Name: methionine functionalized biocompatible block copolymers for targeted plasmid dna delivery
Uploaded: 2019-08-06T12:30:00
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이 연구는 중국의 국가 핵심 연구 개발 프로그램 (No. 2016YFC0905900), 중국 국립 자연 과학 재단 (No. 81801827, 81872365), 장쑤성의 기초 연구 프로그램 (자연 과학 재단, 아니. BK20181086) 및 강수암병원 과학연구기금(No. ZK201605).

1. BNHEMA 폴리머의 합성 (PBNHEMA)
<ol><li>1.87 g의 N,N-비스(2-하이드록세틸)메타크릴아미드(BNHEMA)를 중합 병에 증류수 1 mL에 용해시켰다. 참고 : 중합 병은 고무 스토퍼와 자기 교반기와 둥근 바닥 플라스크입니다.</li>
	<li>0.03 g의 4-시안펜타노산 디티오벤조이트(CTP)와 0.02 g의 4,4'-아조비스(4-시안발라제드)(ACVA)를 5 mL 비커에 0.5 mL의 다이옥산에 녹입니다. 이어서, CTP 및 ACVA 용액을 1.1단계에...

<ol>
	<li>Flotte, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+and+Cell+Therapy+in+2018:+A+Look+Ahead.">Gene and Cell Therapy in 2018: A Look Ahead.</a> Human Gene Therapy. 29, 1-1 (2018).</li><li>Huang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanomedicine-based+combination+anticancer+therapy+between+nucleic+acids+and+small-molecular+drugs.">Nanomedicine-based combination anticancer therapy between nucleic acids and small-molecular drugs.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 115, 82-97 (2017).</li><li>Wu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversing+of+multidrug+resistance+breast+cancer+by+co-delivery+of+P-gp+siRNA+and+doxorubicin+via+folic+acid-modified+core-shell+nanomicelles.">Reversing of multidrug resistance breast cancer by co-delivery of P-gp siRNA and doxorubicin via folic acid-modified core-shell nanomicelles.</a> Colloids &amp; Surfaces B Biointerfaces. 138, 60-69 (2016).</li><li>Quader, S., Kataoka, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanomaterial-Enabled+Cancer+Therapy.">Nanomaterial-Enabled Cancer Therapy.</a> Molecular Therapy. 25, 1501-1513 (2017).</li><li>Wu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multivalent+methionine-functionalized+biocompatible+block+copolymers+for+targeted+siRNA+delivery+and+subsequent+reversal+effect+on+adriamycin+resistance+in+human+breast+cancer+cell+line+MCF-7/ADR.">Multivalent methionine-functionalized biocompatible block copolymers for targeted siRNA delivery and subsequent reversal effect on adriamycin resistance in human breast cancer cell line MCF-7/ADR.</a> Journal of Gene Medicine. 19, e2969 (2017).</li><li>Szwarc, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=‘Living’+Polymers.">‘Living’ Polymers.</a> Nature. 178, 168-169 (1956).</li><li>Szwarc, M., Rembaum, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polymerization+of+methyl+methacrylate+initiated+by+an+electron+transfer+to+the+monomer.">Polymerization of methyl methacrylate initiated by an electron transfer to the monomer.</a> Journal of Polymer Science. 22 (100), 189-191 (1956).</li><li>Mukhopadhyay, R. D., Ajayaghosh, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Living+supramolecular+polymerization.">Living supramolecular polymerization.</a> Science. 349, 241 (2015).</li><li>Ozkose, U. U., Altinkok, C., Yilmaz, O., Alpturk, O., Tasdelen, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In-situ+preparation+of+poly(2-ethyl-2-oxazoline)/clay+nanocomposites+via+living+cationic+ring-opening+polymerization.">In-situ preparation of poly(2-ethyl-2-oxazoline)/clay nanocomposites via living cationic ring-opening polymerization.</a> European Polymer Journal. 88, 586-593 (2017).</li><li>Wu, W., Wang, W., Li, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Star+polymers:+Advances+in+biomedical+applications.">Star polymers: Advances in biomedical applications.</a> Progress in Polymer Science. 46, 55-85 (2015).</li><li>Boyer, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Copper-Mediated+Living+Radical+Polymerization+(Atom+Transfer+Radical+Polymerization+and+Copper(0)+Mediated+Polymerization):+From+Fundamentals+to+Bioapplications.">Copper-Mediated Living Radical Polymerization (Atom Transfer Radical Polymerization and Copper(0) Mediated Polymerization): From Fundamentals to Bioapplications.</a> Chemical Reviews. 116, 1803-1949 (2016).</li><li>Keddie, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+guide+to+the+synthesis+of+block+copolymers+using+reversible-addition+fragmentation+chain+transfer+(RAFT)+polymerization.">A guide to the synthesis of block copolymers using reversible-addition fragmentation chain transfer (RAFT) polymerization.</a> Chemical Society Reviews. 43, 496-505 (2014).</li><li>Wu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guanidinylated+3-gluconamidopropyl+methacrylamide-s-3-aminopropyl+methacrylamide+copolymer+as+siRNA+carriers+for+inhibiting+human+telomerase+reverse+transcriptase+expression.">Guanidinylated 3-gluconamidopropyl methacrylamide-s-3-aminopropyl methacrylamide copolymer as siRNA carriers for inhibiting human telomerase reverse transcriptase expression.</a> Drug Delivery. 20, 296-305 (2013).</li><li>Qin, Z., Liu, W., Guo, L., Li, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+on+Guanidinated+N-3-Aminopropyl+Methacrylamide-N-2-Hydroxypropyl+Methacrylamide+Co-polymers+as+Gene+Delivery+Carrier.">Studies on Guanidinated N-3-Aminopropyl Methacrylamide-N-2-Hydroxypropyl Methacrylamide Co-polymers as Gene Delivery Carrier.</a> Journal of Biomaterials Science, Polymer Edition. 23, 1-4 (2012).</li><li>Friedman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Applications+of+the+Ninhydrin+Reaction+for+Analysis+of+Amino+Acids,+Peptides,+and+Proteins+to+Agricultural+and+Biomedical+Sciences.">Applications of the Ninhydrin Reaction for Analysis of Amino Acids, Peptides, and Proteins to Agricultural and Biomedical Sciences.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 52, 385-406 (2004).</li><li>Habuchi, S., Yamamoto, T., Tezuka, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthesis+of+Cyclic+Polymers+and+Characterization+of+Their+Diffusive+Motion+in+the+Melt+State+at+the+Single+Molecule+Level.">Synthesis of Cyclic Polymers and Characterization of Their Diffusive Motion in the Melt State at the Single Molecule Level.</a> Journal of Visualized Experiments. (115), 1-9 (2016).</li><li>Rao, D. A., Nguyen, D. X., Mishra, G. P., Doddapaneni, B. S., Alani, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+and+Characterization+of+Individual+and+Multi-drug+Loaded+Physically+Entrapped+Polymeric+Micelles.">Preparation and Characterization of Individual and Multi-drug Loaded Physically Entrapped Polymeric Micelles.</a> Journal of Visualized Experiments. 102, 1-5 (2015).</li></ol>

본 연구는 일련의 BNHEMA-b-APMA 블록 폴리머 양이온 유전자 운반체를 소개하였다. 이들 블록 중합체는 가역적 첨가-단편화 사슬 전달(RAFT) 방법을 통해 합성되었다. 친수성 세그먼트 BNHEMA는 용해도를 향상시키기 위하여 소개되었습니다. 메티오닌 및 구아니딘 기는 표적 능력 및 형질감염 효율을 향상시키기 위해 수정되었다5. MBG 공중합체에서 APMA 사슬 함량이 증가하고 관과이니디?...

최근에는 모든 종류의 질병을 치료하는 약물로서 핵산의 치료적 전달을 위한 유전자 요법이 등장하고있다1. 플라스미드 DNA(pDNA) 및 소형 간섭 RNA(siRNA)를 포함하는 유전자 약물의 개발은 약물 전달 시스템(DDS)2의안정성 및 효율성에 의존한다. 모든 DDS 중에서, 양이온 성 중합체 담체는 양호한 안정성, 낮은 면역원성 및 허수제 및 변형의 장점을 가지고 있으며, 이는 양이온 성 중합체 담체광범위한 응용 적 전망3,4를준다. 생물 의학에서 실용적인 응용을 위해, 연구원은 높은 효율, 낮은 독성 및 좋은 표적화 능력5를가진 양이온 폴리머 캐리어를 찾아야 합니다. 모든 폴리머 캐리어 중에서 블록 공중합체는 가장 널리 사용되는 약물 전달 시스템 중 하나입니다. 블록 공중합체는 약물 전달에서 미셀, 마이크로스피어 및 나노입자를 형성하는 자기 조립특성 및 능력에 대해 집중적으로 연구된다 5. 블록 공중합체는 살아있는 중합 또는 클릭 화학 방법을 통해 합성될 수 있습니다.
1956 년, Szwarc 등은 살아있는 중합의 주제를 제기, 연쇄 파괴 반응없이 반응으로 정의6,7. 그 이후로, 이 방법을 사용하여 중합체를 합성하기 위해 여러 기술이 개발되었다; 따라서, 살아있는 중합은 폴리머 과학8의 이정표로 간주됩니다. 살아있는 중합체는 살아있는 음이온 중합, 살아있는 양이온 중합, 및 가역적 불활성화 라디칼 중합(RDRP) 9로 분류될 수있다. 살아있는 이온/양이온 중합은 그들의 엄격한 반응 조건10으로인해 제한된 적용 범위를 가지는다. 제어/살아있는 라디칼 중합(CRP)은 온화한 반응 조건, 편리한 처리량 및 양호한 수율을 가지며, 따라서 최근 몇 년 동안 주요 연구 초점이 되었다11. CRP에서, 활성 전파 사슬은 자유 라디칼의 농도를 감소시키고 전파 사슬 라디칼의 이중 분자 반응을 피하기 위해 휴면 으로 가역적으로 전달됩니다. 추가 된 중합은 비활성 휴면 전파 사슬이 가역적으로 사슬 라디칼로 애니메이션되는 경우에만 계속할 수 있습니다. 살아있는 라디칼 중합의 가장 유망한 형태 중 하나로서, 가역적 첨가 단편화 사슬 전달 (RAFT) 중합은 조절 된 분자량과 구조, 좁은 분자량을 가진 블록 폴리머를 항복시키는 방법에 적용 가능한 방법입니다. [1] 및 운반기능군12. 성공적인 RAFT 중합의 핵심은 매우 높은 사슬 전달 상수를 보유한 체인 전달제( 일반적으로 디티오에스테르)의 효과입니다.
이 논문에서, 뗏목 중합 방법은 BNHEMA-b-APMA 블록 폴리머를 제조하도록 설계되었으며, 4,4'-아조비스(4-시안산)(ACVA)를 개시제및 4-시안펜타노산 디티오벤조에이트(CTP)를 사슬 전달제로 복용하였다. RAFT 중합은 BNHEMA를 양이온 성 중합체 담체 내로 도입하기 위해 두 번 사용되었습니다. 이어서, APMA 사슬내의 아민 기는 메티오닌 및 구니디닐화 시약 1-아미디노피라졸 염산염으로 변형되었다. 구니디닐화 시약 및 메타크릴아미드 폴리머 골격 구조의 양전하를 이용하여, 얻어진 블록 폴리머 담체의 세포 섭취 효율이 향상되었다.

<table>
<tbody>
<tr>
<td>1-hydroxybenzotriazole</td>
<td>Macklin Biochemical Co., Ltd,China</td>
<td>H810970</td>
<td>&ge;97.0%</td>
</tr>
<tr>
<td>1,4-dioxane</td>
<td>Sinopharm chemical reagent Co., Ltd, China</td>
<td>10008918</td>
<td>AR</td>
</tr>
<tr>
<td>1-amidinopyrazole Hydrochloride</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>A107935</td>
<td>98%</td>
</tr>
<tr>
<td>1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide hydrochloride</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>E106172</td>
<td>AR</td>
</tr>
<tr>
<td>4,4&#x2019;-azobis(4-cyanovaleric acid)</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>A106307</td>
<td>Analytical reagent (AR)</td>
</tr>
<tr>
<td>4-cyano-4-(phenylcarbonothioylthio)pentanoic Acid</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>C132316</td>
<td>&#x003E;97%(HPLC)</td>
</tr>
<tr>
<td>Acetate</td>
<td>Sinopharm chemical reagent Co., Ltd, China</td>
<td>81014818</td>
<td>AR</td>
</tr>
<tr>
<td>Acetone</td>
<td>Sinopharm chemical reagent Co., Ltd, China</td>
<td>10000418</td>
<td>AR</td>
</tr>
<tr>
<td>Agarose</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>A118881</td>
<td>High resolution</td>
</tr>
<tr>
<td>Ascorbic acid</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>A103533</td>
<td>AR</td>
</tr>
<tr>
<td>DMSO</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>D103272</td>
<td>AR</td>
</tr>
<tr>
<td>Ethylene glycol</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>E103319</td>
<td>AR</td>
</tr>
<tr>
<td>N-(3-aminopropyl)methacrylamide hydrochloride</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>N129096</td>
<td>&ge;98.0%(HPLC)</td>
</tr>
<tr>
<td>N,N-bis(2-hydroxyethyl)methacrylamide</td>
<td>ZaiQi Bio-Tech Co.,Ltd, China</td>
<td>CF259748</td>
<td>&ge;98.0%(HPLC)</td>
</tr>
<tr>
<td>Ninhydrin</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>N105629</td>
<td>AR</td>
</tr>
<tr>
<td>PBS buffer</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>P196986</td>
<td>pH 7.4</td>
</tr>
<tr>
<td>Plasmid DNA</td>
<td>BIOGOT Co., Ltd, China</td>
<td>pDNA-EGFP</td>
<td>pDNA-EGFP</td>
</tr>
<tr>
<td>Plasmid DNA</td>
<td>BIOGOT Co., Ltd, China</td>
<td>Pdna</td>
<td>pDNA</td>
</tr>
<tr>
<td>Sodium carbonate decahydrate</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>S112589</td>
<td>AR</td>
</tr>
<tr>
<td>Trimethylamine</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>T103285</td>
<td>AR</td>
</tr>
</tbody>
</table>

methionine functionalized biocompatible block copolymers for targeted plasmid dna delivery

가역적 첨가-단편화 사슬 전달(RAFT) 중합은 라디칼 중합 및 살아있는 중합의 장점을 통합합니다. 이 작품은 RAFT 중합을 통해 메티오닌 기능화 생체 적합성 블록 공중합체의 준비를 제시한다. 첫째,N,N-비스(2-하이드록세틸)메타크릴라미드-b-N-(3-아미노프로필) 메타크릴라미드(BNHEMA-b-APMA, BA)를 사용하여 래프트 중합을 통해 합성하였다 4,4'-아조비스(4-시안발산)(ACVA)로 체인 전달제로서 개시제 및 4-시안펜타노산 디티오벤조에이트(CTP)를 개시한다. 이어서,N,N-비스(2-hydroxyethyl)메타크릴라미드-b-N-(3-guanidinopropyl) 메타크릴라미드(메티오닌 접목BNHEMA-b-GPMA, mBG)는 메티오닌 및 과니딘과 함께 APMA에서 아민 군을 변형시킴으로써 제조하였다. 그룹. 3종의 블록 폴리머, mBG1, mBG2 및 mBG3의 3가지 블록을 비교하기 위해 합성되었다. Ninhydrin 반응은 APMA 함량을 정량화하기 위하여 이용되었습니다; mBG1, mBG2 및 mBG3는 각각 21%, 37%, 52%의 APMA를 가졌다. 겔 투과 크로마토그래피(GPC) 결과는 BA 공중합체가 16,200(BA1), 20,900(BA2) 및 27,200(BA3) g/mol의 분자량을 가지고 있음을 보여주었다. 수득된 블록 공중합체 유전자 운반체의 플라스미드 DNA(pDNA) 복합성 도 조사되었다. 전하비(N/P)는 pDNA가 mBG1, mBG2, mBG3으로 완전히 복합화되었을 때 8, 16 및 4였습니다. mBG/pDNA 폴리플렉스의 N/P 비율이 1보다 높았을 때, mBG의 제타 전위는 양수였다. 16과 32 사이의 N/P 비율에서 mBG/pDNA 폴리펙스의 평균 입자 크기는 100-200 nm 사이였습니다. 전반적으로, 이 작업은 블록 공중합체 반송파 합성을 위한 간단하고 편리한 프로토콜을 나타낸다.

BNHEMA는 표1에 나타낸 중합의 객관적인 정도에 따라 공급되었다; mBG의 합성 절차는 그림1에 나와 있습니다. 첫째, BNHEMA 호모폴리머는 물-다이옥산 시스템에서 가역적 첨가-단편화 사슬 전달(RAFT) 방법을 통해 제조하였으며, 4-시안펜타노산 디티오벤조에이트사슬 전달제로서 사용하였다. 둘째, PBNHEMA는 BNHEMA-b-APMA 블록폴리머를 준비하는 사슬 전달제로서 사?...

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Methionine Functionalized Biocompatible Block Copolymers for Targeted Plasmid DNA Delivery

이 작품은 가역적 첨가 단편화 사슬 전달(RAFT) 방법을 통해 메티오닌 기능화된 생체 적합성 블록 공중합체(mBG)의 제조를 제시한다. 얻어진 mBG및 이들의 형질감염 효율의 플라스미드 DNA 복합성도 조사되었다. RAFT 방법은 특수 작용기 포함 단량체를 중합하는 데 매우 유용합니다.

표적 플라스미드 DNA 전달을 위한 메티오닌 기능화 생체 적합성 블록 공중합체

Reversible addition-fragmentation chain transfer (RAFT) polymerization integrates the advantages of radical polymerization and living polymerization. This ...

양이온 고분자 약물 운반체는 안정성이 좋고 면역원성이 낮으며 촉진제제 및 수정의 장점이 있다. 여기에서, 우리는 그것의 합성을 위한 신속하고 간단한 방법을 제공합니다. 가역적 첨가-단편화 사슬 전달 중합법제어 분자량 및 구조 및 운반 기능성 군을 가진 블록 폴리머를 산출하는 데 적용되는 방법이다.이 약 운반대는 동시에 암, 염증 및 그밖 질병의 협력 처리를 달성하기 위하여 다른 약을 전송할 수 있습니다. IFT 중합은 고전적인 방법이며, 이 프로토콜은 유전자 치료에 대한 적용의 예를 제공한다. 이 중합체의 합성을 위한 성공의 열쇠는 반응 온도를 정확하게 제어하는 것입니다.수조보다 오일 목욕을 사용하는 것이 좋습니다. 이 절차를 시작하려면, 중합 병으로 사용되는 고무 스토퍼와 자기 교반기로 둥근 바닥 플라스크를 얻을. 중합병내 증류수 1밀리리터에 비스 하이드록시 HEMA 1.87 그램을 녹입니다.5 밀리 리터 비커에서, 용해 0.03 CTP의 그램과 ACVA의 0.02 그램 에 0.5 밀리리터 1, 4-dioxane. 이 혼합물을 중합 병에 넣습니다. 그런 다음 응축수 트랩을 사용하여 중합 병에서 용액을 동결합니다.병을 철지지에 고정시키고 바늘로 걸린 도관을 사용하여 질소를 진공 청소기로 진공 청소기로 사용하고 반응 혼합물에 주입합니다. 그런 다음 중합병을 밀봉하고 실온에서 30분 동안 용액을 해동하십시오. 이 동결 펌프 해동 주기를 세 번 반복합니다.그 후, 병을 오일 목욕에 넣고 70섭씨로 젖을 짜서 질소 대기 하에서 24시간 동안 용액이 반응하도록 한다. 다음 날, 중합병을 섭씨 0도에서 식히고 고무 스토퍼를 열어 중합 반응을 종료한다. 다음으로, 2시간 동안 음수 20도의 냉장고에 아세톤을 미리 식히고, 50 대 1의 비율로 중합 병에 반응 용액과 혼합한다.원심분리기는 아세톤을 제거하고 침전물을 수집하기 위해 10분 동안 8, 200배 g에서 혼합물을 수집합니다. 합성 된 폴리 비스 하이드록시 HEMA를 정화하려면 수집 된 침전물을 순수 한 물의 2 밀리리터로 용해하십시오. 그런 다음 1 대 50의 비율로 미리 냉각 된 아세톤의 100 밀리리터와 섞습니다.침전물을 수집하는 데 10분 동안 8, 200배 g의 원심분리제. 침전물을 3번 용해, 혼합 및 원심분리하는 이 정화 과정을 반복한다. 먼저, 10밀리리터 비커에 증류수 5밀리리터에 0.96 그램의 APMA 와 0.93 그램의 정제 된 폴리 비스 하이드록시 HEMA를 용해하십시오.ACVA0.01 그램을 1, 4-디옥산의 0.5 밀리리터에 녹이고 APMA 및 폴리 비스 하이드록시 HEMA 용액에 추가하십시오. 이 혼합물을 중합 병에 옮기고 1 시간 동안 건조 질소로 환기시하십시오. 이어서, 중합병을 오일 목욕에 넣고 섭씨 70도에서, 질소 대기 하에서 24시간 동안 반응하게 한다.다음 날, 중합병을 섭씨 0도에서 식히고 고무 스토퍼를 열어 중합 공정 용액을 종료한다. 시작하려면 MCF-7 세포를 6웰 플레이트의 우물로 잘 하여 20, 000세포의 밀도가 있습니다. 가습 된 인큐베이터에서 세포를 섭씨 37도에서 12 시간 동안 5 %의 이산화탄소로 배양합니다.그 후, 배양 배지를 양이온 폴리머 및 pDNA 폴리플렉스 폴리플렉스를 함유하는 신선한 배양 배지로 대체하여 질소 대 인 비의 상이한 비율의 폴리플렉스를 대체한다. 6 시간 동안 세포를 배양 한 다음 배지를 신선한 RPMI 1640 배지의 2 밀리리터로 대체합니다. 48시간 동안 계속 배양하십시오.그런 다음, 세포를 수집하고, 녹색 형광을 검출하기 위해 유동 세포계를 사용합니다. 본 연구에서는, 메티오닌-기능성 생체적합성 블록 중합체는 가역적인 부화-단편화 사슬 전달 방법을 통해 제조되고, 얻어진 mBG의 플라스미드 DNA 복합 능력 및 이들의 트랜스포팅 효율을 조사한다. mBG/pDNA 폴리플렉스의 평균 입자 크기와 제타 전위는 각각 124나노미터와 15.7밀리볼트이며, N 대 P 비율은 16이다.전기 전도 체질은 N 대 P 비율이 0인 pDNA가 아가로즈 겔의 구속 없이 움직일 수 있으며 겔 이미저에서 줄무늬로 관찰된다는 것을 보여준다. pDNA가 mBG로 복잡해지면 pDNA의 움직임이 지연되고 그 후 대역의 밝기가 감소됩니다. 이는 MBG가 N에서 P까지 4개 이상이면 pDNA를 완전히 복잡하게 만들 수 있음을 보여준다.mBG/pDNA 폴리플렉스의 세포 독성은 다음 표준 MTT 분석기를 사용하여 측정된 다음 이러한 결과는 mBG/pDNA 폴리플렉스가 4, 8, 16 및 32의 N-p DNA 비에서 PEI/pDNA 폴리플렉스보다 세포 독성이 있음을 보여준다. 또한 볼 수 있듯이, mBG/pDNA 폴리플렉스의 세포 독성은 N 대 P 비율이 증가함에 따라 증가합니다. 이 증가 된 세포 독성은 양전하 GPMA 구성 요소의 결과입니다.pDNA 경질 실험에 사용되는 N-대 P 비율은 세포 독성 결과에 따라 선택된다. mBG1, mBG2 및 mBG3의 경질 능력은 GFP 형광 강도를 측정하여 비교되며, 그 결과는 mBG3가 최적의 유전자 담체임을 보여주었다. 실트 라운드 하단 플라스크에서 공기를 배출하고 반응 온도를 유지하는 것이 중요합니다.얻어진 중합체 약물 운반체는 화학요법 약물 및 유전자 약물의 공동 전달에 적용되어 약물 내성 암을 시너지 효과를 낼 수 있다. 유전자 약물과 화학 요법 약물의 조합의 분자 메커니즘은 약물 내성 종양의 치료를 위해 더 탐구 될 수 있습니다. 아세톤은 급성 독성에 대한 낮은 독성으로 평가된다.키, 흡입 또는 눈이나 피부와의 접촉을 피해야합니다. 가열 절차 중에 스케일링의 위험을 피하십시오.

Research

JoVE Journal

Chemistry

Microwave-assisted Intramolecular Dehydrogenative Diels-Alder Reactions for the Synthesis of Functionalized Naphthalenes/Solvatochromic Dyes

작용 Naphthalenes / Solvatochromic의 염료의 합성을위한 전자 레인지를 이용한 분자 Dehydrogenative Diels-앨더 반응

Functionalized naphthalenes have applications in a variety of research fields ranging from the synthesis of natural or biologically active molecules to ...

연구

화학

Synthesis and Characterization of Functionalized Metal-organic Frameworks

기능화의 합성 및 특성 금속 - 유기 프레임 워크

Metal-organic frameworks have attracted extraordinary amounts of research attention, as they are attractive candidates for numerous industrial and ...

Preparation and Characterization of SDF-1&#945;-Chitosan-Dextran Sulfate Nanoparticles

Preparation and Characterization of SDF-1ÃƒÅ½Ã‚Â±-Chitosan-Dextran Sulfate Nanoparticles

SDF-1α-키토산 덱스 트란 황산 나노 입자의 제조 및 특성

Chitosan (CS) and dextran sulfate (DS) are charged polysaccharides (glycans), which form polyelectrolyte complex-based nanoparticles when mixed under ...

Functionalization of Single-walled Carbon Nanotubes with Thermo-reversible Block Copolymers and Characterization by Small-angle Neutron Scattering

작은 각도 중성자 산란에 의한 열 가역적 블록 공중 합체 및 특성 단일 벽 탄소 나노 튜브의 기능화

We demonstrate a protocol for single-walled carbon nanotube functionalization using thermo-sensitive PEO-PPO-PEO triblock copolymers in an aqueous ...

Self-assembling Morphologies Obtained from Helical Polycarbodiimide Copolymers and Their Triazole Derivatives

나선형 폴리 카 보디이 미드 공중 합체 및 이들의 트리아 졸 유도체로부터 획득 자기 조립 모폴로지

A facile method for the preparation of polycarbodiimide-based secondary structures (e.g., nano-rings, &#34;craters,&#34; fibers, looped fibers, fibrous ...

Synthesis of a Thiol Building Block for the Crystallization of a Semiconducting Gyroidal Metal-sulfur Framework

반도체 Gyroidal 금속-황 프레임 워크의 결정 화에 대 한 Thiol 빌딩 블록의 합성

We present a method for preparing thioester molecules as the masked form of the thiol linkers and their utilization for accessing a semiconducting and ...

Preparation of Poly(pentafluorophenyl acrylate) Functionalized SiO2 Beads for Protein Purification

Preparation of Polypentafluorophenyl acrylate Functionalized SiO2 Beads for Protein Purification

단백질 정화에 대 한 Poly(pentafluorophenyl acrylate) 기능성 SiO2 구슬의 준비

We demonstrate a simple method to prepare poly(pentafluorophenyl acrylate) (poly(PFPA)) grafted silica beads for antibody immobilization and subsequent ...

Synthesis of Monodisperse Cylindrical Nanoparticles via Crystallization-driven Self-assembly of Biodegradable Block Copolymers

생분해성 블록 공합체의 결정화 구동 자가 조립을 통해 단분산 원통형 나노 입자의 합성

The production of monodisperse cylindrical micelles is a significant challenge in polymer chemistry. Most cylindrical constructs formed from diblock ...

Efficient Synthesis of All-Carbon Quaternary Centers via the Conjugate Addition of Functionalized Monoorganozinc Bromides

관 능 적 모노 아연 브로 미 데스의 결합체 첨가를 통한 전 탄소 4 급 센터의 효율적인 합성

The conjugate addition of organometallic reagents to &#945;,&#946;-unsaturated carbonyls represents an important method to generate C&#8211;C bonds in the ...