Name: a zebrafish embryo model for in vivo visualization and intravital analysis of biomaterial-associated staphylococcus aureus infection
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Zebrafish Embryo Model for In Vivo Visualization and Intravital Analysis of Biomaterial-associated Staphylococcus aureus Infection at JoVE.com

Deze studie werd financieel ondersteund door de IBIZA-project van de biomedische materiaal (BMM) programma en medegefinancierd door het Nederlandse ministerie van economische zaken. De auteurs bedank Prof. Dr. Graham Lieschke van Monash University in Australië voor het verstrekken van de zebravis transgene lijn (mpeg1:Gal4 / UAS:Kaede).

In dit protocol is onderhoud van volwassen zebrafish in overeenstemming met de lokale dierenwelzijn verordeningen zoals goedgekeurd door de Commissie van de lokale dierenwelzijn. Experimenten met embryo's werden uitgevoerd volgens de richtlijn 2010/63/EU.
1. voorbereiding van de "Bacteriën-only" en bacteriën-microsferen schorsingen
Opmerking: De RN4220 van S. aureus -stam uitdrukken mCherry TL proteïne (S. aureus- mCherry) wordt g...

Biomaterial-geassocieerde infectie (BAI) is een ernstige klinische complicatie. Een beter begrip van de pathogenese van BAI in vivo zou bieden nieuwe inzichten ter verbetering van de preventie en behandeling van BAI. Huidige experimentele BAI dierlijke modellen zoals lymfkliertest modellen zijn echter duur, arbeidsintensief, en vereisen gespecialiseerde personeel opgeleid in complexe chirurgische technieken. Deze modellen zijn daarom niet geschikt voor hoge doorvoer analyse. Aangezien eisen voor zebrafish embryo modellen...

Een verscheidenheid van medische hulpmiddelen (hierna aangeduid als "biomaterialen") worden steeds meer gebruikt in de moderne geneeskunde op herstel of vervanging van menselijk lichaam deel1. De inplanting van biomaterialen predisposes echter een patiënt aan infectie, genaamd een biomaterial-geassocieerde infectie (BAI), die een belangrijke complicatie van implantaten in de chirurgie. Staphylococcus aureus en Staphylococcus epidermidis zijn de twee meest voorkomende bacteriële soorten verantwoordelijk voor BAI2,3,4,5,6. Geïmplanteerd biomaterialen vorm een gevoelig voor bacteriële biofilm vorming oppervlak. Bovendien is lokale immuunrespons kan worden gestoorde door de geïmplanteerde biomaterialen, waardoor verminderde effectiviteit van bacteriële goedkeuring. De eerste goedkeuring van bacteriën infecteren gebeurt voornamelijk door infiltreren neutrofielen, die sterk verminderde bactericide capaciteit in aanwezigheid van een ingevoegde of geïmplanteerd biomaterial7. Bovendien, macrofagen infiltreren het weefsel na de initiële toestroom van neutrofielen zal phagocytose de resterende bacteriën maar kan niet effectief doden hen intracellulair, als gevolg van de gestoorde immuun signalering dat is een gevolg van de gecombineerde aanwezigheid van de biomaterial en bacteriën8. Aldus, de aanwezigheid van biomaterialen intracellulair overleven van bacteriën9,10,11,12,13 en biofilm vorming op de geïmplanteerde kan vergemakkelijken biomaterialen4,14. Bijgevolg, BAI kan leiden tot het falen en behoefte aan vervanging van geïmplanteerde biomaterialen, waardoor verhoogde morbiditeit en mortaliteit en langdurige ziekenhuisopname met extra kosten2,15.
Een toenemend aantal anti-BAI strategieën worden ontwikkeld2,16,17. In vivo evaluatie van de werkzaamheid van deze strategieën in relevante diermodellen is essentieel. Traditionele experimentele BAI dierlijke modellen (bijvoorbeeld, -Muismodellen) zijn echter meestal duur, tijdrovend en dus niet geschikt voor hoge throughput testen van meerdere strategieën18. Recente ontwikkeling van bio-optische beeldvormingstechnieken op basis van bioluminescente/TL etikettering van gastheer cellen en bacteriën kan toestaan voor de continue bewaking van BAI progressie en host-pathogen/host-materiaal interacties in één kleine dieren zoals muizen18,19,20,21. Echter, deze techniek is relatief complexe en nog in de kinderschoenen, en verschillende kwesties moeten worden aangepakt voor kwantitatieve analyse van BAI18. Bijvoorbeeld, is een uitdaging van hoge dosis vereist voor het visualiseren van bacteriële kolonisatie. Daarnaast licht verstrooiing en adsorptie van bioluminescentie/fluorescentie signalen in weefsels van zoogdiercellen dieren moeten ook worden aangepakt18,19,21. Roman, kosteneffectieve diermodellen waardoor intravital visualisatie en kwantitatieve analyse na verloop van tijd zijn dus waardevolle aanvullende systemen voor het bestuderen van BAI in vivo.
Zebrafish (embryo's) zijn gebruikt als een veelzijdig in vivo instrument voor het ontleden van de gastheer-pathogeen interacties en pathogenese van de infectie van verschillende bacteriesoorten zoals mycobacteriën22, Pseudomonas aeruginosa23, Escherichia coli24, Enterococcus faecalis25en staphylokokken26,27. Zebravis embryo's hebben veel voordelen zoals optische transparantie, een relatief lage onderhoudskosten, en het bezit van een vrijwel gelijkwaardig aan die in zoogdieren28,29immuunsysteem. Dit maakt de zebravis embryo's een zeer economische, levens modelorganisme voor intravital visualisatie en analyse van de progressie van de infectie en de bijbehorende host reacties28,29. Visualisatie van cel gedrag toestaan in vivo, transgene zebrafish lijnen met verschillende soorten immuuncellen (b.v., macrofagen en neutrofielen) en zelfs met fluorescently tagged subcellular structuren zijn ontwikkeld28 ,29. Het tempo hoge reproductie van de zebravis biedt bovendien de mogelijkheid van het ontwikkelen van hoge-doorvoer testsystemen met geautomatiseerde robot injectie, geautomatiseerde fluorescentie kwantificering en RNA sequentie analyse27, 30.
In de huidige studie, we gericht op het ontwikkelen van een zebravis embryo model voor biomaterial-geassocieerde infectie met behulp van fluorescentie beeldvormingstechnieken. Te dien einde ontwikkeld we een procedure voor het injecteren van bacteriën (S. aureus) in aanwezigheid van biomaterial microsferen in het spierweefsel van de zebravis embryo's. We gebruikten S. aureus RN4220 waarin mCherry TL proteïne (S. aureus- mCherry), die werd gebouwd zoals elders beschreven voor een ander S. aureus -stam-10,31. De transgene zebrafish lijn (mpeg1: UAS/Kaede) uitdrukken Kaede groen fluorescent proteïne in de macrofagen32 en blauw TL polystyreen microsferen werden gebruikt. In een eerdere studie, hebben wij aangetoond dat intramusculaire injectie van microbolletjes in zebrafish embryo's na te bootsen biomaterial implantatie haalbaar33. Om de progressie van BAI en infiltratie van de bijbehorende cel in één embryo's na verloop van tijd kwantitatief te analyseren, gebruikten we het projectbestand "Zebrafish-Immunotest", die wordt beheerd binnen "ObjectJ" (een plug-in voor ImageJ) te kwantificeren van de intensiteit van de fluorescentie van bacteriën die woonachtig en macrofagen infiltreren in de buurt van de injectieplaats microsferen33. Bovendien, wij vastbesloten de nummers van de kolonie-vormende eenheden (kve) van bacteriën in de aanwezigheid en de afwezigheid van microbolletjes in de embryo's potentiële effecten van biomaterialen op infectie te bestuderen. Onze huidige studie toont aan dat met de methoden die hier ontwikkeld, de zebravis embryo een veelbelovende, roman gewervelde dieren model is voor het bestuderen van de biomaterial-geassocieerde infecties in vivo.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Tryptic soya agar</td>
			<td>BD Difco</td>
			<td>236950</td>
			<td>Media preparation unit at AMC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tryptic soya broth</td>
			<td>BD Difco</td>
			<td>211825</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyvinylpyrrolidone40</td>
			<td>Applichem</td>
			<td>A2259.0250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 &#181;m diameter polystyrene microspheres (blue fluorescent)</td>
			<td>Life technology/ThemoFisher</td>
			<td>F8829</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass microcapilary (1 mm O.D. x 0.78 mm I.D.)</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>30-0038</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropipette puller instrument</td>
			<td>Sutter Instrument Inc</td>
			<td>Flaming p-97</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light microscope LM 20</td>
			<td>Leica</td>
			<td>MDG33 10450123</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-aminobenzoic acid (Tricaine)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E10521-50G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose MP</td>
			<td>Roche</td>
			<td>11388991001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereo fluorescent microscope LM80</td>
			<td>Leica</td>
			<td>MDG3610450126</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microloader pipette tips</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5242956.003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micromanipulator M3301 with M10 stand</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>00-42-101-0000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FemtoJet express micro-injector</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5248ZO100329</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtrube 2ml pp</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>72.693.005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zirconia beads</td>
			<td>Bio-connect</td>
			<td>11079124ZX</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MagNA lyser</td>
			<td>Roche</td>
			<td>41416401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MSA-2 plates (Mannitol Salt Agar-2)</td>
			<td>Biomerieux</td>
			<td>43671</td>
			<td>Chapmon 2 medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methyl cellulose 4000cp</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>MO512-250G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloramphenicol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C0378</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gyrotory shaker (for bacterial growth)</td>
			<td>New Brunswick Scientific</td>
			<td>G10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zebrafish incubator</td>
			<td>VWR</td>
			<td>Incu-line</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cuvettes</td>
			<td>BRAND</td>
			<td>759015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Hettich-Zentrifugen</td>
			<td>ROTANTA 460R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spectrometer</td>
			<td>Pharmacia biotech</td>
			<td>Ultrospec&#174;2000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F6521-1EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>48 well-plates</td>
			<td>Greiner bio-one</td>
			<td>677180</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 well-plates</td>
			<td>Greiner bio-one</td>
			<td>655161</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri-dish</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>353003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri-dish</td>
			<td>Biomerieux</td>
			<td>NL-132</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageJ</td>
			<td>Not applicable</td>
			<td>Not applicable</td>
			<td>link: https://imagej.nih.gov/ij/download.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GraphPad 7.0</td>
			<td>Prism</td>
			<td>Not applicable</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a zebrafish embryo model for in vivo visualization and intravital analysis of biomaterial-associated staphylococcus aureus infection

Biomaterial-geassocieerde infectie (BAI) is een belangrijke oorzaak van het mislukken van biomaterialen/medische apparaten. Staphylococcus aureus is een van de belangrijkste ziekteverwekkers in BAI. Huidige BAI zoogdieren proefdieren modellen zoals Muismodellen zijn kostbaar en tijdrovend, en dus niet geschikt voor hoge doorvoer analyse. Dus, roman diermodellen als aanvullende systemen voor het onderzoeken van BAI in vivo gewenst zijn. In de huidige studie, we gericht op het ontwikkelen van een zebravis embryo model voor in vivo visualisatie en intravital analyse van bacteriële infectie in het bijzijn van biomaterialen gebaseerd op fluorescentie microscopie. Bovendien, werd de reactie uitgelokt macrofaag bestudeerd. Te dien einde, we gebruikt fluorescente proteïne-uiten S. aureus en transgene zebrafish embryo's uiting van fluorescente proteïnen in hun macrofagen en ontwikkelde een procedure om te injecteren bacteriën alleen of samen met de microsferen in de spier weefsel van embryo's. Als u wilt controleren de progressie van de bacteriële infectie in levende embryo's na verloop van tijd, bedacht we een eenvoudige maar betrouwbare methode van microscopische scoren van fluorescerende bacteriën. De resultaten van microscopische scoren toonden aan dat alle embryo's met meer dan 20 kolonie-vormende eenheden (kve) van bacteriën een positief fluorescent signaal van bacteriën leverde. De potentiële effecten van biomaterialen op infectie te studeren, vastbesloten wij de CFU aantallen S. aureus met en zonder polystyreen microsferen van 10 µm (PS10) als model biomaterialen in de embryo's. Bovendien, we gewend het projectbestand ObjectJ "Zebrafish-Immunotest" uit ImageJ kwantificeren van de intensiteit van de fluorescentie van S. aureus -infectie met en zonder PS10 na verloop van tijd. Resultaten van beide methoden toonde hogere aantallen S. aureus in besmette embryo's met microsferen dan in de embryo's zonder microsferen, met vermelding van een verhoogde infectie gevoeligheid in aanwezigheid van de biomaterial. Dus toont de huidige studie het potentieel van de zebravis embryo model te studeren BAI met de methoden die hier ontwikkeld.

De huidige studie beoordeeld de toepasselijkheid van de zebravis embryo's als een roman gewervelde diermodel voor het onderzoeken van biomaterial-geassocieerde infectie. Microinjection techniek is vaak gebruikt om te injecteren van verschillende bacteriesoorten in zebrafish embryo's tot infectie22,26,27,30,36. Met behulp van de...

Watch this Scientific Journal Video about A Zebrafish Embryo Model for In Vivo Visualization and Intravital Analysis of Biomaterial-associated Staphylococcus aureus Infection at JoVE.com

A Zebrafish Embryo Model for In Vivo Visualization and Intravital Analysis of Biomaterial-associated Staphylococcus aureus Infection

Een zebravis Embryo Model voor In Vivo visualisatie en Intravital analyse van Biomaterial-geassocieerde goudhoudende Stafylokok infectie

De huidige studie beschrijft een zebravis embryo model voor in vivo visualisatie en intravital analyse van biomaterial-geassocieerde infectie na verloop van tijd op basis van fluorescentie microscopie. Dit model is een veelbelovende aanvulling op zoogdieren dierlijke modellen zoals Muismodellen voor het bestuderen van de biomaterial-geassocieerde infecties in vivo.

Biomaterial-associated infection (BAI) is a major cause of the failure of biomaterials/medical devices. Staphylococcus aureus is one of the major ...

Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van belangrijke vragen over hoe biomaterialen de gevoeligheid voor infectie beïnvloeden, hoe ze de progressie van dergelijke infecties beïnvloeden en hoe ze het immuunsysteem gedrag rond dergelijke biomaterialen in vivo beïnvloeden. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat het een nieuw diermodel biedt dat in vivo visualisatie en intravitale analyse van biomaterieel-geassocieerde infecties mogelijk maakt. Visuele demonstratie van deze methode is van cruciaal belang omdat de injectie van biomateriële microsferen een zeer delicate procedure is.Om een bacterie-only suspensie te genereren, breng eerst vier naar vijf kolonies van de fluorescerende Staph aureus mCherry-stam, gekweekt op tryptische sojalandbouwplaten aangevuld met 10 microgram per milliliter chlooramfenicol in 10 milliliter tryptische sojabouillon aangevuld met chloramphenicol, voor groei in de mid-logaritmische groeifase bij 37 graden Celsius met schudden. Wanneer de cultuur een optische dichtheidsmeting bereikt op 620 nanometer van 0,4 tot 0,8, verzamel de bacteriën door centrifugatie en was de cellen twee keer met één milliliter steriele PBS per wasbeurt. Na de tweede wasbeurt, resuspend de pellet in 1,1 milliliter PVP, en vortex de bacteriële suspensie voor het meten van de optische dichtheid weer.Pas vervolgens de concentratie van de bacteriële suspensie aan met PVP volgens de experimentele vereisten om de ënsuspensie alleen voor bacteriën te genereren. Om een bacterie microsfeer suspensie te genereren, centrifuge commerciële polystyreen microsferen, PS-10, en resuspend de microsfeer pellet in de bacteriën-only suspensie. Verdun de microsfeersuspensie van de bacteriën met een 1/2 volume PVP om een geschikte concentratie van bacteriën in de suspensie te bereiken die ongeveer 2/3 van die in de bacteriën-slechts suspensie is.Meng de suspensie door vortexing. Om de concentratie van de bacteriën-only en bacteriën microsfeer suspensie te controleren, voeg 100 microliters van elke suspensie aan individuele putten van een 96-put plaat. Verdun serieel 10 microliter aliquots van de suspensies in 90 microliter van steriele PBS in volgende putten, met behulp van verse tips voor elke verdunningsstap.Breng dubbele 10-microliter aliquots van de onverdunde en verdunde bacteriële suspensies aan op agarplaten en broed de platen 's nachts bij 37 graden Celsius uit. De volgende ochtend, tel de kolonies om het aantal bacteriën te berekenen binnen de voorbereide bacteriën-only en bacteriën microsfeer suspensies. Na het verzamelen van de zebravis embryo's, gooi alle niet-transparante niet-levensvatbare embryo's, en incuberen ongeveer 60 embryo's per 100-milliliter petrischaaltje op 28 graden Celsius in verse E3 medium.Na anesthesie, sequester de GFP-positieve embryo's voor fluorescentie microscopie. Breng ze naar een petrischaaltje van 100 milliliter van E3-medium. Om een spuitgietvorm te maken, vul een petrischaaltje van 100 milliliter met één tot 1,5% vloeibare agarose.Gebruik een plastic mal sjabloon om groeven te maken in de agarose. Wanneer de agarose is gestold, verwijder de mal, en bedek de agar met E3 medium aangevuld met 0,02%tricaine. Op een dag drie na de bevruchting, gebruik tangen om het puntje van een getrokken glazen microcapillaire naald te breken om tips te bereiken met een ongeveer 20 micrometer buitendiameter onder een lichtmicroscoop met een schaal bar in de oculaire.De aanpassing van de opening van de naaldpunt is praktisch voor het injecteren van microsferen. De diameter van de opening moet worden aangepast voor microsferen van verschillende grootte. Gebruik vervolgens een Microloader pipettip om de naald te laden met ongeveer 20 microliters van de bacterie microsfeer of bacteriën-only suspensie, en monteer de naald op een micromanipulator aangesloten op een micro-injector.Breng nu de geselecteerde embryo's over naar de gegroefde agaroseplaat. Na vijf minuten wachten op de embryo's te zijn verdoofd, uitlijnen van de embryo's in de groeven in een enkele oriëntatie voor hun injectie. Stel de microinjector in op de juiste injectie-instellingen en steek de naald in het spierweefsel van het eerste embryo onder een hoek van 45 tot 60 graden onder een stereomicroscoop.Beweeg de naald voorzichtig heen en weer om de positie in het weefsel zo nodig aan te passen en gebruik het microinjector voetpedaal om de geladen vering te injecteren. Bij het injecteren van een bacterie microsfeer suspensie in het weefsel van zebravis embryo's, moet de naald voorzichtig worden ingebracht, maar met een vaste hand. Na een succesvolle inbreng moet er voor de injectie een ruimte voor de materialen worden gecreëerd.Wanneer alle embryo's zijn geïnjecteerd, score de embryo's voor een succesvolle injectie onder een stereo fluorescentie microscoop, en onderhouden van de embryo's in E3 medium zonder tricaïne in individuele putten van 48-well platen met dagelijkse medium veranderingen. Om de infectieprogressie door kolonievormende eenheid kwantificering te controleren, breng je vijf tot zes levensvatbare geïnfecteerde embryo's kort na de injectie willekeurig over in individuele twee milliliter microbuisjes en was je de embryo's voorzichtig met steriele PBS. Na het weggooien van de wasbeurten, voeg 100 microliter steriele PBS aan elke buis, gevolgd door twee tot drie steriele twee-millimeter-diameter zirconia kralen.Plet vervolgens de embryo's in een homogenisator bij 3,500 tpm gedurende 30 seconden en kweek het homogenaat zoals aangetoond. Plaats een 100-millimeter petrischaal met E3 medium aangevuld met 0,02%tricaine op een stereo fluorescentie microscoop stadium, en voeg 500 microliter van 2%methylcellulose in de Petri schotel. Om de voortgang van de infectie door fluorescentiemicroscopie te volgen, de juiste heldere-veld en fluorescerende filters uit te rusten, lijn de verdoofde geïnfecteerde embryo's horizontaal in een plek van methylcellulose in een petrischaal.Gebruik het heldere veldfilter om het beschadigde geïnjecteerde weefsel in beeld te brengen bij een vergroting van 160x. Stel de Z-stack diepte in op 10 micrometer en de stapgrootte op vijf micrometer om de opname van drie opeenvolgende beelden mogelijk te maken. Beeld vervolgens de afzonderlijke embryo's onder identieke geoptimaliseerde instellingen bij een vergroting van 160x.Gebruik de ObjectJ-plug-in in ImageJ om de afbeeldingen te analyseren. Intramusculaire injectie van Staph aureus initieert een dosisafhankelijke infectie in embryo's, waarbij de levensvatbare infectieprogressie waargenomen wordt in embryo's die op dag één en twee na de injectie hoge-uitdagingsdoses toegediend kregen. Zoals aangetoond, is het mogelijk om vergelijkbare aantallen bacteriën te injecteren in de aanwezigheid of afwezigheid van microsferen.Typisch, alle embryo's met meer dan 20 kolonie-vormende eenheden van Staph aureus mCherry zijn positief voor fluorescentie onder microscopische score, hoewel de aanwezigheid van microsferen lijkt niet significant invloed op de infectie progressie in de lage dosis embryo's. In hooggedoseerde uitgedaagde embryo's toont microscopisch scoren geen verschillen in geïnfecteerde embryofrequentie met of zonder microsferen, maar kwantitatieve cultuur onthult hogere kolonievormende eenheidsnummers die zijn opgehaald uit embryo's in de Staph aureus plus microsfeergroep in vergelijking met die welke twee dagen na de injectie uit de Staph aureus-only groep zijn geoogst. De aanwezigheid van een biomateriaal beïnvloedt zowel de immuuncelrespons als de aanvankelijke gevoeligheid voor infectie.Bijvoorbeeld, op vijf uur na injectie, de macrofaag infiltratie in reactie op een Staph aureus-only injectie is aanzienlijk hoger dan in reactie op een Staph aureus plus microsferen injectie, terwijl op een dag na de injectie, de embryo's met microsferen vertonen aanzienlijk hogere niveaus van Staph aureus infectie dan de embryo's zonder microsferen. Het is belangrijk om te onthouden om altijd de opening van de naaldpunt aan te passen aan de grootte van de biomaterialen en om de verhouding van de bacteriënconcentratie in de bacteriën-only suspensie en de bacteriën microsfeersuspensie aan te passen. Dit zebravis embryomodel maakt de in vivo visualisatie en de intravitale analyse van de infectieprogressie en de uitgelokte immuuncelreacties in de aanwezigheid en afwezigheid van biomaterialen mogelijk.Deze techniek biedt een nieuw model voor het hele dier voor de ontwikkeling van antimicrobiële biomaterialen en behandelingsstrategieën voor veilige medische hulpmiddelen.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

A Zebrafish Embryo Model for In Vivo Visualization and Intravital Analysis of Biomaterial-associated Staphylococcus aureus Infection

Creating Two-Dimensional Patterned Substrates for Protein and Cell Confinement

Het creëren van twee-dimensionale Patterned Substraten voor eiwit en Cell opsluiting

Microcontact printing provides a rapid, highly reproducible method for the creation of well-defined patterned substrates.1  While microcontact printing ...

Cellular Lipid Extraction for Targeted Stable Isotope Dilution Liquid Chromatography-Mass Spectrometry Analysis

Cellulaire vetextractie voor gerichte stabiele isotopen Verdunning vloeistofchromatografie-massaspectrometrie Analyse

The metabolism of fatty acids, such as arachidonic acid (AA) and linoleic acid (LA), results in the formation of oxidized bioactive lipids, including ...

Simple Microfluidic Devices for in vivo Imaging of C. elegans, Drosophila and Zebrafish

Simple Microfluidic Devices for in vivo Imaging of C. elegans, Drosophila and Zebrafish

Eenvoudige Microfluïdische Inrichtingen voor<em&gt; In vivo</em&gt; Beeldvorming van<em&gt; C. elegans</em&gt;,<em&gt; Drosophila</em&gt; En zebravis

Micro fabricated fluidic devices provide an accessible micro-environment for in vivo studies on small organisms. Simple fabrication processes are ...

Viral Nanoparticles for In vivo Tumor Imaging

Viral Nanoparticles for In vivo Tumor Imaging

Virale nanopartikels voor<em&gt; In vivo</em&gt; Tumor Imaging

The use of nanomaterials has the potential to revolutionize materials science and medicine. Currently, a number of different nanoparticles are being ...

Mass Cytometry: Protocol for Daily Tuning and Running Cell Samples on a CyTOF Mass Cytometer

Massa Cytometry: Protocol voor dagelijks Tuning en Running Cell Samples op een CyTOF Mass Cytometer

In recent years, the rapid analysis of single cells has commonly been performed using flow cytometry and fluorescently-labeled antibodies. However, the ...

Biosensor for Detection of Antibiotic Resistant Staphylococcus Bacteria

Biosensor voor de detectie van antibiotica resistente Staphylococcus bacteriën

A structurally transformed lytic bacteriophage having a broad host range of Staphylococcus aureus strains and a penicillin-binding protein (PBP 2a) ...

A Full Skin Defect Model to Evaluate Vascularization of Biomaterials In Vivo

A Full Skin Defect Model to Evaluate Vascularization of Biomaterials In Vivo

Een Full Skin Defect model te evalueren Vascularisatie Biomaterialen<em&gt; In Vivo</em

Insufficient vascularization is considered to be one of the main factors limiting the clinical success of tissue-engineered constructs. In order to ...

Adapting the Electrospinning Process to Provide Three Unique Environments for a Tri-layered In Vitro Model of the Airway Wall

Adapting the Electrospinning Process to Provide Three Unique Environments for a Tri-layered In Vitro Model of the Airway Wall

Aanpassing van de elektrospinproces te bieden drie unieke omgevingen voor een Tri-layered<em&gt; In Vitro</em&gt; Model van de Airway Muur

Electrospinning is a highly adaptable method producing porous 3D fibrous scaffolds that can be exploited in in vitro cell culture. Alterations to ...

Rigid Embedding of Fixed and Stained, Whole, Millimeter-Scale Specimens for Section-free 3D Histology by Micro-Computed Tomography

Stijve inbedding van vaste en gekleurd, geheel Millimeter-schaal Specimens voor sectie-gratis 3D histologie door Micro-berekend tomografie

For over a hundred years, the histological study of tissues has been the gold standard for medical diagnosis because histology allows all cell types in ...

Colorimetric Analysis of Alkaline Phosphatase Activity in S. aureus Biofilm

Colorimetric Analysis of Alkaline Phosphatase Activity in S. aureus Biofilm

Colorimetrische analyse van alkalische fosfatase activiteit in S. aureus Biofilm

Alkaline phosphatase (ALP) is a common enzyme expressed in both prokaryotic and eukaryotic cells. It catalyzes the hydrolysis of phosphate monoesters from ...