numune tutucusu üzerine yerleştirmeden önce her tüpü 10 saniye boyunca yavaşça girdaplayın.Örnek çekmeceyi açın ve bir numaralı tüpü numune tutucuya yerleştirin. Ardından, örnek çekmeceyi kapatın ve göreli ışık ünitesi okumasını bekleyin. Metin protokolünde belirtildiği gibi, iki ve üç ve tüm yinelenenler için bu okuma işlemini tekrarlayın.Tüm tüpler işlendikten sonra, EA sonuçları otomatik olarak hesaplanır ve yazdırılır. Test edilmesi gereken her kan örneği için tüm tahkikat işlemini tekrarlayın. EA Tsay kitini ve bileşenlerini orijinal mühürlü ambalajda iki ila 25 santigrat derece arasında bir sıcaklıkta saklayın.Bu çalışmada, kritik hastalarda tam kan endotoksemisini saptamak için Endotoksin Aktivitesi Tahlili yapılmıştır. 0.40 EA biriminin altında bir EA değeri düşük endotoksin aktivite düzeyini gösterir, düşük dolaşan LPS konsantrasyonuna eşittir, bu da ciddi bir hastalık durumuna ilerleme riskini düşük gösterir. 0.40 ve 0.59 EA üniteleri arasında bir sonuç şiddetli sepsis ve septik şok gelişimi için bir ara risk temsil eden bir ara endotoksin aktivite düzeyi gösterir.Sonuçlar 0.60 EA ünitesine eşit veya daha büyük türdedir ve bu da septik şok ve kötü hasta sonuçları için yüksek risk teşkil eden yüksek endotoksin aktivite düzeyini gösterir. Dört ve beş numaralı tüplerden gelen kan doğru test tüpüyle karıştırılmalıdır. Protokolde belirtilen doğru sırayı takip etmek için ekstra özen gösterilmelidir.Her tüp yinelenenler halinde çalıştırılır ve bu aşamada hatalara yol açabilecek. Piyasaya sürüldükten sonra, EA Tsay sistemik hipoperfüzyonlu hastanın risk tabakalaşması için bir biyomarker olarak önerilmiştir. Ayrıca, ileri hemopurification tedavi stratejileri için hasta seçmek için bir tarama testi olarak çalışılmıştır.

Research

JoVE Journal

Medicine

Manual Muscle Testing:  A Method of Measuring Extremity Muscle Strength Applied to Critically Ill Patients

Kritik Hastalarda Uygulanan Manuel Kas Testi: Ekstremite Kas Kuvveti Ölçme Yöntemi

Survivors of acute respiratory distress syndrome (ARDS) and other causes of critical illness often have generalized weakness, reduced exercise tolerance, ...

Accurate and Simple Measurement of the Pro-inflammatory Cytokine IL-1&beta; using a Whole Blood Stimulation Assay

Accurate and Simple Measurement of the Pro-inflammatory Cytokine IL-1ÃƒÅ½Ã‚Â² using a Whole Blood Stimulation Assay

Tam Kan Stimülasyon Testi kullanarak Pro-inflamatuar sitokin IL-1β Doğru ve Basit Ölçme

Inflammatory processes resulting from the secretion of soluble mediators by immune cells, lead to various manifestations in skin, joints and other tissues ...

Sequencing of Bacterial Microflora in Peripheral Blood: our Experience with HIV-infected Patients

Periferik Kan Bakteriyel Mikroflorası Sıralama: HIV ile enfekte olan hastalar ile bizim Deneyimi

The healthy gastrointestinal tract is physiologically colonized by a large variety of commensal microbes that influence the development 
	of the humoral ...

Rapid Point-of-Care Assay of Enoxaparin Anticoagulant Efficacy in Whole Blood

Tüm Kan enoksaparin Antikoagülan Etkinliğinin Rapid Point-of-Care Assay

There is the need for a clinical assay to determine the extent to which a patient's blood is effectively anticoagulated by the ...

Real-time Cytotoxicity Assays in Human Whole Blood

İnsan Tüm Kan gerçek zamanlı sitotoksisite deneyleri

A live cell-based whole blood cytotoxicity assay (WCA) that allows access to temporal information of the overall cell cytotoxicity is developed with ...

Network Analysis of Foramen Ovale Electrode Recordings in Drug-resistant Temporal Lobe Epilepsy Patients

İlaca dirençli Temporal Lob Epilepsi Hastalarında Foramen Ovale Elektrot Kayıtları Ağ Analizi

Approximately 30% of epilepsy patients are refractory to antiepileptic drugs. In these cases, surgery is the only alternative to eliminate/control ...

Whole Genome Sequencing of Candida glabrata for Detection of Markers of Antifungal Drug Resistance

Whole Genome Sequencing of Candida glabrata for Detection of Markers of Antifungal Drug Resistance

Tüm genom sıralama Candida glabrata algılama, işaretçileri, Antifungal ilaç direnci için

Candida glabrata can rapidly acquire mutations that result in drug resistance, especially to azoles and echinocandins. Identification of genetic mutations ...

How to Administer Near-Infrared Spectroscopy in Critically ill Neonates, Infants, and Children

Kritik Hasta Neonatlarda, Bebeklerde ve Çocuklarda Yakın Kızılötesi Spektroskopi Nasıl Uygulanır?

Near infrared spectroscopy (NIRS) calculates regional tissue oxygenation (rSO2) using the different absorption spectra of oxygenated and deoxygenated ...

Infrared Thermography for the Detection of Changes in Brown Adipose Tissue Activity

Kahverengi yağ dokusu aktivitesindeki değişikliklerin tespiti için kızılötesi termografi

Measuring brown adipose tissue (BAT) activity by positron emission tomography computed tomography (PET-CT) via the accumulation of 18F-fluorodeoxyglucose ...