Name: an in vivo method to study mouse blood-testis barrier integrity
Uploaded: 2018-12-02T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about An In Vivo Method to Study Mouse Blood-Testis Barrier Integrity at JoVE.com

इस काम के राष्ट्रीय कुंजी अनुसंधान और विकास चीन के कार्यक्रम (2016YFA0500902), चीन के राष्ट्रीय प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन (३१४७१२२८, ३१७७१६५३), प्रतिष्ठित युवा विद्वानों (BK20150047), प्राकृतिक विज्ञान के लिए Jiangsu विज्ञान फाउंडेशन द्वारा समर्थित किया गया Jiangsu प्रांत की नींव (BK20140897, 14KJA180005) और Jiangsu प्रांत के अभिनव और उद्यमी कार्यक्रम K.Z. को

सभी प्रदर्शन पशु प्रयोगों नानजिंग चिकित्सा विश्वविद्यालय समिति द्वारा अनुमोदित किया गया है । पुरुष C57BL/6 चूहों नियंत्रित photoperiod शर्तों के तहत रखा गया था और भोजन और पानी के साथ आपूर्ति की गई ।
1. तै...

<ol>
	<li>Mruk, D. D., Cheng, C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sertoli-Sertoli+and+Sertoli-germ+cell+interactions+and+their+significance+in+germ+cell+movement+in+the+seminiferous+epithelium+during+spermatogenesis.">Sertoli-Sertoli and Sertoli-germ cell interactions and their significance in germ cell movement in the seminiferous epithelium during spermatogenesis.</a> Endocrine Reviews. 25 (5), 747-806 (2004).</li><li>Wen, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transport+of+germ+cells+across+the+seminiferous+epithelium+during+spermatogenesis-the+involvement+of+both+actin-+and+microtubule-based+cytoskeletons.">Transport of germ cells across the seminiferous epithelium during spermatogenesis-the involvement of both actin- and microtubule-based cytoskeletons.</a> Tissue Barriers. 4 (4), e1265042 (2016).</li><li>Wang, C. Q., Cheng, C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+seamless+trespass:+germ+cell+migration+across+the+seminiferous+epithelium+during+spermatogenesis.">A seamless trespass: germ cell migration across the seminiferous epithelium during spermatogenesis.</a> Journal of Cell Biology. 178 (4), 549-556 (2007).</li><li>Fijak, M., Meinhardt, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+testis+in+immune+privilege.">The testis in immune privilege.</a> Immunological Reviews. 213, 66-81 (2006).</li><li>O'Bryan, M. K., Hedger, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+Networks+in+the+Control+of+Spermatogenesis+Chronic+Inflammation+in+an+Immunologically+Privileged+Tissue?.">Inflammatory Networks in the Control of Spermatogenesis Chronic Inflammation in an Immunologically Privileged Tissue?.</a> Molecular Mechanisms In Spermatogenesis. 636, 92-114 (2008).</li><li>Li, N., Wang, T., Han, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+cellular+and+molecular+aspects+of+immune+privilege+in+the+testis.">Structural cellular and molecular aspects of immune privilege in the testis.</a> Frontiers in Immunology. 3, 152 (2012).</li><li>Mruk, D. D., Cheng, C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Mammalian+Blood-Testis+Barrier:+Its+Biology+and+Regulation.">The Mammalian Blood-Testis Barrier: Its Biology and Regulation.</a> Endocrine Review. 36 (5), 564-591 (2015).</li><li>Govero, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zika+virus+infection+damages+the+testes+in+mice.">Zika virus infection damages the testes in mice.</a> Nature. 540 (7633), 438-442 (2016).</li><li>Jenabian, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+tolerance+properties+of+the+testicular+tissue+as+a+viral+sanctuary+site+in+ART-treated+HIV-infected+adults.">Immune tolerance properties of the testicular tissue as a viral sanctuary site in ART-treated HIV-infected adults.</a> AIDS. 30 (18), 2777-2786 (2016).</li><li>Holembowski, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TAp73+is+essential+for+germ+cell+adhesion+and+maturation+in+testis.">TAp73 is essential for germ cell adhesion and maturation in testis.</a> Journal Of Cell Biology. 204 (7), 1173-1190 (2014).</li><li>Legendre, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+engineered+3D+blood-testis+barrier+model+for+the+assessment+of+reproductive+toxicity+potential.">An engineered 3D blood-testis barrier model for the assessment of reproductive toxicity potential.</a> Biomaterials. 31 (16), 4492-4505 (2010).</li><li>Setchell, B. P., Waites, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+the+permeability+of+the+testicular+capillaries+and+of+the+'blood-testis+barrier'+after+injection+of+cadmium+chloride+in+the+rat.">Changes in the permeability of the testicular capillaries and of the 'blood-testis barrier' after injection of cadmium chloride in the rat.</a> Journal of Endocrinology. 47 (1), 81-86 (1970).</li><li>Griswold, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+central+role+of+Sertoli+cells+in+spermatogenesis.">The central role of Sertoli cells in spermatogenesis.</a> Seminars in Cell &amp; Developmental Biology. 9 (4), 411-416 (1998).</li><li>Cheng, C. Y., Mruk, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+blood-testis+barrier+and+its+implications+for+male+contraception.">The blood-testis barrier and its implications for male contraception.</a> Pharmacological Reviews. 64 (1), 16-64 (2012).</li><li>Mruk, D. D., Cheng, C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+in+vitro+system+to+study+Sertoli+cell+blood-testis+barrier+dynamics.">An in vitro system to study Sertoli cell blood-testis barrier dynamics.</a> Methods Molecular Biology. 763, 237-252 (2011).</li><li>Orth, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proliferation+of+Sertoli+cells+in+fetal+and+postnatal+rats:+a+quantitative+autoradiographic+study.">Proliferation of Sertoli cells in fetal and postnatal rats: a quantitative autoradiographic study.</a> Anatomical Record. 203 (4), 485-492 (1982).</li><li>Lee, N. P. Y., Mruk, D., Lee, W. M., Cheng, C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Is+the+cadherin/catenin+complex+a+functional+unit+of+cell-cell+actin-based+adherens+junctions+in+the+rat+testis?.">Is the cadherin/catenin complex a functional unit of cell-cell actin-based adherens junctions in the rat testis?.</a> Biology of Reproduction. 68 (2), 489-508 (2003).</li><li>Bai, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Germline-Specific+Role+for+the+mTORC2+Component+Rictor+in+Maintaining+Spermatogonial+Differentiation+and+Intercellular+Adhesion+in+Mouse+Testis.">A Germline-Specific Role for the mTORC2 Component Rictor in Maintaining Spermatogonial Differentiation and Intercellular Adhesion in Mouse Testis.</a> Molecular Human Reproduction. 24 (5), 244-259 (2018).</li><li>Korhonen, H. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DICER+Regulates+the+Formation+and+Maintenance+of+Cell-Cell+Junctions+in+the+Mouse+Seminiferous+Epithelium.">DICER Regulates the Formation and Maintenance of Cell-Cell Junctions in the Mouse Seminiferous Epithelium.</a> Biology of Reproduction. 93 (6), 139 (2015).</li><li>Loir, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trout+Sertoli+cells+and+germ+cells+in+primary+culture:+I.+Morphological+and+ultrastructural+study.">Trout Sertoli cells and germ cells in primary culture: I. Morphological and ultrastructural study.</a> Gamete Research. 24 (2), 151-169 (1989).</li><li>Chen, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+the+Integrity+of+the+Blood-Testis+Barrier+(BTB):+An+In+Vivo+Assay.">Monitoring the Integrity of the Blood-Testis Barrier (BTB): An In Vivo Assay.</a> Methods in Molecular Biology. 1748, 245-252 (2018).</li></ol>

शुक्राणुजनन सेमिनीफेरस उपकला में जगह लेता है और एक उच्च आदेश दिया और गतिशील प्रक्रिया है कि रोगाणु कोशिकाओं और दैहिक कोशिकाओं द्वारा नियंत्रित किया जाताहै (जैसे , Sertoli कोशिकाओं)13. BTB संरच?...

स्तनधारी शुक्राणुजनन एक उच्च संरचित प्रक्रिया है कि spermatocytes के माध्यम से अगुणित शुक्राणु में बँटवारा, अर्धसूत्रीविभाजन, और spermiogenesis, जो दौरान नाटकीय के माध्यम से स्व-नवीकरण और भेदभाव spermatogonial शामिल माना जाता है जैव रासायनिक और रूपात्मक परिवर्तन होते हैं । विकासशील रोगाणु कोशिकाओं को उत्तरोत्तर लुमेन की ओर सेमिनीफेरस tubule के आधार से पहुंचाया जाता है । यह प्रक्रिया रोगाणु कोशिकाओं और Sertoli कोशिकाओं1,2के बीच सेल सेल संपर्कों द्वारा विनियमित है । सन्निकट Sertoli कक्ष BTB सेमिनीफेरस tubule के आधार के पास स्थित है जो प्रपत्र । BTB शारीरिक रूप से एक बेसल और एक adluminal डिब्बे में उपकला विभाजित । चरणों के दौरान आठवीं-ग्यारहवीं उपकला चक्र की, preleptotene/leptotene spermatocytes बेसल डिब्बों से BTB भर में विस्थापित, adluminal डिब्बों में प्रवेश3. इसलिए, BTB के समारोह अर्धसूत्रीविभाजन और spermiogenesis4,5,6के पूरा होने के लिए एक immunoprivileged microenvironment प्रदान करना है । अन्य रक्त ऊतक अवरोधों (जैसे, रक्त मस्तिष्क बाधा) है कि केवल तंग जंक्शनों (TJs) से बना रहे हैं के विपरीत, BTB चार विभिन्न जंक्शनों (TJs, ectoplasmic विशेषज्ञता, अंतर जंक्शनों, और मध्यवर्ती रेशा आधारित द्वारा बनाई गई है desmosomes) Sertoli कोशिकाओं के बीच1,7.
कई अध्ययनों का इस्तेमाल किया है आनुवंशिक रूप से संशोधित चूहों, वायरस के संक्रमण, और पर्यावरण विषालु BTB अखंडता7,8,9के तंत्र की जांच करने के लिए । BTB व्यवधान बिगड़ा शुक्राणुजनन और उपप्रजनन या बांझपन लाती है । BTB गठन और अखंडता Sertoli8कोशिकाओं के बीच संपर्कों से प्रभावित होने की पुष्टि की गई है के बाद से, एक इन विट्रो मॉडल अलग Sertoli कोशिकाओं की प्राथमिक संस्कृति पर आधारित BTB अध्ययन के लिए इस्तेमाल किया गया है. हालांकि, इस मॉडल सही BTB गतिशीलता में vivoकी नकल नहीं कर सकता । इसके अलावा, कोई ऐसी सह Sertoli कोशिकाओं के साथ रोगाणु कोशिकाओं की संस्कृति के रूप में स्थापित किया गया है BTB10,11के सभी प्रासंगिक संरचनात्मक और कार्यात्मक घटकों को प्रतिबिंबित करने में सक्षम ।
सामांय में, vivo BTB अखंडता परख में आमतौर पर ऐसे ईज़ी लिंक Sulfo-एन एच एस-नियंत्रण-बायोटिन और FITC-संयुग्मित inulin (inulin-FITC) के रूप में छोटे अणुओं, पर आधारित हैं । आम तौर पर, बेसल डिब्बे से बायोटिन या inulin-FITC का प्रसार BTB संरचना द्वारा अवरुद्ध है । इसलिए, हम नियंत्रण समूहों के साथ तुलना में BTB क्षति की सीमा का आकलन करने के लिए इस विधि का उपयोग करने में सक्षम हैं । जबकि BTB कैडमियम क्लोराइड (CdCl2)12के साथ उपचार के रूप में कुछ प्रकार की उत्तेजनाओं के साथ समझौता किया जा सकता है, BTB छोटे अणुओं, जो अंततः संकेतक के रूप में adluminal डिब्बे में प्रवेश करने के लिए सुलभ हो जाता है ।
vivo BTB अखंडता परख में एक जल्दी jugular नस में बायोटिन या inulin-FITC इंजेक्शन शामिल है, जो शल्य चिकित्सा शामिल है, और आक्रामक, जटिल है, और समय लेने वाली । इसके अलावा, रिपोर्टर पदार्थ परिसंचरण के माध्यम से पूरे शरीर के माध्यम से फैलाना, सेमिनीफेरस नलिकाओं में बायोटिन या inulin-FITC की स्थानीय एकाग्रता सीमित है । इसके अलावा, प्रणालीगत जोखिम प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं को प्रेरित कर सकते हैं । यहां, हम एक सरल और vivo BTB अखंडता परख एक interstitium के वृषण में inulin-FITC के एक छोटे aliquot के प्रत्यक्ष इंजेक्शन को सक्षम करने में प्रभावी वर्तमान । फ्लोरोसेंट लेबलिंग विधि का प्रयोग, धुंधला प्रक्रिया सुविधाजनक है, के रूप में माध्यमिक एंटीबॉडी की आवश्यकता नहीं कर रहे हैं । यहां, फ्लोरोसेंट डाई वृषण में प्रवेश करने की प्रक्रिया visualized है ।

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:803px;" width="802">
	
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:261px;">Capillary puller&#160;</td>
			<td style="width:231px;">SUTTER INSTRUMENT (USA)</td>
			<td style="width:139px;">P-97</td>
			<td style="width:172px;"></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">10x PBS</td>
			<td style="width:231px;">Hyclone (USA)</td>
			<td style="width:139px;">SH30258.01</td>
			<td>dilution to 1&#215; in ddH2O</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">4&#8217;,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI)</td>
			<td style="width:231px;">Sigma (USA)</td>
			<td style="width:139px;">F6057</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Adhesion microscope slides</td>
			<td style="width:231px;">CITOGLAS (China)</td>
			<td style="width:139px;">80312-3161</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cadmium chloride</td>
			<td style="width:231px;">Sigma (USA)</td>
			<td style="width:139px;">655198-5G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Confocal microscope</td>
			<td style="width:231px;">Zeiss (Germany)</td>
			<td style="width:139px;">LSM700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dust-free paper</td>
			<td style="width:231px;">Kimberly-Clark (USA)</td>
			<td style="width:139px;">34120</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Inulin-FITC</td>
			<td style="width:231px;">Sigma (USA)</td>
			<td style="width:139px;">F3272</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:261px;">Microinjection capillaries</td>
			<td style="width:231px;">Zhengtianyi (China)</td>
			<td style="width:139px;">BJ-40</td>
			<td>1.0 mm &#215; 0.8 mm&#160; &#215; 100 mm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Micropipette beveler</td>
			<td style="width:231px;">NARISHIGE (JAPAN)</td>
			<td style="width:139px;">EG-400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">OCT</td>
			<td style="width:231px;">SAKURA (JAPAN)</td>
			<td style="width:139px;">4583</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Paraformaldehyde</td>
			<td style="width:231px;">Sigma (USA)</td>
			<td style="width:139px;">P6148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pentobarbital sodium</td>
			<td style="width:231px;">Merck (Germany)</td>
			<td style="width:139px;">P11011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Shaver&#160;</td>
			<td style="width:231px;">Yashen (China)</td>
			<td style="width:139px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:261px;">Stereo microscope</td>
			<td style="width:231px;">Nikon (JAPAN)</td>
			<td style="width:139px;">SMZ1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sucrose&#160;</td>
			<td style="width:231px;">Sangon Biotech (China)</td>
			<td style="width:139px;">A610498</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:261px;">Surgical instruments</td>
			<td style="width:231px;">Stronger (China)</td>
			<td style="width:139px;"></td>
			<td>scissors, forceps, needle holder</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Syringe</td>
			<td style="width:231px;">KDL (China)</td>
			<td style="width:139px;">20163150518</td>
			<td>0.45 mm &#215; 0.16 mm RW LB</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">thermostatic heater</td>
			<td style="width:231px;">KELL (Nanjing, China)</td>
			<td style="width:139px;">KEL-2010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td >10x TBS, pH 7.6</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">0.2 M Tris</td>
			<td style="width:231px;">Sangon Biotech (China)</td>
			<td style="width:139px;">A600194</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:261px;">1.37 M Nacl</td>
			<td style="width:231px;">Sangon Biotech (China)</td>
			<td style="width:139px;">A610476</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an in vivo method to study mouse blood-testis barrier integrity

शुक्राणुजनन नलिकाओं के सेमिनीफेरस वृषण में परिपक्व शुक्राणु में spermatogonia का विकास होता है. इस प्रक्रिया Sertoli सेल जंक्शनों द्वारा रक्त-वृषण बैरियर (BTB) है, जो स्तनधारी शरीर में सबसे तंग ऊतक बाधा है और दो डिब्बों, एक बेसल और एक सेमिनीफेरस में adluminal उपकला पृथक्करण द्वारा समर्थित है । BTB अर्धसूत्रीविभाजन में रोगाणु कोशिकाओं के लिए एक अद्वितीय microenvironment बनाता है I/II और spermatids के माध्यम से शुक्राणु में postmeiotic spermiogenesis के विकास के लिए । यहां, हम एक विश्वसनीय परख का वर्णन vivo मेंमाउस वृषण के BTB अखंडता पर नजर रखने के लिए । एक बरकरार BTB ब्लॉक FITC के प्रसार-संयुग्मित inulin बेसल से शिखर सेमिनीफेरस के नलिकाओं डिब्बे के लिए । इस तकनीक जीन उंमीदवारों, वायरस, या पर्यावरणीय विषालु है कि BTB समारोह या अखंडता को प्रभावित कर सकते है अध्ययन के लिए उपयुक्त है, एक आसान प्रक्रिया के साथ और वैकल्पिक तरीकों की तुलना में शल्य चिकित्सा कौशल की एक ंयूनतम आवश्यकता ।

प्रायोगिक सेट-अप BTB अखंडता परख प्रदर्शन के लिए चित्रा 1में दिखाया गया है । खींचो और एक केशिका खींचने और micropipette बेवली, क्रमशः (चित्रा 1a और 1C) के साथ microinjection केशिकाओं पैन?...

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An In Vivo Method to Study Mouse Blood-Testis Barrier Integrity

यहां, हम परीक्षण में inulin-FITC इंजेक्शन द्वारा रक्त वृषण बाधा अखंडता का आकलन करने के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं । इस vivo विधि में कुशल रक्त-वृषण बाधा अखंडता है कि आनुवंशिक और पर्यावरणीय तत्वों से समझौता किया जा सकता है अध्ययन करने के लिए है ।

Vivo में एक विधि माउस रक्त-वृषण बाधा अखंडता का अध्ययन करने के लिए

Spermatogenesis is the development of spermatogonia into mature spermatozoa in the seminiferous tubules of the testis. This process is supported by ...

इस विधि जीन उम्मीदवारों, वायरस, या पर्यावरण विषाक्त पदार्थों के बारे में जीव विज्ञान क्षेत्रों के रक्त-टेस्टिस बाधा में महत्वपूर्ण सवालों के जवाब देने में मदद कर सकते हैं जो रक्त-टेस्टिस बाधा समारोह या अखंडता को प्रभावित कर सकते हैं। सर्जरी से तीन दिन पहले, इंट्रापेरिटोनियल इंजेक्शन के माध्यम से पांच मिलीग्राम प्रति किलोग्राम शरीर के वजन कैडमियम क्लोराइड के साथ रोजाना कम से ३ ८ सप्ताह पुराने C57Black/6 पुरुष चूहों का इलाज करें । सर्जरी के दिन, 75% इथेनॉल-स्टरलाइज्ड सर्जिकल क्षेत्र पर एक साफ ऊतक रखें और थर्मोस्टैटिक हीटर को 37 डिग्री सेल्सियस तक सेट करें।ऊतक पर एक एनेस्थेटाइज्ड माउस रखें, फिर पैर के अंगुली चुटकी के लिए प्रतिक्रिया की कमी की पुष्टि करें। एक शेवर के साथ पेट के बालों को दाढ़ी, और 75% इथेनॉल के साथ उजागर त्वचा कीटाणुरहित। पेट की दीवार को बेनकाब करने के लिए प्रीपुटियल ग्रंथियों के ऊपर एक सेंटीमीटर त्वचा चीरा बनाएं, और पेरिटोनम में 0.5 सेंटीमीटर चीरा बनाने के लिए त्वचा को उठाने के लिए छोटे संदंश का उपयोग करें।एपिडिडिमिस और टेस्टिस के आसपास वसा पैड की खोज करने के लिए संदंश का उपयोग करें, एक संलग्न टेस्टिस को बेनकाब करने के लिए वसा पैड को ध्यान से खींचें। वसा पैड और टेस्टिस के नीचे कागज का एक नौ सेंटीमीटर टुकड़ा रखें, और ताजा तैयार इनुलिन-फिटसी समाधान के साथ एक माइक्रोइंजेक्शन पिपेट लोड करें। पिपेट को माइक्रोमैनीपुलेटर यूनिट से कनेक्ट करें, और ट्यूनिका अल्बुगिनिया के तहत माइक्रोइंजेक्शन पिपेट टिप को धीरे से डालने के लिए विच्छेदन माइक्रोस्कोप का उपयोग करें।इनुलिन-फिटसी के 20 माइक्रोलीटर को टेस्टिस के इंटरस्टिटियम में वितरित करने के लिए ऑपरेटिंग लीवर को धीरे-धीरे घुमाएं। यदि डिलीवरी सफल होती है, तो टेस्टिस एक चमकीले हरे-पीले रंग को बदल देगा। तुरंत पेट की गुहा को टेस्टिस वापस करें, और पीबीएस के 20 माइक्रोलीटर के साथ कॉन्ट्रालेट्रल टेस्टिस इंजेक्ट करें, फिर त्वचा को सर्जिकल सीवन के साथ बंद करें।और माउस को थर्मोस्टैटिक हीटर के हीट पैड पर रखें। इंजेक्शन के 40 मिनट बाद, प्रत्येक माउस से वृषण एकत्र करने के लिए तेज कैंची का उपयोग करें, और ऊतकों को बर्फ-ठंडे पीबीएस के एक मिलीलीटर में धोएं। इसके बाद, 12 से 24 घंटे के लिए चार डिग्री सेल्सियस पर 4% पैराफॉर्मलडिहाइड में टेस्ट को ठीक करें और इसके बाद प्रति वॉश 1% पीबीएस के १.५ मिलीलीटर में तीन वॉश करें ।रात भर 30% सुक्रोज निर्जलीकरण के बाद, नमूनों को व्यक्तिगत एम्बेडिंग फ्रेम में स्थानांतरित करें, और ऊतकों को इष्टतम काटने वाले तापमान यौगिक के साथ कवर करें। एक क्रायोस्टेट का तापमान नकारात्मक 20 डिग्री सेल्सियस तक सेट करें और अक्टूबर के जम जाने तक फ्रेम को क्रायोस्टेट में लगभग 10 मिनट तक रखें। फिर, प्रत्येक एम्बेडिंग फ्रेम को ताजा अक्टूबर के साथ तब तक भरें जब तक कि पूरे टेस्टिस प्रत्येक मोल्ड में कवर न हो जाएं।जब अक्टूबर की दूसरी परत जम गई है, तो प्रत्येक टेस्टिस के पांच माइक्रोमीटर-मोटी क्रॉस सेक्शन प्राप्त करें, ग्लास माइक्रोस्कोप स्लाइड पर ऊतक वर्गों को कैप्चर करें क्योंकि वे प्राप्त किए जाते हैं। नमूनों की छवि के लिए, पहले कमरे के तापमान पर एक आर्द्र बॉक्स में स्लाइड गर्म । 10 मिनट के बाद, ताजा ट्राइस-बफर नमकीन प्रति वॉश में तीन बार स्लाइड धोएं और प्रकाश से संरक्षित पांच मिनट के लिए वर्गों को सूखने दें।किसी भी अवशिष्ट खारा को हटाने के लिए धूल मुक्त कागज का उपयोग करें, और DAPI-पूरक बढ़ते माध्यम के साथ नमूनों माउंट । फिर, प्रत्येक नमूने को एक उल्टे कवर स्लिप के साथ कवर करें, और एक कॉन्फोकल माइक्रोस्कोप के 20X उद्देश्य के तहत नमूनों की छवि करें। कैडमियम क्लोराइड उपचार के तीन दिन रक्त-टेस्टिस बाधा को नुकसान पहुंचाता है जिससे बेसल डिब्बे से सेमिनीफेरस एपिथेलियम के एपिकल डिब्बे तक इनुलिन-फिटसी प्रसार की अनुमति मिलती है।इसके विपरीत, यह प्रसार नियंत्रण पीबीएस-उपचारित टेस्ट में अवरुद्ध है। रक्त-टेस्टिस बैरियर क्षति की सीमा का निर्धारण एक ही अर्धनिफेरस ट्यूबल के त्रिज्या में इनुलिन-फिटसी प्रसार की दूरी के अनुपात की गणना करके किया जाता है। इसके अलावा, विषम रिक्टर में बरकरार रक्त-टेस्टिस बैरियर नॉकआउट चूहों ने अपिकल डिब्बे में बैरियर के पार इनुलिन प्रसार को ब्लॉक कर दिया, जबकि सशर्त रिक्टर नॉकआउट चूहों के पास एक समझौता रक्त-टेस्टिस बाधा होती है जो इनुलिन प्रसार की अनुमति देती है।इस प्रक्रिया का प्रयास करते समय, प्रयोग के दिन तैयार इनुलिन-फिटसी को वितरित करना और ऊतक को प्रकाश से संरक्षित रखने के लिए याद रखना महत्वपूर्ण है क्योंकि फिटसी एक प्रकाश-संवेदनशील अणु है। इस तकनीक के निहितार्थ बिगड़ा शुक्राणुओं की चिकित्सा के लिए विस्तार क्योंकि रक्त-टेस्टिस बाधा का कार्य शुक्राणुओं में मेयोसिस के पूरा होने के लिए एक प्रतिरक्षा-विशेषाधिकार प्राप्त माइक्रोएनवायरमेंट प्रदान करना है। इसके विकास के बाद, यह तकनीक प्रजनन चिकित्सा के क्षेत्र में शोधकर्ताओं को चूहों में उपfertility और बांझपन का पता लगाने के लिए एक रास्ता प्रदान करती है।यह न भूलें कि पैराफॉर्मेल्डिहाइड के साथ काम करना बेहद खतरनाक हो सकता है और इस प्रक्रिया को करते समय कपड़े और फेस मास्क पहनने जैसी सावधानियां हमेशा ली जानी चाहिए।

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

An In Vivo Method to Study Mouse Blood-Testis Barrier Integrity

Analysis of Zebrafish Larvae Skeletal Muscle Integrity with Evans Blue Dye

इवांस नीले रंग की डाई के साथ zebrafish लार्वा कंकाल की मांसपेशी वफ़ादारी का विश्लेषण

The zebrafish model is an emerging system for the study of neuromuscular disorders.  In the study of neuromuscular diseases, the integrity of the muscle ...

Using Ex Vivo Upright Droplet Cultures of Whole Fetal Organs to Study Developmental Processes during Mouse Organogenesis

Using Ex Vivo Upright Droplet Cultures of Whole Fetal Organs to Study Developmental Processes during Mouse Organogenesis

का प्रयोग<em&gt; पूर्व Vivo</em&gt; पूरे भ्रूण अंगों की ईमानदार बूंद संस्कृतियों माउस जीवोत्पत्ति के दौरान विकास की प्रक्रिया का अध्ययन करने के लिए

Investigating organogenesis in utero is a technically challenging process in placental mammals due to inaccessibility of reagents to embryos that develop ...

Stem cell-like Xenopus Embryonic Explants to Study Early Neural Developmental Features In Vitro and In Vivo

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स्टेम सेल की तरह<em&gt; Xenopus</em&gt; भ्रूण Explants अर्ली तंत्रिका विकास संबंधी सुविधाओं का अध्ययन करने के लिए<em&gt; इन विट्रो</em&gt; और<em&gt; Vivo</em

Understanding the genetic programs underlying neural development is an important goal of developmental and stem cell biology. In the amphibian blastula, ...

Quantitative Analysis of Protein Expression to Study Lineage Specification in Mouse Preimplantation Embryos

माउस Preimplantation भ्रूण में वंश विशिष्टता का अध्ययन करने के लिए प्रोटीन अभिव्यक्ति की मात्रात्मक विश्लेषण

This protocol presents a method to perform quantitative, single-cell in situ analyses of protein expression to study lineage specification in mouse ...

An Efficient Method to Obtain Dedifferentiated Fat Cells

एक कारगर तरीका dedifferentiated वसा कोशिकाओं को प्राप्त करने के लिए

Tissue engineering and cell therapy hold great promise clinically. In this regard, multipotent cells, such as mesenchymal stem cells (MSCs), may be used ...

In Vitro and In Vivo Models to Study Corneal Endothelial-mesenchymal Transition

In Vitro and In Vivo Models to Study Corneal Endothelial-mesenchymal Transition

इन विट्रो में और vivo मॉडल में अध्ययन करने के कॉर्नियल Endothelial-mesenchymal संक्रमण

Corneal endothelial cells (CECs) play a crucial role in maintaining corneal clarity through active pumping. A reduced CEC count may lead to corneal edema ...

An Ex Vivo Method for Time-Lapse Imaging of Cultured Rat Mesenteric Microvascular Networks

An Ex Vivo Method for Time-Lapse Imaging of Cultured Rat Mesenteric Microvascular Networks

एक<em&gt; पूर्व विवो</em&gt; विधि संवर्धित चूहे mesenteric microvascular नेटवर्क के समय चूक इमेजिंग के लिए

Angiogenesis, defined as the growth of new blood vessels from pre-existing vessels, involves endothelial cells, pericytes, smooth muscle cells, immune ...

Establishment of Larval Zebrafish as an Animal Model to Investigate Trypanosoma cruzi Motility In Vivo

Establishment of Larval Zebrafish as an Animal Model to Investigate Trypanosoma cruzi Motility In Vivo

वीवो में Trypanosoma cruzi गतिशीलता की जांच के लिए एक पशु मॉडल के रूप में लार्वा Zebrafish की स्थापना

Chagas disease is a parasitic infection caused by Trypanosoma cruzi, whose motility is not only important for localization, but also for cellular binding ...

Organotypic Culture Method to Study the Development Of Embryonic Chicken Tissues

Organotypic संस्कृति विधि भ्रूण चिकन ऊतकों के विकास का अध्ययन करने के लिए

The embryonic chicken is commonly used as a reliable model organism for vertebrate development. Its accessibility and short incubation period makes it ...

A Hyperandrogenic Mouse Model to Study Polycystic Ovary Syndrome

पॉलीसिस्टिक अंडाशय सिंड्रोम का अध्ययन करने के लिए एक Hyperandrogenic माउस मॉडल

Hyperandrogenemia plays a critical role in reproductive and metabolic function in females and is the hallmark of polycystic ovary syndrome. Developing a ...