Name: a zebrafish embryo model for in vivo visualization and intravital analysis of biomaterial-associated staphylococcus aureus infection
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Zebrafish Embryo Model for In Vivo Visualization and Intravital Analysis of Biomaterial-associated Staphylococcus aureus Infection at JoVE.com

Bu çalışmada mali Biyomedikal malzeme (BMM) programı IBIZA project tarafından desteklenen ve ortak Flamanca ekonomik işler Bakanlığı tarafından finanse. Yazarlar Prof. Dr. Graham Lieschke Monash Üniversitesi, Avustralya'dan zebra balığı mutant satır sağlamak için teşekkür etmek istiyorum (mpeg1:Gal4 / UAS:Kaede).

Bu protokol için yetişkin zebra balığı yerel hayvan refahı düzenlemeleri ile uyumlu yerel hayvan refahı Komitesi tarafından onaylanmış gibi korumaktır. Embriyo ile deneyler 2010/63/AB Direktifi göre yapıldı.
1. "Salt bakteri" ve bakteri-mikroküreler süspansiyonlar hazırlanması
Not: MCherry floresan protein (S. aureus- mCherry) ifade S. aureus RN4220 zorlanma kullanılır. S. aureus RN4220 zorlanma virülan...

Enfeksiyonu (BAI) biomaterial ilgili ciddi bir klinik komplikasyondur. Önlenmesi ve tedavisinde BAI geliştirmek için yeni anlayışlar BAI içinde vivo patogenezinde daha iyi anlaşılmasını sağlayacaktır. Ancak, geçerli BAI hayvan modeller fare modelleri gibi pahalı, emek yoğun ve karmaşık cerrahi tekniklerde uzmanlaşmış personel eğitim gerektirir. Bu nedenle, bu modeller yüksek üretilen iş analizi için uygun değildir. Zebra balığı embriyo bir roman omurgalı hayvan modeli olarak BAI içinde vivo...

Tıbbi cihazlar ("Biyomalzeme" anılacaktır) çeşitli giderek modern tıpta dinlenme ya da insan vücudu parçaları1değiştirmek için kullanılır. Ancak, Biyomalzemeler implantasyonu enfeksiyona, implant ameliyatta önemli bir komplikasyonu olan bir biomaterial ilişkili enfeksiyon (BAI) adı verilen bir hasta açmaları. Staphylococcus aureus ve Staphylococcus epidermidis iki en yaygın bakteriyel türler BAI2,3,4için,5,6sorumlu vardır. Biyomalzeme formu bir yüzey bakteriyel biyofilm oluşumu için duyarlı implante. Ayrıca, yerel bağışıklık yanıtı bakteriyel temizleme azaltılmış etkinliğini neden implante Biyomalzeme tarafından dengesiz. Bakteri hastalık ilk izni esas olarak nötrofil, güçlü bir eklenen huzurunda bakterisidal kapasitesi azaltılmış veya biomaterial7implante infiltre tarafından gerçekleştirilir. Ayrıca, sonra nötrofil ilk akını kalan bakteri phagocytose ama etkili olamaz doku sızmak makrofajlar onları intracellularly, kombine varlığı bir sonucu olan sinyal dengesiz bağışıklık nedeniyle öldürmek biomaterial ve bakteri8. Böylece, Biyomalzemeler varlığı bakteri9,10,11,12,13 ve biyofilm oluşumu implante hücre içi yaşama kolaylaştırabilir Biyomalzeme4,14. Sonuç olarak, BAI başarısızlık yol ve implante Biyomalzeme, yenisiyle değiştirme için ek maliyeti2,15ile artan morbidite ve mortalite ve uzun süreli hastanede neden gerekir.
Anti-BAI stratejileri artan sayıda gelişmiş2,16,17davranıyorsun. İn vivo ilgili hayvan modellerinde bu stratejileri etkinliğinin değerlendirilmesi esastır. Ancak, geleneksel deneysel BAI hayvan modelleri (örneğin, fare modelleri) genellikle pahalı, zaman alıcı ve bu nedenle yüksek üretilen iş birden fazla stratejileri18test için uygun değildir. Son konak hücreleri ve bakteriler kollarındaki/floresan etiketlemeyi dayalı biyo-optik görüntüleme teknikleri geliştirilmesi tek küçük hayvanlarda BAI ilerleme ve ana bilgisayar-patojen/konak-malzeme etkileşimleri sürekli izlenmesi için izin verebilir Fareler18,19,20,21gibi. Ancak, bu teknik oldukça karmaşık ve henüz emekleme aşamasında, ve birkaç sorunu BAI18kantitatif analiz için ele alınması gerekir. Örneğin, bir yüksek meydan doz bakteriyel kolonizasyon görselleştirmek için gereklidir. Ayrıca, ışık saçılma ve Adsorpsiyon memeli test hayvanları da olmalıdır dokularda bioluminescence/floresan sinyallerin18,19,21ele. Bu nedenle, zaman içinde intravital görselleştirme ve kantitatif analiz için izin roman, uygun maliyetli hayvan modelleri BAI içinde vivo çalışmak için değerli tamamlayıcı sistemlerdir.
Zebra balığı (embriyo) ana bilgisayar-patojen etkileşim ve enfeksiyon Patogenez mikobakteriler22, Pseudomonas aeruginosa23, gibi çeşitli bakteri türlerinin dissekan için çok yönlü bir içinde vivo aracı olarak kullanılmıştır Escherichia coli24, Enterococcus faecalistir25ve stafilokoklar26,27. Zebra balığı embriyo optik şeffaflık, nispeten düşük bakım maliyeti ve memeliler28,29son derece benzer bir bağışıklık sistemi bulundurma gibi pek çok avantajı var. Bu son derece ekonomik, canlı model organizma intravital görselleştirme ve analiz enfeksiyon ilerleme ve ilişkili ana bilgisayar yanıt-e doğru28,29zebra balığı embriyo yapar. Görselleştirme hücre davranış içinde vivo, transgenik zebra balığı satırlarının bağışıklık hücreleri (, makrofajlar ve nötrofiller) farklı tipleri ile izin ve hatta fluorescently etiketli hücre altı yapıları ile geliştirilen28 ,29. Ayrıca, zebra balığı yüksek üreme oranı yüksek üretilen iş test sistemleri otomatik robot enjeksiyon, otomatik floresans miktar ve RNA dizisini analiz27, geliştirme imkanı sağlar 30.
Bu da çalışmanın, floresans görüntüleme teknikleri kullanarak biomaterial ilişkili enfeksiyon için bir zebra balığı embriyo model geliştirmek amaçlanmıştır. Bu amaçla, zebra balığı embriyo Kas dokusuna biomaterial mikroküreler huzurunda bakteri (S. aureus) enjekte etmek için bir yordam geliştirdi. Biz başka bir yerde başka bir S. aureus zorlanma10,31için açıklandığı gibi inşa edilmiştir S. aureus RN4220 ifade mCherry floresan protein (S. aureus- mCherry), kullanılır. Transgenik zebra balığı hattı (mpeg1: UAS/Kaede) Kaede makrofajlar32 ve mavi flüoresan polistren mikroküreler yeşil flüoresan protein kullanılan ifade. Bir önceki çalışmada, mikroküreler kas içi enjeksiyon biomaterial implantasyon taklit zebra balığı embriyo içine uygun33olduğunu göstermiştir. Kantitatif BAI ilerlemesini ve zaman içinde tek embriyo içinde ilişkili hücre infiltrasyonu, biz ki "ObjectJ" (bir eklenti ImageJ) içinde floresans yoğunluğunu ölçmek için ameliyat "Zebra balığı-Immunotest" proje dosyası olarak çözümlemeye ikamet eden bakteri ve mikroküreler33enjeksiyon yeri çevresinde infiltre makrofajlar. Buna ek olarak, biz koloni oluşturan numaralarını tespit Biyomalzeme olası etkilerini enfeksiyon üzerinde çalışmaya birimleri (CFU) varlığı ve yokluğu mikroküreler embriyo içinde bakteri. Bizim çalışmada burada geliştirilen Yöntemler ile zebra balığı embriyo biomaterial ilişkili enfeksiyonların içinde vivo çalışmak için umut verici, yeni bir omurgalı hayvan modeli olduğunu gösterir.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Tryptic soya agar</td>
			<td>BD Difco</td>
			<td>236950</td>
			<td>Media preparation unit at AMC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tryptic soya broth</td>
			<td>BD Difco</td>
			<td>211825</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyvinylpyrrolidone40</td>
			<td>Applichem</td>
			<td>A2259.0250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 &#181;m diameter polystyrene microspheres (blue fluorescent)</td>
			<td>Life technology/ThemoFisher</td>
			<td>F8829</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass microcapilary (1 mm O.D. x 0.78 mm I.D.)</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>30-0038</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropipette puller instrument</td>
			<td>Sutter Instrument Inc</td>
			<td>Flaming p-97</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light microscope LM 20</td>
			<td>Leica</td>
			<td>MDG33 10450123</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-aminobenzoic acid (Tricaine)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E10521-50G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose MP</td>
			<td>Roche</td>
			<td>11388991001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereo fluorescent microscope LM80</td>
			<td>Leica</td>
			<td>MDG3610450126</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microloader pipette tips</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5242956.003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micromanipulator M3301 with M10 stand</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>00-42-101-0000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FemtoJet express micro-injector</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5248ZO100329</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtrube 2ml pp</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>72.693.005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zirconia beads</td>
			<td>Bio-connect</td>
			<td>11079124ZX</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MagNA lyser</td>
			<td>Roche</td>
			<td>41416401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MSA-2 plates (Mannitol Salt Agar-2)</td>
			<td>Biomerieux</td>
			<td>43671</td>
			<td>Chapmon 2 medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methyl cellulose 4000cp</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>MO512-250G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloramphenicol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C0378</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gyrotory shaker (for bacterial growth)</td>
			<td>New Brunswick Scientific</td>
			<td>G10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zebrafish incubator</td>
			<td>VWR</td>
			<td>Incu-line</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cuvettes</td>
			<td>BRAND</td>
			<td>759015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Hettich-Zentrifugen</td>
			<td>ROTANTA 460R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spectrometer</td>
			<td>Pharmacia biotech</td>
			<td>Ultrospec&#174;2000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F6521-1EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>48 well-plates</td>
			<td>Greiner bio-one</td>
			<td>677180</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 well-plates</td>
			<td>Greiner bio-one</td>
			<td>655161</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri-dish</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>353003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri-dish</td>
			<td>Biomerieux</td>
			<td>NL-132</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageJ</td>
			<td>Not applicable</td>
			<td>Not applicable</td>
			<td>link: https://imagej.nih.gov/ij/download.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GraphPad 7.0</td>
			<td>Prism</td>
			<td>Not applicable</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a zebrafish embryo model for in vivo visualization and intravital analysis of biomaterial-associated staphylococcus aureus infection

Enfeksiyonu (BAI) biomaterial ilgili Biyomalzeme/tıbbi cihazlar başarısızlığın önemli bir nedenidir. Staphylococcus aureus BAI önemli patojenler biridir. Fare modelleri pahalı ve zaman alıcı ve bu nedenle yüksek üretilen iş analizi için uygun değildir gibi geçerli deneysel BAI memeli hayvan modelleri. Böylece, roman hayvan modelleri BAI içinde vivo soruşturma için tamamlayıcı sistemler olarak istenilen. Mevcut çalışma, zebra balığı embriyo model içinde vivo görselleştirme ve floresan mikroskopi üzerinde dayalı Biyomalzeme huzurunda bakteriyel enfeksiyon intravital çözümleme geliştirmek amaçlanmıştır. Buna ek olarak, provoke makrofaj yanıt incelenmiştir. Bu amaçla, floresan protein ifade S. aureus ve transgenik zebra balığı embriyo onların makrofajlar floresan proteinler ifade kullanılan ve bakteriler tek başına veya birlikte mikroküreler kas içine enjekte etmek için bir prosedür geliştirilmiştir doku embriyo. Zaman içinde canlı embriyolar bakteriyel enfeksiyon ilerleme izlemek için mikroskobik floresan bakteri Puanlama basit fakat güvenilir bir yöntem geliştirdi. Mikroskobik Puanlama sonuçları ile 20'den fazla koloni oluşturan birim (CFU) bakterilerin tüm embriyoların bakterilerin olumlu bir floresan sinyal verdiğini gösterdi. Biyomalzeme olası etkilerini enfeksiyon üzerinde çalışmaya, biz CFU numaralarını S. aureus ve 10 µm polistren mikroküreler (PS10) olmadan embriyo modeli Biyomalzeme olarak belirledi. Ayrıca, ObjectJ proje dosya "Zebra balığı-Immunotest ImageJ içinde faaliyet" S. aureus enfeksiyon ve PS10 olmadan zaman içinde floresans yoğunluğunu ölçmek için kullanılır. Her iki yöntem sonuçlarından S. aureus daha yüksek sayıda embriyo mikroküreler, biomaterial huzurunda bir artan enfeksiyon duyarlılık gösteren olmadan içinde mikroküreler ile enfekte embriyo gösterdi. Böylece, bu da çalışmanın potansiyel zebra balığı embriyo modelinin BAI burada geliştirilen Yöntemler ile çalışmaya gösterir.

Bu da çalışmanın zebra balığı embriyo uygulanabilirliği enfeksiyonu biomaterial ilgili soruşturma için bir roman omurgalı hayvan modeli olarak değerlendirildi. Mikroenjeksiyon tekniği farklı bakteri türleri zebra balığı embriyo enfeksiyon22,26,27,30,36neden enjekte etmek yaygın olarak kullanılmış. <strong ...

Watch this Scientific Journal Video about A Zebrafish Embryo Model for In Vivo Visualization and Intravital Analysis of Biomaterial-associated Staphylococcus aureus Infection at JoVE.com

A Zebrafish Embryo Model for In Vivo Visualization and Intravital Analysis of Biomaterial-associated Staphylococcus aureus Infection

Bir zebra balığı embriyo Model In Vivo görselleştirme ve Staphylococcus aureus Intravital analiz Biomaterial ilişkili enfeksiyon

Bu da çalışmanın bir zebra balığı embriyo modeli içinde vivo görselleştirme ve enfeksiyonu floresans mikroskobu göre zaman içinde biomaterial ilgili intravital analizi için açıklar. Bu model içinde vivo biomaterial ilişkili enfeksiyonların çalışmak için fare modelleri gibi memeli hayvan modelleri tamamlayan gelecek vaat eden bir sistemdir.

Biomaterial-associated infection (BAI) is a major cause of the failure of biomaterials/medical devices. Staphylococcus aureus is one of the major ...

Bu yöntem, biyomalzemelerin enfeksiyona yatkınlığı nasıl etkilediği, bu tür enfeksiyonların ilerlemesini nasıl etkilediği ve bu tür biyomalzemelerin etrafındaki bağışıklık hücre davranışlarını nasıl etkilediği ile ilgili anahtar soruların yanıtlatılabilir. Bu tekniğin en büyük avantajı, biyomateryalle ilişkili enfeksiyonların in vivo görselleştirme ve intravital analizine olanak sağlayan yeni bir hayvan modeli sağlamasıdır. Biyomalzeme mikrokürelerinin enjeksiyonu çok hassas bir işlem olduğu için bu yöntemin görsel gösterimi çok önemlidir.Bir bakteri sadece süspansiyon oluşturmak için, ilk transfer dört ila beş floresan Staph aureus mCherry suşu, triptik soya tarım plakaları üzerinde kültürlü 10 kloramfenikol mililitre başına mikrogram ile desteklenen 10 kloramfenikol ile takviye lifanikol mililitre, orta logarritmik büyüme aşamasında büyüme için 37 derece santigrat santigrat. Kültür 0,4 ila 0,8 620 nanometre optik yoğunluk ölçümü ulaştığında, santrifüj ile bakteri toplamak ve yıkama başına steril PBS bir mililitre ile hücreleri iki kez yıkayın. İkinci yıkamadan sonra, pvp 1.1 mililitre pelet resuspend, ve tekrar optik yoğunluğu ölçmeden önce bakteriyel süspansiyon girdap.Daha sonra bakteri sadece süspansiyon oluşturmak için deneysel gereksinimlerine göre PVP ile bakteriyel süspansiyon konsantrasyonu ayarlayın. Bir bakteri mikrosfer süspansiyon oluşturmak için, ticari polistiren mikrosfersan santrifüj, PS-10, ve bakterilerin sadece süspansiyon mikrosfer pelet resuspend. Bakterilerin mikrosfer süspansiyonunun 1/2 hacmi pvp ile seyreltin ve süspansiyonda uygun bir bakteri konsantrasyonuna ulaşın ki bu da bakterilerin sadece süspansiyonunda bunun yaklaşık 2/3'üdür.Girdap ile süspansiyon karıştırın. Sadece bakteri ve bakteri mikrosfer süspansiyon konsantrasyonu kontrol etmek için, 96-iyi plaka bireysel kuyulara her süspansiyon 100 mikrolitre ekleyin. Sonraki kuyularda 90 mikrolitre steril PBS'deki süspansiyonların 10 mikrolitresini, her seyreltme adımı için taze ipuçları kullanarak seri olarak seyreltin.Sulandırılmamış ve seyreltilmiş bakteriyel süspansiyonların 10 mikrolitrelik aliquotlarını agar plakalarına uygulayın ve plakaları bir gecede 37 santigrat derecede kuluçkaya yatırın. Ertesi sabah, sadece hazırlanan bakterilerve bakteri mikrosfer süspansiyonları içindeki bakteri sayısını hesaplamak için kolonileri sayın. Zebra balığı embriyolarını topladıktan sonra, saydam olmayan unviable embriyoları atın ve taze E3 ortamda 28 santigrat derecede 100 mililitrelik Petri kabı başına yaklaşık 60 embriyo kuluçkaya yatırın.Anesteziden sonra floresan mikroskopi için GFP pozitif embriyoları ayırın. E3 orta 100 mililitrepetri çanak onları aktarın. Bir enjeksiyon kalıbı oluşturmak için, 100 mililitrelik Petri kabını %1 ila %1,5 sıvı agarose ile doldurun.Agarose oluklar oluşturmak için plastik bir kalıp şablonu kullanın. Agarose katılaşmış olduğunda, kalıp çıkarın, ve E3 orta ile kapsayacak 0.02% tricaine ile takviye. Bir gün üç post-fertilizasyon, oküler bir ölçek çubuğu ile Bir ışık mikroskop altında yaklaşık 20 mikrometre dış çapı ile ipuçları elde etmek için bir çekti cam mikrokapiller iğne ucu kırmak için forceps kullanın.İğne ucunun açılmasımikrokürelerin enjeksiyonu için pratiktir. AçılışÇapı farklı boyutlardaki mikroküreler için ayarlanmalıdır. Daha sonra iğneyi yaklaşık 20 mikrolitre bakteri mikrosferi veya yalnızca bakteri süspansiyonu ile yüklemek için bir Microloader pipet ucu kullanın ve iğneyi mikroenjektöre bağlı bir mikromanipülatöre monte edin.Şimdi seçilen embriyoları oluklü agarose plakasına aktarın. Embriyoların uyuşdurulması için beş dakika bekledikten sonra, embriyoları enjeksiyonları için tek bir oryantasyonda oluklar içinde hizalayın. Mikroenjektörü uygun enjeksiyon ayarlarına ayarlayın ve iğneyi stereo mikroskop altında 45 ila 60 derecelik bir açıyla ilk embriyonun kas dokusuna yerleştirin.İğneyi gerektiği gibi doku içindeki pozisyonu ayarlamak için yavaşça ileri geri hareket ettirin ve yüklenen süspansiyonu enjekte etmek için mikroenjektör ayak pedalını kullanın. Zebrabalığı embriyolarının dokusuna bir bakteri mikrosfer süspansiyon enjekte ederken, iğne hafifçe ama sabit bir el ile takılmalıdır. Başarılı bir ekleme den sonra, enjeksiyondan önce malzemeler için bir boşluk oluşturulmalıdır.Tüm embriyolar enjekte edildiğinde, stereo floresan mikroskobu altında başarılı bir enjeksiyon için embriyopuan, ve günlük orta değişiklikler ile 48-iyi plakalar bireysel kuyularda trikotin olmadan E3 ortamda embriyolar korumak. Koloni oluşturan birim nicelleştirme ile enfeksiyon ilerlemesini izlemek için, rastgele enjeksiyondan kısa bir süre sonra bireysel iki mililitrelik mikrotüpler içine beş ila altı canlı enfekte embriyolar transfer ve hafifçe steril PBS ile embriyoları yıkayın. Yıkar attıktan sonra, her tüpe 100 mikrolitre steril PBS ekleyin ve ardından iki ila üç adet steril iki milimetre çapındazirkon boncuk ekleyin.Sonra 30 saniye boyunca 3, 500 rpm bir homogenizer embriyoezmek ve kültür homojen olarak gösterildiği gibi. Stereo floresan mikroskobu aşamasına %0,02 trikotin içeren E3 ortamı içeren 100 milimetrelik Petri kabı yerleştirin ve Petri kabına 500 mikrolitre %2 metilselüloz ekleyin. Floresan mikroskopisi ile enfeksiyon ilerlemesini izlemek için, uygun parlak alan ve floresan filtrelerdonabilir, bir Petri kabında metilselüloz bir noktada yatay anestezi enfekte embriyolar hizalamak.160x büyütme de odak içine hasarlı enjekte doku getirmek için parlak alan filtre kullanın. Z-stack derinliğini 10 mikrometreye ve adım boyutunu beş mikrometreolarak ayarlayın ve art arda üç görüntünün kaydedilmesine izin verin. Daha sonra 160x büyütme de aynı optimize ayarları altında bireysel embriyolar görüntü.Görüntüleri analiz etmek için ImageJ'deki ObjectJ eklentisini kullanın. Staph aureus intramüsküler enjeksiyon embriyolarda doza bağlı bir enfeksiyon başlatır, embriyolarda gözlenen uygun enfeksiyon ilerlemesi ile gün bir ve iki post-enjeksiyon yüksek zorluk dozlarda uygulandı. Gösterildiği gibi, mikrokürelerin varlığı nda veya yokluğunda benzer sayıda bakteri enjekte etmek mümkündür.Tipik olarak, Staph aureus mCherry 20'den fazla koloni oluşturan birimleri ile tüm embriyolar mikroskobik skorlama altında floresan için pozitif, mikrokürelerin varlığı önemli ölçüde düşük doz da sorunlu embriyolarda enfeksiyon ilerlemesini etkilemez gibi görünse de. Yüksek dosed meydan embriyolarda, mikroskobik skorlama mikrosferli veya mikroküresiz enfekte embriyo sıklığında herhangi bir farklılık göstermez, ancak kantitatif kültür, enjeksiyon dan sonra iki gün içinde Staph aureus grubundan alınanlara kıyasla Staph aureus artı mikrosfer grubundaki embriyolardan alınan daha yüksek koloni oluşturan birim sayılarını ortaya koymaktadır. Bir biyomalzemenin varlığı hem bağışıklık hücresi yanıtını hem de enfeksiyona ilk yatkınlığı etkiler.Örneğin, enjeksiyon dan sonra beş saat, bir Staph aureus sadece enjeksiyon yanıt olarak makrofaj infiltrasyon önemli ölçüde bir Staph aureus artı mikrosfer enjeksiyonyanıt olarak daha yüksektir, bir gün post-enjeksiyon, mikroküreler ile embriyolar mikrosferler olmadan embriyolar daha Staph aureus enfeksiyonu önemli ölçüde daha yüksek düzeyde sergilerken. İğne ucunun açılmasını her zaman biyomalzemelerin büyüklüğüne göre ayarlamayı ve sadece bakterilerin süspansiyonu ve mikrosfer süspansiyonu ndaki bakteri konsantrasyonu oranını ayarlamak önemlidir. Bu zebrabalığı embriyo modeli in vivo görselleştirme ve enfeksiyon ilerlemesi ve biyomalzemelerin varlığı ve yokluğunda provoke bağışıklık hücresi yanıtları intravital analizi sağlar.Bu teknik, güvenli tıbbi cihazlar için antimikrobiyal biyomalzemeler ve tedavi stratejilerinin geliştirilmesi için yeni bir bütün-hayvan modeli sağlar.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

A Zebrafish Embryo Model for In Vivo Visualization and Intravital Analysis of Biomaterial-associated Staphylococcus aureus Infection

Creating Two-Dimensional Patterned Substrates for Protein and Cell Confinement

Protein ve hücre Etrafının İki Boyutlu Desenli Yüzeyler Oluşturma

Microcontact printing provides a rapid, highly reproducible method for the creation of well-defined patterned substrates.1  While microcontact printing ...

Cellular Lipid Extraction for Targeted Stable Isotope Dilution Liquid Chromatography-Mass Spectrometry Analysis

Hücresel Lipid Ekstraksiyon Hedefli Kararlı İzotop Seyreltme Sıvı Kromatografi-Kütle Spektrometresi Analizi

The metabolism of fatty acids, such as arachidonic acid (AA) and linoleic acid (LA), results in the formation of oxidized bioactive lipids, including ...

Simple Microfluidic Devices for in vivo Imaging of C. elegans, Drosophila and Zebrafish

Simple Microfluidic Devices for in vivo Imaging of C. elegans, Drosophila and Zebrafish

Için basit Mikroakışkan Cihazlar<em&gt; In vivo</emVe&gt; Görüntüleme<em&gt; C. elegans</em&gt;,<em&gt; Drosophila</em&gt; Ve Zebra balığı

Micro fabricated fluidic devices provide an accessible micro-environment for in vivo studies on small organisms. Simple fabrication processes are ...

Viral Nanoparticles for In vivo Tumor Imaging

Viral Nanoparticles for In vivo Tumor Imaging

Viral Nanopartiküller<em&gt; In vivo</em&gt; Tümör Görüntüleme

The use of nanomaterials has the potential to revolutionize materials science and medicine. Currently, a number of different nanoparticles are being ...

Mass Cytometry: Protocol for Daily Tuning and Running Cell Samples on a CyTOF Mass Cytometer

Kütle Sitometri: Bir CyTOF Kütle Sitometre Daily Tuning ve Koşu Hücre Örnekleri için protokol

In recent years, the rapid analysis of single cells has commonly been performed using flow cytometry and fluorescently-labeled antibodies. However, the ...

Biosensor for Detection of Antibiotic Resistant Staphylococcus Bacteria

Antibiyotik Dirençli Stafilokok bakteri tespiti için biyosensör

A structurally transformed lytic bacteriophage having a broad host range of Staphylococcus aureus strains and a penicillin-binding protein (PBP 2a) ...

A Full Skin Defect Model to Evaluate Vascularization of Biomaterials In Vivo

A Full Skin Defect Model to Evaluate Vascularization of Biomaterials In Vivo

A Tam Cilt Hata Modeli Biyomateryallerin vaskülarizasyonunu değerlendirin<em&gt; In Vivo</em

Insufficient vascularization is considered to be one of the main factors limiting the clinical success of tissue-engineered constructs. In order to ...

Adapting the Electrospinning Process to Provide Three Unique Environments for a Tri-layered In Vitro Model of the Airway Wall

Adapting the Electrospinning Process to Provide Three Unique Environments for a Tri-layered In Vitro Model of the Airway Wall

Elektrospinning Süreci Uyarlama bir Tri-katmanlı için üç Benzersiz ortamlar sağlamak için<em&gt; In Vitro</em&gt; Havayolu Wall Modeli

Electrospinning is a highly adaptable method producing porous 3D fibrous scaffolds that can be exploited in in vitro cell culture. Alterations to ...

Rigid Embedding of Fixed and Stained, Whole, Millimeter-Scale Specimens for Section-free 3D Histology by Micro-Computed Tomography

Katı, sabit ve lekeli, genel olarak, milimetre ölçekli örnekler için bölüm ücretsiz 3D Histoloji mikro bilgisayarlı tomografi tarafından katıştırma

For over a hundred years, the histological study of tissues has been the gold standard for medical diagnosis because histology allows all cell types in ...

Colorimetric Analysis of Alkaline Phosphatase Activity in S. aureus Biofilm

Colorimetric Analysis of Alkaline Phosphatase Activity in S. aureus Biofilm

Renkölçer analiz, alkalin fosfataz etkinliğinde S. aureus biyofilm

Alkaline phosphatase (ALP) is a common enzyme expressed in both prokaryotic and eukaryotic cells. It catalyzes the hydrolysis of phosphate monoesters from ...