Name: methionine functionalized biocompatible block copolymers for targeted plasmid dna delivery
Uploaded: 2019-08-06T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Methionine Functionalized Biocompatible Block Copolymers for Targeted Plasmid DNA Delivery at JoVE.com

Cette recherche a été soutenue par le National Key Research and Development Program of China (No. 2016YFC0905900), National Natural Science Foundation of China (Nos. 81801827, 81872365), Basic Research Program of Jiangsu Province (Natural Science Foundation, No. BK20181086), et Jiangsu Cancer Hospital Scientific Research Fund (No. ZK201605).

1. Synthèse du polymère BNHEMA (PBNHEMA)
<ol><li>Dissoudre 1,87 g de N, N-bis(2-hydroxyethyl)methacrylamide (BNHEMA) dans 1 ml d'eau distillée dans une bouteille de polymérisation. REMARQUE : La bouteille de polymérisation est un flacon à fond rond avec un bouchon en caoutchouc et un agitateur magnétique.</li>
	<li>Dissoudre 0,03 g de 4-cyanopentanoic acide dithiobenzoate (CTP) et 0,02 g de 4,4'-azobis (4-cyanovalericacid ) (ACVA) en 0.5 mL de 1,4-dioxane dans un beaker de 5 mL. Ensuite, ajo...

<ol>
	<li>Flotte, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+and+Cell+Therapy+in+2018:+A+Look+Ahead.">Gene and Cell Therapy in 2018: A Look Ahead.</a> Human Gene Therapy. 29, 1-1 (2018).</li><li>Huang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanomedicine-based+combination+anticancer+therapy+between+nucleic+acids+and+small-molecular+drugs.">Nanomedicine-based combination anticancer therapy between nucleic acids and small-molecular drugs.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 115, 82-97 (2017).</li><li>Wu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversing+of+multidrug+resistance+breast+cancer+by+co-delivery+of+P-gp+siRNA+and+doxorubicin+via+folic+acid-modified+core-shell+nanomicelles.">Reversing of multidrug resistance breast cancer by co-delivery of P-gp siRNA and doxorubicin via folic acid-modified core-shell nanomicelles.</a> Colloids &amp; Surfaces B Biointerfaces. 138, 60-69 (2016).</li><li>Quader, S., Kataoka, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanomaterial-Enabled+Cancer+Therapy.">Nanomaterial-Enabled Cancer Therapy.</a> Molecular Therapy. 25, 1501-1513 (2017).</li><li>Wu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multivalent+methionine-functionalized+biocompatible+block+copolymers+for+targeted+siRNA+delivery+and+subsequent+reversal+effect+on+adriamycin+resistance+in+human+breast+cancer+cell+line+MCF-7/ADR.">Multivalent methionine-functionalized biocompatible block copolymers for targeted siRNA delivery and subsequent reversal effect on adriamycin resistance in human breast cancer cell line MCF-7/ADR.</a> Journal of Gene Medicine. 19, e2969 (2017).</li><li>Szwarc, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=‘Living’+Polymers.">‘Living’ Polymers.</a> Nature. 178, 168-169 (1956).</li><li>Szwarc, M., Rembaum, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polymerization+of+methyl+methacrylate+initiated+by+an+electron+transfer+to+the+monomer.">Polymerization of methyl methacrylate initiated by an electron transfer to the monomer.</a> Journal of Polymer Science. 22 (100), 189-191 (1956).</li><li>Mukhopadhyay, R. D., Ajayaghosh, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Living+supramolecular+polymerization.">Living supramolecular polymerization.</a> Science. 349, 241 (2015).</li><li>Ozkose, U. U., Altinkok, C., Yilmaz, O., Alpturk, O., Tasdelen, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In-situ+preparation+of+poly(2-ethyl-2-oxazoline)/clay+nanocomposites+via+living+cationic+ring-opening+polymerization.">In-situ preparation of poly(2-ethyl-2-oxazoline)/clay nanocomposites via living cationic ring-opening polymerization.</a> European Polymer Journal. 88, 586-593 (2017).</li><li>Wu, W., Wang, W., Li, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Star+polymers:+Advances+in+biomedical+applications.">Star polymers: Advances in biomedical applications.</a> Progress in Polymer Science. 46, 55-85 (2015).</li><li>Boyer, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Copper-Mediated+Living+Radical+Polymerization+(Atom+Transfer+Radical+Polymerization+and+Copper(0)+Mediated+Polymerization):+From+Fundamentals+to+Bioapplications.">Copper-Mediated Living Radical Polymerization (Atom Transfer Radical Polymerization and Copper(0) Mediated Polymerization): From Fundamentals to Bioapplications.</a> Chemical Reviews. 116, 1803-1949 (2016).</li><li>Keddie, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+guide+to+the+synthesis+of+block+copolymers+using+reversible-addition+fragmentation+chain+transfer+(RAFT)+polymerization.">A guide to the synthesis of block copolymers using reversible-addition fragmentation chain transfer (RAFT) polymerization.</a> Chemical Society Reviews. 43, 496-505 (2014).</li><li>Wu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guanidinylated+3-gluconamidopropyl+methacrylamide-s-3-aminopropyl+methacrylamide+copolymer+as+siRNA+carriers+for+inhibiting+human+telomerase+reverse+transcriptase+expression.">Guanidinylated 3-gluconamidopropyl methacrylamide-s-3-aminopropyl methacrylamide copolymer as siRNA carriers for inhibiting human telomerase reverse transcriptase expression.</a> Drug Delivery. 20, 296-305 (2013).</li><li>Qin, Z., Liu, W., Guo, L., Li, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+on+Guanidinated+N-3-Aminopropyl+Methacrylamide-N-2-Hydroxypropyl+Methacrylamide+Co-polymers+as+Gene+Delivery+Carrier.">Studies on Guanidinated N-3-Aminopropyl Methacrylamide-N-2-Hydroxypropyl Methacrylamide Co-polymers as Gene Delivery Carrier.</a> Journal of Biomaterials Science, Polymer Edition. 23, 1-4 (2012).</li><li>Friedman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Applications+of+the+Ninhydrin+Reaction+for+Analysis+of+Amino+Acids,+Peptides,+and+Proteins+to+Agricultural+and+Biomedical+Sciences.">Applications of the Ninhydrin Reaction for Analysis of Amino Acids, Peptides, and Proteins to Agricultural and Biomedical Sciences.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 52, 385-406 (2004).</li><li>Habuchi, S., Yamamoto, T., Tezuka, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthesis+of+Cyclic+Polymers+and+Characterization+of+Their+Diffusive+Motion+in+the+Melt+State+at+the+Single+Molecule+Level.">Synthesis of Cyclic Polymers and Characterization of Their Diffusive Motion in the Melt State at the Single Molecule Level.</a> Journal of Visualized Experiments. (115), 1-9 (2016).</li><li>Rao, D. A., Nguyen, D. X., Mishra, G. P., Doddapaneni, B. S., Alani, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+and+Characterization+of+Individual+and+Multi-drug+Loaded+Physically+Entrapped+Polymeric+Micelles.">Preparation and Characterization of Individual and Multi-drug Loaded Physically Entrapped Polymeric Micelles.</a> Journal of Visualized Experiments. 102, 1-5 (2015).</li></ol>

Cette étude a introduit une série de porteurs de gènes cationiques de polymère de bloc de BNHEMA-b-APMA. Ces polymères de bloc ont été synthétisés par l'intermédiaire de la méthode réversible de transfert de chaîne d'addition-fragmentation (RAFT). Le segment hydrophile BNHEMA a été introduit pour améliorer la solubilité. Les groupes de méthionine et de guanidine ont été modifiés pour améliorer la capacité cible et l'efficacité de la transfection5. Le contenu de la chaîne A...

Ces dernières années, la thérapie génique a émergé pour la livraison thérapeutique d'acides nucléiques comme médicaments pour traiter toutes sortes de maladies1. Le développement de médicaments géniques, y compris l'ADN plasmide (pDNA) et le petit ARN interférant (siRNA) repose sur la stabilité et l'efficacité du système d'administration de médicaments (DDS)2. Parmi tous les Porteurs de Polymère Cationic, les porteurs de polymères cationic ont les avantages d'une bonne stabilité, d'une faible immunogénicité, et d'une préparation et d'une modification faciles, qui donnent aux porteurs de polymères cationic de larges perspectives d'application3,4. Pour des applications pratiques en biomédecine, les chercheurs doivent trouver un porteur depolymère cationic avec l'efficacité élevée, la faible toxicité, et la bonne capacité de ciblage 5. Parmi tous les porteurs de polymères, les copolymères de bloc sont l'un des systèmes de livraison de médicaments les plus utilisés. Les copolymères de bloc sont intensivement étudiés pour leur propriété d'auto-assemblage et leurs capacités à former des micelles, des microsphères, et des nanoparticules dans la livraisondedrogue 5. Les copolymères de bloc peuvent être synthétisés par l'intermédiaire des méthodes vivantes de polymérisation ou de chimie de clic.
En 1956, Szwarc et coll. ont soulevé le sujet de la polymérisation vivante, la définissant comme une réaction sans réactions en chaîne6,7. Depuis lors, plusieurs techniques ont été développées pour synthétiser les polymères à l'aide de cette méthode; ainsi, la polymérisation vivante est considérée comme un jalon de la science des polymères8. La polymérisation vivante peut être classée dans la polymérisation anionique vivante, lapolymérisation cationic vivante, et la polymérisation radicale de désactivation réversible (RDRP) 9. Les polymérisations anioniques/cationiques vivantes ont une portée limitée d'application en raison de leurs conditions de réaction strictes10. La polymérisation radicale contrôlée/vivante (CRP) a des conditions de réaction douces, disposition commode, et bon rendement et a donc été un foyer de recherche important ces dernières années11. Dans le CRP, les chaînes de propagation actives sont réversiblement passivated en dormantes pour réduire la concentration des radicaux libres et éviter la réaction bimoléculaire des radicaux de chaîne de propagation. La polymérisation d'addition ne peut se poursuivre que si les chaînes de propagation dormantes inactives sont réversiblement animées en radicaux de chaîne. En tant que l'une des formes les plus prometteuses de polymérisation radicale vivante, la polymérisation réversible de transfert de chaîne d'addition-fragmentation (RAFT) est une méthode applicable aux polymères de bloc de rendement avec le poids et la structure moléculaires contrôlés, le poids moléculaire étroit distribution, et portant les groupes fonctionnels12. La clé du succès de la polymérisation RAFT est l'effet des agents de transfert de chaîne, généralement dithioesters, qui possèdent une constante de transfert de chaîne très élevé.
Dans cet article, une méthode de polymérisation RAFT a été conçue pour préparer le polymère de bloc BNHEMA-b-APMA, prenant 4,4'-azobis(4-cyanovaleric acid) (ACVA) comme agent initiateur et 4-cyanopentanoic acide dithiobenzoate (CTP) comme agent de transfert de chaîne. La polymérisation RAFT a été utilisée deux fois pour introduire BNHEMA dans les porteurs de polymères cationiques. Par la suite, les groupes d'amine dans la chaîne d'APMA ont été modifiés avec la méthionine et le réagent de guanidinylation 1-amidinopyrazole hydrochlorure. En faisant l'utilisation des charges positives du réactif de guanidinylation et de la structure de squelette de polymère de methacrylamide, l'efficacité cellulaire d'apaisement des porteurs obtenus de polymère de bloc a été améliorée.

<table>
<tbody>
<tr>
<td>1-hydroxybenzotriazole</td>
<td>Macklin Biochemical Co., Ltd,China</td>
<td>H810970</td>
<td>&ge;97.0%</td>
</tr>
<tr>
<td>1,4-dioxane</td>
<td>Sinopharm chemical reagent Co., Ltd, China</td>
<td>10008918</td>
<td>AR</td>
</tr>
<tr>
<td>1-amidinopyrazole Hydrochloride</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>A107935</td>
<td>98%</td>
</tr>
<tr>
<td>1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide hydrochloride</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>E106172</td>
<td>AR</td>
</tr>
<tr>
<td>4,4&#x2019;-azobis(4-cyanovaleric acid)</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>A106307</td>
<td>Analytical reagent (AR)</td>
</tr>
<tr>
<td>4-cyano-4-(phenylcarbonothioylthio)pentanoic Acid</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>C132316</td>
<td>&#x003E;97%(HPLC)</td>
</tr>
<tr>
<td>Acetate</td>
<td>Sinopharm chemical reagent Co., Ltd, China</td>
<td>81014818</td>
<td>AR</td>
</tr>
<tr>
<td>Acetone</td>
<td>Sinopharm chemical reagent Co., Ltd, China</td>
<td>10000418</td>
<td>AR</td>
</tr>
<tr>
<td>Agarose</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>A118881</td>
<td>High resolution</td>
</tr>
<tr>
<td>Ascorbic acid</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>A103533</td>
<td>AR</td>
</tr>
<tr>
<td>DMSO</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>D103272</td>
<td>AR</td>
</tr>
<tr>
<td>Ethylene glycol</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>E103319</td>
<td>AR</td>
</tr>
<tr>
<td>N-(3-aminopropyl)methacrylamide hydrochloride</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>N129096</td>
<td>&ge;98.0%(HPLC)</td>
</tr>
<tr>
<td>N,N-bis(2-hydroxyethyl)methacrylamide</td>
<td>ZaiQi Bio-Tech Co.,Ltd, China</td>
<td>CF259748</td>
<td>&ge;98.0%(HPLC)</td>
</tr>
<tr>
<td>Ninhydrin</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>N105629</td>
<td>AR</td>
</tr>
<tr>
<td>PBS buffer</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>P196986</td>
<td>pH 7.4</td>
</tr>
<tr>
<td>Plasmid DNA</td>
<td>BIOGOT Co., Ltd, China</td>
<td>pDNA-EGFP</td>
<td>pDNA-EGFP</td>
</tr>
<tr>
<td>Plasmid DNA</td>
<td>BIOGOT Co., Ltd, China</td>
<td>Pdna</td>
<td>pDNA</td>
</tr>
<tr>
<td>Sodium carbonate decahydrate</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>S112589</td>
<td>AR</td>
</tr>
<tr>
<td>Trimethylamine</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>T103285</td>
<td>AR</td>
</tr>
</tbody>
</table>

methionine functionalized biocompatible block copolymers for targeted plasmid dna delivery

La polymérisation réversible du transfert de chaîne de fragmentation-ajout (RAFT) intègre les avantages de la polymérisation radicale et de la polymérisation vivante. Ce travail présente la préparation des copolymères biocompatibles biocompatibles fonctionnales de méthionine par l'intermédiaire de la polymérisation de RAFT. Tout d'abord, N,N-bis(2-hydroxyethyl)methacrylamide-b-N-(3-aminopropyl)methacrylamide (BNHEMA-b-APMA, BA) a été synthétisé via la polymérisation RAFT à l'aide de 4,4'-azobis(4-acide cyanovaleric) (ACVA) comme un l'agent d'initiation et le dithiobenzoate d'acide 4-cyanopentanoic (CTP) comme agent de transfert de chaîne. Par la suite, N,N-bis(2-hydroxyethyl)methacrylamide-b-N-(3-guanidinopropyl)methacrylamide (méthionine greffée BNHEMA-b-GPMA, mBG) a été préparée en modifiant les groupes d'amine en APMA avec de la méthionine et de la guanidine Groupes. Trois types de polymères de bloc, mBG1, mBG2, et mBG3, ont été synthétisés pour la comparaison. Une réaction de ninhydrin a été employée pour quantifier le contenu d'APMA ; mBG1, mBG2 et mBG3 avaient respectivement 21 %, 37 % et 52 % d'APMA. Les résultats de la chromatographie de perméation de gel (GPC) ont prouvé que les copolymères de BA possèdent des poids moléculaires de 16.200 (BA1), 20.900 (BA2), et 27.200 (BA3) g/mol. La capacité de complexation de l'ADN plasmide (pDNA) des porteurs de gènes copolymères de bloc obtenus a également été étudiée. Les rapports de charge (N/P) étaient 8, 16, et 4 quand le pDNA a été complexe complètement avec mBG1, mBG2, mBG3, respectivement. Lorsque le rapport N/P des polyplexes de mBG/pDNA était plus élevé que 1, le potentiel Zeta de mBG était positif. À un rapport N/P entre 16 et 32, la taille moyenne des particules de polyplexes mBG/pDNA se siant entre 100 et 200 nm. Dans l'ensemble, ce travail illustre un protocole simple et pratique pour la synthèse du porte-avions de copolymère de bloc.

La BNHEMA a été alimentée en fonction du degré objectif de polymérisation indiqué dans le tableau1; la procédure de synthèse de mBG est montrée dans la figure 1. Tout d'abord, l'homopolymère de BNHEMA a été préparé par l'intermédiaire de la méthode réversible de transfert de chaîne d'addition-fragmentation (RAFT) dans le système d'eau-dioxane, utilisant le dithiobenzoate d'acide 4-cyanopentanoic comme agent de transfert de chaîne. Deuxièmement, PBNHEMA a...

Watch this Scientific Journal Video about Methionine Functionalized Biocompatible Block Copolymers for Targeted Plasmid DNA Delivery at JoVE.com

Methionine Functionalized Biocompatible Block Copolymers for Targeted Plasmid DNA Delivery

Ce travail présente la préparation des copolymères biocompatibles biocompatibles de bloc de méthionine (mBG) par l'intermédiaire de la méthode réversible de transfert de chaîne d'addition-fragmentation (RAFT). La capacité de complexation d'ADN plasmide du MBG obtenu et de leur efficacité de transfection ont été également étudiées. La méthode RAFT est très bénéfique pour les monomères polymérisantes contenant des groupes fonctionnels spéciaux.

Copolymères de bloc biocompatibles biocompatibles de methionine pour la livraison ciblée de Plasmid d'ADN

Reversible addition-fragmentation chain transfer (RAFT) polymerization integrates the advantages of radical polymerization and living polymerization. This ...

Les porteurs de médicaments en polymère cationique ont les avantages d’une bonne stabilité, d’une faible immunogénicité et d’une préparation et d’une modification faciles. Ici, nous offrons une méthode rapide et simple pour sa synthèse. La méthode réversible de polymérisation de transfert de chaîne d’addition-fragmentation est une méthode applicable aux polymères de bloc de rendement avec le poids et la structure moléculaires commandés et portant des groupes fonctionnels.Ces porteurs de médicaments peuvent simultanément transporter différents médicaments pour obtenir le traitement de collaboration du cancer, de l’inflammation et d’autres maladies. La polymérisation IFT est une méthode classique, et ce protocole donne un exemple de son application dans la thérapie génique. La clé du succès pour la synthèse de ce polymère est de contrôler précisément la température de réaction.Il est plus conseillé d’utiliser un bain d’huile qu’un bain d’eau. Pour commencer cette procédure, obtenir un flacon à fond rond avec un bouchon en caoutchouc et un agitateur magnétique à utiliser comme bouteille de polymérisation. Dissoudre 1,87 gramme d’HEMA bis-hydroxy dans un millilitre d’eau distillée dans la bouteille de polymérisation.Dans un bécher de cinq millilitres, dissoudre 0,03 grammes de CTP et 0,02 grammes d’ACVA en 0,5 millilitres de 1, 4-dioxane. Ajouter ce mélange à la bouteille de polymérisation. Ensuite, utilisez un piège à condensats pour congeler la solution dans la bouteille de polymérisation.Fixez la bouteille au support en fer et utilisez un conduit trébuché à l’aide d’une aiguille pour aspirer et injecter de l’azote dans le mélange de réaction. Ensuite, sceller la bouteille de polymérisation et décongeler la solution à température ambiante pendant 30 minutes. Répétez ce cycle gel-pompe-dégel trois fois.Après cela, placez la bouteille dans un bain d’huile à 70 degrés Celsius et laissez la solution réagir pendant 24 heures sous l’atmosphère azoté. Le lendemain, refroidissez la bouteille de polymérisation à zéro degré Celsius et ouvrez le bouchon en caoutchouc pour mettre fin à la réaction de polymérisation. Ensuite, précooler l’acétone dans un réfrigérateur à 20 degrés Celsius négatif pendant deux heures, et le mélanger avec la solution de réaction dans la bouteille de polymérisation à un rapport de 50 pour un.Centrifugeuse ce mélange à 8200 fois g pendant 10 minutes pour enlever l’acétone et recueillir le précipité. Pour purifier le poly bis-hydroxy synthétisé HEMA, dissoudre le précipité recueilli en deux millilitres d’eau pure. Ensuite, mélangez-le avec 100 millilitres d’acétone précoolée à un rapport de un à 50.Centrifugez la solution à 8 200 g pendant 10 minutes pour recueillir le précipité. Répétez ce processus de purification de dissoudre, mélanger et centrifuger le précipité trois fois. Tout d’abord, dissoudre 0,96 grammes d’APMA et 0,93 grammes de l’HEMA purifié poly bis-hydroxy dans cinq millilitres d’eau distillée dans un bécher de 10 millilitres.Dissoudre 0,01 grammes d’ACVA en 0,5 millilitres de 1, 4-dioxane, et ajouter cela à l’APMA et poly bis-hydroxy HEMA solution. Transférer ce mélange dans une bouteille de polymérisation et ventiler avec de l’azote sec pendant une heure. Ensuite, mettez la bouteille de polymérisation dans un bain d’huile à 70 degrés Celsius, et laissez-la réagir pendant 24 heures sous l’atmosphère azoté.Le lendemain, refroidissez la bouteille de polymérisation à zéro degré Celsius et ouvrez le bouchon en caoutchouc pour mettre fin à la solution de processus de polymérisation. Pour commencer, grainez les cellules MCF-7 dans les puits d’une plaque de six puits à une densité de 20 000 cellules par puits. Culture des cellules dans un incubateur humidifié à 37 degrés Celsius avec 5% de dioxyde de carbone pendant 12 heures.Après cela, remplacez le milieu de culture par le milieu de culture frais contenant des polymères cationiques et des polyplex pDNA de différents ratios azote-phosphore. Culture des cellules pendant six heures, puis remplacer le milieu par deux millilitres de RPMI frais 1640 moyen. Continuer à faire la culture pendant 48 heures.Ensuite, recueillir les cellules, et utiliser un cytomètre d’écoulement pour détecter la fluorescence verte. Dans cette étude, les copolymères biocompatibles biocompatibles méthionine-fonctionnalisés sont préparés par l’intermédiaire de la méthode réversible de transfert de chaîne d’addition-fragmentation, et la capacité plasmide de teint d’ADN du mBG obtenu et de leur efficacité de transfection est étudiée. La taille moyenne des particules et le potentiel zeta des polyplex mBG/pDNA sont de 124 nanomètres et plus 15,7 millivolts, respectivement, à un rapport N-to-P de 16.Le retardement électrophoretic révèle que pDNA avec un rapport N-to-P de zéro peut se déplacer sans retenue dans le gel d’agarose et est observé comme une bande dans l’imageur de gel. Lorsque pDNA est complexé avec mBG, le mouvement de pDNA est retardé, et par la suite, la luminosité de la bande est réduite. Cela montre que mBG peut complètement complexe le pDNA lorsque le N à P est supérieur à quatre.La cytotoxicité des polyplex mBG/pDNA est ensuite mesurée à l’aide de l’analyse MTT standard Ces résultats montrent que les polyplex mBG/pDNA ont une cytotoxicité que les polyplex pei/pDNA aux ratios N-to-P de quatre, huit, 16 et 32. Comme on peut également le voir, la cytotoxicité des polyplex mBG/pDNA augmente avec l’augmentation du rapport N-to-P. Cette cytotoxicité accrue est le résultat de la composante GPMA chargée positivement.Le rapport N-to-P utilisé dans l’expérience de transfection pDNA est sélectionné en fonction des résultats de la cytotoxicité. Les capacités de transfection de mBG1, mBG2, et mBG3 sont comparées en mesurant l’intensité de fluorescence de GFP, et les résultats ont prouvé que mBG3 est le porteur optimal de gène. Il est important d’épuiser l’air du flacon de limon à fond rond et de maintenir la température de réaction.Les porteurs de médicaments polymères obtenus peuvent être appliqués à la co-administration de médicaments chimiothérapeutiques et de médicaments génétiques pour traiter synergiquement le cancer pharmacorésistant. Le mécanisme moléculaire de la combinaison des drogues génétiques et des drogues chimiothérapeutiques peut être davantage exploré pour le traitement des tumeurs pharmacorésistantes. L’acétone est considérée comme faiblement toxique pour sa toxicité aiguë.Les clés, l’inhalation ou le contact avec les yeux ou la peau doivent être évités. Évitez au risque d’échaudage pendant la procédure de chauffage.

Research

JoVE Journal

Chemistry

Microwave-assisted Intramolecular Dehydrogenative Diels-Alder Reactions for the Synthesis of Functionalized Naphthalenes/Solvatochromic Dyes

Assistée par micro-déshydrogénation intramoléculaire de Diels-Alder pour la synthèse des naphtalènes fonctionnalisés / Colorants solvatochromes

Functionalized naphthalenes have applications in a variety of research fields ranging from the synthesis of natural or biologically active molecules to ...

Recherche

Chimie

Synthesis and Characterization of Functionalized Metal-organic Frameworks

Cadres de synthèse et la caractérisation de fonctionnalisé métal-organique

Metal-organic frameworks have attracted extraordinary amounts of research attention, as they are attractive candidates for numerous industrial and ...

Preparation and Characterization of SDF-1&#945;-Chitosan-Dextran Sulfate Nanoparticles

Preparation and Characterization of SDF-1ÃƒÅ½Ã‚Â±-Chitosan-Dextran Sulfate Nanoparticles

Préparation et caractérisation des SDF-1α-chitosane-Sulfate de Dextran nanoparticules

Chitosan (CS) and dextran sulfate (DS) are charged polysaccharides (glycans), which form polyelectrolyte complex-based nanoparticles when mixed under ...

Functionalization of Single-walled Carbon Nanotubes with Thermo-reversible Block Copolymers and Characterization by Small-angle Neutron Scattering

Fonctionnalisation de Simple paroi Carbon Nanotubes avec Thermo-réversibles Copolymères blocs et Caractérisation par petits angles de diffusion neutronique

We demonstrate a protocol for single-walled carbon nanotube functionalization using thermo-sensitive PEO-PPO-PEO triblock copolymers in an aqueous ...

Self-assembling Morphologies Obtained from Helical Polycarbodiimide Copolymers and Their Triazole Derivatives

Morphologies auto-assemblage obtenu à partir hélicoïdaux polycarbodiimide Copolymères et leurs dérivés triazole

A facile method for the preparation of polycarbodiimide-based secondary structures (e.g., nano-rings, &#34;craters,&#34; fibers, looped fibers, fibrous ...

Synthesis of a Thiol Building Block for the Crystallization of a Semiconducting Gyroidal Metal-sulfur Framework

Synthèse d’un bloc de construction de Thiol pour la cristallisation d’un cadre de métal Gyroidal soufre semiconductrices

We present a method for preparing thioester molecules as the masked form of the thiol linkers and their utilization for accessing a semiconducting and ...

Preparation of Poly(pentafluorophenyl acrylate) Functionalized SiO2 Beads for Protein Purification

Preparation of Polypentafluorophenyl acrylate Functionalized SiO2 Beads for Protein Purification

Préparation de Poly(pentafluorophenyl acrylate) fonctionnalisés SiO2 perles pour la Purification de protéines

We demonstrate a simple method to prepare poly(pentafluorophenyl acrylate) (poly(PFPA)) grafted silica beads for antibody immobilization and subsequent ...

Synthesis of Monodisperse Cylindrical Nanoparticles via Crystallization-driven Self-assembly of Biodegradable Block Copolymers

Synthèse de nanoparticules cylindriques monodispersées par l'auto-assemblage de copolymères de blocs biodégradables

The production of monodisperse cylindrical micelles is a significant challenge in polymer chemistry. Most cylindrical constructs formed from diblock ...

Efficient Synthesis of All-Carbon Quaternary Centers via the Conjugate Addition of Functionalized Monoorganozinc Bromides

Synthèse efficace des centres quaternaires tout-carbone via l’addition conjuguée de bromures Monoorganozinc fonctionnalisées

The conjugate addition of organometallic reagents to &#945;,&#946;-unsaturated carbonyls represents an important method to generate C&#8211;C bonds in the ...