Name: methionine functionalized biocompatible block copolymers for targeted plasmid dna delivery
Uploaded: 2019-08-06T12:30:00
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Esta pesquisa foi apoiada pelo programa de pesquisa e desenvolvimento chave nacional da China (no. 2016YFC0905900), Fundação Nacional de ciência natural da China (nos. 81801827, 81872365), programa de pesquisa básica da província de Jiangsu (Fundação de ciências naturais, não. BK20181086), e Jiangsu Cancer hospital fundo de investigação científica (no. ZK201605).

1. síntese de BNHEMA polímero (PBNHEMA)
<ol><li>Dissolver 1,87 g de n, n-bis(2-Hydroxyethyl) METHACRYLAMIDE (bnhema) em 1 ml de água destilada em um frasco de polimerização. Nota: a garrafa de polimerização é um balão de fundo redondo com uma rolha de borracha e um agitador magnético.</li>
	<li>Dissolver 0, 3 g de 4-ácido cianopentanóico dithiobenzoato (CTP) e 0, 2 g de 4, 4 '-azobis (4-cyanovalericacid) (ACVA) em 0,5 mL de 1,4-dioxano em uma taça de 5 mL. Em seguida, adicione a soluç...

<ol>
	<li>Flotte, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+and+Cell+Therapy+in+2018:+A+Look+Ahead.">Gene and Cell Therapy in 2018: A Look Ahead.</a> Human Gene Therapy. 29, 1-1 (2018).</li><li>Huang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanomedicine-based+combination+anticancer+therapy+between+nucleic+acids+and+small-molecular+drugs.">Nanomedicine-based combination anticancer therapy between nucleic acids and small-molecular drugs.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 115, 82-97 (2017).</li><li>Wu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversing+of+multidrug+resistance+breast+cancer+by+co-delivery+of+P-gp+siRNA+and+doxorubicin+via+folic+acid-modified+core-shell+nanomicelles.">Reversing of multidrug resistance breast cancer by co-delivery of P-gp siRNA and doxorubicin via folic acid-modified core-shell nanomicelles.</a> Colloids &amp; Surfaces B Biointerfaces. 138, 60-69 (2016).</li><li>Quader, S., Kataoka, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanomaterial-Enabled+Cancer+Therapy.">Nanomaterial-Enabled Cancer Therapy.</a> Molecular Therapy. 25, 1501-1513 (2017).</li><li>Wu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multivalent+methionine-functionalized+biocompatible+block+copolymers+for+targeted+siRNA+delivery+and+subsequent+reversal+effect+on+adriamycin+resistance+in+human+breast+cancer+cell+line+MCF-7/ADR.">Multivalent methionine-functionalized biocompatible block copolymers for targeted siRNA delivery and subsequent reversal effect on adriamycin resistance in human breast cancer cell line MCF-7/ADR.</a> Journal of Gene Medicine. 19, e2969 (2017).</li><li>Szwarc, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=‘Living’+Polymers.">‘Living’ Polymers.</a> Nature. 178, 168-169 (1956).</li><li>Szwarc, M., Rembaum, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polymerization+of+methyl+methacrylate+initiated+by+an+electron+transfer+to+the+monomer.">Polymerization of methyl methacrylate initiated by an electron transfer to the monomer.</a> Journal of Polymer Science. 22 (100), 189-191 (1956).</li><li>Mukhopadhyay, R. D., Ajayaghosh, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Living+supramolecular+polymerization.">Living supramolecular polymerization.</a> Science. 349, 241 (2015).</li><li>Ozkose, U. U., Altinkok, C., Yilmaz, O., Alpturk, O., Tasdelen, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In-situ+preparation+of+poly(2-ethyl-2-oxazoline)/clay+nanocomposites+via+living+cationic+ring-opening+polymerization.">In-situ preparation of poly(2-ethyl-2-oxazoline)/clay nanocomposites via living cationic ring-opening polymerization.</a> European Polymer Journal. 88, 586-593 (2017).</li><li>Wu, W., Wang, W., Li, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Star+polymers:+Advances+in+biomedical+applications.">Star polymers: Advances in biomedical applications.</a> Progress in Polymer Science. 46, 55-85 (2015).</li><li>Boyer, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Copper-Mediated+Living+Radical+Polymerization+(Atom+Transfer+Radical+Polymerization+and+Copper(0)+Mediated+Polymerization):+From+Fundamentals+to+Bioapplications.">Copper-Mediated Living Radical Polymerization (Atom Transfer Radical Polymerization and Copper(0) Mediated Polymerization): From Fundamentals to Bioapplications.</a> Chemical Reviews. 116, 1803-1949 (2016).</li><li>Keddie, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+guide+to+the+synthesis+of+block+copolymers+using+reversible-addition+fragmentation+chain+transfer+(RAFT)+polymerization.">A guide to the synthesis of block copolymers using reversible-addition fragmentation chain transfer (RAFT) polymerization.</a> Chemical Society Reviews. 43, 496-505 (2014).</li><li>Wu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guanidinylated+3-gluconamidopropyl+methacrylamide-s-3-aminopropyl+methacrylamide+copolymer+as+siRNA+carriers+for+inhibiting+human+telomerase+reverse+transcriptase+expression.">Guanidinylated 3-gluconamidopropyl methacrylamide-s-3-aminopropyl methacrylamide copolymer as siRNA carriers for inhibiting human telomerase reverse transcriptase expression.</a> Drug Delivery. 20, 296-305 (2013).</li><li>Qin, Z., Liu, W., Guo, L., Li, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+on+Guanidinated+N-3-Aminopropyl+Methacrylamide-N-2-Hydroxypropyl+Methacrylamide+Co-polymers+as+Gene+Delivery+Carrier.">Studies on Guanidinated N-3-Aminopropyl Methacrylamide-N-2-Hydroxypropyl Methacrylamide Co-polymers as Gene Delivery Carrier.</a> Journal of Biomaterials Science, Polymer Edition. 23, 1-4 (2012).</li><li>Friedman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Applications+of+the+Ninhydrin+Reaction+for+Analysis+of+Amino+Acids,+Peptides,+and+Proteins+to+Agricultural+and+Biomedical+Sciences.">Applications of the Ninhydrin Reaction for Analysis of Amino Acids, Peptides, and Proteins to Agricultural and Biomedical Sciences.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 52, 385-406 (2004).</li><li>Habuchi, S., Yamamoto, T., Tezuka, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthesis+of+Cyclic+Polymers+and+Characterization+of+Their+Diffusive+Motion+in+the+Melt+State+at+the+Single+Molecule+Level.">Synthesis of Cyclic Polymers and Characterization of Their Diffusive Motion in the Melt State at the Single Molecule Level.</a> Journal of Visualized Experiments. (115), 1-9 (2016).</li><li>Rao, D. A., Nguyen, D. X., Mishra, G. P., Doddapaneni, B. S., Alani, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+and+Characterization+of+Individual+and+Multi-drug+Loaded+Physically+Entrapped+Polymeric+Micelles.">Preparation and Characterization of Individual and Multi-drug Loaded Physically Entrapped Polymeric Micelles.</a> Journal of Visualized Experiments. 102, 1-5 (2015).</li></ol>

Este estudo introduziu uma série de portadores do gene catiônicos do polímero do bloco de bnhema-b-APMA. Estes polímeros do bloco foram sintetizados através do método reversível da transferência chain da adição-fragmentação (JANGADA). O segmento hidrofílico BNHEMA foi introduzido para melhorar a solubilidade. Os grupos de metionina e guanidina foram modificados para melhorar a capacidade alvo e a eficiência de transfecção5. O conteúdo da cadeia de APMA aumentou e a guanidinilaçã...

Nos últimos anos, a terapia gênica surgiu para a entrega terapêutica de ácidos nucleicos como drogas para tratar todos os tipos de doenças1. O desenvolvimento de drogas genéticas, incluindo DNA plasmídeo (pDNA) e RNA interferente pequeno (siRNA), depende da estabilidade e eficiência do sistema de distribuição de fármacos (DDS)2. Entre todos os DDS, os portadores de polímero catiônico têm as vantagens de boa estabilidade, baixa imunogenicidade e preparo e modificação facile, que conferem às transportadoras de polímeros catiônicos amplas perspectivas de aplicação3,4. Para aplicações práticas em biomedicina, os pesquisadores devem encontrar um portador de polímero catiônico com alta eficiência, baixa toxicidade e boa capacidade de segmentação5. Entre todos os portadores de polímero, os copolímeros de blocos são um dos sistemas de entrega de drogas mais amplamente utilizados. Os copolímeros de blocos são intensamente estudados para sua propriedade e habilidades de automontagem para formar micelas, microesferas e nanopartículas na entrega de fármacos5. Os copolímeros do bloco podem ser sintetizados através da polimerização viva ou de métodos da química do clique.
Em 1956, Szwarc et al. elevaram o tema da polimerização viva, definindo-o como uma reação sem reações de quebra de cadeia6,7. Desde então, várias técnicas foram desenvolvidas para sintetizar polímeros utilizando este método; assim, a polimerização viva é vista como um marco da ciência do polímero8. A polimerização viva pode ser classificada na polimerização aniónica viva, na polimerização catiônica viva, e na polimerização radical reversível da desactivação (RDRP)9. As polimerizações ANIÓNICAS/catiônicas vivas têm um âmbito de aplicação limitado devido às suas condições de reacção rigorosas10. A polimerização controlada/viva do radical (CRP) tem condições de reação suaves, disposição conveniente, e bom rendimento e foi assim um foco principal da pesquisa nos últimos anos11. Na PCR, as cadeias de propagação ativas são passivadas reversivelmente em dormentes para reduzir a concentração de radicais livres e evitar a reação bimoleculares de propagação de radicais da cadeia. A polimerização da adição pode continuar somente se as correntes de propagação dormentes inativas são animadas reversivelmente em radicais Chain. Como uma das formas mais promissoras de polimerização radical viva, a polimerização reversível de transferência de cadeia de adição-fragmentação (RAFT) é um método aplicável a polímeros de blocos de produção com peso molecular e estrutura controlados, peso molecular estreito distribuição, e carregando grupos funcionais12. A chave à polimerização bem sucedida da JANGADA é o efeito de agentes de transferência Chain, geralmente dithioesters, que possuem constante de transferência Chain muito elevada.
Neste papel, um método da polimerização da JANGADA foi projetado preparar o polímero do bloco de BNHEMA-b-APMA, tomando 4, 4 '-azobis (ácido 4-cyanovaleric) (ACVA) como um agente de início e um dithiobenzoate do ácido 4-cyanopentanoic (CTP) como um agente de transferência Chain A polimerização do RAFT foi usada duas vezes para introduzir o BNHEMA nos portadores do polímero catiônico. Subseqüentemente, os grupos da amina na corrente de APMA foram modificados com metionina e o cloridrato 1-amidinopyrazole do reagente do guanidinylation. Fazendo o uso das cargas positivas do reagente do guanidinylation e da estrutura de esqueleto do polímero do metacrilamida, a eficiência celular da captação dos portadores do polímero do bloco obtido foi melhorada.

<table>
<tbody>
<tr>
<td>1-hydroxybenzotriazole</td>
<td>Macklin Biochemical Co., Ltd,China</td>
<td>H810970</td>
<td>&ge;97.0%</td>
</tr>
<tr>
<td>1,4-dioxane</td>
<td>Sinopharm chemical reagent Co., Ltd, China</td>
<td>10008918</td>
<td>AR</td>
</tr>
<tr>
<td>1-amidinopyrazole Hydrochloride</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>A107935</td>
<td>98%</td>
</tr>
<tr>
<td>1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide hydrochloride</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>E106172</td>
<td>AR</td>
</tr>
<tr>
<td>4,4&#x2019;-azobis(4-cyanovaleric acid)</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>A106307</td>
<td>Analytical reagent (AR)</td>
</tr>
<tr>
<td>4-cyano-4-(phenylcarbonothioylthio)pentanoic Acid</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>C132316</td>
<td>&#x003E;97%(HPLC)</td>
</tr>
<tr>
<td>Acetate</td>
<td>Sinopharm chemical reagent Co., Ltd, China</td>
<td>81014818</td>
<td>AR</td>
</tr>
<tr>
<td>Acetone</td>
<td>Sinopharm chemical reagent Co., Ltd, China</td>
<td>10000418</td>
<td>AR</td>
</tr>
<tr>
<td>Agarose</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>A118881</td>
<td>High resolution</td>
</tr>
<tr>
<td>Ascorbic acid</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>A103533</td>
<td>AR</td>
</tr>
<tr>
<td>DMSO</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>D103272</td>
<td>AR</td>
</tr>
<tr>
<td>Ethylene glycol</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>E103319</td>
<td>AR</td>
</tr>
<tr>
<td>N-(3-aminopropyl)methacrylamide hydrochloride</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>N129096</td>
<td>&ge;98.0%(HPLC)</td>
</tr>
<tr>
<td>N,N-bis(2-hydroxyethyl)methacrylamide</td>
<td>ZaiQi Bio-Tech Co.,Ltd, China</td>
<td>CF259748</td>
<td>&ge;98.0%(HPLC)</td>
</tr>
<tr>
<td>Ninhydrin</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>N105629</td>
<td>AR</td>
</tr>
<tr>
<td>PBS buffer</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>P196986</td>
<td>pH 7.4</td>
</tr>
<tr>
<td>Plasmid DNA</td>
<td>BIOGOT Co., Ltd, China</td>
<td>pDNA-EGFP</td>
<td>pDNA-EGFP</td>
</tr>
<tr>
<td>Plasmid DNA</td>
<td>BIOGOT Co., Ltd, China</td>
<td>Pdna</td>
<td>pDNA</td>
</tr>
<tr>
<td>Sodium carbonate decahydrate</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>S112589</td>
<td>AR</td>
</tr>
<tr>
<td>Trimethylamine</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>T103285</td>
<td>AR</td>
</tr>
</tbody>
</table>

methionine functionalized biocompatible block copolymers for targeted plasmid dna delivery

A polimerização reversível da transferência chain da adição-fragmentação (JANGADA) integra as vantagens da polimerização radical e da polimerização viva. Este trabalho apresenta a preparação de copolímeros de bloco biocompatível funcionalizados com metionina via polimerização de JANGADA. Primeiramente, n, n-bis(2-Hydroxyethyl) methacrylamide-b-n-(3-AMINOPROPYL) methacrylamide (bnhema-b-APMA, BA) foi sintetizado através da polimerização da jangada usando 4, 4 '-AZOBIS (ácido 4-cyanovaleric) (ACVA) como Agente de iniciação e dithiobenzoate do ácido 4-cyanopentanoic (CTP) como o agente de transferência Chain. Subseqüentemente, n, n-bis(2-Hydroxyethyl) methacrylamide-b-n-(3-guanidinopropyl) methacrylamide (metionina enxertada bnhema-b-gpma, MBG) foi preparada modificando grupos de amina em APMA com metionina e guanidina Grupos. Três tipos de polímeros de bloco, mBG1, mBG2 e mBG3, foram sintetizados para comparação. Uma reação de ninidrina foi usada para quantificar o índice de APMA; mBG1, mBG2 e mBG3 tiveram 21%, 37% e 52% de APMA, respectivamente. Os resultados da cromatografia de permeação de gel (GPC) mostraram que os copolímeros da BA possuem pesos moleculares de 16.200 (BA1), 20900 (BA2) e 27200 (BA3) g/mol. A habilidade complexantes do ADN do plasmídeo (PDNA) dos portadores do gene obtido do copolímero do bloco foi investigada igualmente. Os rácios de carga (N/P) foram 8, 16 e 4 quando o pDNA foi complexado completamente com mBG1, mBG2, mBG3, respectivamente. Quando a relação N/P de poliplexes mBG/pDNA foi superior a 1, o potencial zeta de mBG foi positivo. Em uma relação de N/P entre 16 e 32, o tamanho de partícula médio de maioria de MBG/PDNA era entre 100-200 nanômetro. Globalmente, este trabalho ilustra um protocolo simples e conveniente para a síntese do portador do copolímero do bloco.

O BNHEMA foi alimentado de acordo com o grau objetivo de polimerização mostrado na tabela 1; o procedimento de síntese de mBG é mostrado na Figura 1. Firstly, o homopolímero de BNHEMA foi preparado através do método reversível da transferência chain da adição-fragmentação (JANGADA) no sistema da água-dioxane, usando o dithiobenzoate do ácido 4-cyanopentanoic como um agente de transferência Chain. Em segundo lugar, PBNHEMA foi usado como um agente de transfer?...

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Methionine Functionalized Biocompatible Block Copolymers for Targeted Plasmid DNA Delivery

Este trabalho apresenta a preparação de copolímeros de blocos biocompatíveis (mBG) funcionalizados com metionina através do método de transferência reversível da cadeia de fragmentação de adição (RAFT). A habilidade complexantes do DNA do plasmídeo do MBG obtido e sua eficiência do transfection foram investigadas igualmente. O método da JANGADA é muito benéfico para os monómeros de polimerização que contêm grupos funcionais especiais.

Methionine Funcionalizou o bloco biocompatible copolímeros para a entrega alvejada do ADN do plasmid

Reversible addition-fragmentation chain transfer (RAFT) polymerization integrates the advantages of radical polymerization and living polymerization. This ...

Os portadores de drogas de polímero cationic têm as vantagens de boa estabilidade, baixa imunogenicidade e preparação e modificação fáceis. Aqui, oferecemos um método rápido e simples para sua síntese. O método de polimerização da cadeia de transferência de adição reversível é um método aplicável para produzir polímeros de bloco com peso molecular controlado e estrutura e carregando grupos funcionais.Esses portadores de drogas podem transportar simultaneamente diferentes drogas para alcançar o tratamento colaboratório do câncer, inflamação e outras doenças. A polimerização IFT é um método clássico, e este protocolo dá um exemplo de sua aplicação na terapia genética. A chave para o sucesso para a síntese deste polímero é controlar precisamente a temperatura de reação.É mais aconselhável usar um banho de óleo do que um banho de água. Para iniciar este procedimento, obtenha um frasco de fundo redondo com uma rolha de borracha e um agitador magnético para ser usado como garrafa de polimerização. Dissolva 1,87 gramas de bis-hidroxi HEMA em um mililitro de água destilada na garrafa de polimerização.Em um béquer de cinco mililitros, dissolva 0,03 gramas de CTP e 0,02 gramas de ACVA em 0,5 mililitros de 1, 4-dioxano. Adicione essa mistura à garrafa de polimerização. Em seguida, use uma armadilha de condensado para congelar a solução na garrafa de polimerização.Fixar a garrafa no suporte de ferro, e use um conduíte tropeçado com uma agulha para aspirar e injetar nitrogênio na mistura de reação. Em seguida, sele a garrafa de polimerização e descongele a solução à temperatura ambiente por 30 minutos. Repita este ciclo de congelamento da bomba três vezes.Depois disso, coloque a garrafa em um banho de óleo a 70 graus Celsius e deixe a solução reagir por 24 horas sob a atmosfera de nitrogênio. No dia seguinte, esfrie a garrafa de polimerização a zero graus Celsius e abra a rolha de borracha para terminar a reação de polimerização. Em seguida, acetona pré-doença em uma geladeira a 20 graus Celsius negativos por duas horas, e misture-a com a solução de reação na garrafa de polimerização a uma proporção de 50 para um.Centrifugar esta mistura a 8.200 vezes g por 10 minutos para remover a acetona e coletar o precipitado. Para purificar o HEMA poli-hidroxy sintetizado, dissolva o precipitado coletado em dois mililitros de água pura. Em seguida, misture-o com 100 mililitros de acetona pré-identificada em uma proporção de um a 50.Centrifugar a solução a 8.200 vezes g por 10 minutos para coletar o precipitado. Repita este processo de purificação de dissolver, misturar e centrifugar o precipitado três vezes. Primeiro, dissolver 0,96 gramas de APMA e 0,93 gramas do purificado poly bis-hidroxy HEMA em cinco mililitros de água destilada em um béquer de 10 mililitros.Dissolva 0,01 gramas de ACVA em 0,5 mililitros de 1, 4 dioxano, e adicione isso à solução APMA e poly bis-hidroxy HEMA. Transfira essa mistura para uma garrafa de polimerização e ventile com nitrogênio seco por uma hora. Em seguida, coloque a garrafa de polimerização em um banho de óleo a 70 graus Celsius, e deixe-a reagir por 24 horas sob a atmosfera de nitrogênio.No dia seguinte, esfrie a garrafa de polimerização a zero graus Celsius e abra a rolha de borracha para terminar a solução do processo de polimerização. Para começar, as células de sementes MCF-7 nos poços de uma placa de seis poços a uma densidade de 20.000 células por poço. Cultue as células em uma incubadora umidificada a 37 graus Celsius com 5% de dióxido de carbono por 12 horas.Depois disso, substitua o meio de cultura por meio de cultura fresca contendo polímeros cônicos e poliplex pDNA de diferentes proporções de relações nitrogênio-fósforo. Cultue as células por seis horas e, em seguida, substitua o meio por dois mililitros de meio RPMI 1640 fresco. Continue a culminar por 48 horas.Em seguida, colete as células e use um citômetro de fluxo para detectar a fluorescência verde. Neste estudo, copolímeros de blocos biocompatíveis biocompatíveis de methionina são preparados através do método reversível de transferência da cadeia de adição e fragmentação, e a capacidade de complexo de DNA plasmídeo do mBG obtido e sua eficiência de transfecção são investigadas. O tamanho médio das partículas e o potencial zeta dos poliplexes mBG/pDNA são de 124 nanômetros e mais 15,7 milivolts, respectivamente, em uma relação N-para-P de 16.O retardo eletroforético revela que pDNA com uma relação N-para-P de zero pode mover-se sem contenção no gel de agarose e é observado como uma listra no imager gel. Quando o pDNA é complexo com mBG, o movimento do pDNA é retardado e, posteriormente, o brilho da banda é reduzido. Isso mostra que o mBG pode complexo completamente o pDNA quando o N a P é maior que quatro.A citotoxicidade dos poliplexes mBG/pDNA é então medida usando o ensaio padrão MTT Estes resultados mostram que os poliplexes mBG/pDNA têm citotoxicidade superior aos poliplexes PEI/pDNA nas proporções N-to-P de quatro, oito, 16 e 32. Como também pode ser visto, a citotoxicidade dos poliplexes mBG/pDNA aumenta com o aumento da relação N-para-P. Este aumento da citotoxicidade é resultado do componente GPMA carregado positivamente.A razão N-para-P utilizada no experimento de transfecção pDNA é selecionada de acordo com os resultados da citotoxicidade. As habilidades de transfecção de mBG1, mBG2 e mBG3 são comparadas medindo a intensidade de fluorescência GFP, e os resultados mostraram que o mBG3 é o portador do gene ideal. É importante esgotar o ar do frasco de fundo redondo e manter a temperatura de reação.Os portadores de medicamentos polímeros obtidos podem ser aplicados à co-entrega de medicamentos quimioterápicos e medicamentos genéticos para tratar sinergicamente câncer resistente a medicamentos. O mecanismo molecular de combinação de drogas genéticas e quimioterapia pode ser ainda mais explorado para o tratamento de tumores resistentes a medicamentos. A acetona é classificada como baixa tóxica por sua toxicidade aguda.As chaves, a inalação ou o contato com os olhos ou a pele devem ser evitados. Evite o risco de queimaduras durante o procedimento de aquecimento.

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