Name: a zebrafish embryo model for in vivo visualization and intravital analysis of biomaterial-associated staphylococcus aureus infection
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Zebrafish Embryo Model for In Vivo Visualization and Intravital Analysis of Biomaterial-associated Staphylococcus aureus Infection at JoVE.com

هذه الدراسة ماليا يدعمها المشروع إيبيزا البرنامج المواد الطبية الحيوية (بم) ويشترك في تمويله وزارة الشؤون الاقتصادية في هولندا. الكتاب يود أن يشكر الأستاذ الدكتور غراهام ليشكي من جامعة موناش، أستراليا لتوفير خط الزرد المحورة وراثيا (mpeg1:Gal4/UAS:Kaede).

في هذا البروتوكول، وصيانة الزرد الكبار امتثالا للوائح المحلية الرفق بالحيوان كما أقرته اللجنة المحلية الرفق بالحيوان. وأجريت تجارب على الأجنة وفقا لتوجيهات 2010/63/الاتحاد الأوروبي.
1-إعداد "البكتيريا فقط" وتعليق البكتيريا-الجزئي المجالات الخرز الصغير
ملاح...

العدوى المرتبطة بمادة بيولوجية (بأي) مضاعفات سريرية خطيرة. فهم أفضل للآلية المرضية بأي المجراة في أن يوفر رؤى جديدة لتحسين الوقاية والعلاج بأي. بيد أن الحالية تجريبية بأي نماذج حيوانية مثل نماذج مورين هي مكلفة وتتطلب عمالة مكثفة، وتتطلب تدريب العاملين المتخصصين في التقنيات الجراحية المع?...

يتزايد استخدام مجموعة متنوعة من الأجهزة الطبية (يشار إليها على أنها "الحيوية") في الطب الحديث لاستعادة أو استبدال أجزاء جسم الإنسان1. ومع ذلك، عند غرس الحيوية مريض للعدوى، دعا عدوى المرتبطة بمادة بيولوجية (بأي)، ومضاعفات رئيسية ليزرع في الجراحة. المكوّرات العنقودية الذهبية و المكوّرات العنقودية ابيديرميديس هي الأنواع البكتيرية الأكثر انتشارا هما مسؤولة بأي2،،من34،،من56. مزروع النموذج الحيوية على سطح عرضه لتشكيل بيوفيلم الجرثومي. وعلاوة على ذلك، قد تكون مختل الاستجابة المناعية المحلية بالحيوية مزروع، مما تسبب في انخفاض فعالية إزالة البكتيريا. الموافقة الأولية على إصابة البكتيريا يقوم أساسا بتسلل العَدلات، التي بشدة انخفاض قدرة جراثيم حضور المدرج أو مزروع مادة بيولوجية7. وعلاوة على ذلك، الضامة التسلل إلى الأنسجة بعد تدفق العَدلات الأولى سوف phagocytose البكتيريا المتبقية ولكن لا يمكن فعلياً قتلهم إينتراسيلولارلي، بسبب المناعة مختل مما يشير إلى أنه نتيجة لوجود مجتمعة مادة بيولوجية والبكتيريا8. وهكذا، يمكن تيسير وجود الحيوية البقاء داخل الخلايا للبكتيريا9،10،11،،من1213 وبيوفيلم تشكيل على مزروع الحيوية4،14. ونتيجة لذلك، قد تؤدي إلى الفشل بأي والحاجة إلى استبدال مزروع الحيوية، مما تسبب في زيادة معدلات الاعتلال والوفيات والاستشفاء المطول مع التكاليف الإضافية2،15.
ويجري عدد متزايد من استراتيجيات مكافحة--بأي المتقدمة2،،من1617. المجراة في تقييم فعالية هذه الاستراتيجيات في نماذج حيوانية ذات الصلة أمر ضروري. ومع ذلك، التقليدية التجريبية بأي نماذج حيوانية (مثل، الماوس نماذج) عادة ما تكون مكلفة وتستغرق وقتاً طويلاً لذلك غير مناسب لاختبار الإنتاجية العالية من استراتيجيات متعددة18. التطورات الأخيرة في تقنيات التصوير الضوئية الحيوية استناداً إلى طرحه/فلوري تسمية الخلايا المضيفة والبكتيريا قد يسمح للرصد المستمر للتفاعلات بأي تطور والمضيف الممرض/المضيف-المواد في الحيوانات الصغيرة واحدة مثل الفئران18،19،،من2021. ومع ذلك، هذا الأسلوب معقد نسبيا ولا تزال في مهدها، ويجب معالجة عدة قضايا للتحليل الكمي بأي18. على سبيل المثال، مطلوب بجرعة عالية من تحدي لتصور الاستعمار الجرثومي. وبالإضافة إلى ذلك، على ضوء التشتت والامتزاز إشارات الإضاءة الحيوية/الأسفار في أنسجة الثدييات اختبار الحيوانات كما يجب تناول18،،من1921. ولذلك، هي نماذج حيوانية مبتكرة، وفعالة من حيث التكلفة مما يسمح للتصور إينترافيتال والتحليل الكمي على مر الزمن قيمة النظم التكميلية للدراسة المجراة في بأي.
وقد استخدمت الزرد (الأجنة) كأداة في الحية تنوعاً لتشريح التفاعلات المضيف-مسببات المرض والإصابة المرضية للعديد من الأنواع البكتيرية مثل المتفطرة22،23من الزائفة الزّنجاريّة، الإشريكيّة القولونية26،24و العنقوديات البرازية faecalis2527. وقد أجنة الزرد العديد من المزايا مثل الشفافية الضوئية، وتكلفة الصيانة منخفضة نسبيا، وحيازة نظام المناعة عالية مماثلة لتلك في الثدييات28،29. وهذا يجعل الأجنة الزرد كائن نموذج الغاية الاقتصادية والمعيشية للتصور إينترافيتال وتحليل تطور العدوى والمضيف المقترنة الردود28،29. للسماح لتصور سلوك الخلية خطوط الزرد في الحية، ومحوره وراثيا مع أنواع مختلفة من الخلايا المناعية (مثل الضامة، والعدلات) وحتى مع المعلمة فلوريسسينتلي الهياكل سوبسيلولار وقد وضعت28 ،29. وبالإضافة إلى ذلك، يوفر معدل الإنجاب عالية الزرد إمكانية تطوير نظم اختبار إنتاجية عالية يتميز الحقن الآلية المؤتمتة والأسفار الآلي الكمي و تحليل الحمض النووي الريبي تسلسل27، 30.
في هذه الدراسة، ونحن تهدف إلى وضع نموذج الزرد جنين للعدوى المرتبطة بمادة بيولوجية باستخدام تقنيات التصوير الأسفار. وتحقيقا لهذه الغاية، قمنا بتطوير إجراء لحقن البكتيريا (S. aureus) حضور مادة بيولوجية الجزئي المجالات الخرز الصغير الأنسجة العضلية الزرد الأجنة. كنا المذهبة س. RN4220 وإذ تعرب عن مشري الفلورسنت البروتين (S. aureus-مشري)، الذي شيد كما هو موضح في مكان آخر لآخر10،سلالة المذهبة س. 31. السطر الزرد المحورة وراثيا (mpeg1: UAS/كايد) معربا عن كايد واستخدمت بروتين فلوري أخضر في الضامة32 والأزرق الفلورسنت البوليستيرين الجزئي المجالات الخرز الصغير. في دراسة سابقة، وقد أظهرنا أن ضخ العضلي الجزئي المجالات الخرز الصغير في الأجنة الزرد لتقليد غرس مادة بيولوجية هي عمليا33. لتحليل كمي التقدم بأي وتسلل خلية مرتبطة في الأجنة واحد مع مرور الوقت، كنا ملف المشروع "الزرد-إيمونوتيست" الذي يجري تشغيله في "أوبجيكتج" (المكونات في إيماجيج) لقياس كثافة الأسفار البكتيريا المقيمين والضامة التسلل إلى محيط موقع الحقن الجزئي المجالات الخرز الصغير33. وباﻹضافة إلى ذلك، عقدنا العزم الأرقام لتشكيل مستعمرة وحدات (زيمبابوي) من البكتيريا في الوجود والغياب الجزئي المجالات الخرز الصغير في الأجنة لدراسة الآثار المحتملة للمواد الحيوية على العدوى. لدينا هذه الدراسة يتبين أن الجنين الزرد مع الأساليب المتقدمة هنا، نموذج حيوانات الفقارية واعدة، ورواية لدراسة الإصابات المرتبطة بمادة بيولوجية المجراة.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Tryptic soya agar</td>
			<td>BD Difco</td>
			<td>236950</td>
			<td>Media preparation unit at AMC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tryptic soya broth</td>
			<td>BD Difco</td>
			<td>211825</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyvinylpyrrolidone40</td>
			<td>Applichem</td>
			<td>A2259.0250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 &#181;m diameter polystyrene microspheres (blue fluorescent)</td>
			<td>Life technology/ThemoFisher</td>
			<td>F8829</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass microcapilary (1 mm O.D. x 0.78 mm I.D.)</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>30-0038</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropipette puller instrument</td>
			<td>Sutter Instrument Inc</td>
			<td>Flaming p-97</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light microscope LM 20</td>
			<td>Leica</td>
			<td>MDG33 10450123</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-aminobenzoic acid (Tricaine)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E10521-50G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose MP</td>
			<td>Roche</td>
			<td>11388991001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereo fluorescent microscope LM80</td>
			<td>Leica</td>
			<td>MDG3610450126</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microloader pipette tips</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5242956.003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micromanipulator M3301 with M10 stand</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>00-42-101-0000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FemtoJet express micro-injector</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5248ZO100329</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtrube 2ml pp</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>72.693.005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zirconia beads</td>
			<td>Bio-connect</td>
			<td>11079124ZX</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MagNA lyser</td>
			<td>Roche</td>
			<td>41416401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MSA-2 plates (Mannitol Salt Agar-2)</td>
			<td>Biomerieux</td>
			<td>43671</td>
			<td>Chapmon 2 medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methyl cellulose 4000cp</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>MO512-250G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloramphenicol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C0378</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gyrotory shaker (for bacterial growth)</td>
			<td>New Brunswick Scientific</td>
			<td>G10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zebrafish incubator</td>
			<td>VWR</td>
			<td>Incu-line</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cuvettes</td>
			<td>BRAND</td>
			<td>759015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Hettich-Zentrifugen</td>
			<td>ROTANTA 460R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spectrometer</td>
			<td>Pharmacia biotech</td>
			<td>Ultrospec&#174;2000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F6521-1EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>48 well-plates</td>
			<td>Greiner bio-one</td>
			<td>677180</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 well-plates</td>
			<td>Greiner bio-one</td>
			<td>655161</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri-dish</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>353003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri-dish</td>
			<td>Biomerieux</td>
			<td>NL-132</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageJ</td>
			<td>Not applicable</td>
			<td>Not applicable</td>
			<td>link: https://imagej.nih.gov/ij/download.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GraphPad 7.0</td>
			<td>Prism</td>
			<td>Not applicable</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a zebrafish embryo model for in vivo visualization and intravital analysis of biomaterial-associated staphylococcus aureus infection

العدوى المرتبطة بمادة بيولوجية (بأي) أحد أسباب رئيسية لفشل الأجهزة الطبية الحيوية. المكوّرات العنقودية الذهبية إحدى المسببات الرئيسية في بأي. النماذج الحالية تجريبية بأي الحيوانات الثديية مثل نماذج الماوس مكلفة وتستغرق وقتاً طويلاً، وذلك غير مناسبة لتحليل الإنتاجية العالية. وهكذا، الرواية نماذج حيوانية كنظم متكاملة للتحقيق بأي المجراة في المرغوب فيها. في هذه الدراسة، نحن تهدف إلى تطوير نموذج جنين الزرد المجراة في التصور والتحليل إينترافيتال للعدوى البكتيرية حضور الحيوية استناداً إلى الفحص المجهري الأسفار. وبالإضافة إلى ذلك، تدرس استجابة بلعم استفزاز. وتحقيقا لهذه الغاية، استخدمنا الفلورسنت معربا عن البروتين المذهبة س. والأجنة المعدلة وراثيا الزرد معربا عن البروتينات الفلورية في الضامة بهم ووضع إجراء لحقن البكتيريا وحدها أو بالاشتراك مع الجزئي المجالات الخرز الصغير في العضلات أنسجة الأجنة. لرصد تطور العدوى البكتيرية في الأجنة الحية على مر الزمن، ونحن استنباط طريقة بسيطة ولكنها موثوقة التهديف مجهرية للبكتيريا الفلورسنت. وأظهرت النتائج من التهديف مجهرية أن جميع الأجنة مع الوحدات المكونة للمستعمرة أكثر من 20 (زيمبابوي) من البكتيريا أسفرت عن إشارة إيجابية فلورسنت من البكتيريا. لدراسة الآثار المحتملة للمواد الحيوية على العدوى، حددنا الأرقام زيمبابوي في المذهبة س. مع أو بدون 10 ميكرون البوليستيرين الجزئي المجالات الخرز الصغير (PS10) كنموذج الحيوية في الأجنة. وعلاوة على ذلك، قمنا باستخدام ملف المشروع أوبجيكتج "الزرد-إيمونوتيست" العاملة في إيماجيج لقياس كثافة الأسفار من عدوى المكوّرات س. مع أو بدون ملاحظة:10 مع مرور الوقت. وأظهرت النتائج من كلا الأسلوبين أعلى الأرقام في المذهبة س. في الأجنة المصابة مع الجزئي المجالات الخرز الصغير مما في الأجنة دون الجزئي المجالات الخرز الصغير، مما يدل قابلية إصابة بزيادة حضور مادة بيولوجية. وهكذا، يظهر هذه الدراسة إمكانيات النموذجي الجنين الزرد للدراسة بأي مع الأساليب المتقدمة هنا.

هذه الدراسة تقييم مدى انطباق الزرد الأجنة كنموذج حيوانات الفقارية رواية للتحقيق في الإصابة المرتبطة بمادة بيولوجية. قد استخدمت تقنية microinjection عادة لمختلف أنواع الجراثيم بحقن الأجنة الزرد تسبب الإصابة22،،من2627،?...

Watch this Scientific Journal Video about A Zebrafish Embryo Model for In Vivo Visualization and Intravital Analysis of Biomaterial-associated Staphylococcus aureus Infection at JoVE.com

A Zebrafish Embryo Model for In Vivo Visualization and Intravital Analysis of Biomaterial-associated Staphylococcus aureus Infection

نموذج الجنين الزرد بالتصور فيفو و المرتبطة "تحليل إينترافيتال لمادة بيولوجية" المكوّرات العنقودية الذهبية العدوى

تصف هذه الدراسة نموذجا جنين الزرد المجراة في التصور والتحليل إينترافيتال للعدوى المرتبطة بمادة بيولوجية على مر الزمن استناداً إلى الفحص المجهري الأسفار. هذا النموذج نظام واعدة لاستكمال نماذج الحيوانات الثديية مثل الماوس نماذج لدراسة الأمراض المرتبطة بمادة بيولوجية المجراة.

Biomaterial-associated infection (BAI) is a major cause of the failure of biomaterials/medical devices. Staphylococcus aureus is one of the major ...

يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية حول كيفية تأثير المواد الحيوية على قابلية الإصابة بالعدوى، وكيف تؤثر على تطور مثل هذه العدوى، وكيف تؤثر على سلوك الخلايا المناعية حول مثل هذه المواد الحيوية في الجسم الحي. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها توفر نموذجًا حيوانيًا جديدًا يسمح بالتصور الحي والتحليل داخل الرحم للعدوى المرتبطة بالمواد الحيوية. إن البرهان المرئي لهذه الطريقة أمر بالغ الأهمية لأن حقن ميكروفرات المواد الحيوية هو إجراء دقيق للغاية.لتوليد تعليق البكتيريا فقط، نقل أول أربع إلى خمس مستعمرات من سلالة الفلورسنت ستايف أوريوس mCherry، المستزرعة على لوحات زراعة الصويا تريبوتي تكملها 10 ميكروغرام لكل ملليلتر من الكلورامفينيكول إلى 10 ملليلتر من مرق الصويا التربتيك تستكمل مع الكلورامفينيكول، للنمو في مرحلة النمو في منتصف لوغاريتمي في 37 درجة مئوية مع اهتزاز. عندما تصل الثقافة إلى قياس الكثافة البصرية في 620 نانومتر من 0.4 إلى 0.8 ، وجمع البكتيريا عن طريق الطرد المركزي ، وغسل الخلايا مرتين مع ملليلتر واحد من برنامج تلفزيوني عقيمة في غسل. بعد الغسيل الثاني، resuspend بيليه في 1.1 ملليلتر من PVP، ودوامة التعليق البكتيري قبل قياس الكثافة البصرية مرة أخرى.ثم ضبط تركيز التعليق البكتيري مع PVP وفقا للمتطلبات التجريبية لتوليد تعليق البكتيريا فقط. لتوليد البكتيريا microsphere تعليق، أجهزة الطرد المركزي التجارية البوليسترين microspheres، PS-10، وإعادة معادلة بيليه microsphere في تعليق البكتيريا فقط. تمييع تعليق البكتيريا microsphere مع حجم 1/2 من PVP للوصول إلى تركيز مناسب من البكتيريا في التعليق الذي هو تقريبا 2/3 من ذلك في تعليق البكتيريا فقط.اخلطي التعليق عن طريق الدوامة. للتحقق من تركيز البكتيريا فقط والبكتيريا microsphere تعليق، إضافة 100 ميكرولترات من كل تعليق إلى الآبار الفردية من لوحة 96 جيدا. تخفيف تسلسليا 10 ميكرولتر aliquots من التعليقات في 90 ميكرولترات من برنامج تلفزيوني عقيم في الآبار اللاحقة، وذلك باستخدام نصائح جديدة لكل خطوة التخفيف.تطبيق 10 ميكرولتر 10 اسكوت عن التعليقات البكتيرية غير المخففة والمخففة على لوحات أجار، واحتضان لوحات بين عشية وضحاها في 37 درجة مئوية. في صباح اليوم التالي، عد المستعمرات لحساب عدد البكتيريا داخل البكتيريا الجاهزة فقط والبكتيريا microsphere تعليق. بعد جمع أجنة سمك الحمار الوحشي، والتخلص من أي أجنة غير شفافة غير قابلة للحياة، واحتضان ما يقرب من 60 جنينا لكل 100 ملليلتر طبق بيتري في 28 درجة مئوية في المتوسط E3 الطازجة.بعد التخدير، اعزل الأجنة الإيجابية من GFP للمجهر الفلوري. نقلها إلى طبق بيتري 100 ملليلتر من E3 المتوسطة. لإنشاء قالب حقن، وملء طبق بيتري 100 ملليلتر مع واحد إلى 1.5٪ من الأزهرة السائلة.استخدام قالب قالب من البلاستيك لإنشاء الأخاغ في agarose. عندما عززت agarose، وإزالة القالب، وتغطية أجار مع E3 المتوسطة تكمل مع 0.02٪ tricaine. يوم واحد ثلاثة بعد الإخصاب، واستخدام ملقط لكسر غيض من إبرة الزجاج microcapillary سحب لتحقيق نصائح مع ما يقرب من 20 ميكرومتر القطر الخارجي تحت مجهر خفيف مع شريط مقياس في العين.تعديل فتح طرف الإبرة هو عملي لحقن microspheres. يجب تعديل قطر الفتحة للميكروسفيرات الدقيقة من مختلف الأحجام. ثم استخدام طرف ماصة Microloader لتحميل الإبرة مع ما يقرب من 20 ميكرولتردات من البكتيريا microsphere أو تعليق البكتيريا فقط، وجبل الإبرة على micromanipulator متصلة مجهرية.الآن نقل الأجنة المختارة إلى لوحة أغاروز مخدد. بعد انتظار خمس دقائق حتى يتم تخدير الأجنة، محاذاة الأجنة داخل الأخادق في اتجاه واحد لحقنها. تعيين الحقن المجهري إلى إعدادات الحقن المناسبة، وإدراج الإبرة في الأنسجة العضلية للجنين الأول في زاوية 45 إلى 60 درجة تحت مجهر ستيريو.نقل بلطف الإبرة ذهابا وإيابا لضبط الموقف داخل الأنسجة حسب الضرورة، واستخدام دواسة القدم microinjector لحقن تعليق محملة. عند حقن البكتيريا microsphere تعليق في أنسجة أجنة حمار وحشي، يجب إدخال الإبرة بلطف ولكن مع اليد ثابتة. بعد الإدراج الناجح، يجب إنشاء مساحة للمواد قبل الحقن.عندما يتم حقن جميع الأجنة ، يسجل الأجنة لحقن ناجح تحت مجهر الفلورانس الاستريو ، والحفاظ على الأجنة في E3 المتوسطة دون tricaine في آبار فردية من 48 بئرًا مع تغييرات متوسطة يوميًا. لرصد تطور العدوى عن طريق تكوين وحدة كمية مستعمرة، نقل عشوائيا خمسة إلى ستة الأجنة المصابة قابلة للحياة في الأنابيب الدقيقة الفردية ملليلتر بعد وقت قصير من الحقن، وغسل بلطف الأجنة مع برنامج تلفزيوني عقيم. بعد التخلص من يغسل، إضافة 100 ميكرولترات من برنامج تلفزيوني معقم إلى كل أنبوب، تليها اثنين إلى ثلاثة حبات الزركونيا قطرها ملليمترين معقمة.ثم سحق الأجنة في التجانس في 3، 500 دورة في الدقيقة لمدة 30 ثانية، والثقافة متجانسة كما هو موضح. ضع طبق بيتري 100 ملليمتر يحتوي على E3 متوسطة مكمّلة بنسبة 0.02٪ tricaine على مرحلة مجهر الفلورانس ستيريو ، وأضف 500 ميكرولترات من 2٪ ميثيلسيلولوزي في طبق بيتري. لرصد تقدم العدوى عن طريق المجهر الفلوريس، وتجهيز المناسبة مشرق الحقل والمرشحات الفلورية، محاذاة الأجنة المصابة تخدير أفقيا في بقعة من ميثيلسيللوز في طبق بيتري.استخدم فلتر الحقل الساطع لجعل الأنسجة التالفة المحقونة موضع التركيز عند التكبير 160x. تعيين عمق Z-المكدس في 10 ميكرومتر وحجم الخطوة في خمسة ميكرومتر للسماح بتسجيل ثلاث صور متتالية. ثم صورة الأجنة الفردية تحت إعدادات محسنة متطابقة في التكبير 160x.استخدم البرنامج المساعد ObjectJ في ImageJ لتحليل الصور. الحقن العضلي من ستاف aureus يبدأ عدوى تعتمد على الجرعة في الأجنة، مع تطور العدوى القابلة للتطبيق لوحظ في الأجنة تدار جرعات عالية التحدي في اليومين الأول والثاني بعد الحقن. كما هو موضح، فمن الممكن لحقن أعداد مماثلة من البكتيريا في وجود أو عدم وجود microspheres.عادة، جميع الأجنة مع أكثر من 20 وحدات تشكيل مستعمرة من ستاف aureus mCherry إيجابية لفلورانس تحت التهديف المجهرية، على الرغم من وجود microspheres يبدو أن لا تؤثر بشكل كبير على تطور العدوى في الأجنة طعن جرعة منخفضة. في الأجنة المطعون فيها عالية الدوس، لا يظهر التسجيل المجهري أي اختلافات في تردد الأجنة المصابة مع أو بدون مجهر، ولكن الثقافة الكمية تكشف عن أرقام وحدات تكوين مستعمرة أعلى يتم استردادها من الأجنة في مجموعة ستاف أوريوس بالإضافة إلى مجموعة الغلاف الدقيق مقارنة بتلك التي يتم حصادها من مجموعة ستاف أوريوس فقط في يومين بعد الحقن. وجود المواد الحيوية يؤثر على كل من استجابة الخلية المناعية والتعرض الأولي للعدوى.على سبيل المثال، في خمس ساعات بعد الحقن، فإن تسلل الضامة استجابة لحقن Staph aureus فقط أعلى بكثير مما كان عليه استجابة لحقن المكورات العنقودية بالإضافة إلى الميكروس، بينما في يوم واحد بعد الحقن، تظهر الأجنة ذات الميكروسفيرات مستويات أعلى بكثير من عدوى اوريوس ستايف من الأجنة بدون مجهرية. من المهم أن نتذكر دائما لضبط فتح طرف إبرة لحجم المواد الحيوية وضبط نسبة تركيز البكتيريا في تعليق البكتيريا فقط والبكتيريا microsphere تعليق. هذا نموذج الجنين حمار وحشي يسمح في تصور في الجسم الحي وتحليل داخل مدينة تطور العدوى وردود الخلايا المناعية أثار في وجود وغياب المواد الحيوية.توفر هذه التقنية نموذجًا جديدًا لكل الحيوان لتطوير المواد الحيوية المضادة للميكروبات واستراتيجيات العلاج للأجهزة الطبية الآمنة.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

A Zebrafish Embryo Model for In Vivo Visualization and Intravital Analysis of Biomaterial-associated Staphylococcus aureus Infection

Creating Two-Dimensional Patterned Substrates for Protein and Cell Confinement

إنشاء ثنائي الأبعاد ركائز منقوشة على الحبس البروتين والخلايا

Microcontact printing provides a rapid, highly reproducible method for the creation of well-defined patterned substrates.1  While microcontact printing ...

Cellular Lipid Extraction for Targeted Stable Isotope Dilution Liquid Chromatography-Mass Spectrometry Analysis

الخلوية لاستخراج الدهن المستهدفة التخفيف النظائر المستقرة تحليل السائل الطيف اللوني القداس

The metabolism of fatty acids, such as arachidonic acid (AA) and linoleic acid (LA), results in the formation of oxidized bioactive lipids, including ...

Simple Microfluidic Devices for in vivo Imaging of C. elegans, Drosophila and Zebrafish

Simple Microfluidic Devices for in vivo Imaging of C. elegans, Drosophila and Zebrafish

ميكروفلويديك أجهزة بسيطة لل<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; التصوير من<em&gt; C. ايليجانس</em&gt;،<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; واسماك الزرد

Micro fabricated fluidic devices provide an accessible micro-environment for in vivo studies on small organisms. Simple fabrication processes are ...

Viral Nanoparticles for In vivo Tumor Imaging

Viral Nanoparticles for In vivo Tumor Imaging

الفيروسية النانوية ل<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; التصوير ورم

The use of nanomaterials has the potential to revolutionize materials science and medicine. Currently, a number of different nanoparticles are being ...

Mass Cytometry: Protocol for Daily Tuning and Running Cell Samples on a CyTOF Mass Cytometer

الخلوي الجماعي: بروتوكول لضبط اليومية وعينات الخلايا تشغيل عداد الكريات الشامل على CyTOF

In recent years, the rapid analysis of single cells has commonly been performed using flow cytometry and fluorescently-labeled antibodies. However, the ...

Biosensor for Detection of Antibiotic Resistant Staphylococcus Bacteria

جهاز الاستشعار البيولوجي للكشف عن المضادات الحيوية البكتيريا العنقودية الذهبية المقاومة لل

A structurally transformed lytic bacteriophage having a broad host range of Staphylococcus aureus strains and a penicillin-binding protein (PBP 2a) ...

A Full Skin Defect Model to Evaluate Vascularization of Biomaterials In Vivo

A Full Skin Defect Model to Evaluate Vascularization of Biomaterials In Vivo

جلد كامل عيب نموذج في تقييم الأوعية الدموية من الحيوية<em&gt; في فيفو</em

Insufficient vascularization is considered to be one of the main factors limiting the clinical success of tissue-engineered constructs. In order to ...

Adapting the Electrospinning Process to Provide Three Unique Environments for a Tri-layered In Vitro Model of the Airway Wall

Adapting the Electrospinning Process to Provide Three Unique Environments for a Tri-layered In Vitro Model of the Airway Wall

تكييف عملية Electrospinning لتوفير ثلاث بيئات فريدة من نوعها لثلاثي الطبقات<em&gt; في المختبر</em&gt; نموذج جدار مجرى الهواء

Electrospinning is a highly adaptable method producing porous 3D fibrous scaffolds that can be exploited in in vitro cell culture. Alterations to ...

Rigid Embedding of Fixed and Stained, Whole, Millimeter-Scale Specimens for Section-free 3D Histology by Micro-Computed Tomography

جامدة التضمين من الثابتة والملون، إجمالاً، مقياس الملليمتر العينات 3D خالية من قسم علم الأنسجة بالتصوير المقطعي الصغيرة المحسوبة

For over a hundred years, the histological study of tissues has been the gold standard for medical diagnosis because histology allows all cell types in ...

Colorimetric Analysis of Alkaline Phosphatase Activity in S. aureus Biofilm

Colorimetric Analysis of Alkaline Phosphatase Activity in S. aureus Biofilm

قياس الألوان "التحليل من القلوية الفوسفاتيز النشاط" في المذهبة س. بيوفيلم

Alkaline phosphatase (ALP) is a common enzyme expressed in both prokaryotic and eukaryotic cells. It catalyzes the hydrolysis of phosphate monoesters from ...