Name: methionine functionalized biocompatible block copolymers for targeted plasmid dna delivery
Uploaded: 2019-08-06T12:30:00
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Questa ricerca è stata sostenuta dal National Key Research and Development Program of China (N. 2016YFC0905900), National Natural Science Foundation of China (N. 81801827, 81872365), Basic Research Program of Jiangsu Province (Natural Science Foundation, No. BK20181086), e Jiangsu Cancer Hospital Scientific Research Fund (n. K201605).

1. Sintesi del polimero BNHEMA (PBNHEMA)
<ol><li>Sciogliere 1,87 g di N, N-bis(2-hydroxyethyl)methacrylamide (BNHEMA) in 1 mL di acqua distillata in una bottiglia di polimerizzazione. NOTA: La bottiglia di polimerizzazione è una boraltà dal fondo rotondo con un tappo di gomma e un agitatore magnetico.</li>
	<li>Sciogliere 0,03 g di 4-cianopentanoico dithiobenzoate (CTP) e 0,02 g di 4,4'-azobis (4-cyanovalericacid ) (ACVA) in 0,5 mL di 1,4-dioxane in un becher 5 mL. Quindi, aggiungere la soluzione...

<ol>
	<li>Flotte, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+and+Cell+Therapy+in+2018:+A+Look+Ahead.">Gene and Cell Therapy in 2018: A Look Ahead.</a> Human Gene Therapy. 29, 1-1 (2018).</li><li>Huang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanomedicine-based+combination+anticancer+therapy+between+nucleic+acids+and+small-molecular+drugs.">Nanomedicine-based combination anticancer therapy between nucleic acids and small-molecular drugs.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 115, 82-97 (2017).</li><li>Wu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversing+of+multidrug+resistance+breast+cancer+by+co-delivery+of+P-gp+siRNA+and+doxorubicin+via+folic+acid-modified+core-shell+nanomicelles.">Reversing of multidrug resistance breast cancer by co-delivery of P-gp siRNA and doxorubicin via folic acid-modified core-shell nanomicelles.</a> Colloids &amp; Surfaces B Biointerfaces. 138, 60-69 (2016).</li><li>Quader, S., Kataoka, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanomaterial-Enabled+Cancer+Therapy.">Nanomaterial-Enabled Cancer Therapy.</a> Molecular Therapy. 25, 1501-1513 (2017).</li><li>Wu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multivalent+methionine-functionalized+biocompatible+block+copolymers+for+targeted+siRNA+delivery+and+subsequent+reversal+effect+on+adriamycin+resistance+in+human+breast+cancer+cell+line+MCF-7/ADR.">Multivalent methionine-functionalized biocompatible block copolymers for targeted siRNA delivery and subsequent reversal effect on adriamycin resistance in human breast cancer cell line MCF-7/ADR.</a> Journal of Gene Medicine. 19, e2969 (2017).</li><li>Szwarc, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=‘Living’+Polymers.">‘Living’ Polymers.</a> Nature. 178, 168-169 (1956).</li><li>Szwarc, M., Rembaum, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polymerization+of+methyl+methacrylate+initiated+by+an+electron+transfer+to+the+monomer.">Polymerization of methyl methacrylate initiated by an electron transfer to the monomer.</a> Journal of Polymer Science. 22 (100), 189-191 (1956).</li><li>Mukhopadhyay, R. D., Ajayaghosh, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Living+supramolecular+polymerization.">Living supramolecular polymerization.</a> Science. 349, 241 (2015).</li><li>Ozkose, U. U., Altinkok, C., Yilmaz, O., Alpturk, O., Tasdelen, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In-situ+preparation+of+poly(2-ethyl-2-oxazoline)/clay+nanocomposites+via+living+cationic+ring-opening+polymerization.">In-situ preparation of poly(2-ethyl-2-oxazoline)/clay nanocomposites via living cationic ring-opening polymerization.</a> European Polymer Journal. 88, 586-593 (2017).</li><li>Wu, W., Wang, W., Li, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Star+polymers:+Advances+in+biomedical+applications.">Star polymers: Advances in biomedical applications.</a> Progress in Polymer Science. 46, 55-85 (2015).</li><li>Boyer, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Copper-Mediated+Living+Radical+Polymerization+(Atom+Transfer+Radical+Polymerization+and+Copper(0)+Mediated+Polymerization):+From+Fundamentals+to+Bioapplications.">Copper-Mediated Living Radical Polymerization (Atom Transfer Radical Polymerization and Copper(0) Mediated Polymerization): From Fundamentals to Bioapplications.</a> Chemical Reviews. 116, 1803-1949 (2016).</li><li>Keddie, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+guide+to+the+synthesis+of+block+copolymers+using+reversible-addition+fragmentation+chain+transfer+(RAFT)+polymerization.">A guide to the synthesis of block copolymers using reversible-addition fragmentation chain transfer (RAFT) polymerization.</a> Chemical Society Reviews. 43, 496-505 (2014).</li><li>Wu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guanidinylated+3-gluconamidopropyl+methacrylamide-s-3-aminopropyl+methacrylamide+copolymer+as+siRNA+carriers+for+inhibiting+human+telomerase+reverse+transcriptase+expression.">Guanidinylated 3-gluconamidopropyl methacrylamide-s-3-aminopropyl methacrylamide copolymer as siRNA carriers for inhibiting human telomerase reverse transcriptase expression.</a> Drug Delivery. 20, 296-305 (2013).</li><li>Qin, Z., Liu, W., Guo, L., Li, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+on+Guanidinated+N-3-Aminopropyl+Methacrylamide-N-2-Hydroxypropyl+Methacrylamide+Co-polymers+as+Gene+Delivery+Carrier.">Studies on Guanidinated N-3-Aminopropyl Methacrylamide-N-2-Hydroxypropyl Methacrylamide Co-polymers as Gene Delivery Carrier.</a> Journal of Biomaterials Science, Polymer Edition. 23, 1-4 (2012).</li><li>Friedman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Applications+of+the+Ninhydrin+Reaction+for+Analysis+of+Amino+Acids,+Peptides,+and+Proteins+to+Agricultural+and+Biomedical+Sciences.">Applications of the Ninhydrin Reaction for Analysis of Amino Acids, Peptides, and Proteins to Agricultural and Biomedical Sciences.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 52, 385-406 (2004).</li><li>Habuchi, S., Yamamoto, T., Tezuka, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthesis+of+Cyclic+Polymers+and+Characterization+of+Their+Diffusive+Motion+in+the+Melt+State+at+the+Single+Molecule+Level.">Synthesis of Cyclic Polymers and Characterization of Their Diffusive Motion in the Melt State at the Single Molecule Level.</a> Journal of Visualized Experiments. (115), 1-9 (2016).</li><li>Rao, D. A., Nguyen, D. X., Mishra, G. P., Doddapaneni, B. S., Alani, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+and+Characterization+of+Individual+and+Multi-drug+Loaded+Physically+Entrapped+Polymeric+Micelles.">Preparation and Characterization of Individual and Multi-drug Loaded Physically Entrapped Polymeric Micelles.</a> Journal of Visualized Experiments. 102, 1-5 (2015).</li></ol>

Questo studio ha introdotto una serie di portatori genici polimerici a blocchi BNHEMA-b-APMA. Questi polimeri a blocchi sono stati sintetizzati tramite il metodo di trasferimento reversibile della catena di aggiunta-frammentazione (RAFT). Il segmento idrofilo BNHEMA è stato introdotto per migliorare la solubilità. I gruppi di methionina e guanidina sono stati modificati per migliorare l'abilità di destinazione e l'efficienza della trasfezione5. Il contenuto della catena APMA è aumentato e la g...

Negli ultimi anni, la terapia genica è emersa per la somministrazione terapeutica di acidi nucleici come farmaci per trattare tutti i tipi di malattie1. Lo sviluppo di farmaci genici, tra cui DNA plasmide (pDNA) e piccolo RNA interferente (siRNA) si basa sulla stabilità e l'efficienza del sistema di somministrazione di farmaci (DDS)2. Tra tutti i DDS, i portatori di polimeri cationici hanno i vantaggi di una buona stabilità, bassa immunogenicità e facile preparazione e modifica, che danno ai vettori polimerici cationici ampie prospettive di applicazione3,4. Per le applicazioni pratiche in biomedicina, i ricercatori devono trovare un vettore di polimeri cationici con alta efficienza, bassa tossicità e buona capacità di targeting5. Tra tutti i portatori di polimeri, i copolimeri a blocchi sono uno dei sistemi di somministrazione di farmaci più utilizzati. I copolimeri a blocchi sono studiati intensamente per la loro proprietà di auto-assemblaggio e le capacità di formare micelle, microsfere e nanoparticelle nella somministrazione di farmaci5. I copolimeri a blocchi possono essere sintetizzati tramite polimerizzazione vivente o metodi chimici click.
Nel 1956, Szwarc ealtri. Da allora, sono state sviluppate più tecniche per sintetizzare polimeri utilizzando questo metodo; così, la polimerizzazione vivente è vista come una pietra miliare della scienza dei polimeri8. La polimerizzazione vivente può essere classificata in polimerizzazione anionica vivente, polimerizzazione cationica vivente e polimerizzazione radicale di disattivazione reversibile (RDRP)9. Le polimerizzazioni anionica/cationica viventi hanno una portata di applicazione limitata a causa delle loro rigide condizioni di reazione10. La polimerizzazione radicale controllata/vivente (CRP) ha condizioni di reazione mite, disposizione conveniente e buona resa ed è stata quindi un importante centro di ricerca negli ultimi anni11. Nella CRP, le catene di propagazione attiva sono reversibilmente passivate in quelle dorate per ridurre la concentrazione di radicali liberi ed evitare la reazione bimolecolare della propagazione dei radicali a catena. La polimerizzazione di addizione può continuare solo se le catene di propagazione dormienti inattive sono animate reversibilmente in radicali a catena. Essendo una delle forme più promettenti di polimerizzazione radicale vivente, la polimerizzazione reversibile della catena di addizione-frammentazione (RAFT) è un metodo applicabile ai polimeri a blocchi con peso molecolare controllato e struttura, peso molecolare ridotto distribuzione e il trasporto di gruppi funzionali12. La chiave per una polimerizzazione RAFT di successo è l'effetto degli agenti di trasferimento a catena, di solito dithioesters, che possiedono una costante di trasferimento a catena molto alta.
In questo documento, un metodo di polimerizzazione RAFT è stato progettato per preparare il polimero a blocchi BNHEMA-b-APMA, prendendo 4,4'-azobis (4-cyanovaleric acid) (ACVA) come agente di lancio della catena e 4-cianopentanoico dithiobenzoate (CTP) come agente di trasferimento a catena. La polimerizzazione RAFT è stata usata due volte per introdurre BNHEMA nei portatori di polimeri cationici. Successivamente, i gruppi di ammine nella catena APMA sono stati modificati con la methionina e il reagente di guanidinylation 1-amidinopyrazole idroclororuro. Facendo l'uso delle cariche positive del reagente di guanidinylation e della struttura scheletro di polimeri methacrilimide, l'efficienza di assorbimento cellulare dei portatori di polimeri a blocchi ottenuti è stata migliorata.

<table>
<tbody>
<tr>
<td>1-hydroxybenzotriazole</td>
<td>Macklin Biochemical Co., Ltd,China</td>
<td>H810970</td>
<td>&ge;97.0%</td>
</tr>
<tr>
<td>1,4-dioxane</td>
<td>Sinopharm chemical reagent Co., Ltd, China</td>
<td>10008918</td>
<td>AR</td>
</tr>
<tr>
<td>1-amidinopyrazole Hydrochloride</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>A107935</td>
<td>98%</td>
</tr>
<tr>
<td>1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide hydrochloride</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>E106172</td>
<td>AR</td>
</tr>
<tr>
<td>4,4&#x2019;-azobis(4-cyanovaleric acid)</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>A106307</td>
<td>Analytical reagent (AR)</td>
</tr>
<tr>
<td>4-cyano-4-(phenylcarbonothioylthio)pentanoic Acid</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>C132316</td>
<td>&#x003E;97%(HPLC)</td>
</tr>
<tr>
<td>Acetate</td>
<td>Sinopharm chemical reagent Co., Ltd, China</td>
<td>81014818</td>
<td>AR</td>
</tr>
<tr>
<td>Acetone</td>
<td>Sinopharm chemical reagent Co., Ltd, China</td>
<td>10000418</td>
<td>AR</td>
</tr>
<tr>
<td>Agarose</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>A118881</td>
<td>High resolution</td>
</tr>
<tr>
<td>Ascorbic acid</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>A103533</td>
<td>AR</td>
</tr>
<tr>
<td>DMSO</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>D103272</td>
<td>AR</td>
</tr>
<tr>
<td>Ethylene glycol</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>E103319</td>
<td>AR</td>
</tr>
<tr>
<td>N-(3-aminopropyl)methacrylamide hydrochloride</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>N129096</td>
<td>&ge;98.0%(HPLC)</td>
</tr>
<tr>
<td>N,N-bis(2-hydroxyethyl)methacrylamide</td>
<td>ZaiQi Bio-Tech Co.,Ltd, China</td>
<td>CF259748</td>
<td>&ge;98.0%(HPLC)</td>
</tr>
<tr>
<td>Ninhydrin</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>N105629</td>
<td>AR</td>
</tr>
<tr>
<td>PBS buffer</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>P196986</td>
<td>pH 7.4</td>
</tr>
<tr>
<td>Plasmid DNA</td>
<td>BIOGOT Co., Ltd, China</td>
<td>pDNA-EGFP</td>
<td>pDNA-EGFP</td>
</tr>
<tr>
<td>Plasmid DNA</td>
<td>BIOGOT Co., Ltd, China</td>
<td>Pdna</td>
<td>pDNA</td>
</tr>
<tr>
<td>Sodium carbonate decahydrate</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>S112589</td>
<td>AR</td>
</tr>
<tr>
<td>Trimethylamine</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>T103285</td>
<td>AR</td>
</tr>
</tbody>
</table>

methionine functionalized biocompatible block copolymers for targeted plasmid dna delivery

La polimerizzazione reversibile della catena di addizione (RAFT) integra i vantaggi della polimerizzazione radicale e della polimerizzazione vivente. Questo lavoro presenta la preparazione di copolimeri a blocchi biocompatibili funzionalizzati di methionina tramite la polimerizzazione RAFT. In primo luogo, N,N-bis(2-idxyethyl)methacrylamide-b-N-(3-aminopropyl)methacrylamide (BNHEMA-b-APMA, BA) è stato sintetizzato tramite la polimerizzazione RAFT utilizzando 4,4'-azobis(4-cyanovaleric acid) (ACVA) come l'agente di incapacità e il dithiobenzoate (CTP) dell'acido a catena (CTP) come agente di trasferimento a catena. Successivamente, N,N-bis(2-hydroxyethyl)methacrylamide-b-N-(3-guanididinopropyl)methacrylamide (methionina innegio BNHEMA-b-GPMA, mBG) è stato preparato modificando i gruppi di ammine in APMA con methionina e guanidine Gruppi. Tre tipi di polimeri a blocchi, mBG1, mBG2 e mBG3, sono stati sintetizzati per il confronto. Una reazione ninhydrin è stata utilizzata per quantificare il contenuto di APMA; mBG1, mBG2 e mBG3 avevano rispettivamente il 21%, il 37% e il 52% di APMA. I risultati della cromatografia permeazione del gel (GPC) hanno mostrato che i copolimeri BA possiedono pesi molecolari di 16.200 (BA1), 20.900 (BA2) e 27.200 (BA3) g/mol. È stata studiata anche la capacità complessa del DNA plasmide (pDNA) dei portatori genici del copolimero del blocco ottenuto. I rapporti di carica (N/P) erano rispettivamente 8, 16 e 4 quando il pDNA era completamente complesso con mBG1, mBG2, mBG3. Quando il rapporto N/P dei polimes mBG/pDNA era superiore a 1, il potenziale di mBG era positivo. Con un rapporto N/P compreso tra 16 e 32, la dimensione media delle particelle dei poliplex mBG/pDNA era compresa tra 100-200 nm. Nel complesso, questo lavoro illustra un protocollo semplice e conveniente per la sintesi del vettore di copolimeri a blocchi.

La BNHEMA è stata alimentata in base al grado oggettivo di polimerizzazione mostrato nella tabella 1; la procedura di sintesi di mBG è illustrata nella Figura 1. In primo luogo, l'omopolimero BNHEMA è stato preparato tramite il metodo di trasferimento a catena reversibile di aggiunta-frammentazione (RAFT) nel sistema della diossiae ad acqua, utilizzando il dithiobenzoate a cotonico acido cianopen come agente di trasferimento a catena. In secondo luogo, PBNHEMA è stato ut...

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Methionine Functionalized Biocompatible Block Copolymers for Targeted Plasmid DNA Delivery

Questo lavoro presenta la preparazione di copolimeri a blocchi biocompatibili funzionalizzati di methionina (mBG) tramite il metodo RAFT (reversibile addometto-frammentazione a catena di trasferimento). Sono state studiate anche la capacità di complessire il DNA plasmide del mBG ottenuto e la loro efficienza di trasfezione. Il metodo RAFT è molto utile per polimerizzare i monomeri contenenti gruppi funzionali speciali.

Meticolosina Sistemi colatori di blocchi biocompatibili per la consegna mirata del DNA plasmide

Reversible addition-fragmentation chain transfer (RAFT) polymerization integrates the advantages of radical polymerization and living polymerization. This ...

I portatori di farmaci polimerici cationici hanno i vantaggi di una buona stabilità, bassa immunogenicità e facile preparazione e modifica. Qui, offriamo un metodo rapido e semplice per la sua sintesi. Il metodo di polimerizzazione reversibile di trasferimento della catena di addizione-frammentazione è un metodo applicabile ai polimeri a blocchi di snervamento con peso molecolare controllato e struttura e che trasportano gruppi funzionali.Questi portatori di farmaci possono trasportare contemporaneamente diversi farmaci per ottenere il trattamento di collaborazione di cancro, infiammazione e altre malattie. La polimerizzazione IFT è un metodo classico, e questo protocollo fornisce un esempio della sua applicazione nella terapia genica. La chiave del successo per la sintesi di questo polimero è controllare con precisione la temperatura di reazione.È più consigliabile utilizzare un bagno d'olio che un bagno d'acqua. Per iniziare questa procedura, ottenere un pallone a fondo rotondo con un tappo di gomma e un agitatore magnetico da utilizzare come bottiglia di polimerizzazione. Sciogliere 1,87 grammi di BIS-idrossi HEMA in un millilitro di acqua distillata nella bottiglia di polimerizzazione.In un bicchiere da cinque millilitri, sciogliere 0,03 grammi di CTP e 0,02 grammi di ACVA in 0,5 millilitri di 1, 4-diossano. Aggiungere questa miscela alla bottiglia di polimerizzazione. Quindi, utilizzare una trappola di condensa per congelare la soluzione nella bottiglia di polimerizzazione.Fissare la bottiglia al supporto di ferro e utilizzare un condotto inciampato con un ago per aspirare e iniettare azoto nella miscela di reazione. Quindi, sigillare la bottiglia di polimerizzazione e scongelare la soluzione a temperatura ambiente per 30 minuti. Ripetere questo ciclo di congelamento-pompa-scongelamento tre volte.Successivamente, mettere la bottiglia in un bagno d'olio a 70 gradi Celsius e lasciare che la soluzione reagisca per 24 ore sotto l'atmosfera di azoto. Il giorno successivo, raffreddare la bottiglia di polimerizzazione a zero gradi Celsius e aprire il tappo di gomma per terminare la reazione di polimerizzazione. Successivamente, preraffreddare l'acetone in frigorifero a -20 gradi Celsius per due ore e mescolarlo con la soluzione di reazione nella bottiglia di polimerizzazione con un rapporto di 50 a uno.Centrifugare questa miscela a 8.200 volte g per 10 minuti per rimuovere l'acetone e raccogliere il precipitato. Per purificare il poli bis-idrossi idrossi HEMA sintetizzato, sciogliere il precipitato raccolto in due millilitri di acqua pura. Quindi, mescolarlo con 100 millilitri di acetone preraffreddato con un rapporto da uno a 50.Centrifugare la soluzione a 8.200 volte g per 10 minuti per raccogliere il precipitato. Ripetere tre volte questo processo di purificazione della dissoluzione, miscelazione e centrifugazione del precipitato. In primo luogo, sciogliere 0,96 grammi di APMA e 0,93 grammi del poli bis-idrossiere purificato HEMA in cinque millilitri di acqua distillata in un becher da 10 millilitri.Sciogliere 0,01 grammi di ACVA in 0,5 millilitri da 1, 4-diossano e aggiungerlo alla soluzione APMA e poly bis-idrossi HEMA. Trasferire questa miscela in una bottiglia di polimerizzazione e ventilare con azoto secco per un'ora. Quindi, metti la bottiglia di polimerizzazione in un bagno d'olio a 70 gradi Celsius e lasciala reagire per 24 ore sotto l'atmosfera di azoto.Il giorno successivo, raffreddare la bottiglia di polimerizzazione a zero gradi Celsius e aprire il tappo di gomma per terminare la soluzione del processo di polimerizzazione. Per cominciare, seminare cellule MCF-7 nei pozzi di una piastra di sei po 'ad una densità di 20.000 cellule per pozzo. Coltura delle cellule in un incubatore umidificato a 37 gradi Celsius con anidride carbonica al 5% per 12 ore.Successivamente, sostituire il mezzo di coltura con il mezzo di coltura fresco contenente polimero cationico e poliplex pDNA di diverso rapporto tra rapporto azoto-fosforo. Coltura delle cellule per sei ore, quindi sostituire il mezzo con due millilitri di mezzo RPMI 1640 fresco. Continuare a coltivare per 48 ore.Quindi, raccogliere le cellule e utilizzare un citometro a flusso per rilevare la fluorescenza verde. In questo studio, i copolimeri a blocchi biocompatibili funzionalizzati alla meionina vengono preparati attraverso il metodo reversibile di trasferimento della catena di addizione-frammentazione e viene studiata la capacità di carnagione del DNA plasmide dell'mBG ottenuto e la loro efficienza di trasfezione. La dimensione media delle particelle e il potenziale zeta dei poliplex mBG/pDNA sono 124 nanometri e più 15,7 millivolt, rispettivamente, con un rapporto N-P di 16.Il ritardo elettroforetico rivela che il pDNA con un rapporto N-P pari a zero può muoversi senza ritegno nel gel di agarosio ed è osservato come una striscia nell'imager del gel. Quando il pDNA è complesso con mBG, il movimento del pDNA è ritardato e, successivamente, la luminosità della banda viene ridotta. Ciò dimostra che mBG può complessare completamente il pDNA quando la N a P è superiore a quattro.La citotossicità dei poliplex mBG/pDNA viene quindi misurata utilizzando il saggio MTT standard Questi risultati mostrano che i poliplex mBG/pDNA hanno citotossicità rispetto ai polilessi PEI/pDNA ai rapporti N-p di quattro, otto, 16 e 32. Come si può anche vedere, la citotossicità dei polilessi mBG/pDNA aumenta con un aumento del rapporto N-P. Questo aumento della citotossicità è il risultato del componente GPMA caricato positivamente.Il rapporto N-P utilizzato nell'esperimento di trasfezione del pDNA viene selezionato in base ai risultati della citotossicità. Le capacità di trasfezione di mBG1, mBG2 e mBG3 vengono confrontate misurando l'intensità di fluorescenza della GFP, e i risultati hanno mostrato che mBG3 è il vettore genico ottimale. È importante esaurire l'aria dal pallone a fondo rotondo del limo e mantenere la temperatura di reazione.I portatori di farmaci polimerici ottenuti possono essere applicati alla co-somministrazione di farmaci chemioterapici e farmaci genetici per trattare sinergisticamente il cancro resistente ai farmaci. Il meccanismo molecolare di combinazione di farmaci genetici e farmaci chemioterapici può essere ulteriormente esplorato per il trattamento di tumori resistenti ai farmaci. L'acetone è classificato come a bassa tossicità per la sua tossicità acuta.Le chiavi, l'inalazione o il contatto con gli occhi o la pelle devono essere evitati. Evitare il rischio di scottature durante la procedura di riscaldamento.

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18F-Labeling of Radiotracers Functionalized with a Silicon Fluoride Acceptor (SiFA) for Positron Emission Tomography

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18 mi lato Etichettatura F dei radiotracciati funzionalizzata con un accettatore di fluoruro di silicio (SiFA) per la tomografia a emissione di positroni