Name: methionine functionalized biocompatible block copolymers for targeted plasmid dna delivery
Uploaded: 2019-08-06T12:30:00
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Esta investigación fue apoyada por el Programa Nacional De Investigación y Desarrollo Clave de China (No. 2016YFC0905900), National Natural Science Foundation of China (Nos. 81801827, 81872365), Basic Research Program of Jiangsu Province (Fundación de Ciencias Naturales, No. BK20181086), y el Fondo de Investigación Científica del Hospital del Cáncer de Jiangsu (No. ZK201605).

1. Síntesis del polímero BNHEMA (PBNHEMA)
<ol><li>Disolver 1,87 g de N, N-bis(2-hidroxietilo)metacrilamida (BNHEMA) en 1 ml de agua destilada en una botella de polimerización. NOTA: La botella de polimerización es un matraz de fondo redondo con un tapón de goma y un agitador magnético.</li>
	<li>Disolver 0,03 g de ditiobenzoato de ácido 4-cianopentanoico (CTP) y 0,02 g de 4,4'-azobis (4-cianoovalericácido) (ACVA) en 0,5 ml de 1,4 dioxanos en un vaso de precipitados de 5 ml. A continuación,...

<ol>
	<li>Flotte, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+and+Cell+Therapy+in+2018:+A+Look+Ahead.">Gene and Cell Therapy in 2018: A Look Ahead.</a> Human Gene Therapy. 29, 1-1 (2018).</li><li>Huang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanomedicine-based+combination+anticancer+therapy+between+nucleic+acids+and+small-molecular+drugs.">Nanomedicine-based combination anticancer therapy between nucleic acids and small-molecular drugs.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 115, 82-97 (2017).</li><li>Wu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversing+of+multidrug+resistance+breast+cancer+by+co-delivery+of+P-gp+siRNA+and+doxorubicin+via+folic+acid-modified+core-shell+nanomicelles.">Reversing of multidrug resistance breast cancer by co-delivery of P-gp siRNA and doxorubicin via folic acid-modified core-shell nanomicelles.</a> Colloids &amp; Surfaces B Biointerfaces. 138, 60-69 (2016).</li><li>Quader, S., Kataoka, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanomaterial-Enabled+Cancer+Therapy.">Nanomaterial-Enabled Cancer Therapy.</a> Molecular Therapy. 25, 1501-1513 (2017).</li><li>Wu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multivalent+methionine-functionalized+biocompatible+block+copolymers+for+targeted+siRNA+delivery+and+subsequent+reversal+effect+on+adriamycin+resistance+in+human+breast+cancer+cell+line+MCF-7/ADR.">Multivalent methionine-functionalized biocompatible block copolymers for targeted siRNA delivery and subsequent reversal effect on adriamycin resistance in human breast cancer cell line MCF-7/ADR.</a> Journal of Gene Medicine. 19, e2969 (2017).</li><li>Szwarc, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=‘Living’+Polymers.">‘Living’ Polymers.</a> Nature. 178, 168-169 (1956).</li><li>Szwarc, M., Rembaum, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polymerization+of+methyl+methacrylate+initiated+by+an+electron+transfer+to+the+monomer.">Polymerization of methyl methacrylate initiated by an electron transfer to the monomer.</a> Journal of Polymer Science. 22 (100), 189-191 (1956).</li><li>Mukhopadhyay, R. D., Ajayaghosh, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Living+supramolecular+polymerization.">Living supramolecular polymerization.</a> Science. 349, 241 (2015).</li><li>Ozkose, U. U., Altinkok, C., Yilmaz, O., Alpturk, O., Tasdelen, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In-situ+preparation+of+poly(2-ethyl-2-oxazoline)/clay+nanocomposites+via+living+cationic+ring-opening+polymerization.">In-situ preparation of poly(2-ethyl-2-oxazoline)/clay nanocomposites via living cationic ring-opening polymerization.</a> European Polymer Journal. 88, 586-593 (2017).</li><li>Wu, W., Wang, W., Li, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Star+polymers:+Advances+in+biomedical+applications.">Star polymers: Advances in biomedical applications.</a> Progress in Polymer Science. 46, 55-85 (2015).</li><li>Boyer, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Copper-Mediated+Living+Radical+Polymerization+(Atom+Transfer+Radical+Polymerization+and+Copper(0)+Mediated+Polymerization):+From+Fundamentals+to+Bioapplications.">Copper-Mediated Living Radical Polymerization (Atom Transfer Radical Polymerization and Copper(0) Mediated Polymerization): From Fundamentals to Bioapplications.</a> Chemical Reviews. 116, 1803-1949 (2016).</li><li>Keddie, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+guide+to+the+synthesis+of+block+copolymers+using+reversible-addition+fragmentation+chain+transfer+(RAFT)+polymerization.">A guide to the synthesis of block copolymers using reversible-addition fragmentation chain transfer (RAFT) polymerization.</a> Chemical Society Reviews. 43, 496-505 (2014).</li><li>Wu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guanidinylated+3-gluconamidopropyl+methacrylamide-s-3-aminopropyl+methacrylamide+copolymer+as+siRNA+carriers+for+inhibiting+human+telomerase+reverse+transcriptase+expression.">Guanidinylated 3-gluconamidopropyl methacrylamide-s-3-aminopropyl methacrylamide copolymer as siRNA carriers for inhibiting human telomerase reverse transcriptase expression.</a> Drug Delivery. 20, 296-305 (2013).</li><li>Qin, Z., Liu, W., Guo, L., Li, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+on+Guanidinated+N-3-Aminopropyl+Methacrylamide-N-2-Hydroxypropyl+Methacrylamide+Co-polymers+as+Gene+Delivery+Carrier.">Studies on Guanidinated N-3-Aminopropyl Methacrylamide-N-2-Hydroxypropyl Methacrylamide Co-polymers as Gene Delivery Carrier.</a> Journal of Biomaterials Science, Polymer Edition. 23, 1-4 (2012).</li><li>Friedman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Applications+of+the+Ninhydrin+Reaction+for+Analysis+of+Amino+Acids,+Peptides,+and+Proteins+to+Agricultural+and+Biomedical+Sciences.">Applications of the Ninhydrin Reaction for Analysis of Amino Acids, Peptides, and Proteins to Agricultural and Biomedical Sciences.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 52, 385-406 (2004).</li><li>Habuchi, S., Yamamoto, T., Tezuka, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthesis+of+Cyclic+Polymers+and+Characterization+of+Their+Diffusive+Motion+in+the+Melt+State+at+the+Single+Molecule+Level.">Synthesis of Cyclic Polymers and Characterization of Their Diffusive Motion in the Melt State at the Single Molecule Level.</a> Journal of Visualized Experiments. (115), 1-9 (2016).</li><li>Rao, D. A., Nguyen, D. X., Mishra, G. P., Doddapaneni, B. S., Alani, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+and+Characterization+of+Individual+and+Multi-drug+Loaded+Physically+Entrapped+Polymeric+Micelles.">Preparation and Characterization of Individual and Multi-drug Loaded Physically Entrapped Polymeric Micelles.</a> Journal of Visualized Experiments. 102, 1-5 (2015).</li></ol>

Este estudio introdujo una serie de portadores de genes catiónicos de polímero de bloque BNHEMA-b-APMA. Estos polímeros de bloque se sintetizaron a través del método reversible de transferencia de cadena de adición-fragmentación (RAFT). El segmento hidrófilo BNHEMA se introdujo para mejorar la solubilidad. Se modificaron los grupos de metionina y guanidina paramejorar la capacidad objetivo y la eficiencia de transfección 5. El contenido de la cadena APMA aumentó y la guanidinilación en ...

En los últimos años, la terapia génica ha surgido para la entrega terapéutica de ácidos nucleicos como fármacos para tratar todo tipo de enfermedades1. El desarrollo de fármacos genéticos, como el ADN plásmido (PDNA) y el pequeño ARN interferente (SIRNA), se basa en la estabilidad y eficiencia del sistema de administración de fármacos (DDS)2. Entre todos los DDS, los portadores de polímeros catiónicos tienen las ventajas de una buena estabilidad, baja inmunogenicidad, y fácil preparación y modificación, que dan a los portadores de polímeros catiónicos amplias perspectivas de aplicación3,4. Para aplicaciones prácticas en biomedicina, los investigadores deben encontrar un portador de polímero catiónico con alta eficiencia, baja toxicidad y buena capacidad de focalización5. Entre todos los portadores de polímeros, los copolímeros de bloque sin hogar son uno de los sistemas de administración de medicamentos más utilizados. Los copolímeros de bloque se estudian intensamente por sus propiedades de autoensamblaje y sus capacidadespara formar micelas, microesferas y nanopartículas en la administración de fármacos 5. Los copolímeros de bloque se pueden sintetizar a través de métodos de polimerización viva o de química de clics.
En 1956, Szwarc y otros plantearon el tema de la polimerización viva, definiéndolo como una reacción sin reacciones de ruptura en cadena6,7. Desde entonces, se habían desarrollado múltiples técnicas para sintetizar polímeros utilizando este método; por lo tanto, la polimerización viva es vista como un hito de la ciencia de polímeros8. La polimerización viva se puede clasificar en polimerización aniónica viva, polimerización catiónica viva y polimerización radical de desactivación reversible (RDRP)9. Las polimerizaciones aniónicas/catiónicas vivas tienen un alcance limitado de aplicación debido a sus estrictas condiciones de reacción10. La polimerización radical controlada/viva (CRP) tiene condiciones de reacción leves, disposición conveniente y buen rendimiento y, por lo tanto, ha sido un foco de investigación importante en los últimos años11. En la PCC, las cadenas de propagación activas se pasivan reversiblemente en las inactivas para reducir la concentración de radicales libres y evitar la reacción bimolecular de propagar los radicales de la cadena. La polimerización adicional sólo puede continuar si las cadenas de propagación latentes inactivas se animan reversiblemente en radicales de cadena. Como una de las formas más prometedoras de polimerización radical viva, la polimerización reversible de la transferencia de cadena de fragmentación de adición (RAFT) es un método aplicable para producir polímeros de bloque sin peso y estructura molecular controlados, peso molecular estrecho distribución y transporte de grupos funcionales12. La clave para el éxito de la polimerización RAFT es el efecto de los agentes de transferencia de cadena, generalmente ditioestras, que poseen una constante de transferencia de cadena muy alta.
En este artículo, se diseñó un método de polimerización RAFT para preparar el polímero de bloque BNHEMA-b-APMA, tomando 4,4'-azobis(4-ácido cianoovalico) (ACVA) como agente iniciador y 4-cianopentanoico ácido dithiobenzoato (CTP) como agente de transferencia de cadena. La polimerización RAFT se utilizó dos veces para introducir BNHEMA en los portadores de polímeros catiónicos. Posteriormente, los grupos de aminas en la cadena APMA fueron modificados con metionina y el reactivo de guanidinilación 1-amidinopyrazol clorhidrato. Haciendo uso de las cargas positivas del reactivo de guanidinilación y la estructura del esqueleto del polímero de metacrilamida, se mejoró la eficiencia de admisión celular de los portadores de polímeros de bloque obtenidos.

<table>
<tbody>
<tr>
<td>1-hydroxybenzotriazole</td>
<td>Macklin Biochemical Co., Ltd,China</td>
<td>H810970</td>
<td>&ge;97.0%</td>
</tr>
<tr>
<td>1,4-dioxane</td>
<td>Sinopharm chemical reagent Co., Ltd, China</td>
<td>10008918</td>
<td>AR</td>
</tr>
<tr>
<td>1-amidinopyrazole Hydrochloride</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>A107935</td>
<td>98%</td>
</tr>
<tr>
<td>1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide hydrochloride</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>E106172</td>
<td>AR</td>
</tr>
<tr>
<td>4,4&#x2019;-azobis(4-cyanovaleric acid)</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>A106307</td>
<td>Analytical reagent (AR)</td>
</tr>
<tr>
<td>4-cyano-4-(phenylcarbonothioylthio)pentanoic Acid</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>C132316</td>
<td>&#x003E;97%(HPLC)</td>
</tr>
<tr>
<td>Acetate</td>
<td>Sinopharm chemical reagent Co., Ltd, China</td>
<td>81014818</td>
<td>AR</td>
</tr>
<tr>
<td>Acetone</td>
<td>Sinopharm chemical reagent Co., Ltd, China</td>
<td>10000418</td>
<td>AR</td>
</tr>
<tr>
<td>Agarose</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>A118881</td>
<td>High resolution</td>
</tr>
<tr>
<td>Ascorbic acid</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>A103533</td>
<td>AR</td>
</tr>
<tr>
<td>DMSO</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>D103272</td>
<td>AR</td>
</tr>
<tr>
<td>Ethylene glycol</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>E103319</td>
<td>AR</td>
</tr>
<tr>
<td>N-(3-aminopropyl)methacrylamide hydrochloride</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>N129096</td>
<td>&ge;98.0%(HPLC)</td>
</tr>
<tr>
<td>N,N-bis(2-hydroxyethyl)methacrylamide</td>
<td>ZaiQi Bio-Tech Co.,Ltd, China</td>
<td>CF259748</td>
<td>&ge;98.0%(HPLC)</td>
</tr>
<tr>
<td>Ninhydrin</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>N105629</td>
<td>AR</td>
</tr>
<tr>
<td>PBS buffer</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>P196986</td>
<td>pH 7.4</td>
</tr>
<tr>
<td>Plasmid DNA</td>
<td>BIOGOT Co., Ltd, China</td>
<td>pDNA-EGFP</td>
<td>pDNA-EGFP</td>
</tr>
<tr>
<td>Plasmid DNA</td>
<td>BIOGOT Co., Ltd, China</td>
<td>Pdna</td>
<td>pDNA</td>
</tr>
<tr>
<td>Sodium carbonate decahydrate</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>S112589</td>
<td>AR</td>
</tr>
<tr>
<td>Trimethylamine</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>T103285</td>
<td>AR</td>
</tr>
</tbody>
</table>

methionine functionalized biocompatible block copolymers for targeted plasmid dna delivery

La polimerización reversible de la transferencia de cadena de fragmentación de adición (RAFT) integra las ventajas de la polimerización radical y la polimerización viva. Este trabajo presenta la preparación de copolímeros de bloque biocompatible funcionalizados de metionina a través de la polimerización RAFT. En primer lugar, N,N-bis(2-hidroxietilo)metacrilamida-b-N-(3-aminopropyl)metacrilamida (BNHEMA-b-APMA, BA) se sintetizó a través de la polimerización RAFT utilizando 4,4'-azobis(4-ácido cianovalórico) (ACVA) como un agente iniciador y ditiobenzoato de ácido 4-cianopentanoico (CTP) como agente de transferencia de cadena. Posteriormente, N,N-bis(2-hidroxietilo)methacrilamida-b-N-(3-guanidinopropyl)metacrilamida (metionina injertada BNHEMA-b-GPMA, mBG) se preparó modificando grupos de aminas en APMA con metionina y guanidina Grupos. Se sintetizaron tres tipos de polímeros de bloque, mBG1, mBG2 y mBG3, para la comparación. Se utilizó una reacción de ninhydrin para cuantificar el contenido de APMA; mBG1, mBG2 y mBG3 tenían 21%, 37% y 52% de APMA, respectivamente. Los resultados de la cromatografía por permeación en gel (GPC) mostraron que los copolímeros BA poseen pesos moleculares de 16.200 (BA1), 20.900 (BA2) y 27.200(BA3) g/mol. También se investigó la capacidad de complejo del ADN plásmido (ADNp) de los portadores del gen del copolímero de bloque obtenido. Las relaciones de carga (N/P) eran 8, 16 y 4 cuando pDNA se complejoba completamente con mBG1, mBG2, mBG3, respectivamente. Cuando la relación N/P de los polipleplexs mBG/pDNA fue superior a 1, el potencial Zeta de mBG fue positivo. En una relación N/P entre 16 y 32, el tamaño medio de partícula de los poliplexos mBG/pDNA estaba entre 100-200 nm. En general, este trabajo ilustra un protocolo simple y conveniente para la síntesis portadora de copolímero de bloque.

El BNHEMA se alimentó de acuerdo con el grado objetivo de polimerización que se muestra en el Cuadro1; el procedimiento de síntesis de mBG se muestra en la Figura1. En primer lugar, el homopolímero BNHEMA se preparó a través del método reversible de transferencia de cadena de fragmentación de adición (RAFT) en el sistema de dioxano de agua, utilizando el ditiobenzoato de ácido 4-cianopentanoico como agente de transferencia de cadena. En segundo lugar, PBNHEMA se ut...

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Methionine Functionalized Biocompatible Block Copolymers for Targeted Plasmid DNA Delivery

Este trabajo presenta la preparación de copolímeros de bloque biocompatibles funcionalizados de metionina (mBG) a través del método reversible de transferencia de cadena de adición-fragmentación (RAFT). También se investigó la capacidad de complejidad del ADN plásmido del mBG obtenido y su eficiencia de transfección. El método RAFT es muy beneficioso para la polimerización de monómeros que contienen grupos funcionales especiales.

Copolímeros de bloque sin capacidad de ejecución funcionalización de metionina para la entrega de ADN de plásmido dirigido

Reversible addition-fragmentation chain transfer (RAFT) polymerization integrates the advantages of radical polymerization and living polymerization. This ...

Los portadores de fármacos poliméricos catiónicos tienen las ventajas de una buena estabilidad, baja inmunogenicidad y preparación y modificación fáciles. Aquí, ofrecemos un método rápido y simple para su síntesis. El método de polimerización de transferencia de cadena de fragmentación reversible es un método aplicable a polímeros de bloque de rendimiento con peso molecular controlado y estructura y grupos funcionales de transporte.Estos portadores de fármacos pueden llevar simultáneamente diferentes medicamentos para lograr el tratamiento de la colaboración del cáncer, la inflamación y otras enfermedades. La polimerización IFT es un método clásico, y este protocolo da un ejemplo de su aplicación en la terapia génica. La clave del éxito para la síntesis de este polímero es controlar con precisión la temperatura de reacción.Es más aconsejable utilizar un baño de aceite que un baño de agua. Para comenzar este procedimiento, obtenga un matraz de fondo redondo con un tapón de goma y un agitador magnético que se utilizará como botella de polimerización. Disolver 1,87 gramos de BIS-hidroxi HEMA en un mililitro de agua destilada en la botella de polimerización.En un vaso de precipitados de cinco mililitros, disolver 0,03 gramos de CTP y 0,02 gramos de ACVA en 0,5 mililitros de 1, 4-dioxano. Añadir esta mezcla a la botella de polimerización. A continuación, utilice una trampa de condensado para congelar la solución en la botella de polimerización.Fije el frasco al soporte de hierro y utilice un conducto tropezado con una aguja para aspirar e inyectar nitrógeno en la mezcla de reacción. A continuación, selle la botella de polimerización y descongele la solución a temperatura ambiente durante 30 minutos. Repita este ciclo de congelación-bomba-descongelación tres veces.Después de esto, coloque la botella en un baño de aceite a 70 grados centígrados y deje que la solución reaccione durante 24 horas bajo la atmósfera de nitrógeno. Al día siguiente, enfríe la botella de polimerización a cero grados Celsius y abra el tapón de goma para terminar la reacción de polimerización. A continuación, preenfriar la acetona en un refrigerador a 20 grados Celsius negativos durante dos horas, y mezclarlo con la solución de reacción en la botella de polimerización en una proporción de 50 a uno.Centrifugar esta mezcla a 8.200 veces g durante 10 minutos para eliminar la acetona y recoger el precipitado. Para purificar el heMA de poli bishidy sintetizado, disolver el precipitado recogido en dos mililitros de agua pura. Luego, mezcle con 100 mililitros de acetona preenfriada en una proporción de uno a 50.Centrifugar la solución a 8.200 veces g durante 10 minutos para recoger el precipitado. Repita este proceso de purificación de disolver, mezclar y centrifugar el precipitado tres veces. En primer lugar, disolver 0,96 gramos de APMA y 0,93 gramos del HEMA poli bishidróxi purificado en cinco mililitros de agua destilada en un vaso de precipitados de 10 mililitros.Disolver 0,01 gramos de ACVA en 0,5 mililitros de 1, 4-dioxano, y añadirlo a la solución APMA y poli bishidróxi HEMA. Transfiera esta mezcla a una botella de polimerización y ventile con nitrógeno seco durante una hora. Luego, coloque la botella de polimerización en un baño de aceite a 70 grados centígrados, y deje que reaccione durante 24 horas bajo la atmósfera de nitrógeno.Al día siguiente, enfríe la botella de polimerización a cero grados Celsius y abra el tapón de goma para terminar la solución del proceso de polimerización. Para empezar, siembra células MCF-7 en los pozos de una placa de seis pozos a una densidad de 20.000 células por pozo. Cultivo de las células en una incubadora humidificada a 37 grados Celsius con 5% de dióxido de carbono durante 12 horas.Después de esto, reemplace el medio de cultivo con el medio de cultivo fresco que contiene polímero catiónico y poliplexios poliplexes de pDNA de diferente proporción de relaciones nitrógeno-fósforo. Escarúrlas durante seis horas, y luego reemplace el medio con dos mililitros de rpm 1640 medio fresco. Continúe cultivando durante 48 horas.Luego, recoja las células y utilice un citómetro de flujo para detectar la fluorescencia verde. En este estudio, los copolímeros de bloques biocompatibles funcionalizados por metionina se preparan a través del método de transferencia de cadena de fragmentación de adición reversible, y se investiga la capacidad de complejo de ADN plásmido del mBG obtenido y su eficiencia de transfección. El tamaño medio de partícula y el potencial zeta de los poliplexes mBG/pDNA son 124 nanómetros y más 15,7 milivoltios, respectivamente, con una relación N-P de 16.El retardo electroforético revela que el pDNA con una relación N-P de cero puede moverse sin restricciones en el gel de agarosa y se observa como una raya en el imágenes de gel. Cuando el pDNA se compleja con mBG, el movimiento de pDNA se retrasa, y posteriormente, el brillo de la banda se reduce. Esto muestra que el mBG puede complejo completamente el pDNA cuando el N a P es más alto que cuatro.La citotoxicidad de los poliplexes mBG/pDNA se mide utilizando el ensayo estándar de MTT Estos resultados muestran que los poliplexes mBG/pDNA tienen citotoxicidad que los poliplexes PEI/pDNA en las relaciones N-a-P de cuatro, ocho, 16 y 32. Como también se puede ver, la citotoxicidad de los poliplexes mBG/pDNA aumenta con una mayor relación N-P. Este aumento de la citotoxicidad es el resultado del componente GPMA cargado positivamente.La relación N-P utilizada en el experimento de transfección de ADNF se selecciona de acuerdo con los resultados de la citotoxicidad. Las capacidades de transfección de mBG1, mBG2 y mBG3 se comparan midiendo la intensidad de fluorescencia GFP, y los resultados mostraron que mBG3 es el portador de genes óptimo. Es importante agotar el aire del matraz de fondo redondo del limo y mantener la temperatura de reacción.Los portadores de fármacos de polímeros obtenidos se pueden aplicar a la co-entrega de medicamentos de quimioterapia y medicamentos genéticos para tratar sinérgicamente el cáncer farmacorresistente. El mecanismo molecular de la combinación de fármacos genéticos y medicamentos quimioterápticos se puede explorar más a fondo para el tratamiento de tumores farmacorresistentes. La acetona se clasifica como baja tóxica por su toxicidad aguda.Deben evitarse las llaves, la inhalación o el contacto con los ojos o la piel. Evitar el riesgo de escaldación durante el procedimiento de calentamiento.

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