Name: methionine functionalized biocompatible block copolymers for targeted plasmid dna delivery
Uploaded: 2019-08-06T12:30:00
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इस शोध चीन के राष्ट्रीय प्रमुख अनुसंधान और विकास कार्यक्रम (नहीं 2016YFC0905900), चीन के राष्ट्रीय प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन (सं. 81801827, 81872365), Jiangsu प्रांत के बुनियादी अनुसंधान कार्यक्रम (प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन, नहीं) द्वारा समर्थित किया गया था. BK20181086), और Jiangsu कैंसर अस्पताल वैज्ञानिक अनुसंधान कोष (नहीं. $K201605).

1. BNHEMA बहुलक का संश्लेषण (PBNHEMA)
<ol><li>1ण्87 ह, छ-बिस्(2-हाइड्रोक्सीएथिल)मेथैक्रिलमाइड (बीएनएचए) को बहुलकीकरण बोतल में आसुत जल के 1 एमएल में भंग करें। नोट: बहुलकीकरण बोतल एक रबर डाट और एक चुंबकीय उत्तेजक के स...

<ol>
	<li>Flotte, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+and+Cell+Therapy+in+2018:+A+Look+Ahead.">Gene and Cell Therapy in 2018: A Look Ahead.</a> Human Gene Therapy. 29, 1-1 (2018).</li><li>Huang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanomedicine-based+combination+anticancer+therapy+between+nucleic+acids+and+small-molecular+drugs.">Nanomedicine-based combination anticancer therapy between nucleic acids and small-molecular drugs.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 115, 82-97 (2017).</li><li>Wu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversing+of+multidrug+resistance+breast+cancer+by+co-delivery+of+P-gp+siRNA+and+doxorubicin+via+folic+acid-modified+core-shell+nanomicelles.">Reversing of multidrug resistance breast cancer by co-delivery of P-gp siRNA and doxorubicin via folic acid-modified core-shell nanomicelles.</a> Colloids &amp; Surfaces B Biointerfaces. 138, 60-69 (2016).</li><li>Quader, S., Kataoka, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanomaterial-Enabled+Cancer+Therapy.">Nanomaterial-Enabled Cancer Therapy.</a> Molecular Therapy. 25, 1501-1513 (2017).</li><li>Wu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multivalent+methionine-functionalized+biocompatible+block+copolymers+for+targeted+siRNA+delivery+and+subsequent+reversal+effect+on+adriamycin+resistance+in+human+breast+cancer+cell+line+MCF-7/ADR.">Multivalent methionine-functionalized biocompatible block copolymers for targeted siRNA delivery and subsequent reversal effect on adriamycin resistance in human breast cancer cell line MCF-7/ADR.</a> Journal of Gene Medicine. 19, e2969 (2017).</li><li>Szwarc, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=‘Living’+Polymers.">‘Living’ Polymers.</a> Nature. 178, 168-169 (1956).</li><li>Szwarc, M., Rembaum, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polymerization+of+methyl+methacrylate+initiated+by+an+electron+transfer+to+the+monomer.">Polymerization of methyl methacrylate initiated by an electron transfer to the monomer.</a> Journal of Polymer Science. 22 (100), 189-191 (1956).</li><li>Mukhopadhyay, R. D., Ajayaghosh, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Living+supramolecular+polymerization.">Living supramolecular polymerization.</a> Science. 349, 241 (2015).</li><li>Ozkose, U. U., Altinkok, C., Yilmaz, O., Alpturk, O., Tasdelen, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In-situ+preparation+of+poly(2-ethyl-2-oxazoline)/clay+nanocomposites+via+living+cationic+ring-opening+polymerization.">In-situ preparation of poly(2-ethyl-2-oxazoline)/clay nanocomposites via living cationic ring-opening polymerization.</a> European Polymer Journal. 88, 586-593 (2017).</li><li>Wu, W., Wang, W., Li, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Star+polymers:+Advances+in+biomedical+applications.">Star polymers: Advances in biomedical applications.</a> Progress in Polymer Science. 46, 55-85 (2015).</li><li>Boyer, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Copper-Mediated+Living+Radical+Polymerization+(Atom+Transfer+Radical+Polymerization+and+Copper(0)+Mediated+Polymerization):+From+Fundamentals+to+Bioapplications.">Copper-Mediated Living Radical Polymerization (Atom Transfer Radical Polymerization and Copper(0) Mediated Polymerization): From Fundamentals to Bioapplications.</a> Chemical Reviews. 116, 1803-1949 (2016).</li><li>Keddie, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+guide+to+the+synthesis+of+block+copolymers+using+reversible-addition+fragmentation+chain+transfer+(RAFT)+polymerization.">A guide to the synthesis of block copolymers using reversible-addition fragmentation chain transfer (RAFT) polymerization.</a> Chemical Society Reviews. 43, 496-505 (2014).</li><li>Wu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guanidinylated+3-gluconamidopropyl+methacrylamide-s-3-aminopropyl+methacrylamide+copolymer+as+siRNA+carriers+for+inhibiting+human+telomerase+reverse+transcriptase+expression.">Guanidinylated 3-gluconamidopropyl methacrylamide-s-3-aminopropyl methacrylamide copolymer as siRNA carriers for inhibiting human telomerase reverse transcriptase expression.</a> Drug Delivery. 20, 296-305 (2013).</li><li>Qin, Z., Liu, W., Guo, L., Li, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+on+Guanidinated+N-3-Aminopropyl+Methacrylamide-N-2-Hydroxypropyl+Methacrylamide+Co-polymers+as+Gene+Delivery+Carrier.">Studies on Guanidinated N-3-Aminopropyl Methacrylamide-N-2-Hydroxypropyl Methacrylamide Co-polymers as Gene Delivery Carrier.</a> Journal of Biomaterials Science, Polymer Edition. 23, 1-4 (2012).</li><li>Friedman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Applications+of+the+Ninhydrin+Reaction+for+Analysis+of+Amino+Acids,+Peptides,+and+Proteins+to+Agricultural+and+Biomedical+Sciences.">Applications of the Ninhydrin Reaction for Analysis of Amino Acids, Peptides, and Proteins to Agricultural and Biomedical Sciences.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 52, 385-406 (2004).</li><li>Habuchi, S., Yamamoto, T., Tezuka, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthesis+of+Cyclic+Polymers+and+Characterization+of+Their+Diffusive+Motion+in+the+Melt+State+at+the+Single+Molecule+Level.">Synthesis of Cyclic Polymers and Characterization of Their Diffusive Motion in the Melt State at the Single Molecule Level.</a> Journal of Visualized Experiments. (115), 1-9 (2016).</li><li>Rao, D. A., Nguyen, D. X., Mishra, G. P., Doddapaneni, B. S., Alani, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+and+Characterization+of+Individual+and+Multi-drug+Loaded+Physically+Entrapped+Polymeric+Micelles.">Preparation and Characterization of Individual and Multi-drug Loaded Physically Entrapped Polymeric Micelles.</a> Journal of Visualized Experiments. 102, 1-5 (2015).</li></ol>

इस अध्ययन में BNHEMA-b-APMA ब्लॉक बहुलक धनात्मक जीन वाहक की एक श्रृंखला शुरू की. इन ब्लॉक पॉलिमर प्रतिवर्ती जोड़-खंडन श्रृंखला हस्तांतरण (RAFT) विधि के माध्यम से संश्लेषित किया गया. जलरागी खंड BNHEMA घुलनशीलता में सु?...

हाल के वर्षों में, सभी प्रकार के रोगों के उपचार के लिएन्यूक्लिक एसिड ों की चिकित्सीय डिलीवरी के लिए जीन थेरेपी का पता चला है। प्लाज्मिड डीएनए (पीडीएनए) और छोटे हस्तक्षेप आरएनए (सिएनआरए) सहित जीन दवाओं का विकास दवा वितरण प्रणाली (डीडीएस)2की स्थिरता और दक्षता पर निर्भर करता है। सभी DDS के अलावा, धनायनी बहुलक वाहक अच्छी स्थिरता, कम इम्यूनोजेनिकता, और सुगम तैयारी और संशोधन के फायदे हैं, जो धनायनिक बहुलक वाहक व्यापक आवेदन संभावनाओं3,4दे . biomedicine में व्यावहारिक अनुप्रयोगों के लिए, शोधकर्ताओं को उच्च दक्षता, कम विषाक्तता, और अच्छा लक्ष्यीकरण क्षमता5के साथ एक cationic बहुलक वाहक खोजना होगा. सभी बहुलक वाहकों में, ब्लॉक सहबहुलक सबसे व्यापक रूप से उपयोग की जाने वाली औषध वितरण प्रणालियों में से एक हैं। ब्लॉक सहबहुलकों को दवा वितरण5में मिसेल, माइक्रोस्बिलऔर नैनोकणों के रूप में अपने आत्म-असेम्बली गुण और क्षमताओं के लिए गहन अध्ययन किया जाता है। ब्लॉक copolymers रहने वाले बहुलकीकरण के माध्यम से संश्लेषित किया जा सकता है या रसायन विज्ञान के तरीकों पर क्लिक करें.
1956 में, Szwarc एट अल. रहने वाले बहुलकीकरण के विषय उठाया, यह श्रृंखला तोड़ने प्रतिक्रियाओं के बिना एक प्रतिक्रिया के रूप में परिभाषित6,7. तब से, कई तकनीकों को इस विधि का उपयोग कर पॉलिमर संश्लेषित करने के लिए विकसित किया गया था; इस प्रकार, जीवित बहुलकीकरण बहुलक विज्ञान8के एक मील का पत्थर के रूप में देखा जाता है। जीवित बहुलकीकरण को जीवीय एनिओनिक बहुलकीकरण, जीवित धनात्मक बहुलकीकरण, और उत्क्रमणीय विसक्रियण मूलक बहुलकीकरण (आरडीआरपी)9में वर्गीकृत किया जा सकता है। जीवाण्ण ीय बहुलकीकरणों में उनकी कड़ी प्रतिक्रिया शर्तों के कारण आवेदन की सीमित गुंजाइशहोतीहै। नियंत्रित /जीवित कट्टरपंथी बहुलकीकरण (सीआरपी) में हल्की प्रतिक्रिया की स्थिति, सुविधाजनक स्वभाव, और अच्छी उपज होती है और इस प्रकार हाल के वर्षों में एक प्रमुख अनुसंधान ध्यान केंद्रित किया गया है11. सीआरपी में, सक्रिय संचरण शृंखलाएं मुक्त कणों की सांद्रता को कम करने और श्रृंखला के कणों के प्रचार की द्वि-अणुक अभिक्रिया से बचने के लिए निष्क्रिय लोगों में उत्क्रमणीय होती हैं। इसके अलावा बहुलकीकरण केवल तभी जारी रह सकता है जब निष्क्रिय निष्क्रिय प्रचार श्रृंखलाओं को पीछे की ओर श्रृंखला के कणों में एनिमेटेड किया जाता है। कट्टरपंथी बहुलकीकरण जीने का सबसे होनहार रूपों में से एक के रूप में, प्रतिवर्ती इसके अलावा-फ़्रेग्मेंटेशन श्रृंखला हस्तांतरण (RAFT) बहुलकीकरण नियंत्रित आणविक वजन और संरचना, संकीर्ण आणविक वजन के साथ ब्लॉक पॉलिमर उपज के लिए लागू एक विधि है वितरण, और कार्यात्मक समूहों को ले जाने12| सफल RAFT बहुलकन की कुंजी श्रृंखला हस्तांतरण एजेंटों, आमतौर पर dithioesters, जो बहुत उच्च श्रृंखला हस्तांतरण स्थिरक के अधिकारी का प्रभाव है।
इस पेपर में, एक RAFT बहुलकीकरण विधिBNHEMA-b-APMA ब्लॉक बहुलक तैयार करने के लिए डिजाइन किया गया था, ले 4,4'-azobis (4-cyanovaleric एसिड) (ACVA) एक प्रारंभिक एजेंट के रूप में और 4-cyanopentanoic एसिड dithiobenzoate (CTP) एक श्रृंखला हस्तांतरण एजेंट के रूप में. RAFT बहुलकन दो बार cationic बहुलक वाहक में BNHEMA परिचय करने के लिए इस्तेमाल किया गया था. बाद में, APMA श्रृंखला में amine समूहों methionine और guanidinylation अभिकर्मक 1-amidinopyrazole हाइड्रोक्लोराइड के साथ संशोधित किया गया. ग्वानिडियलेशन अभिकर्मक और methacrylamide बहुलक कंकाल संरचना के सकारात्मक आरोपों का उपयोग करते हुए, प्राप्त ब्लॉक बहुलक वाहक के सेलुलर तेज दक्षता में सुधार किया गया था।

<table>
<tbody>
<tr>
<td>1-hydroxybenzotriazole</td>
<td>Macklin Biochemical Co., Ltd,China</td>
<td>H810970</td>
<td>&ge;97.0%</td>
</tr>
<tr>
<td>1,4-dioxane</td>
<td>Sinopharm chemical reagent Co., Ltd, China</td>
<td>10008918</td>
<td>AR</td>
</tr>
<tr>
<td>1-amidinopyrazole Hydrochloride</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>A107935</td>
<td>98%</td>
</tr>
<tr>
<td>1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide hydrochloride</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>E106172</td>
<td>AR</td>
</tr>
<tr>
<td>4,4&#x2019;-azobis(4-cyanovaleric acid)</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>A106307</td>
<td>Analytical reagent (AR)</td>
</tr>
<tr>
<td>4-cyano-4-(phenylcarbonothioylthio)pentanoic Acid</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>C132316</td>
<td>&#x003E;97%(HPLC)</td>
</tr>
<tr>
<td>Acetate</td>
<td>Sinopharm chemical reagent Co., Ltd, China</td>
<td>81014818</td>
<td>AR</td>
</tr>
<tr>
<td>Acetone</td>
<td>Sinopharm chemical reagent Co., Ltd, China</td>
<td>10000418</td>
<td>AR</td>
</tr>
<tr>
<td>Agarose</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>A118881</td>
<td>High resolution</td>
</tr>
<tr>
<td>Ascorbic acid</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>A103533</td>
<td>AR</td>
</tr>
<tr>
<td>DMSO</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>D103272</td>
<td>AR</td>
</tr>
<tr>
<td>Ethylene glycol</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>E103319</td>
<td>AR</td>
</tr>
<tr>
<td>N-(3-aminopropyl)methacrylamide hydrochloride</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>N129096</td>
<td>&ge;98.0%(HPLC)</td>
</tr>
<tr>
<td>N,N-bis(2-hydroxyethyl)methacrylamide</td>
<td>ZaiQi Bio-Tech Co.,Ltd, China</td>
<td>CF259748</td>
<td>&ge;98.0%(HPLC)</td>
</tr>
<tr>
<td>Ninhydrin</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>N105629</td>
<td>AR</td>
</tr>
<tr>
<td>PBS buffer</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>P196986</td>
<td>pH 7.4</td>
</tr>
<tr>
<td>Plasmid DNA</td>
<td>BIOGOT Co., Ltd, China</td>
<td>pDNA-EGFP</td>
<td>pDNA-EGFP</td>
</tr>
<tr>
<td>Plasmid DNA</td>
<td>BIOGOT Co., Ltd, China</td>
<td>Pdna</td>
<td>pDNA</td>
</tr>
<tr>
<td>Sodium carbonate decahydrate</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>S112589</td>
<td>AR</td>
</tr>
<tr>
<td>Trimethylamine</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>T103285</td>
<td>AR</td>
</tr>
</tbody>
</table>

methionine functionalized biocompatible block copolymers for targeted plasmid dna delivery

प्रतिवर्ती जोड़-विखंडन श्रृंखला स्थानांतरण (RAFT) बहुलकीकरण कट्टरपंथी बहुलकीकरण और रहने वाले बहुलकीकरण के लाभों को एकीकृत करता है। यह काम RAFT बहुलकीकरण के माध्यम से methionine कार्यात्मक जैव संगत ब्लॉक copolymers की तैयारी प्रस्तुत करता है. सबसे पहले, N,N-bis(2-hydroxyethyl)methacrylamide-b-N-(3-aminopropyl)methacrylamide (BNHEMA-b -APMA, BA) RAFT बहुलकीकरण के माध्यम से संश्लेषित किया गया था 4,4'-azobis(4-cyanovaleric एसिड) (ACVA) एक के रूप में श्रृंखला स्थानांतरण एजेंट के रूप में एजेंट और 4-cyanopentanoic एसिड dithiobenzoate (सीटीपी) की शुरुआत। बाद में, N,N-bis(2-hydroxyethyl)methacrylamide-b-N- (3-guanidinopropyl)मेथाक्रिलमाइड (मेथियोनीन कलम ित BNHEMA-b-GPMA, mBG) एपीएमए में एमिन समूहों को संशोधित करके तैयार किया गया था मेथियोनीन और गुनिडीन समूहों. ब्लॉक पॉलिमर, mBG1, mBG2, और mBG3 के तीन प्रकार, तुलना के लिए संश्लेषित किया गया. एक ninhydrin प्रतिक्रिया APMA सामग्री की मात्रा निर्धारित करने के लिए इस्तेमाल किया गया था; mBG1, mBG2, और mBG3 क्रमशः 21%, 37%, और APMA के 52% था. जेल permeation क्रोमैटोग्राफी (GPC) परिणामों से पता चला कि बीए copolymers 16,200 (BA1), 20,900 (BA2) के आणविक वजन के होते हैं, और 27,200 (BA3) जी / प्राप्त ब्लॉक सहबहुलक जीन वाहकों की प्लाज्मिड डीएनए (पीडीएनए) जटिल क्षमता की भी जांच की गई। आवेश अनुपात 8, 16 और 4 थे जब पीडीएनए क्रमशः mBG1, mBG2, mBG3 के साथ पूरी तरह से जटिल था। जब mBG/pDNA बहुप्लैक्स का N/P अनुपात 1 से अधिक था, तो mBG की जीटा क्षमता सकारात्मक थी। 16 और 32 के बीच N/P अनुपात में, mBG/pDNA बहुप्लेक्स का औसत कण आकार 100-200 दउ के बीच था। कुल मिलाकर, यह काम ब्लॉक copolymer वाहक संश्लेषण के लिए एक सरल और सुविधाजनक प्रोटोकॉल दिखाता है.

BNHEMA तालिका 1में दिखाया गया बहुलकीकरण के उद्देश्य की डिग्री के अनुसार खिलाया गया था; mBG के संश्लेषण प्रक्रिया चित्र 1में दिखाया गया है. सबसे पहले, BNHEMA homopolymer एक श्रृंखला हस्तांतरण एजेंट के रू?...

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Methionine Functionalized Biocompatible Block Copolymers for Targeted Plasmid DNA Delivery

यह काम विपर्यायीय योग-खंडन श्रृंखला स्थानांतरण (RAFT) विधि के माध्यम से methionine functionalized जैव संगत ब्लॉक copolymers (mBG) की तैयारी प्रस्तुत करता है। प्राप्त mBG की प्लाज्मिड डीएनए जटिल क्षमता और उनके transfection दक्षता भी जांच की गई. RAFT विधि विशेष कार्यात्मक समूहों युक्त monomers बहुलकीकरण के लिए बहुत फायदेमंद है।

मेथियोनीन कार्यात्मक जैव संगत ब्लॉक कोपॉलीमर लक्षित प्लास्मिड डीएनए डिलिवरी के लिए

Reversible addition-fragmentation chain transfer (RAFT) polymerization integrates the advantages of radical polymerization and living polymerization. This ...

Cationic बहुलक दवा वाहक अच्छी स्थिरता, कम इम्यूनोजेनिसिटी, और फेसियल तैयारी और संशोधन के फायदे हैं। यहां, हम इसके संश्लेषण के लिए एक तेजी से और सरल विधि प्रदान करते हैं। रिवर्सिबल इसके अलावा-विखंडन श्रृंखला हस्तांतरण बहुलीकरण विधि नियंत्रित आणविक वजन और संरचना और कार्यात्मक समूहों को ले जाने के साथ ब्लॉक पॉलिमर उपज के लिए लागू एक विधि है।ये दवा वाहक कैंसर, सूजन और अन्य बीमारियों के सहयोग उपचार को प्राप्त करने के लिए एक साथ विभिन्न दवाओं को ले जा सकते हैं। आईएफटी बहुलकीकरण एक क्लासिक विधि है, और यह प्रोटोकॉल जीन थेरेपी में इसके आवेदन का एक उदाहरण देता है। इस बहुलक के संश्लेषण के लिए सफलता की कुंजी प्रतिक्रिया तापमान को ठीक से नियंत्रित करना है।पानी के स्नान की तुलना में तेल स्नान का उपयोग करने की अधिक सलाह दी जाती है। इस प्रक्रिया को शुरू करने के लिए, एक रबर डाट और एक चुंबकीय उभारक के साथ एक गोल-नीचे फ्लास्क प्राप्त करें जिसे पॉलीमराइजेशन बोतल के रूप में इस्तेमाल किया जाएगा। पॉलीमराइजेशन की बोतल में एक मिलीलीटर आसुत पानी में 1.87 ग्राम बीआईएस-हाइड्रोक्सी हेमा को भंग करें।पांच मिलीलीटर बीकर में 0.03 ग्राम सीटीपी और 0.02 ग्राम एसीवीए को 0.5 मिलीलीटर 1, 4-डायोक्सेन में घोलें। इस मिश्रण को पॉलीमराइजेशन बोतल में डालें। फिर, पॉलीमराइजेशन बोतल में समाधान को फ्रीज करने के लिए एक संघनित जाल का उपयोग करें।लोहे के समर्थन के लिए बोतल को ठीक करें, और प्रतिक्रिया मिश्रण में नाइट्रोजन को वैक्यूम करने और इंजेक्ट करने के लिए सुई के साथ फिसल गई नाली का उपयोग करें। फिर, बहुलक की बोतल को सील करें, और 30 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर समाधान गल जाएं। इस फ्रीज-पंप-गल चक्र को तीन बार दोहराएं।इसके बाद, बोतल को 70 डिग्री सेल्सियस पर तेल स्नान में रखें और समाधान को नाइट्रोजन वातावरण के नीचे 24 घंटे तक प्रतिक्रिया दें। अगले दिन, पॉलीमराइजेशन की बोतल को शून्य डिग्री सेल्सियस पर ठंडा करें और पॉलीमराइजेशन प्रतिक्रिया को समाप्त करने के लिए रबर डाट खोलें। इसके बाद, दो घंटे के लिए नकारात्मक 20 डिग्री सेल्सियस पर एक रेफ्रिजरेटर में प्रीकूल एसीटोन, और इसे 50 से एक के अनुपात में बहुलकीकरण बोतल में प्रतिक्रिया समाधान के साथ मिलाएं।एसीटोन को हटाने और वर्षा को इकट्ठा करने के लिए 10 मिनट के लिए 8, 200 बार जी पर इस मिश्रण को अपकेंद्रित्र करें। संश्लेषित पॉली बीआईएस-हाइड्रोक्सी हेमा को शुद्ध करने के लिए, एकत्रित वर्षा को शुद्ध पानी के दो मिलीलीटर में भंग करें। फिर, इसे एक से 50 के अनुपात में 100 मिलीलीटर प्रीकूल्ड एसीटोन के साथ मिलाएं।8, 200 बार जी पर 10 मिनट के लिए तेज़ इकट्ठा करने के लिए समाधान अपकेंद्रित्र। तीन बार उपजी को भंग करने, मिश्रण करने और अपकेंद्री करने की इस शुद्धि प्रक्रिया को दोहराएं। सबसे पहले, 10 मिलीलीटर बीकर में पांच मिलीलीटर आसुत पानी में 0.96 ग्राम एपीएमए और 0.93 ग्राम शुद्ध पॉली बिस-हाइड्रोक्सी हेमा को भंग करें।1, 4-डायोक्सेन के 0.5 मिलीलीटर में 0.01 ग्राम एसीवीए को भंग करें, और इसे एपीएमए और पॉली बीआईएस-हाइड्रोक्सी हेमा समाधान में जोड़ें। इस मिश्रण को पॉलीमराइजेशन बोतल में स्थानांतरित करें, और एक घंटे के लिए शुष्क नाइट्रोजन के साथ हवादार करें। फिर, 70 डिग्री सेल्सियस पर एक तेल स्नान में बहुलक की बोतल डाल दिया, और यह नाइट्रोजन वातावरण के तहत 24 घंटे के लिए प्रतिक्रिया करते हैं।अगले दिन, पॉलीमराइजेशन की बोतल को शून्य डिग्री सेल्सियस पर ठंडा करें और पॉलीमराइजेशन प्रक्रिया समाधान को समाप्त करने के लिए रबर डाट खोलें। शुरू करने के लिए, बीज एमसीएफ-7 कोशिकाओं को एक छह अच्छी तरह से थाली के कुओं में 20, 000 कोशिकाओं के घनत्व पर अच्छी तरह से । संस्कृति 12 घंटे के लिए 5% कार्बन डाइऑक्साइड के साथ ३७ डिग्री सेल्सियस पर एक आर्द्रीकृत इनक्यूबेटर में कोशिकाओं ।इसके बाद, संस्कृति माध्यम को ताजा संस्कृति माध्यम से प्रतिस्थापित किया गया है जिसमें नाइट्रोजन-टू-फास्फोरस अनुपात के विभिन्न अनुपात के cationic बहुलक और pDNA पॉलीप्लेक्स पॉलीप्लेक्स शामिल हैं। छह घंटे के लिए कोशिकाओं संस्कृति, और फिर ताजा RPMI १६४० माध्यम के दो मिलीलीटर के साथ माध्यम की जगह । 48 घंटे तक खेती जारी रखें।फिर, कोशिकाओं को इकट्ठा करें, और हरे फ्लोरेसेंस का पता लगाने के लिए एक प्रवाह साइटोमीटर का उपयोग करें। इस अध्ययन में, मेथिओनाइन-कार्यात्मक बायोसंचालित ब्लॉक कोपॉलिमर रिवर्सिबल इंडड-विखंडन श्रृंखला हस्तांतरण विधि के माध्यम से तैयार किए जाते हैं, और प्राप्त एलबीजी की प्लाज्मिड डीएनए जटिल क्षमता और उनकी ट्रांसफेक्शन दक्षता की जांच की जाती है। 16 के एन-टू-पी अनुपात में क्रमशः 124 नैनोमीटर और प्लस 15.7 मिलीवोल्ट्स के औसत कण आकार और जीटा क्षमता 124 नैनोमीटर और प्लस 15.7 मिलीवोल्ट हैं।इलेक्ट्रोफोरेटिक रिटार्डेशन से पता चलता है कि शून्य के एन-टू-पी अनुपात के साथ पीडीएनए एगर उठे जेल में संयम के बिना स्थानांतरित हो सकता है और जेल इमेजर में एक धारी के रूप में मनाया जाता है। जब पीडीएनए को एमबीजी के साथ जटिल किया जाता है, तो पीडीएनए का आंदोलन मंद हो जाता है, और बाद में, बैंड की चमक कम हो जाती है। इससे पता चलता है कि जब एन से पी चार से अधिक है तो एमबीजी पीडीएनए को पूरी तरह से जटिल कर सकता है ।इसके बाद एमबीजी/पीडीएनए पॉलीप्लेक्स की साइटोटॉक्सिटी को स्टैंडर्ड एमटीटी परख का इस्तेमाल करते हुए मापा जाता है इन नतीजों से पता चलता है कि एमबीजी/पीडीएनए पॉलीप्लेक्स में चार, आठ, 16 और ३२ के एन-टू-पी अनुपात में पीई/पीडीएनए पॉलीप्लेक्स की तुलना में साइटोटॉक्सिकिटी है । जैसा कि देखा जा सकता है, एनबीजी/पीडीएनए पॉलीप्लेक्स की साइटोटेक्सिटी बढ़ी हुई एन-टू-पी रेशियो के साथ बढ़ जाती है । यह बढ़ी हुई साइटोटॉक्सिकिटी सकारात्मक चार्ज जीपीएमए घटक का परिणाम है।पीडीएनए ट्रांसफेक्शन प्रयोग में इस्तेमाल होने वाले एन-टू-पी अनुपात को साइटोटॉक्सिसिटी के नतीजों के अनुसार चुना जाता है । mBG1, mBG2, और mBG3 की ट्रांसफैक्शन क्षमताओं की तुलना जीएफपी फ्लोरेसेंस तीव्रता को मापने से की जाती है, और परिणामों से पता चला है कि mBG3 इष्टतम जीन वाहक है। गाद के गोल-नीचे फ्लास्क से हवा को निकास करना और प्रतिक्रिया तापमान को बनाए रखना महत्वपूर्ण है।प्राप्त बहुलक दवा वाहकों को दवा प्रतिरोधी कैंसर का सह-वितरण करने के लिए कीमोथेरेपी दवाओं और जीन दवाओं के सह-वितरण के लिए लागू किया जा सकता है। दवा प्रतिरोधी ट्यूमर के उपचार के लिए जीन दवाओं और कीमोथैरेप्टिक दवाओं के संयोजन के आणविक तंत्र को आगे खोजा जा सकता है। एसीटोन को इसकी तीव्र विषाक्तता के लिए कम विषाक्त के रूप में रेट किया जाता है।चाबियां, साँस लेना या आंखों या त्वचा के साथ संपर्क से बचना चाहिए। हीटिंग प्रक्रिया के दौरान स्केलिंग के जोखिम से बचें।

Research

JoVE Journal

Chemistry

Microwave-assisted Intramolecular Dehydrogenative Diels-Alder Reactions for the Synthesis of Functionalized Naphthalenes/Solvatochromic Dyes

माइक्रोवेव की सहायता intramolecular Functionalized Naphthalenes / Solvatochromic रंजक के संश्लेषण के लिए Dehydrogenative Diels Alder प्रतिक्रियाओं

Functionalized naphthalenes have applications in a variety of research fields ranging from the synthesis of natural or biologically active molecules to ...

Synthesis and Characterization of Functionalized Metal-organic Frameworks

Functionalized के संश्लेषण और विशेषता धातु कार्बनिक चौखटे

Metal-organic frameworks have attracted extraordinary amounts of research attention, as they are attractive candidates for numerous industrial and ...

Preparation and Characterization of SDF-1&#945;-Chitosan-Dextran Sulfate Nanoparticles

Preparation and Characterization of SDF-1ÃƒÅ½Ã‚Â±-Chitosan-Dextran Sulfate Nanoparticles

एसडीएफ-1α-Chitosan-dextran सल्फेट नैनोकणों की तैयारी और विशेषता

Chitosan (CS) and dextran sulfate (DS) are charged polysaccharides (glycans), which form polyelectrolyte complex-based nanoparticles when mixed under ...

Functionalization of Single-walled Carbon Nanotubes with Thermo-reversible Block Copolymers and Characterization by Small-angle Neutron Scattering

छोटे कोण न्यूट्रॉन बिखरने से थर्मो-प्रतिवर्ती ब्लॉक Copolymers और विशेषता के साथ एकल दीवारों कार्बन नैनोट्यूब के functionalization

We demonstrate a protocol for single-walled carbon nanotube functionalization using thermo-sensitive PEO-PPO-PEO triblock copolymers in an aqueous ...

Self-assembling Morphologies Obtained from Helical Polycarbodiimide Copolymers and Their Triazole Derivatives

स्वयं कोडांतरण Morphologies पेचदार Polycarbodiimide Copolymers और उनके triazole संजात से प्राप्त

A facile method for the preparation of polycarbodiimide-based secondary structures (e.g., nano-rings, &#34;craters,&#34; fibers, looped fibers, fibrous ...

Synthesis of a Thiol Building Block for the Crystallization of a Semiconducting Gyroidal Metal-sulfur Framework

एक Semiconducting Gyroidal धातु-सल्फर फ्रेमवर्क के क्रिस्टलीकरण के लिए एक Thiol बिल्डिंग ब्लॉक का संश्लेषण

We present a method for preparing thioester molecules as the masked form of the thiol linkers and their utilization for accessing a semiconducting and ...

Preparation of Poly(pentafluorophenyl acrylate) Functionalized SiO2 Beads for Protein Purification

Preparation of Polypentafluorophenyl acrylate Functionalized SiO2 Beads for Protein Purification

पाली की तैयारी (pentafluorophenyl acrylate) कार्यात्मक सिइओ2 मोती प्रोटीन शुद्धि के लिए

We demonstrate a simple method to prepare poly(pentafluorophenyl acrylate) (poly(PFPA)) grafted silica beads for antibody immobilization and subsequent ...

Synthesis of Monodisperse Cylindrical Nanoparticles via Crystallization-driven Self-assembly of Biodegradable Block Copolymers

क्रिस्टलीकरण-चालित स्व-असेम्बली ऑफ बायोडिग्रेडेबल ब्लॉक कोपॉलीमर के माध्यम से मोनोडिफिकेशन बेलिनड्रकल नैनोकणों का संश्लेषण

The production of monodisperse cylindrical micelles is a significant challenge in polymer chemistry. Most cylindrical constructs formed from diblock ...

Efficient Synthesis of All-Carbon Quaternary Centers via the Conjugate Addition of Functionalized Monoorganozinc Bromides

कार्यीकृत मोनोऑर्गेनोजिंक ब्रोमाइड के संयुग्मी योग के माध्यम से सभी कार्बन चतुष्क केंद्रों का दक्ष संश्लेषण

The conjugate addition of organometallic reagents to &#945;,&#946;-unsaturated carbonyls represents an important method to generate C&#8211;C bonds in the ...