Name: simultaneous cryosectioning of multiple rodent brains
Uploaded: 2018-09-18T15:00:00
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PCH 임무 지원 자금 지원이 원고에 보고 된 연구. 저자는 다니엘 그리피스 그림에 사용 되는 이미지를 복용 하는 것을 감사 하 고 싶습니다.

Megabrain 기술은 남성 성인 C57Bl6 마우스5, 청소년 Sprague-Dawley 쥐, 및 transcardially 다음 버퍼링 하는 인산 염 (PBS) x 1 끼얹는다 했다 성인 Sprague-Dawley 쥐에서 hemisected 및 전체 두뇌를 사용 하 여 최적화 된 4% paraformaldehyde6으로. 유사한 결과 쥐와 쥐, 남녀 모두에서 그리고 다른 연령대의 다른 긴장에 수행할 수 있습니다. 이 원고에 대 한 데이터를 생성 하는 연구 청소년 ...

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	<li>Lyck, L., Dalmau, I., Chemnitz, J., Finsen, B., Schroder, H. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunohistochemical+markers+for+quantitative+studies+of+neurons+and+glia+in+human+neocortex.">Immunohistochemical markers for quantitative studies of neurons and glia in human neocortex.</a> Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 56 (3), 201-221 (2008).</li><li>Fritz, P., Wu, X., Tuczek, H., Multhaupt, H., Schwarzmann, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitation+in+immunohistochemistry.+A+research+method+or+a+diagnostic+tool+in+surgical+pathology?.">Quantitation in immunohistochemistry. A research method or a diagnostic tool in surgical pathology?.</a> Pathologica. 87 (3), 300-309 (1995).</li><li>Walker, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+immunohistochemistry--issues+concerning+methods,+utility+and+semiquantitative+assessment+I.">Quantification of immunohistochemistry--issues concerning methods, utility and semiquantitative assessment I.</a> Histopathology. 49 (4), 406-410 (2006).</li><li>Evilsizor, M. N., Ray-Jones, H. F., Lifshitz, J., Ziebell, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primer+for+immunohistochemistry+on+cryosectioned+rat+brain+tissue:+example+staining+for+microglia+and+neurons.">Primer for immunohistochemistry on cryosectioned rat brain tissue: example staining for microglia and neurons.</a> Journal of Visualized Experiments. (99), (2015).</li><li>Harrison, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resolvins+AT-D1+and+E1+differentially+impact+functional+outcome,+post-traumatic+sleep,+and+microglial+activation+following+diffuse+brain+injury+in+the+mouse.">Resolvins AT-D1 and E1 differentially impact functional outcome, post-traumatic sleep, and microglial activation following diffuse brain injury in the mouse.</a> Brain, Behavior, and Immunity. 47, 131-140 (2015).</li><li>Gage, G. J., Kipke, D. R., Shain, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole+animal+perfusion+fixation+for+rodents.">Whole animal perfusion fixation for rodents.</a> Journal of Visualized Experiments. (65), (2012).</li><li>Kilkenny, C., Browne, W. J., Cuthill, I. C., Emerson, M., Altman, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improving+bioscience+research+reporting:+the+ARRIVE+guidelines+for+reporting+animal+research.">Improving bioscience research reporting: the ARRIVE guidelines for reporting animal research.</a> PLoS Biology. 8 (6), e1000412 (2010).</li><li>Kennedy, H. S., Puth, F., Van Hoy, M., Le Pichon, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+removing+the+brain+and+spinal+cord+as+one+unit+from+adult+mice+and+rats.">A method for removing the brain and spinal cord as one unit from adult mice and rats.</a> Lab Animal (NY). 40 (2), 53-57 (2011).</li><li>Fischer, A. H., Jacobson, K. A., Rose, J., Zeller, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hematoxylin+and+eosin+staining+of+tissue+and+cell+sections.">Hematoxylin and eosin staining of tissue and cell sections.</a> CSH Protocols. 2008, (2008).</li><li>Ji, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Impact+of+Repeated+Freeze-Thaw+Cycles+on+the+Quality+of+Biomolecules+in+Four+Different+Tissues.">The Impact of Repeated Freeze-Thaw Cycles on the Quality of Biomolecules in Four Different Tissues.</a> Biopreservation and Biobanking. 15 (5), 475-483 (2017).</li><li>Pegg, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+history+and+principles+of+cryopreservation.">The history and principles of cryopreservation.</a> Seminars in Reproductive Medicine. 20 (1), 5-13 (2002).</li></ol>

그것은 고려 되어야 한다이 절차 동안에 그는 Megabrain와 그 주변 온도 지속적으로 모니터링 해야 녹고 고 다시 조직의 동결을 방지 하기 위해. 뇌만 제거할 수 있습니다-20 ° C 냉동 고에서 최대를 3 번으로 때마다 그것을 건드리지 cryostat 따뜻한 변동 온도, 조직에에서 녹아서 왼쪽과 refreezes, 텍스처 및 비정상적인 조직의 무결성10같은 젤리를 일으키는. 따라서, 그것은 Megabrain를 모...

여기, 우리 소설 방법, 우리는 전화 Megabrain, cryosection 여러 설치류 다운스트림 immunohistochemical 절차에 대 한 동시에 두뇌 개발에 대 한 프로토콜을 제시. Megabrain는 여러 동물에서 조직을 포함 하는 단일 슬라이드의 생산 수 있습니다. 이 기술은 9 성인 쥐 반구, 또는 5 성인 전체 두뇌에서 코로나 섹션을 동시에 최적화 되었습니다. 따라서, 기술은 가장 큰 immunohistochemical 연구 또는 동물의 대규모 코 호트에서 슬라이드 탑재 뇌 조직에서 수행 하는 다른 분석에 적용 됩니다.
Immunohistochemistry 이해 하 고 그들의 표현과 특정 조직1,2,3세포 변화 특성 관심사의 단백질에 대하여 지시 하는 특정 항 체의 사용을 포함. Immunohistochemistry의 사용은 뇌4의 세포 및 분자 이해에 은닉, 다른 과학 분야 중 신경 과학 연구에서 널리 퍼지다. 많은 동물 및 뇌 섹션을 포함 하는 대규모 연구 자원 및 시간 집중 될 수 있습니다. 따라서, 개발 된 Megabrain의 다각적인 근거 있다: 시간을 줄이기 위해 cryosectioning, 장착, 그리고 결과적으로 더 적은 시 약을 사용 하는 동안 조직, 얼룩을 보냈다. 또한, 프로세스를 간소화 하 고 얼룩 같은 여러 두뇌의 수 라운드 배치, immunohistochemistry3의 한계를 얼룩 사이 가변성의 일부를 완화 하는 데 도움이. 또한,는 Megabrain 단면 단면 개별 냉동된 설치류 두뇌에 시간 절약 대안 이다 하며 동물이 나 심지어 치료 그룹 사이 조직의 빠른 비교를 위해 현미경 검사 법 기술로

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Andwin scientific tissue-tek CRYO-OCT compound (case of 12)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-373-65</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermo Scientific Shandon Peel-A-Way Disposable Embedding Molds</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>18-41</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand High Precision Straight Broad Strong Point Tweezers/Forceps</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-000-128</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand 20mL HDPE Scintillation Vials with Polypropylene Cap</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>03-337-23</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose, poly bottle 2.5 kg</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S2-212</td>
			<td>Both 15% and 30% sucrose concentrations need to be made up.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-Methylbutane (Certified), Fisher Chemical</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>O3551-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PYREX Tall-Form Beakers</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>02-546E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand General Purpose Liquid-in-Glass Partial Immersion Thermometers (-50&#176; to +50&#176;C)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-201-642</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand&#160;Scoopula Spatula</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-357Q</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>STANLEY Razor Blade</td>
			<td>Grainger</td>
			<td>4A807</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Edge-Rite Microtome blades</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-070-60</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope slides (1&#34; frost) - white</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22-034-979</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gibco&#160;PBS (Phosphate Buffered Saline) 10X, pH 7.2</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>70-013-032</td>
			<td>Dilute to 1X&#160; before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 piece fine paint brushes</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B079J12ZRV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PAP pen</td>
			<td>abcam</td>
			<td>ab2601</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chuck Shown in Figure 4 was custom made by a lab technician, however similar sizes are available to order from other companies commercially.</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>EMS065</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

simultaneous cryosectioning of multiple rodent brains

조직학 및 immunohistochemistry 현미경 해부학 시각화 및 지역화 생물 조직 내의 단백질 분석의 일상적인 방법이 있습니다. 신경 과학, 뿐만 아니라 다른 과학 분야의 과다,이 기술은 사용 됩니다. Immunohistochemistry는 슬라이드 마운트 조직 또는 부동성 섹션에서 수행할 수 있습니다. 샘플 슬라이드 마운트 준비 시간 집중적인 과정 이다. 다음 프로토콜 기법, Megabrain에 대 한 단일 냉동된 블록으로 여러 두뇌를 결합 하 여 최대 90%까지에 의해 cryosection 및 마운트 뇌 조직에 걸린 시간 감소. 또한,이 기술은 큰 조직화 학적인 학문에서 라운드를 얼룩 사이 본 다양성 감소. 현재 기술에 맞게 최적화 된 설치류 뇌 조직을 사용 하 여 다운스트림 immunohistochemical 분석; 그러나, cryosectioning 사용 하는 다른 과학 분야에 적용할 수 있습니다.

이 절차에 긍정적인 최종 결과 거품 또는 동결 된 방향에서 눈물 없이 슬라이드에 있는 조직. 조직 섹션 OCT에서 뇌와 그림 1에서 시연으로 좋은 표기법의 좋은 배치로 인 떨어져 고 쉽게 식별 분포 균등 하 게 됩니다. 뇌 조직의 비슷한 나이의 동물에서 수집 된 고 조직 OCT에 맞춘 제대로 된 슬라이드에서 수집 하는 섹션 동물 사이 뇌 영역의 비교 수 ?...

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Simultaneous Cryosectioning of Multiple Rodent Brains

여기, 선물이 동결 하 고 처리 한 두뇌를 절약해 주는 대신 여러 동물에서 뇌 조직 섹션 프로토콜. 이 immunohistochemistry 동안 얼룩 가변성을 감소 시키고 감소 시간 cryosectioning 및 이미징.

여러 설치류 두뇌의 동시 Cryosectioning

Histology and immunohistochemistry are routine methods of analysis to visualize microscopic anatomy and localize proteins within biological tissue. In ...

이 시간 절약 방법은 해부학과 국소 단백질 및 조직의 시각화를 최적화하기 위해 신경 과학 연구에서 면역 조직 화학 적 절차의 라운드 사이의 가변성을 감소시킵니다. 이 기술의 주요 장점은 여러 뇌를 하나의 냉동 블록으로 결합하여 저온 절에 걸리는 시간을 줄이고 뇌 조직을 탑재한다는 것입니다. 이 기술은 설치류 두뇌의 관상 동맥 단면도에 최적화되어 있는 동안, 그것은 좌활또는 횡방향 단면도 또는 근육 또는 간과 같은 조직의 다른 모형에 적응할 수 있습니다.성공적인 환갑 관류에 따라 PBS에서 25 밀리리터 바이알에서 동물의 뇌를 24 시간 동안 수정하십시오. 그 후, 무딘 기울어진 집게를 사용하여 파라포름알데히드에서 뇌를 제거하십시오. TBS에서 약 20 밀리리터30%의 자당 용액으로 뇌를 유리병으로 옮는다.그들은 유리병의 바닥에 가라 앉을 때까지 뇌와 해결책을 유지합니다. 다음으로, 얼음 양동이에 드라이 아이스 침대에 500 밀리리터 유리 비커를 놓습니다. 그런 다음 300~400밀리리터의 이스펜타네를 비커에 붓습니다.음수 45도에서 음수 50°C 사이의 isopentane을 유지합니다. 벤치 탑에, 최적의 절삭 온도 또는 OCT 화합물로 전체 약 절반 으로 전체 일회용 포함 금형을 채웁니다. 바늘을 사용하여 금형에서 기포를 제거하십시오.무딘 기울어진 집게를 사용하여 자당 용액에서 첫 번째 뇌를 제거하십시오. 그런 다음 반구를 분리하기 전에 새 면도날을 사용하여 소뇌 및 후각 전구를 제거합니다. 다음으로, 뇌에게 숫자 명명 시스템을 제공합니다.무딘 집게를 사용하여, 위치 2에 배치 할 뇌를 데리러, 먼저 위쪽으로 향하고 절단 할 측면과 방향을 지정합니다. 10 월에 뇌를 낮추고 독립적으로 서 때까지 위치를 조정 하는 핀셋을 사용 하 여. 이 기술의 주요 수정은 위치 1의 빈 공간입니다.이 공간은 메가 브레인 방향을 쉽게 식별할 수 있도록 지정되어 각 뇌와 관련된 동물을 식별합니다. 모든 뇌가 금형에 배치 된 후, 뇌의 상단을 커버하기에 충분한 OCT를 추가 한 다음 바늘을 사용하여 기포를 제거하십시오. 포셉이 10월에 부분적으로 침수되지 않도록 포셉으로 금형 의 모서리를 잡으십시오.그런 다음 금형의 하단 3분의 1이 침수되도록 금형을 isopentane으로 낮춥시다. 30초 후에 전체 금형을 isopentane으로 낮추고 집게에서 놓습니다. 3분 후, 집게를 사용하여 이스펜타네에서 금형을 제거합니다.즉시 금형과 그 내용물들을 알루미늄 호일로 감싸서 적절하게 라벨을 붙입니다. 메가브레인을 최소 24시간 동안 음수 섭씨 20도의 냉동고로 옮춥니까. 첫째, 저온 캐비닛의 온도를 섭씨 19도로 설정합니다.냉동고에서 메가 브레인을 제거하고 냉동고에 놓습니다. 그런 다음 척과 얇은 기울어진 페인트 브러시 두 개를 저온스트에 놓습니다. 그 후 슬라이드에 메가브레인 식별 번호와 슬라이드 번호로 레이블을 지정하고 슬라이드 워머에 슬라이드를 배치합니다.다음으로, 거대 두뇌를 풀고 면도날을 사용하여 금형의 모서리를 잘라냅니다. 10월의 얇은 층을 척에 분배합니다. 그런 다음 빠르게 척에 메가 브레인을 배치합니다.OCT가 완전히 동결 된 후, 메가 브레인의 측면에 10 월의 2 밀리미터 층을 적용하고 척에 측면을 실행 할 수 있습니다. 면도날을 사용하여 척의 측면과 바닥에서 초과 10월을 제거합니다. 첫째, 척이 크머리헤드에 메가브레인장착을 장착한 척을 저온스트의 척 머리에 놓습니다.그런 다음 냉동고스트를 원하는 두께로 설정합니다. 조직 수집을 위해 원하는 뇌 영역에 도달하기 위해 필요에 따라 OCT 및 조직을 다듬습니다. 그런 다음 무대에 놓을 때까지 롤 방지 판을 낮추고 극저온 핸들을 돌려 단일 섹션을 수행합니다.티슈 섹션이 닿지 않도록 주의하면서 롤 방지 판을 천천히 들어 올립니다. 페인트 브러시를 부드럽게 사용하여 평평하게 놓일 때까지 티슈 섹션을 풀수 있습니다. 필요한 경우 페인트 브러시를 사용하여 OCT 플랫을 유지하여 롤링을 방지합니다.그런 다음 슬라이드 워머에서 슬라이드를 제거하고 슬라이드 레이블 측면을 메가브레인 섹션 위로 마우스를 가져가서 슬라이드에 달라붙도록 합니다. 신속하게 조직 섹션에 PBS의 한 방울을 적용합니다. PBS에 담근 미세한 팁 페인트 브러시를 사용하여 조직 섹션의 거품을 털어 내고 조직을 펼치므로 슬라이드에 평평하게 놓여 있습니다.마지막으로 슬라이드 워머에 슬라이드를 45분 동안 건조시키고 슬라이드를 섭씨 80도에 저장합니다. 이 프로토콜에서, 9개의 동물에게서 두뇌 조직은 동시에 준비되고 저온분해되었습니다. 냉동 절제 후, H&E 염색은 극저온 보호 품질을 평가하기 위해 수행 될 수있다.이온화된 칼슘 결합 어댑터 분자 1개 또는 마이크로글리아의 이바1 염색의 대표적인 결과는 단일 메가브레인에 대한 각 연구 뇌 간의 일관된 염색을 보여줍니다. 이 절차를 시도하는 동안, 균열 또는 해동을 방지하고 비정상적인 조직 무결성으로 이어지는 조직의 동결을 방지하기 위해 메가 브레인을 동결하면서 지속적으로 온도를 모니터링하는 것이 중요합니다. 이 염색 하는 동안 그룹 간의 차이를 만들 수 있습니다 및 이미징 및 분석 하는 동안 편견과 주관성을 줄일 수 있기 때문에 별도 메가 브레인에서 다른 치료 그룹을 분리 하는 것이 좋습니다.paraformaldehyde와 함께 일하는 것은 매우 위험할 수 있으며 PBE착용 및 후드 작업과 같은 예방 조치는 이 절차를 수행하는 동안 항상 취해야 합니다.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Simultaneous fMRI and Electrophysiology in the Rodent Brain

쥐 두뇌에 동시 fMRI와 전기 생리학

To examine the neural basis of the blood oxygenation level dependent (BOLD) magnetic resonance imaging (MRI) signal, we have developed a rodent model in ...

연구

신경과학

Ex vivo Culturing of Whole, Developing Drosophila Brains

Ex vivo Culturing of Whole, Developing Drosophila Brains

전체의 전의 생체내의 Culturing, 개발 Drosophila의 뇌는

We describe a method for ex vivo culturing of whole Drosophila brains. This can be used as a counterpoint to chronic genetic manipulations for ...

Simultaneous Electroencephalography, Real-time Measurement of Lactate Concentration and Optogenetic Manipulation of Neuronal Activity in the Rodent Cerebral Cortex

동시 Electroencephalography, 설치류 대뇌 피질의 젖산 농도와 Neuronal 활동 Optogenetic 조작의 실시간 측정

Although the brain represents less than 5% of the body  by mass, it utilizes approximately one quarter of the glucose used by the body  at rest1. The ...

Simultaneous Electrophysiological Recording and Micro-injections of Inhibitory Agents in the Rodent Brain

동시 전기 생리 녹화 및 설치류의 뇌에서 억제 에이전트의 마이크로 주사

Here we describe a method for the construction of a single-use &#8220;injectrode&#8221; using commercially accessible and affordable parts. A probing ...

Isolation, Culture and Long-Term Maintenance of Primary Mesencephalic Dopaminergic Neurons From Embryonic Rodent Brains

배아 쥐의 뇌에서 차 중뇌 도파민 신경 세포의 분리, 문화 및 장기 유지 보수

Degeneration of mesencephalic dopaminergic (mesDA) neurons is the pathological hallmark of Parkinson&#8217;s diseae. Study of the biological processes ...

Homochronic Transplantation of Interneuron Precursors into Early Postnatal Mouse Brains

이른 출생 후 마우스 두뇌로 Interneuron 선구자의 Homochronic 이식

Neuronal fate determination and maturation requires an intricate interplay between genetic programs and environmental signals. However, disentangling the ...

Metabolic Analysis of Drosophila melanogaster Larval and Adult Brains

Metabolic Analysis of Drosophila melanogaster Larval and Adult Brains

초파리 melanogaster Larval 및 성인 두뇌의 변화 분석

This protocol describes a method for measuring the metabolism in Drosophila melanogaster larval and adult brains. Quantifying metabolism in whole organs ...

Abbiategrasso Brain Bank Protocol for Collecting, Processing and Characterizing Aging Brains

In a constantly aging population, the prevalence of neurodegenerative disorders is expected to rise. Understanding disease mechanisms is the key to find ...

Free-floating Immunostaining of Mouse Brains

마우스 뇌의 자유 부동 면역 염색

Immunohistochemical staining of mouse brains is a routine technique commonly used in neuroscience to investigate central mechanisms underlying the ...

Automated Multimodal Stimulation and Simultaneous Neuronal Recording from Multiple Small Organisms

여러 개의 작은 유기체에서 자동화된 다중 모드 자극 및 동시 신경 기록

Fluorescent genetically encoded calcium indicators have contributed greatly to our understanding of neural dynamics from the level of individual neurons ...