Name: methionine functionalized biocompatible block copolymers for targeted plasmid dna delivery
Uploaded: 2019-08-06T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Methionine Functionalized Biocompatible Block Copolymers for Targeted Plasmid DNA Delivery at JoVE.com

Это исследование было поддержано Национальной программой ключевых исследований и разработок Китая (No 2016YFC0905900), Национальным фондом естественных наук Китая (No 81801827, 81872365), Программой фундаментальных исследований провинции Цзянсу (Фонд естественных наук, No. BK20181086), и Цзянсу онкологический госпиталь Научно-исследовательский фонд (Нет. К201605).

1. Синтез полимера BNHEMA (PBNHEMA)
<ol><li>Растворите 1,87 г N, N-бис(2-гидроксиэтил) метакриламид (БНХЕМА) в 1 мл дистиллированной воды в полимерной бутылке. ПРИМЕЧАНИЕ: Бутылка полимеризации представляет собой кругло-нижнюю колбу с резиновой пробкой и магнитным мешалкой.</li>
	<li>Растворите...

<ol>
	<li>Flotte, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+and+Cell+Therapy+in+2018:+A+Look+Ahead.">Gene and Cell Therapy in 2018: A Look Ahead.</a> Human Gene Therapy. 29, 1-1 (2018).</li><li>Huang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanomedicine-based+combination+anticancer+therapy+between+nucleic+acids+and+small-molecular+drugs.">Nanomedicine-based combination anticancer therapy between nucleic acids and small-molecular drugs.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 115, 82-97 (2017).</li><li>Wu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversing+of+multidrug+resistance+breast+cancer+by+co-delivery+of+P-gp+siRNA+and+doxorubicin+via+folic+acid-modified+core-shell+nanomicelles.">Reversing of multidrug resistance breast cancer by co-delivery of P-gp siRNA and doxorubicin via folic acid-modified core-shell nanomicelles.</a> Colloids &amp; Surfaces B Biointerfaces. 138, 60-69 (2016).</li><li>Quader, S., Kataoka, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanomaterial-Enabled+Cancer+Therapy.">Nanomaterial-Enabled Cancer Therapy.</a> Molecular Therapy. 25, 1501-1513 (2017).</li><li>Wu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multivalent+methionine-functionalized+biocompatible+block+copolymers+for+targeted+siRNA+delivery+and+subsequent+reversal+effect+on+adriamycin+resistance+in+human+breast+cancer+cell+line+MCF-7/ADR.">Multivalent methionine-functionalized biocompatible block copolymers for targeted siRNA delivery and subsequent reversal effect on adriamycin resistance in human breast cancer cell line MCF-7/ADR.</a> Journal of Gene Medicine. 19, e2969 (2017).</li><li>Szwarc, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=‘Living’+Polymers.">‘Living’ Polymers.</a> Nature. 178, 168-169 (1956).</li><li>Szwarc, M., Rembaum, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polymerization+of+methyl+methacrylate+initiated+by+an+electron+transfer+to+the+monomer.">Polymerization of methyl methacrylate initiated by an electron transfer to the monomer.</a> Journal of Polymer Science. 22 (100), 189-191 (1956).</li><li>Mukhopadhyay, R. D., Ajayaghosh, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Living+supramolecular+polymerization.">Living supramolecular polymerization.</a> Science. 349, 241 (2015).</li><li>Ozkose, U. U., Altinkok, C., Yilmaz, O., Alpturk, O., Tasdelen, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In-situ+preparation+of+poly(2-ethyl-2-oxazoline)/clay+nanocomposites+via+living+cationic+ring-opening+polymerization.">In-situ preparation of poly(2-ethyl-2-oxazoline)/clay nanocomposites via living cationic ring-opening polymerization.</a> European Polymer Journal. 88, 586-593 (2017).</li><li>Wu, W., Wang, W., Li, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Star+polymers:+Advances+in+biomedical+applications.">Star polymers: Advances in biomedical applications.</a> Progress in Polymer Science. 46, 55-85 (2015).</li><li>Boyer, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Copper-Mediated+Living+Radical+Polymerization+(Atom+Transfer+Radical+Polymerization+and+Copper(0)+Mediated+Polymerization):+From+Fundamentals+to+Bioapplications.">Copper-Mediated Living Radical Polymerization (Atom Transfer Radical Polymerization and Copper(0) Mediated Polymerization): From Fundamentals to Bioapplications.</a> Chemical Reviews. 116, 1803-1949 (2016).</li><li>Keddie, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+guide+to+the+synthesis+of+block+copolymers+using+reversible-addition+fragmentation+chain+transfer+(RAFT)+polymerization.">A guide to the synthesis of block copolymers using reversible-addition fragmentation chain transfer (RAFT) polymerization.</a> Chemical Society Reviews. 43, 496-505 (2014).</li><li>Wu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guanidinylated+3-gluconamidopropyl+methacrylamide-s-3-aminopropyl+methacrylamide+copolymer+as+siRNA+carriers+for+inhibiting+human+telomerase+reverse+transcriptase+expression.">Guanidinylated 3-gluconamidopropyl methacrylamide-s-3-aminopropyl methacrylamide copolymer as siRNA carriers for inhibiting human telomerase reverse transcriptase expression.</a> Drug Delivery. 20, 296-305 (2013).</li><li>Qin, Z., Liu, W., Guo, L., Li, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+on+Guanidinated+N-3-Aminopropyl+Methacrylamide-N-2-Hydroxypropyl+Methacrylamide+Co-polymers+as+Gene+Delivery+Carrier.">Studies on Guanidinated N-3-Aminopropyl Methacrylamide-N-2-Hydroxypropyl Methacrylamide Co-polymers as Gene Delivery Carrier.</a> Journal of Biomaterials Science, Polymer Edition. 23, 1-4 (2012).</li><li>Friedman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Applications+of+the+Ninhydrin+Reaction+for+Analysis+of+Amino+Acids,+Peptides,+and+Proteins+to+Agricultural+and+Biomedical+Sciences.">Applications of the Ninhydrin Reaction for Analysis of Amino Acids, Peptides, and Proteins to Agricultural and Biomedical Sciences.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 52, 385-406 (2004).</li><li>Habuchi, S., Yamamoto, T., Tezuka, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthesis+of+Cyclic+Polymers+and+Characterization+of+Their+Diffusive+Motion+in+the+Melt+State+at+the+Single+Molecule+Level.">Synthesis of Cyclic Polymers and Characterization of Their Diffusive Motion in the Melt State at the Single Molecule Level.</a> Journal of Visualized Experiments. (115), 1-9 (2016).</li><li>Rao, D. A., Nguyen, D. X., Mishra, G. P., Doddapaneni, B. S., Alani, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+and+Characterization+of+Individual+and+Multi-drug+Loaded+Physically+Entrapped+Polymeric+Micelles.">Preparation and Characterization of Individual and Multi-drug Loaded Physically Entrapped Polymeric Micelles.</a> Journal of Visualized Experiments. 102, 1-5 (2015).</li></ol>

Это исследование представило серию BNHEMA-b-APMA блок полимерных катионных носителей генов. Эти блок-полимеры были синтезированы с помощью метода реверсивной передачи цепочек добавления (RAFT). Гидрофильный сегмент BNHEMA был введен для улучшения растворимости. Метилонин и гуанидин группы были ...

В последние годы, генная терапия возникла для терапевтической доставки нуклеиновые кислоты в качестве лекарств для лечения всех видов заболеваний1. Развитие генных препаратов, включая плазмидную ДНК (pDNA) и малаюдическую интерферирующую РНК (siRNA), зависит от стабильности и эффективности системы доставки лекарств (DDS)2. Среди всех DDS, катионные полимерные носители имеют преимущества хорошей стабильности, низкой иммуногенности, и легкой подготовки и модификации, которые дают катионные полимерные носители широкие перспективы применения3,4. Для практического применения в биомедицине, исследователи должны найти катионный полимер перевозчика с высокой эффективностью, низкой токсичности, и хорошая способность ориентации5. Среди всех носителей полимеров блок кополимеры являются одной из наиболее широко используемых систем доставки лекарств. Блок кополимеров интенсивно изучаются на их свойство самосборки и способности формировать мицеллы, микросферы и наночастицы при доставке лекарств5. Блок кополимеров можно синтезировать с помощью живой полимеризации или нажмите методы химии.
В 1956 году Szwarc et al. подняли тему живой полимеризации,определив ее как реакцию без цепных реакций 6,7. С тех пор было разработано несколько методов синтеза полимеров с помощью этого метода; таким образом, живая полимеризация рассматривается как веха полимерной науки8. Димеризация жизни может быть классифицирована в живую анионическую полимеризацию, живую катионную полимеризацию и обратимую деактивацию радикальной полимеризации (РДРП)9. Живые анионические/катионные полимеризации имеют ограниченный объем применения из-за их строгих условий реакции10. Контролируемая/живая радикальная полимеризация (CRP) имеет мягкие условия реакции, удобное расположение, и хорошую урожайность и таким образом была главным фокусом исследования в недавних летах11. В CRP активные цепи распространения реверсивно переходят в спящие, чтобы уменьшить концентрацию свободных радикалов и избежать бимолекулярной реакции распространяющихся цепных радикалов. Крометое полимеризация может продолжаться только в том случае, если неактивные спящие цепи, распространяющиеся, обратимо анимируются на цепные радикалы. В качестве одной из наиболее перспективных форм живой радикальной полимеризации, обратимая добавка-фрагментация цепи передачи (RAFT) полимеризации является методом, применимым для выхода блок полимеров с контролируемым молекулярным весом и структурой, узкий молекулярный вес распределение и проведение функциональных групп12. Ключом к успешной полимеризации RAFT является эффект цепных переносных агентов, как правило, дитиостеров, которые обладают очень высокой константой передачи цепи.
В этой работе, метод полимеризации RAFT был разработан для подготовки BNHEMA -b-APMA блок полимера, принимая 4,4'-azobis (4-cyanovaleric кислоты) (ACVA) в качестве инициирующего агента и 4-цианоптановой кислоты дитиобензоат (CTP) в качестве агента передачи цепи. ПОЛимеризация RAFT дважды использовалась для внедрения BNHEMA в катионные полимерные носители. Впоследствии группы амина в цепи APMA были модифицированы с помощью метионина и гуанидинилового реагента 1-амидинопиразоле гидрохлорида. Благодаря использованию положительных зарядов гуанидинадинационного реагента и метакремламидного полимерного скелета структуры, была улучшена эффективность клеточного поглощения полученных блоков полимерных носителей.

<table>
<tbody>
<tr>
<td>1-hydroxybenzotriazole</td>
<td>Macklin Biochemical Co., Ltd,China</td>
<td>H810970</td>
<td>&ge;97.0%</td>
</tr>
<tr>
<td>1,4-dioxane</td>
<td>Sinopharm chemical reagent Co., Ltd, China</td>
<td>10008918</td>
<td>AR</td>
</tr>
<tr>
<td>1-amidinopyrazole Hydrochloride</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>A107935</td>
<td>98%</td>
</tr>
<tr>
<td>1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide hydrochloride</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>E106172</td>
<td>AR</td>
</tr>
<tr>
<td>4,4&#x2019;-azobis(4-cyanovaleric acid)</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>A106307</td>
<td>Analytical reagent (AR)</td>
</tr>
<tr>
<td>4-cyano-4-(phenylcarbonothioylthio)pentanoic Acid</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>C132316</td>
<td>&#x003E;97%(HPLC)</td>
</tr>
<tr>
<td>Acetate</td>
<td>Sinopharm chemical reagent Co., Ltd, China</td>
<td>81014818</td>
<td>AR</td>
</tr>
<tr>
<td>Acetone</td>
<td>Sinopharm chemical reagent Co., Ltd, China</td>
<td>10000418</td>
<td>AR</td>
</tr>
<tr>
<td>Agarose</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>A118881</td>
<td>High resolution</td>
</tr>
<tr>
<td>Ascorbic acid</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>A103533</td>
<td>AR</td>
</tr>
<tr>
<td>DMSO</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>D103272</td>
<td>AR</td>
</tr>
<tr>
<td>Ethylene glycol</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>E103319</td>
<td>AR</td>
</tr>
<tr>
<td>N-(3-aminopropyl)methacrylamide hydrochloride</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>N129096</td>
<td>&ge;98.0%(HPLC)</td>
</tr>
<tr>
<td>N,N-bis(2-hydroxyethyl)methacrylamide</td>
<td>ZaiQi Bio-Tech Co.,Ltd, China</td>
<td>CF259748</td>
<td>&ge;98.0%(HPLC)</td>
</tr>
<tr>
<td>Ninhydrin</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>N105629</td>
<td>AR</td>
</tr>
<tr>
<td>PBS buffer</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>P196986</td>
<td>pH 7.4</td>
</tr>
<tr>
<td>Plasmid DNA</td>
<td>BIOGOT Co., Ltd, China</td>
<td>pDNA-EGFP</td>
<td>pDNA-EGFP</td>
</tr>
<tr>
<td>Plasmid DNA</td>
<td>BIOGOT Co., Ltd, China</td>
<td>Pdna</td>
<td>pDNA</td>
</tr>
<tr>
<td>Sodium carbonate decahydrate</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>S112589</td>
<td>AR</td>
</tr>
<tr>
<td>Trimethylamine</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>T103285</td>
<td>AR</td>
</tr>
</tbody>
</table>

methionine functionalized biocompatible block copolymers for targeted plasmid dna delivery

Реверсивная полимеризация цепочки добавленной части (РАФТ) интегрирует преимущества радикальной полимеризации и живой полимеризации. Эта работа представляет собой подготовку метионина функционализированных биосовместимых блоков кополимеров через RAFT полимеризации. Во-первых, N,N-бис(2-гидроксиэтил)метакриламид-б -N-(3-аминопропил)метакриламид (BNHEMA -b-APMA, BA) синтезировался с помощью полимеризации RAFT с использованием 4,4'-azobis (4-цианалерическая кислота) (ACVA) в качестве ивитативным агентом и 4-цианпенпентановой кислотой дитиобензоат (CTP) в качестве агента передачи цепи. Впоследствии, N,N-bis(2-гидроксиэтил)метакриламид-б -N-(3-гуанидинопропил)метакриламид (метионин привитый BNHEMA -b-GPMA, mBG) был подготовлен путем изменения групп амина в APMA с метионином и гуанидином Группы. Для сравнения были синтезированы три вида блоковых полимеров: mBG1, mBG2 и mBG3. Для количественной оценки содержания APMA была использована реакция нингидрина; mBG1, mBG2 и mBG3 имели 21%, 37% и 52% APMA, соответственно. Результаты хроматографии гель-пермяки (GPC) показали, что БА-кополимеры обладают молекулярными весами 16 200 (BA1), 20 900 (BA2) и 27 200 (BA3) г/мол. Была также исследована плазмидная ДНК (pDNA), усложняющая способность полученных носителей гена блока. Коэффициенты заряда (N/P) были 8, 16 и 4, когда pDNA был полностью осложнен mBG1, mBG2, mBG3, соответственно. Когда соотношение N/P polyplexes mBG/pDNA было выше 1, потенциал Зэты мБГ был положительным. При соотношении N/P между 16 и 32 средний размер частиц полигекса mBG/pDNA составлял от 100 до 200 нм. В целом, эта работа иллюстрирует простой и удобный протокол для синтеза комимерии блока.

БНЕХЕМА кормили в соответствии с объективной степенью полимеризации, показанной в таблице1; процедура синтеза mBG показана на рисунке 1. Во-первых, гомополимер BNHEMA был подготовлен с помощью обратимого добавления фрагментации цепи передачи (RAFT) метод в системе во?...

Watch this Scientific Journal Video about Methionine Functionalized Biocompatible Block Copolymers for Targeted Plasmid DNA Delivery at JoVE.com

Methionine Functionalized Biocompatible Block Copolymers for Targeted Plasmid DNA Delivery

Эта работа представляет собой подготовку метионина функционализированных биосовместимых блоков кополимеров (mBG) с помощью обратимого добавления фрагментации цепи передачи (RAFT) метод. Также были исследованы плазмидная способность ДНК-комплекса полученного mBG и их эффективность трансфекции. Метод RAFT очень полезен для полимеризации мономеров, содержащих специальные функциональные группы.

Метионин функционально совместимые биосовместимые блок кополимеры для целевой плазмидной доставки ДНК

Reversible addition-fragmentation chain transfer (RAFT) polymerization integrates the advantages of radical polymerization and living polymerization. This ...

Носители полимерных полимеров имеют преимущества хорошей стабильности, низкой иммуногенности, легкой подготовки и модификации. Здесь мы предлагаем быстрый и простой метод его синтеза. Метод полимеризации реверсивной цепочки добавления-фрагментации является методом, применимым для получения блочных полимеров с контролируемым молекулярным весом и структурой и несущих функциональные группы.Эти носители наркотиков могут одновременно нести различные препараты для достижения совместного лечения рака, воспаления и других заболеваний. Полимеризация IFT является классическим методом, и этот протокол дает пример его применения в генной терапии. Ключом к успеху синтеза этого полимера является точный контроль температуры реакции.Более целесообразно использовать масляную баню, чем водяную баню. Чтобы начать эту процедуру, получить круглое дно колбы с резиновой пробкой и магнитной мешалки, которые будут использоваться в качестве бутылки полимеризации. Растворите 1,87 грамма бис-гидрокси HEMA в одном миллилитре дистиллированной воды в бутылке полимеризации.В пятимиллилитровом стакане растворяют 0,03 грамма КТП и 0,02 грамма ACVA в 0,5 миллилитров 1, 4-диоксана. Добавьте эту смесь в бутылку полимеризации. Затем используйте конденсатную ловушку, чтобы заморозить раствор в бутылке полимеризации.Зафиксируйте бутылку на опору железа, и использовать канал споткнулся с иглой пылесосить и вводить азот в реакционной смеси. Затем загерметизу бутылку полимеризации и оттаивать раствор при комнатной температуре в течение 30 минут. Повторите этот цикл замораживания-насоса-оттепели три раза.После этого поместите бутылку в масляную ванну при 70 градусах по Цельсию и дайте раствору отреагировать в течение 24 часов под азотной атмосферой. На следующий день охладите бутылку полимеризации при нулевом градусе Цельсия и откройте резиновую пробку, чтобы прекратить реакцию полимеризации. Далее, предварительно позолоть ацетон в холодильнике при отрицательном 20 градусов по Цельсию в течение двух часов, и смешать его с раствором реакции в полимеризации бутылки в соотношении 50 к одному.Центрифуга этой смеси на 8, 200 раз г в течение 10 минут, чтобы удалить ацетон и собирать осадок. Для очистки синтезированной поли бис-гидроксии HEMA растворите собранный осадок в двух миллилитров чистой воды. Затем смешайте его со 100 миллилитров предварительно обтертого ацетона в соотношении от одного до 50.Центрифуга раствор на 8, 200 раз г в течение 10 минут, чтобы собрать осадок. Повторите этот процесс очистки растворения, смешивания и центрифугирования осадка три раза. Во-первых, растворить 0,96 грамма APMA и 0,93 грамма очищенной поли бис-гидрокси HEMA в пяти миллилитров дистиллированной воды в 10-миллилитровом стакане.Растворите 0,01 грамма ACVA в 0,5 миллилитров 1, 4-диоксана, и добавить это в APMA и поли бис-гидрокси HEMA раствор. Перенесите эту смесь в бутылку полимеризации и проветрите сухим азотом в течение одного часа. Затем поместите бутылку полимеризации в масляную ванну при 70 градусах по Цельсию, и дайте ей реагировать в течение 24 часов под азотной атмосферой.На следующий день охладите бутылку полимеризации при нулевом градусе цельсия и откройте резиновую пробку для прекращения процесса полимеризации раствора. Начнем с того, что семенные клетки MCF-7 в колодцы шести скважинной пластины с плотностью 20 000 клеток на скважину. Культура клеток в увлажненные инкубатор при 37 градусов по Цельсию с 5%углекислого газа в течение 12 часов.После этого замените культурную среду свежей культурой среды, содержащей катиоический полимер и полиплексные полиплексы pDNA разного соотношения соотношения азота к фосфору. Культура клеток в течение шести часов, а затем заменить средний с двумя миллилитров свежих RPMI 1640 среды. Продолжайте культивирование в течение 48 часов.Затем соберите клетки и используйте цитометр потока для обнаружения зеленой флуоресценции. В этом исследовании, мерионин-функционализированных биосовместимых блоков copolymers готовятся с помощью обратимого добавления фрагментации цепи передачи метода, и плазмидной ДНК сложности способность полученных mBG и их эффективность трансфекции исследованы. Средний размер частиц и потенциал зеты полиплексов mBG/pDNA составляет 124 нанометров и плюс 15,7 милливольт, соответственно, при соотношении N-to-P 16.Электрофоретическая отсталость показывает, что пДНА с соотношением N-к-P нуля может двигаться без ограничений в агарозовом геле и наблюдается как полоса в гель-образе. Когда pDNA комплекс с mBG, движение pDNA задерживается, и впоследствии, яркость полосы уменьшается. Это показывает, что mBG может полностью комплекс pDNA, когда N до P выше, чем четыре.Цитотоксия полиплексов mBG/pDNA затем измеряется с помощью стандартного анализа MTT Эти результаты показывают, что полиплексы mBG/pDNA имеют цитотоксиситность, чем полиплексы PEI/pDNA в соотношении N-to-P 4, 8, 16 и 32. Как видно также, цитотоксия полиплексов mBG/pDNA увеличивается с увеличением соотношения N-to-P. Эта повышенная цитотоксичность является результатом положительно заряженного компонента GPMA.Соотношение N-к-P, используемое в эксперименте по трансфекции pDNA, выбирается в соответствии с результатами цитотоксичности. Способности трансфекции mBG1, mBG2 и mBG3 сравниваются путем измерения интенсивности флуоресценции GFP, и результаты показали, что mBG3 является оптимальным носителем генов. Важно исчерпать воздух из ила круглого дна колбы и поддерживать температуру реакции.Полученные полимерные носители лекарств могут быть применены к совместной доставке химиотерапевтических препаратов и генных препаратов для синергетического лечения лекарственно-устойчивого рака. Молекулярный механизм сочетания генных препаратов и химиотерапевтических препаратов можно дополнительно изучить для лечения лекарственно-устойчивых опухолей. Ацетон оценивается как низкотоксичный для его острой токсичности.Ключи, вдыхание или контакт с глазами или кожей следует избегать. Избегайте риска ожогов во время процедуры нагрева.

Research

JoVE Journal

Chemistry

Microwave-assisted Intramolecular Dehydrogenative Diels-Alder Reactions for the Synthesis of Functionalized Naphthalenes/Solvatochromic Dyes

Микроволновая печь при содействии Внутримолекулярная Dehydrogenative Дильса-Альдера реакций синтеза функционализированных Нафталины / сольватохромные Красители

Functionalized naphthalenes have applications in a variety of research fields ranging from the synthesis of natural or biologically active molecules to ...

Synthesis and Characterization of Functionalized Metal-organic Frameworks

Синтеза и характеристики функционализированным Металл-органические каркасы

Metal-organic frameworks have attracted extraordinary amounts of research attention, as they are attractive candidates for numerous industrial and ...

Preparation and Characterization of SDF-1&#945;-Chitosan-Dextran Sulfate Nanoparticles

Preparation and Characterization of SDF-1ÃƒÅ½Ã‚Â±-Chitosan-Dextran Sulfate Nanoparticles

Подготовка и характеристика SDF-1α-хитозан-Декстрансульфат наночастиц

Chitosan (CS) and dextran sulfate (DS) are charged polysaccharides (glycans), which form polyelectrolyte complex-based nanoparticles when mixed under ...

Functionalization of Single-walled Carbon Nanotubes with Thermo-reversible Block Copolymers and Characterization by Small-angle Neutron Scattering

Функционализация одностенных углеродных нанотрубок с Thermo-обратимых блоксополимеров и характеристика малоуглового рассеяния нейтронов

We demonstrate a protocol for single-walled carbon nanotube functionalization using thermo-sensitive PEO-PPO-PEO triblock copolymers in an aqueous ...

Self-assembling Morphologies Obtained from Helical Polycarbodiimide Copolymers and Their Triazole Derivatives

Самособирающихся морфологией, полученные с помощью Винтовая поликарбодиимидным Сополимеры и их производные триазола

A facile method for the preparation of polycarbodiimide-based secondary structures (e.g., nano-rings, &#34;craters,&#34; fibers, looped fibers, fibrous ...

Synthesis of a Thiol Building Block for the Crystallization of a Semiconducting Gyroidal Metal-sulfur Framework

Синтез тиоловых строительный блок для кристаллизации основ полупроводниковой Gyroidal металл серы

We present a method for preparing thioester molecules as the masked form of the thiol linkers and their utilization for accessing a semiconducting and ...

Preparation of Poly(pentafluorophenyl acrylate) Functionalized SiO2 Beads for Protein Purification

Preparation of Polypentafluorophenyl acrylate Functionalized SiO2 Beads for Protein Purification

Подготовка Poly(pentafluorophenyl acrylate) функционализированных SiO2 бусины очищение протеина

We demonstrate a simple method to prepare poly(pentafluorophenyl acrylate) (poly(PFPA)) grafted silica beads for antibody immobilization and subsequent ...

Synthesis of Monodisperse Cylindrical Nanoparticles via Crystallization-driven Self-assembly of Biodegradable Block Copolymers

Синтез монодисперсных цилиндрических наночастиц с помощью кристаллизации управляемой самосборки биоразлагаемых блоков copolymers

The production of monodisperse cylindrical micelles is a significant challenge in polymer chemistry. Most cylindrical constructs formed from diblock ...

Efficient Synthesis of All-Carbon Quaternary Centers via the Conjugate Addition of Functionalized Monoorganozinc Bromides

Эффективный синтез всех углеродных четвертичных центров через сопряженное Добавление функционализированных Моноорганоцинк бромиды

The conjugate addition of organometallic reagents to &#945;,&#946;-unsaturated carbonyls represents an important method to generate C&#8211;C bonds in the ...